CN102961518B - 参仙组合药物制备治疗骨质疏松药物中的应用 - Google Patents
参仙组合药物制备治疗骨质疏松药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了参仙组合药物在治疗骨质疏松中的应用,尤其是在治疗女性更年期导致的骨质疏松和老年性骨质疏松中具有良好的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合制剂的应用,更具体的说涉及一种参仙组合药物制备治疗骨质疏松药物中的应用。
技术背景
骨质疏松(OSTEOPOROSIS简称OP)是一种以骨量减少,骨显微结构改变而导致骨脆性增加和骨折危险性增大的一种疾病。目前把骨质疏松症具体分为Ⅰ型、Ⅱ型,Ⅰ型又称更年期骨质疏松或绝经后骨质疏松症(PMOP);Ⅱ型又称老年性骨质疏松症,统称原发性骨质疏松(PRIMARY OSTEOPOROSIS简称POP)。随着社会老龄化,0P的防治工作越来越引起医学界的重视。对于骨质疏松症我国目前还没有统一认定的诊断标准。而骨密度测定是判断骨量水平的最佳方法,但在目前我国骨密度测量、骨活检应用、定量CT不能广泛开展情况下,普通X射线检查和骨代谢生化检测对0P的普查、预防和治疗观察等有着重要意义。PMOP是一种发病率高、危害性大、常见的难治性中老年疾病,一般认为其发生主要原因是由于绝经或卵巢切除后,体内雌性激素水平降低,雌激素缺乏、导致破骨细胞数量加强,活性增强,使骨吸收相对增强,骨量丢失加速,形成OP。PMOP导致骨强度减弱,轻微外力即可招致骨折,对中老年妇女晚年生活的健康状态和生活质量构成严重威胁。
多年来的中医实践及现代中药药理研究在防治PMOP方面具有很好的效果。根据肾主骨生髓及肾主生殖的理论,均证实补肾中药对内分泌系统尤其是性腺功能有较好的调整作用,即能提高机体内分泌腺体功能,改善下丘脑-垂体-腺轴的功能,增加体内的性激素,调整了内环境,从而达到抑制骨的过度吸收,增加骨的形成,恢复骨代谢活动的正态平衡,西医对本病的一般治疗方法是雌激素替代疗法、补钙等,但雌激素并不适合所有的绝经妇女,而且长期使用可能会导致子宫出血,且有增加子宫内膜癌和乳腺癌发生率的危险,补钙的剂量难以控制且效果不理想。况且这两种方法对骨质疏松的影响是单方面的只能起到抑制破骨细胞对骨的过度吸收,减少骨的丢失或单纯补钙。POP见于男性和女性,源于骨形成下降和老年人肾脏形成1,25-(OH)2D3降低。上述生理变化的结果是引起骨皮质以及骨小梁的丢失,增加了髋骨、长骨以及椎骨的骨折发生危险性表现为Ⅰ型骨质疏松症和Ⅱ型骨质疏松症的区别。POP为老年骨疏松症最常见和最严重的并发症,增加病人痛苦、严重限制活动,缩短寿命。我国统计老年人骨折发生率为6.3%-24.4%,尤以高龄(80岁以上)女性老人为显著。骨质疏松症所致骨折在老年前期以桡骨远端骨折多见,老年期以后以腰椎和股骨上端骨折多见。一般骨量丢失20%以上时即易发生骨折。据统计,椎骨或髋骨骨折的老年人约有10%在3个月内死于手术或手术并发症。20%一年内去世,25%丧失活动能力,仅有半数可以自由活动。
参仙组合药物是由淫羊藿、女贞子、仙茅、人参和制何首乌五味药材组成,功能与主治为温肾益精、补气养血。适用于肾阴阳两虚,心气不足所致的腰膝酸软,神疲乏力,头晕耳鸣,胃寒肢冷,心悸气短,夜尿频多等症。中国专利(ZL93111650.3、ZL93111652.X和ZL93111651.1)分别公开了一种用于治疗抗衰老的参仙药物组合,其配方为人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子。目前以人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子为主要成分的制剂在治疗骨质疏松病症中并没有报道。
发明内容
研究发现,淫羊藿与已被公认的雌激素替代疗法进行疗效对照,通过临床应用观察其对骨代谢生化指标及松质骨密度的影响,证明淫羊藿苷同样明显缓解骨痛症状,改善骨代谢生化指标,提高松质骨密度,有效率达93.3%,与雌激素治疗组有效率(95.0%)相近,说明淫羊藿具有良好防治骨质疏松的作用,而且淫羊藿有类甾体结构物质,是抗骨质疏松的作用的结构基础。仙茅提取物用去卵巢方法制备骨质疏松大鼠模型,结果灌胃给药仙茅提取物的大鼠胫骨骨小梁的骨矿含量和骨矿密度显著提高。其机制可能与仙茅提取物能抑制大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性,增加护骨素(OPG)水平,抑制脱氧吡啶啉(DPD)的分泌,从而升高血清中钙、磷水平等有关。也可能是仙茅提取物通过调节促肾上腺皮质激素和皮质酮水平,进而改善下丘脑-肾上腺轴的功能,间接促进钙和磷的吸收,促使OPG分泌,抑制血清TRAP活性和DPD的分泌,从而起到抗骨质疏松的作用。
本方在仙茅和淫羊藿的基础上添加了人参、女贞子和何首乌。人参皂苷对去卵巢后大鼠骨质疏松骨的作用,通过胫骨近端行骨组织形态计量学测量和分析,结果发现高低剂量的人参皂苷和雌激素一样有减少骨吸收面积的作用,但是不会抑制骨矿化。该实验证实,人参皂苷能抑制破骨细胞对骨的吸收和轻微抑制骨转换,由此认为人参皂苷可以部分抑制去卵巢导致的骨丢失。女贞子治疗完全及非完全去势小白鼠,其雌二醇(E2)水平均明显升高,促卵泡刺激素(FSH)水平均明显下降;阴道脱落细胞成熟指数均明显下降;骨密度水平均明显升高;明显改善了宫颈阴道上皮组织的形态。证明,单味中药女贞子可有效治疗更年期综合症大鼠模型,这为单味中药女贞子用于更年期综合症的临床治疗奠定了良好的药效学基础;单味女贞子可改善更年期综合症模型大鼠的作用机制应与其改善和促进卵巢功能有关。何首乌具有抗衰老效应,能增强老年大鼠DNA损伤的修复能力,促进细胞的增殖分化、抑制过氧化物的生成,具有调节免疫、内分泌、保肝、抑制动脉粥样硬化及促进红细胞生长等作用。本发明在参仙组合药物现有治疗抗衰老的适应症的基础上,通过研究提出了参仙组合药物在治疗骨质疏松病症中的应用。具体内容为:
一种由人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子组成的参仙组合药物在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
所述参仙组合药物在制备治疗原发性骨质疏松药物中的应用。
所述参仙组合药物在制备治疗女性更年期导致的骨质疏松药物中的应用。
所述参仙组合药物在制备治疗老年性骨质疏松药物中的应用。
上述任一所述应用,其特征在于:所述参仙组合药物中人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子的重量比1-40:1-40:1-40:1-40:1-40。
上述应用,其特征在于:所述参仙组合药物的制备方法为:
1)称取药材,淫羊藿切碎,水提取,浓缩至比重为1.2克/厘米3,乙醇浸泡,再回收乙醇得淫羊藿浸膏;
2)乙醇提取仙茅与制首乌,回收乙醇至提取液为原生药材体积的2-20倍时,停止回收,加入石灰乳改变提取液pH值至7-8,过滤,滤液注入二氧化碳气体至无沉淀,24小时时效处理,再过滤,滤后加入醋酸调节pH值至6-3,回收乙醇得仙茅制首乌浸膏;
3)将女贞子粉碎成女贞子粉末,或将女贞子乙醇提取得女贞子浸膏;
4)将人参粉碎成人参粉末,或用乙醇回流提取得到人参浸膏;
5)将上述所得淫羊藿浸膏、仙茅制首乌浸膏、女贞子粉末或浸膏、人参粉末或浸膏混合,通过制剂生产工艺加工成制剂,得到参仙组合药物。
本发明的有益技术效果是:本发明提供了参仙组合药物在治疗骨质疏松中的应用,尤其是在治疗女性更年期导致的骨质疏松和老年性骨质疏松中具有良好的疗效。
具体实施方式
实施例1参仙组合药物的制备
称取淫羊藿25kg,女贞子20kg,仙茅20kg,人参1kg,制首乌15kg。
将淫羊藿切碎,水提取,浓缩至比重为1.2克/厘米3,乙醇浸泡,再回收乙醇得淫羊藿浸膏;
采用乙醇提取仙茅与制首乌,回收乙醇至提取液为原生药材体积的2-20倍时,停止回收,加入石灰乳改变提取液pH值至7-8,过滤,滤液注入二氧化碳气体至无沉淀,24小时时效处理,再过滤,滤后加入醋酸调节pH值至6-3,回收乙醇得仙茅制首乌浸膏;
将女贞子粉碎成女贞子粉末,或将女贞子乙醇提取得女贞子浸膏;
将人参粉碎成人参粉末,或用乙醇回流提取得到人参浸膏;
将上述所得淫羊藿浸膏、仙茅制首乌浸膏、女贞子粉末或浸膏、人参粉末或浸膏混合,通过制剂生产工艺加工成制剂,在制备工艺可以采用市售参仙片的制备工艺;得到参仙组合药物Ⅰ。
称取仙茅40kg,淫羊藿1kg,人参1kg、制首乌40kg和女贞子20kg,按上述方法得到参仙组合药物Ⅱ。
称取仙茅1kg,淫羊藿40kg,人参40kg、制首乌20kg和女贞子40kg,按上述方法得到参仙组合药物Ⅲ。
实施例2参仙组合药物对老年性骨质疏松的活性考察
对维甲酸致大鼠骨质疏松模型的预防作用:取体重170~200g的雌性大鼠60只,随机分为6组,即正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、阳性对照(钙尔奇D 500mg/kg)组(C组)及实施例1所述的参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(给药量4.6g原药材/kg),每组10只。除A组外,其余各组均于每日上午灌胃给予70mg/kg维甲酸,下午灌胃给予相应剂量的受试药物(给药体积1ml/100g体质量),1次/d,连续给药14d后,停用维甲酸,继续给予受试药物至28d。停药后次日经颈静脉取血检测血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、碱性磷酸酶(ALP),并剖杀大鼠,取双侧股骨进行骨钙含量测定及股骨病理组织学检查。
对维甲酸致大鼠骨质疏松模型的治疗作用:取体重170-200g的雌性大鼠60只,随机分为6组,即正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、阳性对照(钙尔奇D 500mg/kg)组(C组)及参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组l0只。除正常对照组外,其余各组均连续灌胃给予70mg/kg维甲酸14d,停用维甲酸后开始给予受试药物,连续给药28d。
结果见表1~2,灌胃给予维甲酸后,B组大鼠血清学指标无明显改变(P﹥0.05);连续给予参仙组合药物28d,无论预防给药还是治疗给药,对大鼠的血清学指标也无明显影响(P﹥0.05)。
表1预防给药对血清学指标及骨钙沉积的影响(n=10,
注:与B组比较,P﹤0.01△表示在10×10光镜视野下数量,表示在10×40光镜视野下数量。
表2治疗给药对血清学指标及骨钙沉积的影响(n=10,
注:与B组比较,P﹤0.01△表示在10×10光镜视野下数量,表示在10×40光镜视野下数量。
骨质疏松症的主要病理学改变是骨组织显微结构异常,其特点为单位体积内骨量减少、骨皮质明显变薄及骨小梁变细等。用维甲酸70mg/kg连续灌胃给予大鼠14d,可在短时间内成功建立实验性骨质疏松模型,具有耗时短、特异性高、症状明显、重现性好的特点,模型对研究骨质疏松症的防治具有重要价值。本研究结果表明,参仙组合药物并不影响血中钙、磷和ALP的正常生理水平,4~5mg/kg剂量水平的参仙组合药物能够抑制骨量减少,对骨质疏松症具有明显的预防和治疗作用。
实施例3参仙组合药物对女性更年期导致的骨质疏松的活性考察
3个月未交配的雌性SD大鼠56只,饲养于室温25℃,相对湿度80%的清洁环境中,自由摄食和摄水;使用标准饲料。随机分为:假手术组(A组);去卵巢组。去卵巢组又分为:对照组(B组);钙尔奇-D组(C组);乙烯雌酚组(D组)、参仙组合药物Ⅰ组(E组)、参仙组合药物Ⅱ组(F组)和参仙组合药物Ⅲ组(G组),每组8只。将大鼠用乙醚麻醉,无菌操作,经腰椎旁切口进入大鼠腹腔背侧,将其去卵巢。术后1周治疗组开始经口灌服单剂给药,C组:钙尔奇-D(每片含600mg元素钙、1500mg碳酸钙、维生素D125U)25片,溶于lO00ml温开水中,装在无菌瓶中,-4℃保存,每100g体重每天1ml,每天1次;D组:乙烯雌酚30g/(kg·d-1)灌胃;E、F和G组:每100g体重每天1ml(含生药0.25g),每天1次。动物给药时间为8周。在动物处死前lO d和2周分别用盐酸四环素灌胃,每天30mg/kg,进行四环素荧光双标记。
喂养8周后,麻醉后用双能x射线吸收测量仪测定大鼠腰椎BMD。股动脉放血处死大鼠,分离血清,用电感偶合等离子体直读光谱仪测定钙、磷含量;分别采用连续检测法、磷钨酸、镁沉淀法、酶比色法测定血清中碱性磷酸酶、高密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇的含量。留取左侧胫骨近端2/3,去除所有软组织,用水砂纸沿纵向将两侧骨标本磨平,暴露骨髓腔,然后放入0.5%的Villanueva染色剂中染色5d。乙醇梯度脱水,丙酮脱脂,聚甲基丙烯酸甲酯包埋剂包埋骨标本。待组织块变硬后,用低速锯沿胫骨暴露面纵向锯成约300μm厚骨片,用水砂纸将骨片仔细研磨成100μm厚的薄片,脱水、透明后封片。骨组织形态学参数:(1)骨小梁体积占全部骨组织体积的百分比[TBV/TTV(%)];(2)骨小梁表面和其体积之比[S/V(mm2/mm3)];(3)骨小梁体积占海绵骨体积的百分比[TBV/SBV(%)];(4)平均骨小梁板厚度[MTPT(μm)],MTPT=TBV/TBS×2000;(5)平均骨小梁板密度[MTPD(/mm2)],MTPD=(TBV/SBV)×(10/MTPT);(6)平均骨小梁板间隙[MTPS(mm2)],MTPS=(1000/MTPD)-MTPT;(7)平均骨皮质厚度[MCW(μm)]。动力学参数:(1)四环素单标记线占骨小梁表面的百分比[Sfract(d)(%)];(2)四环素双标记线占骨小梁表面的百分比[Sfract(d)(%)];(3)四环素单标记线的1/2和双标记线之和占骨小梁表面的百分比[Sfract(s/2+d)(%)];(4)四环素双标记线间的平均距离[DDL(μm)];(5)骨小梁类骨质表面占骨小梁表面的百分比[T0S(%)];(6)平均类骨质宽度[MOSW(μm)];(7)矿化沉积率[MiAR(μm/d)],MiAR=(DDL×π/4)/11;(8)矿化延迟时间[MLT(d)],MLT=MOSW/MiAR;(9)组织水平的骨形成率[Sv[μm3/μm2)],Svf=MiAR×Sfract(s/2+d);(10)类骨质成熟时间[OPM(d)],OPM=MOSW/Svf。
计量资料采用表示,采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析及q检验。
实验前,各组间大鼠体重差异无统计学意义(P﹥0.05)。处死前,A组与B、C、D、E组比较体重显著增加(P﹤0.01);实验完成后假手术组的BMD明显高于B组(P﹤0.05)。与B组比较,3种治疗组BMD有增加趋势,差异有统计学意义(P﹤O.05)。见表3所示。
表3各组大鼠体重的变化和BMD比较
与B组比较,△P﹤0.01,
切除卵巢对骨结构的影响:形态学参数的结果表明,B组与A组相比,大鼠的骨量明显减少,即TBV/TTV和TBV/SBV明显降低(P﹤0.01),MTPS增加(P﹤O.O1),骨皮质厚度变薄(P﹤0.01)。代表骨形成的参数Sfract(s)、Sfract(d)、Sfract(s/2+d)和TOS有增加趋势,但差异无统计学意义(P﹥0.05),而OPM降低(P﹤0.O1)。见表4、5。
表4各组大鼠胫骨干骺端形态计量学参数比较
与B组比较,△P﹤0.01,
表5各组大鼠胫骨干骺端动力学参数比较
与B组比较,△P﹤0.01,
器官湿重除以体重指数。去除卵巢后脑和子宫重量指数明显下降,肾脏指数略下降。乙烯雌酚能使脑、子宫和肾重量指数恢复(P﹤0.01),参仙组合药物和钙也能使脑和肾重量指数恢复。见表6。
表6三种药对各组大鼠内脏指数的影响n=8,g/lOOg)
与A组比较,□P﹤0.01,◇P﹤0.05;与B组比较,△P﹤0.01,与D组相比较☆P﹤0.05。
去卵巢后血清碱性磷酸酶(ALP)含量升高。3种治疗药物均不能使碱性磷酸酶含量下降。乙烯雌酚组与去卵巢组比较,高密度蛋白胆固醇(Ⅻ)L)和总胆固醇含量明显降低。见表7。
表7三种药对各组大鼠血清生化指标的影响n=8)
与A组比较,□P﹤0.01,◇P﹤0.05;与B组比较,△P﹤0.01,与D组相比较☆P﹤0.05;﹟P﹤0.01。
本实验骨形态学和动力学参数比较:3月龄雌性大鼠去卵巢8周后骨量明显减少,伴随骨吸收和骨形成同时增加,骨密度降低,体重增加,呈现高转换骨质疏松状态,显示典型的去卵巢骨质疏松模型的改变。大鼠去卵巢后骨骼的改变是由于体内雌激素迅速降低所致,与绝经后妇女的改变有一定的相似。体重的增加是因为血中雌激素水平降低,肾上腺分泌雌酮在脂肪组织加速转化为雌激素,以弥补血中不足,从而导致体重增加。血中碱性磷酸酶增加是由于去卵巢后雌激素缺乏导致细胞活性增强,因偶联作用成骨细胞活性提高,活跃的成骨细胞分泌大量骨型碱性磷酸酶,一部分参与骨的钙化,一部分释放到血液中,使血中碱性磷酸酶含量增加。
乙烯雌酚能对抗去除卵巢所导致的骨丢失,能使骨量指数恢复,增加去卵巢后的骨量和骨小梁数目,减少破骨细胞生长,抑制去卵巢后所引起的骨形成参数的增加。原因在于抑制了破骨细胞的活性,从而抑制了骨吸收增加所偶联的骨形成增加。雌激素预防去卵巢引起的大鼠骨质疏松的特点正是同时明显抑制骨吸收和骨形成,从而降低了去卵巢后破骨细胞活性增加和降低骨转换率,增加骨量。雌激素替代疗法应用广泛,确有疗效,但不良反应较重。本实验中应用雌激素后,明显抑制了动物增长,过渡刺激肝脏增重和明显刺激子宫增生。当应用参仙组合药物时,对肝脏刺激作用较轻,不过度刺激子宫,而对抗去卵巢所导致的骨丢失的作用与乙烯雌酚相当。
Claims (5)
1.一种由人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子组成的参仙组合药物在制备治疗骨质疏松药物中的应用;所述参仙组合药物中人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子的重量比1-40:1-40:1-40:1-40:1-40。
2.根据权利要求1所述参仙组合药物在制备治疗原发性骨质疏松药物中的应用。
3.根据权利要求2所述参仙组合药物在制备治疗女性更年期导致的骨质疏松药物中的应用。
4.根据权利要求2所述参仙组合药物在制备治疗老年性骨质疏松药物中的应用。
5.根据权利要求1-4所述应用,其特征在于:所述参仙组合药物的制备方法为:
1)称取药材,淫羊藿切碎,水提取,浓缩至比重为1.2克/厘米3,乙醇浸泡,再回收乙醇得淫羊藿浸膏;
2)乙醇提取仙茅与制首乌,回收乙醇至提取液为原生药材体积的2-20倍时,停止回收,加入石灰乳改变提取液pH值至7-8,过滤,滤液注入二氧化碳气体至无沉淀,24小时时效处理,再过滤,滤后加入醋酸调节pH值至6-3,回收乙醇得仙茅制首乌浸膏;
3)将女贞子粉碎成女贞子粉末,或将女贞子乙醇提取得女贞子浸膏;
4)将人参粉碎成人参粉末,或用乙醇回流提取得到人参浸膏;
5)将上述所得淫羊藿浸膏、仙茅制首乌浸膏、女贞子粉末或浸膏、人参粉末或浸膏混合,通过制剂生产工艺加工成制剂,得到参仙组合药物。
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