CN113444043A - 一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 - Google Patents
一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113444043A CN113444043A CN202010231827.9A CN202010231827A CN113444043A CN 113444043 A CN113444043 A CN 113444043A CN 202010231827 A CN202010231827 A CN 202010231827A CN 113444043 A CN113444043 A CN 113444043A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lotus leaf
- alkaloid
- ethanol
- leaf alkaloid
- nuciferine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 title claims abstract description 126
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 title claims abstract description 123
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 title claims abstract description 120
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 title claims abstract description 106
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 title claims abstract description 92
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 23
- YXVXMURDCBMPRH-UHFFFAOYSA-N Lirinidine Natural products C1C2=CC=CC=C2C2=C(O)C(OC)=CC3=C2C1N(C)CC3 YXVXMURDCBMPRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- ORJVQPIHKOARKV-UHFFFAOYSA-N Nuciferine Natural products C1C2=CC=CC=C2C2=C(OC)C(OC)=CC3=C2C1N(C)CC3 ORJVQPIHKOARKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- ORJVQPIHKOARKV-OAHLLOKOSA-N nuciferine Chemical compound C1C2=CC=CC=C2C2=C(OC)C(OC)=CC3=C2[C@@H]1N(C)CC3 ORJVQPIHKOARKV-OAHLLOKOSA-N 0.000 claims abstract description 68
- AKXOIHNFHOEPHN-CQSZACIVSA-N (6ar)-1-methoxy-6-methyl-5,6,6a,7-tetrahydro-4h-dibenzo[de,g]quinoline-2-ol Chemical compound C([C@H]1N(C)CC2)C3=CC=CC=C3C3=C1C2=CC(O)=C3OC AKXOIHNFHOEPHN-CQSZACIVSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 14
- XCUCMLUTCAKSOZ-FIRIVFDPSA-N Liensinine Chemical compound C([C@@H]1C=2C=C(C(=CC=2CCN1C)OC)OC=1C(O)=CC=C(C=1)C[C@H]1N(C)CCC=2C=C(C(=CC=21)OC)OC)C1=CC=C(O)C=C1 XCUCMLUTCAKSOZ-FIRIVFDPSA-N 0.000 claims abstract description 4
- XCUCMLUTCAKSOZ-JSOSNVBQSA-N Liensinine Natural products C([C@@H]1C=2C=C(C(=CC=2CCN1C)OC)OC=1C(O)=CC=C(C=1)C[C@@H]1N(C)CCC=2C=C(C(=CC=21)OC)OC)C1=CC=C(O)C=C1 XCUCMLUTCAKSOZ-JSOSNVBQSA-N 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 121
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 69
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 69
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 37
- 239000012264 purified product Substances 0.000 claims description 29
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 24
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 18
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 17
- CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N azane;methanol Chemical compound N.OC CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 15
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 claims description 8
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 8
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- -1 N-demethylnuciferine Chemical compound 0.000 claims description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011344 liquid material Substances 0.000 claims description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 claims 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 19
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 11
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 10
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 5
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JBGSWIBJAGBGOP-UHFFFAOYSA-N Dehydronuciferine Chemical compound C1=CC=C2C3=C(OC)C(OC)=CC(CCN4C)=C3C4=CC2=C1 JBGSWIBJAGBGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 150000008441 aporphines Chemical class 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XNODZYPOIPVPRF-CGWDHHCXSA-N (2s)-2-methyl-4-[(2r,8r,13r)-2,8,13-trihydroxy-13-[(2r,5r)-5-[(1r)-1-hydroxytridecyl]oxolan-2-yl]tridecyl]-2h-furan-5-one Chemical compound O1[C@@H]([C@H](O)CCCCCCCCCCCC)CC[C@@H]1[C@H](O)CCCC[C@H](O)CCCCC[C@@H](O)CC1=C[C@H](C)OC1=O XNODZYPOIPVPRF-CGWDHHCXSA-N 0.000 description 2
- QQKAHDMMPBQDAC-CQSZACIVSA-N (6ar)-1,2-dimethoxy-5,6,6a,7-tetrahydro-4h-dibenzo[de,g]quinoline Chemical compound C1C2=CC=CC=C2C2=C(OC)C(OC)=CC3=C2[C@@H]1NCC3 QQKAHDMMPBQDAC-CQSZACIVSA-N 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 2
- QQKAHDMMPBQDAC-UHFFFAOYSA-N N-Nornuciferine Natural products C1C2=CC=CC=C2C2=C(OC)C(OC)=CC3=C2C1NCC3 QQKAHDMMPBQDAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 2
- QCMQEZNBBPGFKQ-UHFFFAOYSA-N Thalisopynine Natural products CN1CCC2=C(OC)C(OC)=C(OC)C3=C2C1CC1=C3C=C(OC)C(O)=C1 QCMQEZNBBPGFKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- BZKUYNBAFQJRDM-UHFFFAOYSA-N aporphine Natural products C12=CC=CC=C2CC2N(C)CCC3=CC=CC1=C32 BZKUYNBAFQJRDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 2
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 2
- DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCO DZGCGKFAPXFTNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XHEFDIBZLJXQHF-UHFFFAOYSA-N fisetin Chemical compound C=1C(O)=CC=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 XHEFDIBZLJXQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 2
- FVRABHGHBLRNNR-UHFFFAOYSA-N liriodenine Natural products O=C1C=CC=c2c1cc3nccc4cc5OCOc5c2c34 FVRABHGHBLRNNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- XQYZDYMELSJDRZ-UHFFFAOYSA-N papaverine Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CC1=NC=CC2=CC(OC)=C(OC)C=C12 XQYZDYMELSJDRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 229930008281 A03AD01 - Papaverine Natural products 0.000 description 1
- HVFIEGOJQDOBGC-UHFFFAOYSA-N Annoglacin A Natural products O1C(C(O)CCCCCCCCCCCC)CCC1C(O)CCCCC(O)CCCCCCCC(O)CC1=CC(C)OC1=O HVFIEGOJQDOBGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 235000005807 Nelumbo Nutrition 0.000 description 1
- 241000209477 Nymphaeaceae Species 0.000 description 1
- 240000001090 Papaver somniferum Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- XNODZYPOIPVPRF-BGXDYLHZSA-N annonacin A Natural products O=C1C(C[C@H](O)CCCCC[C@H](O)CCCC[C@H](O)[C@H]2O[C@H]([C@H](O)CCCCCCCCCCCC)CC2)=C[C@H](C)O1 XNODZYPOIPVPRF-BGXDYLHZSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- IZTUINVRJSCOIR-UHFFFAOYSA-N benzylisoquinoline Chemical compound N=1C=CC2=CC=CC=C2C=1CC1=CC=CC=C1 IZTUINVRJSCOIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000011990 fisetin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000009512 hedan Substances 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000009427 jiangzhi Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 229960001789 papaverine Drugs 0.000 description 1
- 235000006502 papoula Nutrition 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012799 strong cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000008588 xue-zhi-ning Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D221/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00
- C07D221/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00 condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D221/04—Ortho- or peri-condensed ring systems
- C07D221/18—Ring systems of four or more rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/473—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. acridines, phenanthridines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4741—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having oxygen as a ring hetero atom, e.g. tubocuraran derivatives, noscapine, bicuculline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/06—Peri-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Abstract
本发明属于医药领域，具体提供一种荷叶生物碱及其提取纯化方法和用途。本发明的荷叶生物碱中包括荷叶碱、O‑去甲基荷叶碱、N‑去甲基荷叶碱、莲碱；其中荷叶碱含量为20.0～40.0％，O‑去甲基荷叶碱含量为5.0～15.0％，N‑去甲基荷叶碱含量为0.5～5.0％，莲碱含量为0.5～5.0％。本发明制备的荷叶生物碱中各生物碱含量高，本发明制备的荷叶生物碱可以用于制备减肥降脂的药物，对促进荷叶资源的合理利用，加强荷叶减肥降脂其相关产品的深度开发具有重要的意义，临床及市场前景优良。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种荷叶生物碱及其提取纯化方法。
背景技术
荷叶是睡莲科莲属植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶。传统医学认为,荷叶性辛凉,味苦涩、微咸,具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的作用。荷叶已广泛应用于各种中成药制剂中,目前,荷叶入药的制剂主要有5类:(1)化湿降脂药:如血脂宁、脂脉康胶囊、通脉降脂片、荷丹片等；(2)健胃消食药:如醒脾开胃颗粒等；(3)止血药:如荷叶丸等；(4)清热消痤药:如通便消痤胶囊等；(5)祛暑清热药:如暑热感冒颗粒等。
现代科学研究显示,荷叶中具有生理活性的物质主要为生物碱和黄酮类物质。荷叶生物碱具有抑制高胆固醇血症和动脉粥样硬化、抗有丝分裂、抑菌和止痉挛等作用。
至今已从荷叶中分离出10余种生物碱类化合物。根据荷叶生物碱的结构特征大致可分为以下4类:(1)单苄基异喹啉类:亚美(杏黄)罂粟碱、衡州乌药碱、N-甲基异衡州乌药碱、N-甲基衡州乌药碱、O-去甲基衡州乌药碱等；(2)阿朴啡类:荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、莲碱、番荔枝碱、N-去甲基亚美罂粟碱、2-羧基-1-甲氧基阿朴啡等；(3)去氢阿朴啡类:去氢荷叶碱、去氢莲碱等；(4)氧化阿朴啡类:鹅掌楸碱等。
文献报道的荷叶生物碱一般采用乙醇提取，大孔树脂纯化。如文献(赵骏，等.利用大孔吸附树脂纯化荷叶生物碱，中药材，26(9)，669)荷叶采用95％乙醇回流提取，D101型树脂纯化，荷叶碱最易被40％左右乙醇洗脱，梯度洗脱可使荷叶碱收率达0.8％。文献(王玉霞等，荷叶生物碱提取纯化工艺研究，北京中医药大学学报，36(9),622)中报道，荷叶药材用90％乙醇提取，D001-CC型离子交换树脂纯化，得荷叶碱占生物碱部位的8.98-9.66％。CN105726640 A公开了一种荷叶生物碱的提取纯化方法，稀盐酸溶液浸提3次。浸出液合并、过滤，过强酸型阳离子交换树脂。收集树脂，进行阴干处理，再用氨水润湿，以乙醇溶剂回流提取至生物碱提取完毕，提取液减压浓缩、干燥得总生物碱提取物，其中荷叶碱占该提取物重量的30.88～40.12％，N-去甲基荷叶碱占该提取物重量的20.94～28.35％，O-去甲基荷叶碱占该提取物重量的3.67～6.32％，杏黄罂粟碱占该提取物重量的2.81～5.16％，厚壳桂素占该提取物重量的0.81～1.88％，该荷叶提取物可以抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化和减小细胞内脂肪滴。CN102258578A也公开了一种荷叶生物总碱的提取纯化方法，荷叶经盐酸乙醇提取，再索氏提取，盐酸水溶液萃取，有机溶剂萃取，干燥浓缩，荷叶碱占总生物碱14-28％，所制得的荷叶总生物碱可以抑制乙酰胆碱、高钾等诱导的儿茶酚胺分泌。
综上所述，现有对于荷叶中总生物碱的纯化方法主要是液液萃取法、大孔吸附树脂柱色谱法和离子交换树脂柱色谱法。其中液液萃取法用到大量的盐酸、三氯甲烷等有机溶剂，存在操作不便及对环境污染较大的缺点，且操作较为繁琐，所得荷叶碱在总生物碱中占比并不是很高；而使用大孔吸附树脂等柱色谱法进行一次纯化所得的总生物碱的纯度不高。因此，研究新型环保、经济、高效的荷叶生物碱的提取分离方法，具有重要的意义。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种荷叶生物碱及其提取方法。本发明制备的荷叶生物碱中荷叶碱含量高，制备方法环保经济。
本发明提供一种荷叶生物碱，包括荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、莲碱；其中荷叶碱含量为20.0～40.0％，O-去甲基荷叶碱含量为5.0～15.0％，N-去甲基荷叶碱含量为0.5～5.0％，莲碱含量为0.5～5.0％。
进一步地，其中荷叶碱含量为27.66～30.12％，O-去甲基荷叶碱含量为9.93～11.36％，N-去甲基荷叶碱含量为1.96～2.99％，莲碱含量为2.17～2.67％。
本发明提供一种上述荷叶生物碱的提取纯化方法，包括以下步骤：
S1:取荷叶，粉碎，乙醇回流提取，浓缩，得荷叶生物碱粗提取物；
S2:取荷叶生物碱粗提取物，使用大孔吸附树脂纯化，得荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物；
S3:取荷叶生物碱大孔树脂纯化物，使用PCX分散固相萃取纯化，得所述荷叶生物碱。
进一步地，步骤S1中乙醇的浓度为50～95％，优选为75～90％，更优选为85％；乙醇与荷叶的液料比为1:10～1:100，优选为1:20～1:60，更优选为1:50；提取时间为1～2.5h，优选为1.5h；提取次数为1～4次，优选为2～3次，更优选为2次。
进一步地，步骤S2中大孔吸附树脂纯化方法包括以下步骤：A)装柱：取大孔吸附树脂，湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合液不产生白色浑浊，再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，放置12h；B)上样：荷叶生物碱粗提取物上样，吸附；C)洗脱：先用蒸馏水、乙醇洗脱除杂，再用乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥得荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物。
进一步地，步骤S2中，A)中流出液与水混合液体积比为1:5；B)中荷叶生物碱粗提取物的上样浓度为相当于原药材0.1～0.3g/ml，优选为0.15g/ml；上样体积为0.5～2BV，优选为1BV；吸附时间为1～3h，优选为2h；C)中蒸馏水用量为2BV～6BV，优选为4BV；洗脱除杂乙醇浓度为30％，用量为4BV；
或步骤S2中，大孔吸附树脂的型号为AB8、D101、X-5型，优选为D101；C)中梯度洗脱乙醇浓度为50％、60％和70％，每个浓度的洗脱体积为4BV，洗脱液收集60％和70％乙醇的洗脱液；每个浓度的洗脱液收集体积为1～3BV。
进一步地，步骤S3中，PCX分散固相萃取的方法包括以下步骤：D)配制荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液，加入PCX，搅拌，抽滤，收集滤饼1；E)滤饼1中加入甲醇，搅拌，抽滤，收集滤饼2；F)滤饼2中加入氨-甲醇溶液，搅拌，抽滤，收集滤液，浓缩，干燥得所述荷叶生物碱。
进一步地，步骤S3中，D)中荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液的浓度为1.5～3.0g/L,优选为2.0g/L，PCX的用量为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用250～500mg，优选为300mg，搅拌时间为2～20min,优选为5min；E)中甲醇体积为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用20～60ml，优选为40ml，搅拌时间为2～20min，优选为5min；F)中氨-甲醇溶液的使用量为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用20～50ml,优选为30ml，氨-甲醇溶液中氨浓度为4％～10％，优选为5％。
本发明还提供所述的荷叶生物碱在制备减肥降脂药物中的用途。
本发明提供一种食品、药品或保健品组合物，其是以所述的荷叶生物碱和常用的辅料制备而成。
本发明的有益效果为：荷叶原药材中荷叶碱的含量约为0.088％,经过本发明方法提取纯化以后，在纯化物中荷叶碱的含量可达到30％,提高了约350多倍；与现有采用乙醇提取、大孔树脂纯化的提取纯化方法相比，本发明提取及纯化效率更高；与现有采用盐酸乙醇浸提，离子交换树脂柱纯化等提取纯化方法相比，本发明避免使用了盐酸等对污染环境的试剂；同时本发明采用的是分散固相萃取法，与传统的柱色谱法相比，这种方法操作简单、节省时间，大大提高了纯化的效率。
本发明通过优化，筛选出一种荷叶生物碱的提取纯化方法，本发明方法制备的荷叶生物碱纯度好，其中，荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、莲碱含量高，其中荷叶碱含量最高，可高达30.12％，纯化过程中，荷叶碱的转移率高，高达43.15％。本发明制备的荷叶生物碱可以用于制备减肥降脂的药物，对促进荷叶资源的合理利用，加强荷叶减肥降脂其相关产品的深度开发具有重要的意义，临床及市场前景优良。
本发明所述“荷叶”可以符合2015版《中华人民共和国药典》相应项下的规定。
本发明所述“BV”是指柱体积。
本发明所述“PCX”是指高分子阳离子交换树脂填料，具体是指磺酸基取代的聚苯乙烯阳离子交换混合机理的水可浸润性聚合物基质填料。
本发明所述百分比符号“％”其具有如2015版《中华人民共和国药典》凡例中的定义。特别地，如本发明所述的乙醇，是指具有指定浓度的乙醇水溶液。在通常情况下，如未特别说明，对于总物料是固体时一般是指重量/重量的百分比，对于总物料是液体的一般是指体积/体积的百分比。
本发明所述的“荷叶生物碱”是指荷叶经提取后获得的包含若干生物碱的活性组分混合物，其中可以包含单体生物碱荷叶碱和其它生物碱，例如现有技术记载的O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、莲碱、番荔枝碱、N-去甲基亚美罂粟碱、2-羧基-1-甲氧基阿朴啡、亚美(杏黄)罂粟碱、衡州乌药碱、N-甲基异衡州乌药碱、N-甲基衡州乌药碱、O-去甲基衡州乌药碱、去氢荷叶碱、去氢莲碱、鹅掌楸碱等。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
图1荷叶生物碱HPLC图
(1.O-去甲基荷叶碱；2.N-去甲基荷叶碱；3.荷叶碱；4.莲碱)
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
本发明所有原料和试剂均为市售，其中PCX(40-60μm)购自天津博纳艾杰尔公司。
实施例 荷叶生物碱的制备
提取：取荷叶，粉碎，85％乙醇，液料比1:50回流提取，每次提取1.5小时，共提取2次，浓缩，得荷叶生物碱粗提取物；
大孔吸附树脂纯化：
装柱：精密称取预处理好的大孔吸附树脂，进行湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合(V∶V＝1∶5)不产生白色浑浊，再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，放置12h。
上样：荷叶生物碱粗提取物浓缩至每毫升醇提物相当于原药材0.15g进行上样，上样体积为1BV，待吸附2h后开始洗脱。
洗脱：首先用4BV蒸馏水进行洗脱，再用4BV 30％、50％、60％、70％乙醇进行梯度洗脱，合并收集1BV-3BV 60％、1BV-3BV 70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶大孔吸附树脂纯化物。
PCX分散固相萃取：将上述荷叶大孔吸附树脂纯化物0.2g，加甲醇溶解并稀释至100mL，加入到盛有PCX填料(每10mL溶液对应于300mg PCX)的烧杯中，磁力搅拌5min后，进行抽滤，将PCX转移至另一烧杯中，再加入相当于荷叶大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液4倍体积的甲醇(即每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用40ml)，磁力搅拌5min后，进行抽滤；再将PCX转移至烧杯中，加入相当于荷叶大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液3倍体积的5％氨-甲醇溶液(即每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用30ml)，磁力搅拌5min后，进行抽滤，收集5％氨-甲醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶生物碱。
按照上述制备过程共制备三批荷叶生物碱。
试验例 荷叶生物碱制备条件的筛选
以下是荷叶生物碱制备各条件的筛选试验。
一、荷叶碱的提取工艺优化研究
采用乙醇加热回流提取的方法，以提取液中荷叶碱的含量为指标，考察了乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数对荷叶中生物碱类成分提取率的影响，确定最佳提取工艺。
1.1乙醇浓度的考察
称取荷叶粉末约3.0g,精密称定，分别加入75％、80％、85％、90％的乙醇作为提取剂，在料液比(g/mL)为1:20的条件下进行回流提取，提取2次，每次1.5h，过滤，合并滤液并定容至100mL，摇匀，0.45μm的微孔滤膜滤过后用HPLC分析。
实验结果见表1。由表1可知，当乙醇浓度为85％时，荷叶碱的提取率最大，因此，选择85％的乙醇作为提取溶剂。
表1乙醇浓度考察
1.2料液比的考察
分别称取荷叶细粉约3.0、3.0、1.0、0.5g,精密称定，以85％乙醇为提取溶剂，以料液比(g/mL)分别为1:10、1:25、1∶50、1∶100提取条件下，提取2次，每次1.5h，过滤，合并滤液并定容至100mL(料液比为1∶10的定容至50mL)，摇匀，0.45μm的微孔滤膜滤过后用HPLC分析。实验结果见表2，由表2可知，当料液比1：50时，荷叶碱的提取率为最高，因此，确立料液比为1：50。
表2液料比考察
1.3提取时间的考察
称取荷叶粉末约1.0g，精密称定，以85％乙醇作为提取剂，在料液比(g/ml)为1:50，提取温度为85℃提取条件下进行提取，分别提取1.0h,1.5h,2.0h,2.5h，提取2次，过滤，合并滤液并定容至100mL，摇匀，0.45μm的微孔滤膜滤过，液相分析。见表3，由实验结果可知，提取时间对荷叶碱的提取率影响不大，最终确定为提取时间为1.5小时。
表3提取时间的考察
1.4提取次数的考察
称取荷叶粉末约1.0g，精密称定，以85％乙醇作为提取剂，在料液比(g/mL)为1:50，提取温度为85℃提取条件下进行回流提取，提取次数分别为1,2,3，4次，每次1.5h，过滤，合并滤液，合并滤液并定容至100mL，摇匀，0.45μm的微孔滤膜滤过，液相分析。见表4，由表可知，当提取3次时，荷叶碱的提取率为最高，但是提取2次与提取3次的荷叶碱的提取率相差不大，因此，综合考察到实验效率，最终确定提取次数为2次。
表4提取次数的考察
综上所述，可知荷叶生物碱乙醇回流提取的最佳条件为：85％乙醇为提取溶剂，料液比为1：50，每次提取1.5小时，共提取2次。
1.5最佳条件的确认
在上述最佳实验条件下，三次的平均提取率为0.0886％。见表5。
表5最佳条件的确认
荷叶碱提取率＝荷叶碱的质量/所取荷叶药材的质量×100％
二、大孔吸附树脂纯化方法的条件优化
1.实验方法
装柱：精密称取预处理好的大孔吸附树脂250g，进行湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合(V∶V＝1∶5)不产生白色浑浊，再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，放置一夜。
上样：在上述最佳条件下得到的醇提液进行浓缩，浓缩至每毫升醇提物相当于原药材0.15g进行上样，上样体积为1BV，待吸附2h后开始洗脱。
洗脱：首先用4BV蒸馏水进行洗脱，再用4BV 30％、50％、60％、70％乙醇进行洗脱，合并收集1BV-3BV 60％、1BV-3BV 70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶大孔树脂纯化物。
2大孔吸附树脂最佳纯化条件的考察
2.1泄露曲线的考察
精密称取预处理过的大孔吸附树脂250湿法装柱，分别以0.5BV、1BV、1.5BV、2BV上样，接收柱后流出液，测定其中荷叶碱的浓度，见表6。
表6泄露曲线的考察
由实验结果可知，当上样体积达到1.5BV时，流出液中荷叶碱浓度变大，说明此时大孔吸附树脂已经达到了饱和，因此，确定最佳上样体积为1BV。
2.2洗脱液浓度的考察
精密称取预处理过的大孔吸附树脂250g湿法装柱，1BV上样，上样2h后开始洗脱，分别以4BV的水、4BV的30％的乙醇洗脱除杂，再分别以50％、60％、70％、80％(4BV)的乙醇进行洗脱，每0.5倍柱体积洗脱液单独接收，测定洗脱液中荷叶碱的浓度，见表7。
表7洗脱液浓度的考察
在实验过程中，分别单独接收50％、60％、70％、80％乙醇洗脱液1-3BV，回收溶剂后进行PCX分散固相萃取的实验研究，结果发现，50％、80％乙醇洗脱的经过PCX纯化后纯度没有60％、70％的高，因此，确定为接收1-3BV的60％、1-3BV 70％洗脱液。
3大孔吸附树脂条件的确认
精密称取预处理过的大孔吸附树脂3份，每份250g，装柱(半径2cm,柱高26cm,柱体积330mL)，1BV上样，上样2h后开始洗脱，分别用4BV水、4BV 30％洗脱以除去杂质，再分别用4BV的50％、60％、70％乙醇洗脱，合并收集1-3BV 60％、1-3BV 70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶大孔树脂纯化物。
精密称取大孔吸附树脂纯化物约0.2g，用甲醇稀释至25mL，摇匀，再精密吸取0.5mL至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进液相色谱法分析，计算荷叶碱的含量。结果见表8，由结果可知，三批次的大孔树脂纯化物中荷叶碱的含量为6.84-7.40％之间。
表8大孔吸附树脂条件的确认
综上所述，大孔树脂纯化的最佳条件为：
装柱：精密称取预处理好的大孔吸附树脂250g，进行湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合(V∶V＝1∶5)不产生白色浑浊，再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，放置一夜。
上样：在上述最佳条件下得到的醇提液进行浓缩，浓缩至每毫升醇提物相当于原药材0.15g进行上样，上样体积为1BV，待吸附2h后开始洗脱。
洗脱：首先用4BV蒸馏水进行洗脱，再用4BV 30％、50％、60％、70％乙醇进行洗脱，合并收集1BV-3BV 60％、1BV-3BV 70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶大孔树脂纯化物。
三、PCX分散固相萃取
1.实验方法
将上述大孔吸附树脂纯化物约0.2g,加甲醇溶解并稀释至100mL，分别加入到盛有PCX填料(每10mL溶液对应于300mgPCX)的烧杯中，磁力搅拌5min后，进行抽滤，将PCX转移至另一烧杯中，再加入4倍体积的甲醇，磁力搅拌5min后，进行抽滤；再将PCX转移至烧杯中，加入3倍体积的5％氨-甲醇溶液，磁力搅拌5min后，进行抽滤，收集5％氨-甲醇洗脱液,回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶生物碱。
2实验条件考察
2.1PCX用量的考察
将上述大孔吸附树脂纯化物0.2g,加甲醇溶解并稀释至100mL(荷叶碱的含量为0.146mg/mL)，量取上述溶液10mL,分别置于装有50、100、150、200、250、300、350、400mg PCX填料的烧杯中，按“1实验方法”进行纯化，分别测定每个母液中荷叶碱的浓度。结果见下表。由表可知，当PCX用量达到300mg时，母液中的荷叶碱含量比较小，说明绝大部分的生物碱已被PCX所吸附，当继续增加填料用量时，母液中的荷叶碱浓度并未见明显降低，说明能填料用量达到饱和状态，因此，PCX填料的用量选择为每10mL大孔吸附树脂纯化物为300mg的PCX，见表9。
表9 PCX用量的考察
2.2氨甲醇用量的考察
将上述大孔吸附树脂纯化物0.2g,加甲醇溶解并稀释至100mL(荷叶碱的含量为0.146mg/mL)，量取上述溶液10mL,置于盛有300mg PCX填料的烧杯中，按“本部分1实验方法”进行纯化，通过进行多次用小体积(10mL)洗脱剂洗脱，把洗脱后的洗脱液进HPLC分析，分别收集洗脱液，测定洗脱液中荷叶碱的浓度。由实验结果可知，荷叶碱的浓度在使用第1个10mL洗脱剂时最大，说明大部分的荷叶生物碱类成分在第一个10mL洗脱剂时被洗脱下来，且随着洗脱剂体积的不断增加，不断有生物碱类成分被洗脱下来。但第四个10mL(总量40mL)洗脱剂中生物碱的峰面积非常小，说明通过前3个10mL洗脱剂的洗脱，大部分生物碱都洗脱下来了。因此，综合考虑到荷叶碱的洗脱率与实际操作，最终选择30mL 5％氨-甲醇进行洗脱，见表10。
表10氨甲醇用量的考察
2.3氨浓度的考察
将上述大孔吸附树脂纯化物0.2g,加甲醇溶解并稀释至100mL(荷叶碱的含量为0.146mg/mL)，量取上述溶液10ml,置于盛有300mg PCX填料的烧杯中，按“1实验方法”进行纯化，再分别加入30mL 0％、2％、5％、10％氨-甲醇进行洗脱，收集洗脱液。将得到的洗脱液进HPLC分析。由实验结果可知，当氨水浓度在0％-5％变化时，随着氨水浓度的增加，洗脱液中荷叶碱的浓度，说明在碱性条件下，荷叶碱从强阳离子交换吸附剂中缓慢地被洗脱出来，在氨水浓度为5％时，峰面积达到最大。但当氨浓度继续增加至10％时，洗脱液中荷叶碱的峰面积并未见明显增加，因此选择5％为最佳氨浓度。
综上所述，PCX分散固相萃取的最佳条件是：将上述荷叶大孔吸附树脂纯化物0.2g，加甲醇溶解并稀释至100mL，得荷叶大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液，将溶液加入到盛有PCX填料(每10mL溶液对应于300mg PCX)的烧杯中，磁力搅拌5min后，进行抽滤，将PCX转移至另一烧杯中，再加入相当于荷叶大孔吸附树脂纯化物4倍体积的甲醇(即每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用40ml)，磁力搅拌5min后，进行抽滤；再将PCX转移至烧杯中，加入相当于荷叶大孔吸附树脂纯化物3倍体积的5％氨-甲醇溶液(即每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用30ml)，磁力搅拌5min后，进行抽滤，收集5％氨-甲醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得固体粉末，即为荷叶生物碱。
以下通过分析测试例来说明本发明的有益效果：
分析测试例
HPLC色谱条件：U-3000高效液相色谱仪(美国戴安公司)，色谱柱Phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27：70.6：1.6：0.78)；检测波长为270nm；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL。
对照品溶液的制备：精密称取N-去甲荷叶碱、O-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱四种对照品各4.98、5.23、4.92、1.96mg，分别置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为对照品储备液；精密吸取上述标准储备液N-去甲荷叶碱、O-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱各0.5、1、1、1mL至25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。
标准曲线的建立：取混合对照品溶液，分别精密进样1、2、5、10、20μL，以对照品的质量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，建立荷叶中四个生物碱成分定量的标准曲线。实验结果表明，各成分在各自范围内呈现良好的线性关系，结果见表11。
表11四种生物碱线性回归方程
供试品溶液的制备：取本发明实施例制备的三批荷叶生物碱约6mg，精密称定，至100mL量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。供试品溶液按上述液相色谱条件进行分析，得到的荷叶纯化物中四种生物碱的含量见表12，图1。
表12纯化物中主要生物碱含量
注：荷叶碱转移率，是指纯化物中的荷叶碱占荷叶醇提物中荷叶碱的比例，即表示经过纯化过程有多少荷叶碱转移到了终产品中。
在以上最佳制备条件，进行三次制备实验，得到的荷叶生物碱的得率及转移率见表13。
表13荷叶生物碱的得率及转移率
注：荷叶生物碱的得率，是指最终得到的荷叶生物碱纯化物质量占所用荷叶药材质量的比例；荷叶碱转移率，是指纯化物中荷叶碱的质量占药材中荷叶碱质量的比例，即表示经过纯化过程，原药材中有多少荷叶碱转移到了最终的荷叶生物碱中
综上所述，本发明制备的荷叶生物碱纯度好，其中，荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、莲碱含量高，其中荷叶碱含量最高，可达30.12％，纯化过程中，荷叶碱的转移率高，高达43.15％，得率也较高，为0.13％～0.14％。本发明制备的荷叶生物碱可以用于制备减肥降脂的药物，对促进荷叶资源的合理利用，加强荷叶减肥降脂其相关产品的深度开发具有重要的意义，临床及市场前景优良。
Claims (10)
1.一种荷叶生物碱，其特征在于，包括荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、莲碱；其中荷叶碱含量为20.0～40.0％，O-去甲基荷叶碱含量为5.0～15.0％，N-去甲基荷叶碱含量为0.5～5.0％，莲碱含量为0.5～5.0％。
2.根据权利要求1所述的荷叶生物碱，其特征在于，其中荷叶碱含量为27.66～30.12％，O-去甲基荷叶碱含量为9.93～11.36％，N-去甲基荷叶碱含量为1.96～2.99％，莲碱含量为2.17～2.67％。
3.一种如权利要求1或2所述的荷叶生物碱的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1:取荷叶，粉碎，乙醇回流提取，浓缩，得荷叶生物碱粗提取物；
S2:取荷叶生物碱粗提取物，使用大孔吸附树脂纯化，得荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物；
S3:取荷叶生物碱大孔树脂纯化物，使用PCX分散固相萃取纯化，得所述荷叶生物碱。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S1中乙醇的浓度为50～95％，优选为75～90％，更优选为85％；乙醇与荷叶的液料比为1:10～1:100，优选为1:20～1:60，更优选为1:50；提取时间为1～2.5h，优选为1.5h；提取次数为1～4次，优选为2～3次，更优选为2次。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2中大孔吸附树脂纯化方法包括以下步骤为：A)装柱：取大孔吸附树脂，湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合液不产生白色浑浊，再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，放置12h；B)上样：荷叶生物碱粗提取物上样，吸附；C)洗脱：先用蒸馏水、乙醇洗脱除杂，再用乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥得荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物。
6.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，步骤S2中，A)中流出液与水混合液体积比为1:5；B)中荷叶生物碱粗提取物的上样浓度为相当于原药材0.1～0.3g/ml，优选为0.15g/ml；上样体积为0.5～2BV，优选为1BV；吸附时间为1～3h，优选为2h；C)中蒸馏水用量为2BV～6BV，优选为4BV；洗脱除杂乙醇浓度为30％，用量为4BV；
或步骤S2中，大孔吸附树脂的型号为AB8、D101、X-5型，优选为D101；C)中梯度洗脱乙醇浓度为50％、60％和70％，每个浓度的洗脱体积为4BV，洗脱液收集60％和70％乙醇的洗脱液；每个浓度的洗脱液收集体积为1～3BV。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S3中，PCX分散固相萃取的方法包括以下步骤为：D)配制荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液，加入PCX，搅拌，抽滤，收集滤饼1；E)滤饼1中加入甲醇，搅拌，抽滤，收集滤饼2；F)滤饼2中加入氨-甲醇溶液，搅拌，抽滤，收集滤液，浓缩，干燥得所述荷叶生物碱。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤S3中，D)中荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物甲醇溶液的浓度为1.5～3.0g/L,优选为2.0g/L，PCX的用量为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用250～500mg，优选为300mg，搅拌时间为2～20min,优选为5min；E)中甲醇体积为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用20～60ml，优选为40ml，搅拌时间为2～20min，优选为5min；F)中氨-甲醇溶液的使用量为每20mg荷叶生物碱大孔吸附树脂纯化物使用20～50ml,优选为30ml，氨-甲醇溶液中氨浓度为4％～10％，优选为5％。
9.如权利要求1或2任意一项所述的荷叶生物碱在制备减肥降脂药物中的用途。
10.一种食品、药品或保健品组合物，其是以权利要求1或2任意一项所述的荷叶生物碱和常用的辅料制备而成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010231827.9A CN113444043A (zh) | 2020-03-27 | 2020-03-27 | 一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010231827.9A CN113444043A (zh) | 2020-03-27 | 2020-03-27 | 一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113444043A true CN113444043A (zh) | 2021-09-28 |
Family
ID=77808251
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010231827.9A Pending CN113444043A (zh) | 2020-03-27 | 2020-03-27 | 一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113444043A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114247181A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-03-29 | 辽宁中医药大学 | 一种磁性分离材料富集制备莲碱的方法 |
| CN114558012A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-31 | 山东师范大学 | 荷叶碱衍生物及其在制备降尿酸药物中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1923829A (zh) * | 2006-09-21 | 2007-03-07 | 福州大学 | 一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途 |
| CN101085041A (zh) * | 2007-07-11 | 2007-12-12 | 石任兵 | 荷叶总生物碱提取物及其制备方法 |
| CN101139321A (zh) * | 2007-09-01 | 2008-03-12 | 福州大学 | 一种采用阳离子交换树脂分离纯化荷叶碱的方法 |
| CN101869605A (zh) * | 2010-07-02 | 2010-10-27 | 安徽济人药业有限公司 | 一种桑叶黄酮、生物碱复合物的提取分离方法 |
-
2020
- 2020-03-27 CN CN202010231827.9A patent/CN113444043A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1923829A (zh) * | 2006-09-21 | 2007-03-07 | 福州大学 | 一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途 |
| CN101085041A (zh) * | 2007-07-11 | 2007-12-12 | 石任兵 | 荷叶总生物碱提取物及其制备方法 |
| CN101139321A (zh) * | 2007-09-01 | 2008-03-12 | 福州大学 | 一种采用阳离子交换树脂分离纯化荷叶碱的方法 |
| CN101869605A (zh) * | 2010-07-02 | 2010-10-27 | 安徽济人药业有限公司 | 一种桑叶黄酮、生物碱复合物的提取分离方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114247181A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-03-29 | 辽宁中医药大学 | 一种磁性分离材料富集制备莲碱的方法 |
| CN114247181B (zh) * | 2021-12-23 | 2023-02-28 | 辽宁中医药大学 | 一种磁性分离材料富集制备莲碱的方法 |
| CN114558012A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-31 | 山东师范大学 | 荷叶碱衍生物及其在制备降尿酸药物中的应用 |
| CN114558012B (zh) * | 2022-01-14 | 2023-09-01 | 浙江沙棘生物科技有限公司 | 荷叶碱衍生物及其在制备降尿酸药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110845328B (zh) | 一种以迷迭香油膏副产品制备高纯度鼠尾草酸的方法 | |
| CN102258588B (zh) | 芍药总苷的制备方法 | |
| CN102423329B (zh) | 一种三七总皂苷提取液的脱色方法 | |
| CN113444043A (zh) | 一种荷叶生物碱及其提取纯化方法 | |
| CN101288695B (zh) | 粉防己生物碱的制备工艺 | |
| CN102228515B (zh) | 一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法 | |
| CN109879919B (zh) | 一种从酸枣仁中分离制备三种黄酮苷的方法 | |
| CN102174009A (zh) | 从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法 | |
| EP2650301B1 (en) | Method for preparing albiflorin and paeoniflorin | |
| CN102659861B (zh) | 一种曲札茋苷的纯化方法 | |
| CN104311616A (zh) | 一种从秦皮中提取高纯度秦皮甲素和秦皮苷的方法 | |
| Hou et al. | Preparative purification of corilagin from Phyllanthus by combining ionic liquid extraction, prep-HPLC, and precipitation | |
| CN101544575B (zh) | 天然4-羟基-异亮氨酸的制备方法 | |
| CN112830881B (zh) | 从橙皮苷废液中分离辛弗林的方法 | |
| CN101327232A (zh) | 一种采用聚酰胺分离纯化沙棘黄酮的制备方法及其应用 | |
| CN109970838B (zh) | 一种长梗冬青苷的制备方法 | |
| CN102078400B (zh) | 一种枇杷叶总三萜酸提取物的制备方法 | |
| CN102824473A (zh) | 黑果枸杞果总黄酮提取物及其制备方法 | |
| CN102093210A (zh) | 6种银杏酸单体的纯化制备方法 | |
| CN109485652A (zh) | 紫金龙中原阿片碱Protopine单体的提取富集工艺及其应用 | |
| CN115466256B (zh) | 一种从苦豆子中提取分离纯化苦参碱和槐定碱的方法 | |
| CN106366154B (zh) | 一种七叶皂苷b的制备方法 | |
| CN106380505B (zh) | 一种七叶皂苷a的制备方法 | |
| CN113956303B (zh) | 一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法 | |
| CN107602642A (zh) | 一种从红花籽中提取纯化络石苷的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210928 |