CN103784856B - 一种治疗牙周炎的中药组合物及其制法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗牙周炎的中药组合物，选用熟地黄、地黄、鸡血藤、紫河车、骨碎补、漏芦、丹参、五味子、山药、郁金、黄芪、牛膝、野菊花、茯苓、枸杞子、牡丹皮、泽泻、肉桂为原料，根据现代制剂工艺技术的常规制备方法制备成任何一种常用的制剂。本发明也涉及该中药组合物在制备对肾虚火旺所致的牙齿酸软、咀嚼无力、松动移位、龈肿齿衄及慢性牙周炎的药物中的应用，本发明的中药组合物具有标本兼治、安全性好、疗效好、使用方便等特点。

Description

一种治疗牙周炎的中药组合物及其制法与应用

【技术领域】

本发明属于中药领域，具体讲涉及一种治疗因肾虚火旺所致的牙齿酸软、咀嚼无力、松动移位、龈肿齿衄及慢性牙周炎的中药组合物及其制备方法与应用。

【背景技术】

牙周病是人类最常见、最多发的口腔疾病之一，世界范围内均有较高的患病率，其主要症状为牙龈出血，牙龈红肿，疼痛，严重时牙龈溢脓，咀嚼无力，牙齿松动等。据第三次全国口腔健康流行病学调查数据显示，我国80%～90%的成年人群有不同程度的牙周问题，患有牙周疾病的占到成人总人数的2/3，已成为人们口腔健康的第一杀手。目前，牙周病主要包括牙龈病和牙周炎两大类，前者只发生在牙龈组织，而后者则是累及四种牙周支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质）的慢性感染性疾病，往往引发牙周支持组织的炎性破坏，其主要临床表现是牙龈炎症、出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收、牙槽骨高度降低、牙齿松动、移位、咀嚼无力，严重者牙齿可自行脱落或者导致牙齿的拔除。

临床上牙周病的治疗方法主要包括：①口腔自洁、电动牙刷、龈上洁治、龈下刮治；②手术治疗；③西药治疗：甲硝锉、二甲胺四环素、强力霉素、替硝锉等，但有比较明显的缺点：全身用药药用量大、疗程长、副作用大等；而控释药物则必须在牙周袋底释放药物，必须释放出对微生物有效的药物浓度及必须在牙周袋内维持有效浓度达到的足够时间，使得置药困难、牙周损害大、限制了疗效的发挥。

中医认为齿为肾所主，肾虚精亏血少，齿失濡养，引起骨质瘘软，兼以阴虚火旺，虚火上炎于龈肉，久则牙齿动摇、根露；或因素体虚弱，或因久病耗伤正气，气血不足，牙龈失于滋养而病邪趁虚而入，以致龈肉萎缩，血不循经，齿龈出血，故成此病。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种标本兼治、安全性好、疗效好、使用方便的用于治疗因肾虚火旺所致的牙齿酸软、咀嚼无力、松动移位、龈肿齿衄及慢性牙周炎的纯中药制剂。

为实现上述目的，本发明提供了一种治疗牙周炎的中药组合物，由下述重量份的原料药制备而成：

熟地黄10～20份地黄5～10份鸡血藤6～12份

紫河车8～15份盐骨碎补7～14份漏芦2～8份

酒丹参5～10份酒五味子2～8份山药3～9份

醋郁金4～10份炙黄芪3～8份牛膝1～5份

野菊花2～8份茯苓1～6份枸杞子2～8份

牡丹皮2～6份盐泽泻0.5～4份肉桂0.1～4份。

本发明的一种治疗牙周炎的中药组合物，其中，原料药较优配比为：

熟地黄15～20份地黄7～10份鸡血藤8～12份

紫河车9～13份盐骨碎补8～11份漏芦3～7份

酒丹参6～9份酒五味子3～7份山药4～8份

醋郁金4～8份炙黄芪4～7份牛膝2～4份

野菊花3～6份茯苓2～5份枸杞子3～7份

牡丹皮2～4份盐泽泻1～3份肉桂0.2～2份。

本发明的治疗牙周炎的中药组合物，其中，组合物制备为丸剂、滴丸剂、胶囊剂、合剂、气雾剂、片剂、颗粒剂、散剂。

本发明的治疗牙周炎的中药组合物的制备方法，包括下述步骤：

将所述十八味药，粉碎成细粉，过筛，混匀；

加入可药用辅料制成临床可接受的剂型。

本发明的中药组合物在制备治疗牙周炎药物中的应用。

本发明立论于“肾生骨生髓”、“齿为骨之余”，立足于补肾益精，治其本，又以清热解毒制其标，用于肾虚热牙周病甚为适宜。本发明的中药组合物中熟地黄滋养肝肾，填精益髓，为君药。紫河车滋补气血、益肝肾，骨碎补补肾健骨、行血消肿，地黄滋阴养血、清热凉血，鸡血藤补血行血、通经活络，山药健脾胃、补肺肾；枸杞子补肝肾、润肺燥，炙黄芪补气健脾，共为臣药。丹参活血祛瘀、凉血消肿，郁金凉血破瘀，五味子益气生津，茯苓健脾渗湿，泽泻渗湿泄火，牛膝破血行瘀、引火下行，漏芦清热解毒、消肿排脓，牡丹皮清热凉血散瘀，野菊花清热解毒、消肿止痛，共为佐药。肉桂引火归源，为使药。本发明的优点在于安全性好、疗效好、疗程短、使用方便。

一、动物实验

1材料和方法

1.1主要材料和仪器

健康普通级SD大鼠240只，实验动物质量合格证SCXK（川）2009-09，由四川大学华西校区实验动物中心提供，雌雄各半，体重约200g/只；大鼠MMP-13抗体（Santa，美国），山羊抗体IgG-生物素、辣根酶标记链亲和素、二氨基联苯胺显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；处方1，处方2，处方3，处方4；持针器、钢丝剪、骨钳、眼科剪、平钳、灌胃器（四川大学华西口腔医院医学院动物中心提供），细菌厌氧培养箱（浙江义乌冷冻机总厂），光学显微镜(Nikon，日本),体视显微镜SM1000型（Nikon，日本）。

处方1：

熟地黄18份地黄8份鸡血藤9份紫河车10份

盐骨碎补8份漏芦5份酒丹参7份酒五味子4份

山药6份醋郁金7份炙黄芪5份牛膝4份

野菊花3份茯苓2份枸杞子7份牡丹皮2份

盐泽泻2份肉桂1份。

处方2：

熟地黄20份地黄10份鸡血藤12份紫河车15份

盐骨碎补9份漏芦8份酒丹参7份酒五味子5份

山药7份醋郁金6份炙黄芪4份牛膝5份

野菊花6份茯苓2份枸杞子8份牡丹皮4份

盐泽泻1份肉桂3份。

处方3：

熟地黄15份地黄8份鸡血藤7份紫河车9份

盐骨碎补10份漏芦6份酒丹参6份酒五味子6份

山药5份醋郁金8份炙黄芪7份牛膝4份

野菊花3份茯苓4份枸杞子6份牡丹皮3份

盐泽泻2份肉桂2份。

处方4：

熟地黄16份地黄6份鸡血藤10份紫河车8份

盐骨碎补14份漏芦8份酒丹参10份酒五味子7份

山药9份醋郁金5份炙黄芪6份牛膝3份

野菊花8份茯苓6份枸杞子4份牡丹皮6份

盐泽泻4份肉桂4份。

1.2方法

1.2.1牙周炎动物模型的建立

（1）建模方法：240只健康SD大鼠，以3%苦味酸溶液标号后按照性比、体质量分层，采用随机数字表法选择24只大鼠作为正常组，给予常规饮食，正常饲养；余下的216只均作为牙周炎建模组，进行牙周炎建模。

牙周炎建模组在全麻下双侧第一磨牙结扎正畸丝，按照每只大鼠每天20mg的剂量，将规格为125mg/粒的阿莫西林（Amoxicillin，山东鲁抗医学股份有限公司，济宁）混入饮用水中喂饲3d，以抑制不利于牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis，Pg）生长的内源性细菌。在双侧上颌第一磨牙的龈沟内接种1ml1.5×10¹²CFU/L的Pg菌悬液，每48h接种1次。共接种3次。牙周炎建模组大鼠以10%高糖饮水喂饲，正常组大鼠喂饲饮用水。从牙周炎建模组大鼠上颌第一磨牙结扎钢丝后计算，建模时间共计21d。

（2）大体形态学观察：每组处死8只大鼠后，解剖分离出上颌骨，分为左、右两侧，将左侧牙槽骨标本完全去除软组织，保留硬组织，在体视显微镜下观察正常组与牙周炎建模组大鼠的牙槽骨情况。

（3）组织学观察：大鼠处死后，迅速分离上颌骨，10%中性福尔马林固定24h，上颌骨右侧用于组织切片观察。组织病理学改变是确定牙周炎动物模型建立成功的金标准，正常组、牙周炎模型组均按照随机数字表法随机选择4个右侧牙槽骨组织块（余下4个牙槽骨组织块用于后续免疫组化实验），通过病理切片观察大鼠右上颌第一磨牙牙周组织的变化，以确定建模是否成功。

1.2.2不同浓度的本发明中药组合物治疗大鼠实验性牙周炎：

（1）实验分组：大鼠牙周炎模型建立成功后去除结扎丝，正常饲养一周，采用随机区组设计，将成功建立牙周炎模型的208只大鼠按照随机数字表法分为13组：牙周炎模型组、本发明中药组合物低剂量组、中剂量组、高剂量组，建模成功后余留的16只正常大鼠作为正常对照组，各组大鼠均为16只。根据《药理实验方法学》等效剂量系数折算法，d_大鼠=6.3×d_人（d：剂量，单位：mg/kg）。根据临床给药剂量换算为200g标准体质量大鼠的用药剂量为0.8g·kg^-1·d^-1，鉴于实验过程中大鼠体质量增加及中药新药药效学研究规定，制定本发明的中药组合物的剂量梯度，低剂量为0.8g·kg^-1·d^-1，中剂量为2g·kg^-1·d^-1，高剂量为4g·kg^-1·d^-1，采用经口灌胃给药方式。正常对照组及牙周炎模型组均以10ml·kg^-1·d^-1的生理盐水灌胃。给药30d后，各组大鼠均处死8只，余下的8只大鼠按照分组的原则继续给药，治疗60d后全部处死。

（2）大体形态学观察：去除正常对照组、牙周炎模型组、本发明中药组合物的低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠上颌骨左侧的软组织，制作上颌骨标本，体视显微镜下观察牙槽骨状况。

（3）组织学观察：对给药30d及60d各组大鼠上颌骨右侧标本进行免疫组化实验，两个时间段各组标本均为8个，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-perosidase，SP）监测MMP-13在各实验组牙龈上皮与牙周膜中的表达。将已知有MMP-13强阳性表达的小鼠小肠标本作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。阳性标准是胞浆染色为黄色，阴性表达则无黄色着色。

在日本NikonEclipse80i光学显微镜下完成图像采集，采用Image-proplus6.0软件（MediaCybemetics，USA）进行图像分析。每只动物选用一张切片，对第一磨牙牙龈上皮和第一磨牙根分叉区中1/3牙周膜的阳性信号强度进行分析。以积分吸光度（integratedabsorbance，IA）值作为参数进行半定量测定。每张切片均测量其背景灰度，用以消除切片见的误差。

2.结果

2.1建模成功后各组大鼠牙周组织中MMP-13的表达：正常大鼠的牙龈上皮和牙周膜中未见MMP-13的表达，成功建立大鼠实验性牙周炎模型后，牙周炎模型组中的牙龈上皮、牙周膜成纤维细胞以及成骨细胞胞浆MMP-13呈强阳性表达。

2.2给药治疗后各组大鼠牙周组织中MMP-13的表达：给药30天后，牙周炎模型组牙龈上皮MMP-13呈强阳性染色，同样牙周膜成纤维细胞以及成骨细胞MMP-13呈强阳性表达。经过本发明中药组合物高、中、低剂量治疗后，牙龈上皮、牙周膜成纤维细胞以及成骨细胞MMP-13阳性信号明显减弱。通过IA值比较发现，本发明中药组合物高、中剂量组能够明显降低牙周组织MMP-13的表达，与牙周炎模型组相比，差异具有统计学意义，且高剂量组MMP-13的IA值显著低于低剂量组（P<0.05）。

给药60天后，牙周炎模型组牙龈上皮与牙周膜成纤维细胞胞浆MMP-13仍呈强阳性染色，牙槽骨呈锯齿状吸收，MMP-13呈强阳性表达。本发明中药组合物高、中、低剂量组中牙龈上皮与牙周膜MMP-13的着色程度和着色面积较模型对照组明显降低，呈弱阳性，差异具有统计学意义，且高剂量组MMP-13的IA值显著低于低剂量组（P<0.05，见表1）。

表1各组牙周炎大鼠牙周组织中MMP-13的积分光密度值

注：各组两个时间点样本量均为8；^a：与相同给药时间牙周炎模型组相比p<0.05，^b：与相同给药时间本发明中药组合物高剂量组相比p<0.05。

给药30天与60天后各治疗组大鼠牙周组织中MMP-13的IA值纵向比较无显著性差异，但从整体水平上看，随着给药时间的延长，MMP-13在牙周组织中的表达量下降趋势。表明本发明中药组合物能够降低炎症反应，降低骨胶原酶MMP-13的表达，延缓牙周组织破坏。

二、临床实验

临床试验共421例（男、女，18～65岁），其中试验组316例，对照组105例。

试验组牙周炎的临床疗效有效率为83.49%，对照组有效率为72.64%，两者差异有统计学意义（P=0.0150），可以认为本发明药物组合物治疗肾虚火旺型牙周炎牙周临床疗效优于知柏地黄丸。试验组对肾虚火旺证候疗效的有效率为72.97%，对照组有效率为70.76%，两者差异无统计学意义（P=0.5252）。可以认为两种药物对肾虚火旺证候疗效相似。临床试验中未发现该药有明显不良反应。

对照组药物：知柏地黄丸，成都九芝堂金鼎药业有限公司，规格：每30丸重1g，批号050445。

试验组药物：本发明处方1。

1.诊断标准

参照中华人民共和国食品药品监督管理局颁布的《中药新药临床研究指导原则》及中华人民共和国国家标准《中医临床诊疗术语证候部分》（GB/T16751.2(1997）以及卫生部统编教材《牙周病学》第二版（曹采方主编，人卫出版社，2003）中的有关内容制定。本研究选择西医诊断为牙周炎、中医辨证符合肾虚火旺型证候的患者。

西医诊断为中、重度牙周炎的患者（包括慢性牙周炎和侵袭性牙周炎），并经中医辨证符合肾虚火旺型者，在肾虚火旺证候积分表中至少出现主症1项，次症1项者。

2.用药方法及疗程

试验组：本发明中药组合物，每天2次，每次1小袋，温水吞服。

对照组：知柏地黄丸，每天2次，每次1小袋，温水吞服。

受试对象纳入后首日进行基线资料的收集，并接受牙周基础治疗，发放药物；第二日早晨开始服用药物；连服3月。定期复查，服药后第91天最后一次复诊，收集终点资料后结束试验。

3.疗效观察指标

牙周炎临床观察指标：牙跟指数（GI）、龈沟出血指数（SBI）、牙周袋探诊深度（PD）、附着丧失程度（AL）、牙齿松动度。

牙槽骨骨密度：拍摄数码口腔曲面断层片，测定指数牙试验前后牙槽骨骨密度的变化。

临床疗效判定标准：基本痊愈、显效、进步、无效。

GI、SBI疗效评价：（相关指数或测量值的）差值=治疗前(治疗后差值均数=差值之和/2

PD、AL疗效评价：（相关指数或测量值的）差值=治疗前(治疗后差值均数=差值之和/2

基本痊愈：GI减少1级以上，SBI减少2级以上，PD、AL减少1mm以上；或者松动度降低2度；

显效：GI减少0.5级，SBI减少1级以上，PD、AL减少0.5mm以上；或者松动度降低1度；

进步：GI、SBI减少0.5级，PD、AL减少不及0.5mm；或松动度降低不及1度；

无效：上述症状体征及指标无明显改善，

报告临床疗效评价时，以基本痊愈加显效计算有效率（%）。

肾虚火旺证候疗效总评价

证候积分指数（N）=（治疗前积分-治疗后积分）/治疗前积分×100%

基本痊愈：N≥90%；显效：70%≤N＜90%；进步：30%≤N＜70%；无效：N＜30%。

试验组和对照组在平均年龄、性别构成、文化程度、吸烟状况、伴随疾病、药物过敏、合并用药、有无牙周炎家族史、脉搏、血压、疾病诊断、治疗前GI、SBI、松动度、PD、AL肾虚火旺证候主、次症各项评分差异等方面差异无统计学意义，两组具有可比性。

4.1牙周临床疗效

结果见表3、表4。

4.2中医证候疗效

结果见表5、表6。

表3治疗后90天两组患者牙周临床疗效比较（FAS分析集）

表4治疗后90天两组患者牙周临床疗效比较(PPS分析集)

结果均显示：治疗后90天试验组和对照组的牙周临床疗效的疗效等级差异无统计学意义；治疗后90天两组的牙周临床疗效有效率差异有统计学意义，可以认为本发明中药组合物治疗牙周炎的临床疗效有效率优于知柏地黄丸。

表5治疗后90天两组患者肾虚火旺证候疗效比较（FAS分析集）

表6治疗后90天两组患者肾虚火旺证候疗效比较（PPS分析集）

FAS分析集和PPS分析集分析结果均显示：治疗后90天试验组和对照组肾虚火旺证候的疗效等级无统计学意义；两组肾虚火旺证候疗效有效率差异无统计学意义。

两组治疗前后牙槽骨密度差值比较，结果见表7。

表7治疗后90天两组牙槽骨密度差值比较（FAS分析集）

试验组和对照组治疗前牙槽骨密度差异无统计学意义，（t=9.2468，P=0.4932）可以认为两组基本具有可比性；治疗前后组内比较，差异均有统计学意义（试验组t＝(0.69，P=0.0001；多招租t=6.9228，P=0.0001），可以认为本发明药物组合物和知柏地黄丸均能增加牙槽骨密度；试验组和对照组治疗前后牙槽骨密度差值两组比较（t=(0.61，P=0.5452），差异无统计学意义。

两组治疗前后牙周临床指标差值的比较，结果见表8。

表8两组治疗后90天与治疗前牙周临床指标差值的比较（FAS分析集）

试验组和对照组治疗前后要临床指标（GI、SBI、松动度、PD、AL）差值的差异无统计学意义。

两组肾虚火旺证候评分的变化比较，见表9、10。

表9治疗后90天两组肾虚火旺证候（主症）评分改变得等级分析（FAS分析集）

结果表明本发明组合物对松动移位改善的效果优于知柏地黄丸。

表10治疗后90天两组肾虚火旺证候（次症）评分改变的等级分析（FAS分析集）

两组安全性评价分级比较，结果见表11。

表11两组安全性评价分级比较

试验组和对照组安全性评价分级，差异无统计学意义。

【具体实施方式】

实施例1

熟地黄10份地黄5份鸡血藤5份

紫河车5份盐骨碎补5份漏芦2份

酒丹参5份酒五味子2份山药2份

醋郁金2份炙黄芪2份牛膝1份

野菊花2份茯苓2份枸杞子2份

牡丹皮1份盐泽泻1份肉桂0.1份。

实施例2

熟地黄20份地黄10份鸡血藤10份

紫河车10份盐骨碎补10份漏芦8份

酒丹参10份酒五味子8份山药8份

醋郁金8份炙黄芪8份牛膝5份

野菊花8份茯苓8份枸杞子8份

牡丹皮5份盐泽泻5份肉桂4份。

实施例3

熟地黄12份地黄6份鸡血藤6份

紫河车6份盐骨碎补6份漏芦3份

酒丹参6份酒五味子3份山药3份

醋郁金3份炙黄芪3份牛膝2份

野菊花3份茯苓3份枸杞子3份

牡丹皮2份盐泽泻2份肉桂0.2份。

实施例4

熟地黄18份地黄9份鸡血藤9份

紫河车9份盐骨碎补9份漏芦7份

酒丹参9份酒五味子7份山药7份

醋郁金7份炙黄芪7份牛膝4份

野菊花7份茯苓7份枸杞子7份

牡丹皮4份盐泽泻4份肉桂2份。

实施例5

熟地黄16份地黄8份鸡血藤8份

紫河车8份盐骨碎补8份漏芦4份

酒丹参8份酒五味子4份山药4份

醋郁金4份炙黄芪4份牛膝2份

野菊花4份茯苓4份枸杞子4份

牡丹皮2份盐泽泻2份肉桂1份

实施例6制备

取实施例1～5任一实施例所述药物，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入可药用辅料制成临床可接受的剂型。

实施例7丸剂制备

将实施例6中所制得的细粉，加入其总量2%的食用盐及适量纯化水，于混合机中混匀，用制丸机制丸，干燥，加入其总量3%的包衣剂用包衣机包衣、制成丸剂。

本实施例中所用制丸机制丸、干燥、用包衣机进行包衣系按照本领域常规工艺制备。

实施例8滴丸剂制备

将实施例6所制得的细粉，加入到适量的聚乙二醇中，加热融化后搅拌均匀，在温度3℃条件下滴入液体石蜡中，制成滴丸剂。

实施例9胶囊剂制备

将实施例6中所制得的细粉，加入其总量2%的硬脂酸镁或/和滑石粉，在混合机中混合均匀后填充胶囊。

实施例10合剂制备

将实施例1～5中任一实施例用粉碎机进行粗碎，用浓度为50%的乙醇浸渍二次，每次乙醇用量为粗粉总量的10倍，每次浸渍时间为24小时，收集浸渍液，挥去乙醇，合并浸渍液，浓缩至每日服用剂量为60ml的的清膏，分装、灭菌，即得。

实施例11气雾剂制备

将实施例6中所制得的细粉，粉碎至5um以下的药物微粒与聚乙二醇在胶体磨中充分混匀研细，制成稳定的混悬液，分装、填充抛射剂，即得。

实施例12颗粒剂制备

将实施例6所制得的细粉，加入适量乙醇及淀粉，用混合机混匀制软材，将软材用制粒机制粒，分装，即得颗粒。

实施例13散剂制备

将实施例6中所制得的细粉，加入3%的滑石粉，混合均匀，分装，即得散剂。

实施例14片剂制备

将实施例6所制得的细粉，加入适量乙醇及淀粉，用混合机混匀制软材，将软材用制粒机制粒后压片，包衣，即得。

本实施例中，可根据实际情况加入适量的滑石粉和/或硬脂酸镁。

本实施例中将软材用制粒机制粒、压片、包衣系按照本领域常规工艺制备。

Claims (6)

1.一种治疗牙周炎的中药组合物，其特征在于由下述重量份的中药原料制备而成：

2.如权利要求1所述一种治疗牙周炎的中药组合物，其特征在于所述原料药较优配比为：

3.如权利要求1所述的治疗牙周炎的中药组合物，其特征在于所述组合物制备为滴丸剂、胶囊剂、合剂、气雾剂、片剂、颗粒剂、散剂。

4.一种如权利要求1或2任一所述的治疗牙周炎的中药组合物的制备方法，包括下述步骤：

将所述十八味药，粉碎成细粉，过筛，混匀；

加入可药用辅料制成临床可接受的剂型。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述可药用辅料为药用炭、苯甲酸钠、滑石粉、蜂蜜、聚乙二醇、乙醇、食盐、包衣剂、淀粉及糊精中的一种或几种的混合物。

6.如权利要求1或2中所述的任一中药组合物在制备治疗因肾虚火旺所致的牙齿酸软、咀嚼无力、松动移位、龈肿齿衄及慢性牙周炎药物中的应用。