CN113425795A - 三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用 - Google Patents

三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，所述三黄降糖片的原料包括黄芪、地黄、大黄、山药、葛根、甘草。本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用是基于三黄降糖片在临床上治疗2型糖尿病方面的显著疗效基础上，进一步挖掘其对于2型糖尿病并发症的疗效，并发现其能对2型糖尿病继发性骨质疏松有显著疗效，并通过动物实验进行了验证。与当前临床上使用治疗2型糖尿病骨质疏松症的药物相比，具有服用药物少，禁忌症少，副作用小，疗效显著的效果。

Description

三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用。
背景技术
糖尿病是一种常见的慢性代谢性增龄性疾病，影响着世界上大多数人口。随着人们生活水平的提高和寿命的延长，糖尿病的发病率在世界范围内迅速上升，特别是在中国。2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，T2DM)占糖尿病患者总人数的90％以上。目前，大量基础和临床研究表明，长期处于高血糖状态会引起骨代谢紊乱，T2DM患者发生骨折的风险可达正常人的1-3倍，并伴有骨质疏松症(OP)，包括骨量低、骨强度降低、骨愈合障碍。骨质疏松等骨骼脆弱相关疾病被认为是T2DM的严重并发症之一，严重降低了患者的生活质量，给社会、医疗卫生机构和家庭带来了沉重的负担。不幸的是，骨质疏松症比其他糖尿病并发症如心血管疾病、肾脏疾病和脑部疾病引起的关注要少。因此，探讨治疗2 型糖尿病骨质疏松症(type 2diabetic osteoporosis,T2DOP)的有效途径迫在眉睫。
当前T2DOP的治疗以降糖药物联合抗骨质疏松药物为主，近年来，二甲双胍被认为是治疗T2DOP的首选药物。Vestergaard等(Vestergaard P，Rejnmark L， MosekildeL.Relative fracture risk in patients with diabetes mellitus and the impact ofinsulin and oral antidiabetic medication on relative fracturerisk.DIABETOLOGIA，2005，48(7):1292-1299.)进行了一项包括124655例骨折患者和373962例正常人的大型药物流行病学的病例对照研究，评估糖尿病不同的治疗措施对骨折的作用，二甲双胍的使用降低了各部位骨折的风险，排除骨折、饮酒、吸烟史等危险因素后，服用二甲双胍降低了19％的骨折风险。目前研究认为，二甲双胍不仅通过降低血糖和糖基化终产物来改善骨代谢，而且还能够促进骨髓间充质干细胞向成骨分化，抑制其成脂分化，并在促进成骨细胞的增殖、分化、矿化以及抑制破骨细胞活性等多个方面来预防和改善糖尿病性骨质疏松症。然而，Monami等(Monami M，Cresci B，Colombini A，et al.BoneFractures and Hypoglycemic Treatment in Type 2Diabetic Patients A casecontrolstudy.DIABETES CARE,2008,31(2):199-203.)的研究虽然发现长期的二甲双胍治疗降低糖尿病患者的骨折风险，但认为两者之间并无明显的相关性。其次，长期服用二甲双胍还会给患者带来副作用，最常见的是胃肠道反应，可以出现腹胀，恶心，呕吐，食欲减退，腹痛腹泻及体重减轻等。少见的不良反应有皮疹、低血糖、头晕等，极少数可以出现乳酸酸中毒。
现有技术中的缺点与不足：1.多药同用，长期应用对肝脏、胃肠损害大： T2DOP的治疗以降糖药物联合抗骨质疏松药物为主，通常以两种，甚至是三种药物联合应用。2.疗效不显著，治疗方法较局限，单药治疗较少，临床灵活应用性较差。3.长期使用，价格昂贵。4.临床常用二甲双胍对T2DOP的治疗有较多禁忌症：(1)对二甲双胍过敏的患者；(2)对二甲双胍不耐受的患者，二甲双胍主要的不良反应是胃肠道的副反应；(3)肝功能不全的患者；(4)肾功能严重不全的患者。
综上所述，目前T2DOP治疗方法单一，对T2DOP的单药治疗较少且弊端明显，因此探索针对T2DOP的新的靶向治疗药物可能为突破目前临床治疗的瓶颈提供契机。
发明内容
为解决上述问题，本发明根据三黄降糖片对2型糖尿病骨质疏松症(T2DOP) 的治疗效果，提供了三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用。
进一步的，所述三黄降糖片的原料包括黄芪、地黄、大黄、山药、葛根、甘草。
进一步的，所述三黄降糖片的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂、饮用剂中的一种或多种。
三黄降糖片(粤药制字Z20070824)是广州中医药大学第一附属医院研制的治疗糖尿病的有效药物，为纯中药复方制剂，根据中医理论，具有益气养阴、活血化瘀、滋润肠道的作用，是以《伤寒论》记载的中医药名方加味桃核承气汤为基础组成。三黄降糖片由黄芪、地黄、大黄、山药、葛根、甘草组成，不仅具有降糖降脂的作用，还能延缓和改善糖尿病的并发症。有报道表明其在临床治疗T2DM取得了良好的疗效，并可能通过增强机体对胰岛素的敏感性来降低外周胰岛素抵抗。发明人发现三黄降糖片在治疗2型糖尿病骨质疏松症(T2DOP)方面也有显著疗效。
三黄降糖片中的葛根除了可增强降糖作用，还能够对骨质疏松发挥治疗作用，葛根的功能成份主要以葛根甙类化合物、异黄酮类化合物及三萜皂苷为主，异黄酮类化合物为天然性植物性雌激素，对骨质疏松有治疗作用，且具有着不良反应低的特点。葛根提取物能够有效的提高骨密度，升高血清骨转化指标，能够促进老年骨质疏松患者骨折愈合，具有较高的应用价值。
三黄降糖片中的山药具有降低血糖和增加骨量的双重作用。
本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，具有如下的优点及效果：
(1)本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用是基于三黄降糖片在临床上治疗2型糖尿病方面的显著疗效基础上，进一步挖掘其对于2型糖尿病并发症的疗效，并发现其能对2型糖尿病继发性骨质疏松有显著疗效，并通过动物实验进行了验证。与当前临床上使用治疗T2DOP的药物相比，具有服用药物少，禁忌症少，副作用小，疗效显著的效果。
(2)本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，单药治疗，双重疗效，疗效显著。相比目前临床上以抗糖尿病与抗骨质疏松药物的联合用药为主治疗T2DOP，仅让患者使用一种药，达到治疗两种疾病的目的，大大降低药物使用过多对机体带来的副作用。
(3)本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，是以《伤寒论》中的加味桃核承气汤为基础的纯中药复方制剂，是在中医整体观及辨证论治理论体系指导下应用，从而具有多成分、多环节、多靶点综合调节人体机能的特点，由于其主要是通过调节机体自身代谢和提高免疫力而发挥作用,因此副作用相对于化学和生化药物小，具有天然、低毒、无副作用的优点。
(4)本发明的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，三黄降糖片价格低廉，禁忌症少，便于推广。
附图说明
为了更清楚的说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见的，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它附图。
图1为三黄降糖片对2型糖尿病骨质疏松症治疗效果测试的动物实验设计示意图；
图2为三黄降糖片对2型糖尿病骨质疏松症治疗效果测试的实验设计示意图；
图3为三组小鼠的全下肢骨密度的分析结果；
图4为三组小鼠胫骨松质骨Micro-CT参数分析，其中，(a)为骨小梁的相对体积，(b)为骨小梁的数量，(c)为骨小梁的分离度，(d)为骨小梁的厚度， (e)为骨小梁的骨结构模型指数；
图5为三组小鼠胫骨皮质骨Micro-CT参数分析，其中，(a)为皮质骨的横截面积，(b)为皮质骨的厚度；
图6为三组小鼠胫骨皮质骨松质骨Micro-CT 3D重建图。
其中，三组小鼠分别为：野生型组(WT)、模型组(db/db)、三黄降糖片组 (db/db+SHJTT)。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通的技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明的保护范围。
对三黄降糖片在2型糖尿病骨质疏松症方面的治疗效果进行测试，测试方法及结果分析如下：
1.测试方法
1.1药物准备
本发明采用的三黄降糖片(SHJTT)(粤药制字Z20070824)，由黄芪、地黄、大黄、山药、葛根、甘草组成，为广州中医药大学第一附属医院购买，批号： 20070824，规格：0.25g/片。
1.2实验动物及标本准备
选择6周龄雄性C57BL/Ks db/db(遗传型肥胖动物模型，糖尿病)小鼠(以下简称db/db小鼠)20只和野生型C57BL/6J小鼠10只，由南京大学模式动物所提供。db/db小鼠在4号染色体上有一个纯合子点突变，缺乏功能性下丘脑瘦素受体，它的2型糖尿病综合征与2型糖尿病患者相似，以肥胖、胰岛素抵抗、高胰岛素血症和进行性高血糖为特征。所有实验动物均饲养于广州中医药大学实验动物中心SPF级动物设施，饲养环境维持恒温(22-25摄氏度)，湿度55-60％，光照12h/12h昼夜明暗交替。动物喂养8周，在14周龄时过量麻醉处死，分离左腿胫骨，尽量清除干净周围软组织，然后置于4％多聚甲醛溶液中固定24h。
1.3动物分组、造模与给药
如图1，适应性喂养1周后，将20只db/db小鼠随机分为模型组(db/db) 和三黄降糖片组(db/db+SHJTT)，C57BL/6J小鼠为野生型组(WT),三组小鼠每组各10只。在整个实验过程中，野生型组和模型组小鼠每天灌胃0.5ml蒸馏水8周。三黄降糖片组按相同剂量和时间灌胃三黄降糖片溶液(2.6g/kg/0.5mL，给药剂量参考人和动物间按体表面积折算的等效剂量比率表和《实验动物学》制定)。实验和操作程序经所在单位的动物实验伦理委员会审核通过。
1.4空腹血糖测定
每周末白天禁食6小时(9:00-15:00)后尾部取血测空腹血糖，采用血糖仪试纸法测定。
1.5骨密度测定
采用Model iNSiGHT VET双能X线骨密度仪(DXA,Osteosys,Korea)测量的三组小鼠的全下肢骨密度(BMD)。测试方法包括：小鼠腹腔注射0.5％水合氯醛 (0.2ml～0.3ml)麻醉；注射了镇静剂的小鼠以平卧的姿势放置在扫描台上，每次DXA测量大约需要25秒，包括10秒的辐射输出；利用厂商提供的软件，采用嵌入式DXA算法计算人体成分值。
1.6Micro-CT原理扫描方法
如图2，所有标本采用Skyscan1172 micro-CT设备进行扫描(Skyscan，Bruker，Belgium)。扫描前，将样品从4％多聚甲醛溶液中取出并用磷酸缓冲盐溶液 (Phosphatebuffered saline，pbs)冲洗后，将骨标本置于垂直于扫描轴的直径为 10mm的标本管中，周围填塞少许医用纱条，加入70％乙醇作为扫描介质。扫描仪的基本参数为:电压50kV，电流200μA，总旋转角360°，旋转角增量0.4°，厚度9μm。扫描后，使用Skyscan NRecon软件并利用Feldkamp圆锥束算法，将二维图像序列自动重建为15.9μm各向同性体素大小的三维体。胫骨骨小梁微结构分析，选用高度为1.0mm的VOI(the volume of interest)，分析从胫骨近端生长板下方0.45mm处开始延伸至近端1.0mm处。另取同样高度的VOI，分析胫骨中骨干的皮质骨结构。骨小梁参数分析，包括骨小梁相对体积(BV/TV,％)，骨表面积组织体积比值(BS/TV,1/mm)，骨小梁厚度(Tb.Th,mm)，骨小梁数量 (Tb.N,1/mm)，骨小梁分离度(Tb.Sp,mm)，骨结构模型指数(structure model index,SMI)。通过分析骨皮质厚度(Ct.Th,μm)，骨皮质面积(Ct.Ar,mm)，评估皮质骨结构。以上数据的操作和分析都使用Custom Analysis程序(CTAn,Skyscan) 进行。
1.7骨组织形态计量学测量
所有标本用14％乙二胺四乙酸(EDTA,Sigma-Aldrich)在37℃脱钙1周。然后，所有样品经梯度酒精脱水，然后包埋石蜡。石蜡块修剪后,修建5um厚切片，并进行苏木精和伊红染色和TRAcP。切片用Olympus BX53光学显微镜(Olympus America)成像。使用Image J软件(Wayne Rasband,National Institutes of Health, USA)分析成骨细胞表面比(Ob.S/BS)、破骨细胞数量(Ob.N/BS,1/mm)和破骨细胞表面/骨表面(Oc.S/BS)等骨组织形态学参数。
1.8统计学分析
采用SPSS19.0统计学软件处理，所有测定数值均使用平均值±标准差 (mean±SEM)表示，数据采用独立样本t检验，p＜0.05表示差异有统计学意义。
2.结果分析
表1为各组小鼠14周空腹血糖情况，与正常的野生型(WT)小鼠相比，模型组(db/db)小鼠具有明显的血糖升高，符合模型组(db/db)小鼠作为2型糖尿病小鼠模型。三黄降糖片组(db/db+SHJTT)小鼠，较模型组(db/db)小鼠血糖显著降低，符合三黄降糖片(SHJTT)治疗2型糖尿病降低血糖作用。
表1
组别 例数(只) 空腹血糖(mmol/L)
野生型(WT) 10 6.62±0.28
模型组(db/db) 10 30.43±3.24
三黄降糖片组(db/db+SHJTT) 10 25.76±3.65
如图3所示，下肢全骨DXA分析显示，模型组(db/db)小鼠骨密度明显低于正常野生型(WT)小鼠，三黄降糖片组(db/db+SHJTT)小鼠骨密度显著高于模型组(db/db)小鼠。
如图6所示，与正常野生型(WT)小鼠相比，模型组(db/db)小鼠的胫骨近端三维成像显示，骨皮质变薄，骨量相对减少，骨小梁松散且结构呈“杆状”变化，而三黄降糖片组(db/db+SHJTT)小鼠骨皮质较模型组(db/db)变厚，骨量相对增多。据图3、图4、图5示，与野生型(WT)小鼠相比，模型组(db/db) 小鼠的骨小梁、皮质骨参数发生了显著变化，骨小梁相对体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)明显减小，小梁骨质量和小梁骨连接性明显降低，并且小梁骨微结构恶化，小梁骨间距(Tb.Sp)相应增加，皮质骨厚度(Ct.Th)、横截面积(Ct.Ar)减小，两者比较有统计学差异(P＜0.05)，而使用SHJTT(三黄降糖片)组，骨小梁相对体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N) 明显升高，小梁骨间距(Tb.Sp)相应减少，皮质骨厚度(Ct.Th)、横截面积(Ct.Ar) 增加，两者比较有统计学差异(P＜0.05)。模型组(db/db)小鼠的胫骨近端骨小梁结构模式指数(structure modelindex,SMI)较野生型组(WT)明显减小，意味着小梁结构组成中板层结构和杆状结构的比例发生了改变。如果结构中骨小梁主要为板层结构，那么SMI接近于0；反之，如果主要是杆状骨小梁，SMI 则接近3。当发生骨质疏松时，骨小梁结构从板状向杆状转变，该值增大。这一参数与图6三维成像相符合，表明模型组(db/db)小鼠中骨小梁相比野生型已转为更多的“杆状”结构，发生了骨质疏松。而三黄降糖片组(db/db+SHJTT)小鼠，SMI较模型组(db/db)小鼠组显著降低。综上，充分说明三黄降糖片能够起到治疗2型糖尿病性骨质疏松的作用。
结构模型指数(Structure Model Index，SMI)，定义骨小梁板状(plate-like) 和杆状(rod-like)的程度，板状骨小梁和杆状骨小梁的SMI数值分别为0和3。发生骨质疏松时，骨小梁从板状向杆状转变，SMI数值增加。SMI越大，说明骨小梁结构越接近球形；若SMI为负值，表明所观察的组织为致密组织。
上述试验可以清楚的表明，本发明公开了三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，开拓了三黄降糖片的药用价值，为中医药学的发展做出创造性贡献。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，在本发明的基础上可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (3)

1.三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，其特征在于，所述三黄降糖片的原料包括黄芪、地黄、大黄、山药、葛根、甘草。
3.根据权利要求1所述的三黄降糖片在制备治疗2型糖尿病骨质疏松症药物中的应用，其特征在于，所述三黄降糖片的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂、饮用剂中的一种或多种。
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郑海霞: "三黄降糖片对糖尿病视网膜非酶糖化影响的临床研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
闵文 等: "补肾通络方改善骨质疏松大鼠糖代谢的作用及机制", 《中国实验方剂学杂志》 *

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CN112717051A (zh) 2021-04-30

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