CN113416716A - 一种分离并纯化重组tph2蛋白的方法及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法及试剂盒，克服了现有技术中色氨酸羟化酶TPH2的分离纯化步骤复杂的缺陷，该一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法包括：获取含重组TPH2蛋白的溶液，所述重组TPH2蛋白中包括TPH2、链霉亲和素和Flag标签；亲和层析：分别采用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行亲和层析，获取层析液；采用分子筛对层析液进行层析纯化即可获得TPH2。本发明具有工艺简单，且能保持TPH2蛋白的结构完整性和活性的优点。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白分离领域，具体涉及一种分离并纯化重组TPH2蛋白的方法及试剂盒。
背景技术
色氨酸是人体必需氨基酸之一，参与多种生物代谢过程，是激素等生物活性物质的合成前体，在医药、食品行业都扮演着不可缺失的角色。色氨酸经过羟化酶氧化后可形成5-羟基色氨酸(5-HTP)，再经过脱羧反应产生5-羟基色氨(5-HT)。5-HT又名血清素，与肾上腺素、去肾上腺素、组胺等物质一样，都是人体中重要的胺类物质。5-HT在神经和大脑中有大量分布，是褪黑激素合成的前体，在人体中具有减轻忧郁、失眠、食欲不振、体重失调等症状的作用。此外，抑郁症、自闭症、狂躁症、精神分裂疾病和人体肠道应激反应综合征等疾病的发病过程通常与5-HT的合成或代谢途径受损相关。因此，5-HT是一种重要的精神疾病药物。
目前医药行业所用的5-HT主要由加纳籽中提取的5-HTP转化而来，提取方法多为水热法、醇法和超声提取。但随着人类对环境的过渡开发与污染，非洲加纳树的存在也越来越少，对于5-HTP的获取带来重大困难。在随后的产品研发中，研究学者引进了色氨酸羟化酶，希望以色氨酸羟化酶催化色氨酸大量合成5-HTP；而TPH2是人体中活性最高的色氨酸羟化酶，其主要在脑部表达。已有研究结果表明，色氨酸羟化酶TPH2和苯丙氨酸羟化酶等芳香族氨基酸羟化酶类似，主要由N端调节区、催化中心区和C端聚集区组成，在亚铁离子和四氢蝶呤存在下，可催化底物羟基化。
但色氨酸羟化酶TPH2在生物体环境中并不稳定，可溶性较低，尤其是在大肠杆菌基因工程菌中需融合较大助溶蛋白，因此在大肠杆菌中表达后，其纯化过程十分复杂，且产物需要采用酶切的方式进行除杂，导致活性低，需要后续进行复活处理，操作十分复杂。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中色氨酸羟化酶TPH2的分离纯化步骤复杂的缺陷，从而提供一种可以简单分离纯化TPH2的方法，且保证分离出的TPH2能够保持结构完整性和活性。
一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，
获取含重组TPH2蛋白的溶液，所述重组TPH2蛋白中包括TPH2、链霉亲和素和Flag标签；
亲和层析：分别采用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行亲和层析，获取层析液；
采用分子筛对层析液进行层析纯化即可获得TPH2。
所述获取含重组TPH2蛋白的溶液的过程为：
获得含TPH2-2Streptavidin-3Flag基因片段的重组质粒，将重组质粒转染到293F表达细胞进行重组蛋白表达后，进行细胞破碎处理获得细胞破碎液，该细胞破碎液即为含重组TPH2蛋白的溶液；
优选的，所述细胞破碎处理时采用机械破碎法、反复冻融法或超声波处理法进行细胞破碎，破碎过程中所用的缓冲液为平衡缓冲液；或/和，在使用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠之前，先采用平衡缓冲液对Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行保存；
所述平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
在进行Flag磁珠和链霉亲和素磁珠保存之前，先使用超纯水和0.1mol/L的NaOH溶液进行清洗；
在采用Flag磁珠进行吸附之前，先采用重生缓冲液和平衡缓冲液分别洗脱Flag磁珠至少一次；
其中，重生缓冲液包括0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至2.0-3.5。
采用Flag磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到Flag磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次flag小肽溶液对该Flag磁珠进行洗脱即可；
采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到链霉亲和素磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次生物素溶液对该链霉亲和素磁珠进行洗脱即可。
所述洗杂缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
所述flag小肽溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
所述生物素溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，1～50mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
所述分子筛对层析液进行层析纯化时，分子筛的流动相缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
在亲和层析步骤中，先采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析，然后再采用Flag磁珠进行亲和层析。
所述亲和层析步骤之前，还包括冷冻离心和/或抽滤步骤；
优选的，所述冷冻离心的最大相对离心力为30000-40000g，离心时间为30-60min，抽滤的滤膜采用孔径≤0.22um的水溶性滤膜。
一种分离纯化重组TPH2蛋白的试剂盒，包括Flag磁珠、链霉亲和素磁珠、平衡缓冲液、洗杂缓冲液、flag小肽溶液和生物素溶液。其中，
平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
洗杂缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
flag小肽溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
生物素溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，1～50mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
本发明的一种分离纯化重组TPH2蛋白的试剂盒，还包括重生缓冲液；所述重生缓冲液为包括0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至3.5。
本发明技术方案，具有如下优点：
本发明提供的分离并纯化重组TPH2蛋白的方法，采用两次亲和层析和分子筛结合的纯化方法，操作步骤简单，省去了传统的复性纯化步骤，提高了TPH2蛋白制备效率；并且，采用本发明方法还保持了TPH2蛋白的结构完整性和活性，并提高了TPH2蛋白分离的产量和纯度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的实施例1的链霉亲和素磁珠亲和层析结果图；
图2是本发明的实施例1的Flag磁珠亲和层析结果图；
图3是本发明的实施例1的分子筛层析后的洗脱液的光吸收分析图；
图4是本发明的实施例1的TPH2蛋白经过分子筛层析后的蛋白电泳图；
图5是本发明的实施例1最终制备得到的TPH2蛋白浓缩蛋白电泳图；
图6是本发明试验例1中测定的5-HTP浓度-荧光吸收标准曲线图；
图7是本发明试验例1中测定的TPH2在不同反应时间下的荧光吸收值。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，包括：步骤1.在UniProt数据库搜索获得人源TPH2基因的DNA序列信息，转录本序列号为NM_173353.4:143..1615，通过PCR扩增技术获取目的片段后，使用T4连接酶将目的片段连接至带有2个Streptavidin、3个Flag标记的商用真核表达载体pCAG中，即获得重组pCAG-TPH2-2Streptavidin-3Flag质粒。将重组pCAG-TPH2-2Streptavidin-3Flag质粒转染到293F表达细胞中，转染方法为常规方法，只要保证质粒转染成功即可，转染成功后发酵培养4天，取300ml培养液，培养液中细胞浓度约为3×106cuf/ml，离心收集细胞。
步骤2.在收集的细胞中加入20ml平衡缓冲液，用超声破碎细胞、获得TPH2蛋白裂解液，所用平衡缓冲液的成分为50mM Hepes-HCl、pH 7.5、150mM NaCl、0.1mM FeSO4,1mMEDTA,0.5mM L-色氨酸，0.1％(v/v)吐温20，10％(v/v)甘油，1mM PMSF。吸取少量破碎后上清液进行蛋白变性凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色检测TPH2蛋白的表达。
步骤3.在40000g亚超速冷冻离心机上离心30分钟，保持转头在4℃条件下，离心后，采用平衡缓冲液进行混悬获得混悬液。
步骤4.使用Jetbiofil公司的针头式过滤器Syring-driven filters型号为PEP-204-030、孔径为0.22um水溶性滤膜对混悬液进行抽滤，获得含有TPH2蛋白的粗提液，同时分别使用超纯水、0.1M NaOH溶液清洗链霉亲和素磁珠，并将链霉亲和素磁珠保存于平衡缓冲液中；分别使用超纯水、0.1M NaOH溶液清洗Flag磁珠，并将Flag磁珠保存于平衡缓冲液中。
步骤5.将粗提液加入到链霉亲和素磁珠中使TPH2蛋白结合链霉亲和素磁珠，然后用洗杂缓冲液冲洗两次，接着用生物素溶液洗脱并收集包含所述TPH2蛋白的洗脱液。其中，洗杂缓冲液为50mM Hepes-HCl、pH 7.5、150mM NaCl、10mM ATP、10mM MgCl2。生物素溶液为50mM Hepes-HCl、pH 7.5、150mM NaCl、0.1mM FeSO4,1mM EDTA,0.5mM L-色氨酸，0.1％(v/v)吐温20，10％(v/v)甘油，1mM PMSF，50mM生物素。其中，链霉亲和素磁珠的厂家和型号为：Iba lifesciences公司
XT
high capacity。
步骤6.吸取少量结合蛋白的链霉亲和素磁珠、生物素溶液多次洗脱的洗脱液进行蛋白变性凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色检测TPH2蛋白的纯化，结果如图1所示，通过结果显示：通过生物素溶液多次洗脱、富集可得到含有TPH2蛋白的第一纯化液。图1中，S为破碎液上清液，FT为流穿液，B1为磁珠结合，E1为第一个洗脱体积(4ml)，E2为第二个洗脱体积(4ml)，E3为第三个洗脱体积(4ml)，E4为第四个洗脱体积(4ml)，B2为磁珠上残留成分。
步骤7.将洗脱液加入到Flag磁珠中使TPH2蛋白结合Flag磁珠，然后用洗杂缓冲液冲洗两次，最后用Flag小肽溶液洗脱并收集包含所述TPH2蛋白的洗脱液；其中，Flag小肽溶液包含50mM Hepes-HCl、pH 7.5、150mM NaCl、0.1mM FeSO4,1mM EDTA,0.5mM L-色氨酸，0.1％(v/v)吐温20，10％(v/v)甘油，1mM PMSF，0.3mg/ml Flag小肽。其中，Flag磁珠的厂家和型号为：Flag
m2 affinity gel。
步骤8.吸取少量结合蛋白的Flag磁珠、Flag小肽溶液多次洗脱的洗脱液进行蛋白变性凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色检测TPH2蛋白的纯化，结果如图2所示，通过结果显示：通过Flag小肽溶液多次洗脱、富集可得到含有TPH2蛋白的第二纯化液。在图2中，S为上清液，FT为流穿液，b1为磁珠结合成分，e1为第一个洗脱体积(4ml)，e2为第二个洗脱体积(4ml)，e3为第三个洗脱体积(4ml)，b2为磁珠残留成分。
步骤9.将洗脱液浓缩至0.5ml、将浓缩液加入到分子筛色谱层析柱中进行层析，分子筛层析结果如图3所示，通过结果显示：纯化的TPH2蛋白洗脱峰在16.25-18.5ml排出体积处。本步骤中的浓缩液通过超滤获得。其中，分子筛色谱层析柱为厂家GE生产的型号为SuperoseTM6 increase 10/300GL分子筛。
步骤10.吸取少量步骤9中分子筛洗脱过程中获得的洗脱液进行蛋白变性凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色，选取TPH2蛋白富集组分，得到纯化的TPH2蛋白，结果如图4所示，图4中6-14对应的洗脱液为图3中标注的标号6-14位置处的洗脱液，通过结果显示：纯化的TPH2蛋白分子量为54.9KD。
步骤11.将纯化的TPH2蛋白收集液浓缩至1ml即可。
采用上述分离纯化方法，经过计算得知，可以从300ml细胞裂解液中得到2.45mg纯化的TPH2蛋白，TPH2蛋白的鉴定结果如图5所示。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于，平衡缓冲液、洗杂缓冲液、flag小肽溶液和生物素溶液中各物质的组成配比不同，具体如下：
平衡缓冲液包括40mmol/L的Hepes、100mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.5mmol/L的EDTA，0.1mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.2；
洗杂缓冲液中包括40mmol/L的Hepes、100mmol/L的NaCl，1mmol/L的ATP，1mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0；
flag小肽溶液中包括40mmol/L的Hepes、100mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.5mmol/L的EDTA，0.1mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5mmol/L的PMSF，0.1mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
生物素溶液中包括40mmol/L的Hepes、100mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.5mmol/L的EDTA，0.1mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5mmol/L的PMSF，10mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.3。
采用上述分离纯化方法，经过计算得知，可以从300ml细胞裂解液中得到2.36mg纯化的TPH2蛋白。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于，平衡缓冲液、洗杂缓冲液、flag小肽溶液和生物素溶液中各物质的组成配比不同，具体如下：
平衡缓冲液包括45mmol/L的Hepes、120mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.8mmol/L的EDTA，0.3mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.8mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.3；
洗杂缓冲液中包括45mmol/L的Hepes、120mmol/L的NaCl，5mmol/L的ATP，5mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.3；
flag小肽溶液中包括45mmol/L的Hepes、120mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.8mmol/L的EDTA，0.3mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.8mmol/L的PMSF，0.3mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.3；
生物素溶液中包括45mmol/L的Hepes、120mmol/L的NaCl，0.3mmol/L的FeSO4，0.8mmol/L的EDTA，0.3mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.5％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.8mmol/L的PMSF，30mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.3。
采用上述分离纯化方法，经过计算得知，可以从300ml细胞裂解液中得到2.55mg纯化的TPH2蛋白。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于，先将粗提液加入到Flag磁珠中使TPH2蛋白结合Flag磁珠，经过Flag磁珠分离纯化后，再加入到链霉亲和素磁珠中使TPH2蛋白结合链霉亲和素磁珠，采用链霉亲和素磁珠进行分离纯化。
采用上述分离纯化方法，经过计算得知，可以从300ml细胞裂解液中得到约2.15mg纯化的TPH2蛋白。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于，在采用Flag磁珠进行分离纯化之前，先采用重生缓冲液进行Flag磁珠的重生，具体过程为：
先后使用重生缓冲液和平衡缓冲液分别对Flag磁珠进行洗脱；所述重生缓冲液为包括含0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至3.5
采用上述分离纯化方法，经过计算得知，可以从300ml细胞裂解液中得到约2.48mg纯化的TPH2蛋白。
试验例1-用于验证其活性
TPH2的活性实验通过检测底物生成速度完成。具体地，在反应缓冲液体系中加入实施例1中制备得到的TPH2，TPH2加入量为0.1mM/L,在37℃水浴开始反应。分别反应0、5、10、20、40min后，加入100uL 10.5M/LHCl,终止反应，冰上孵育5分钟，12000rpm室温离心5分钟，取上清液200uL，在295nm激发光下，检测538nm荧光吸收值，检测结果如图7所示。
其中，反应缓冲液体系为150ul,包括50mM/L Tris-HCl(pH 7.5),250uM/L色氨酸，250uM/L硫酸亚铁铵，250uM/L四氢叶酸，1mM/L DTT，1mM/LNADH，0.39U/mL二氢喋呤还原酶，10mM/L葡萄糖六磷酸，5mU/mL葡萄糖六磷酸脱氢酶，0.2mg/mL过氧化氢酶。
反应缓冲液体系中色氨酸以外的其他条件相同的条件下，配制含有0、10、50、100、150、200、250uM/L的5-HTP标准液，测定5-HTP浓度-荧光吸收标准曲线，标准曲线如图6所示。
定义1min内催化1uM 5-HTP产生所需的TPH2为一个酶活单位(U)，经计算，在给定的条件下，纯化得到的TPH2酶活约为12U/mg，有效证明本发明纯化获得的TPH2具有较好的酶活性。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，
获取含重组TPH2蛋白的溶液，所述重组TPH2蛋白中包括TPH2、链霉亲和素和Flag标签；
亲和层析：分别采用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行亲和层析，获取层析液；
采用分子筛对层析液进行层析纯化即可获得TPH2。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述获取含重组TPH2蛋白的溶液的过程为：
获得含TPH2-2Streptavidin-3Flag基因片段的重组质粒，将重组质粒转染到293F表达细胞进行重组蛋白表达后，进行细胞破碎处理获得细胞破碎液，该细胞破碎液即为含重组TPH2蛋白的溶液；
优选的，所述细胞破碎处理时采用机械破碎法、反复冻融法或超声波处理法进行细胞破碎，破碎过程中所用的缓冲液为平衡缓冲液；或/和，在使用Flag磁珠和链霉亲和素磁珠之前，先采用平衡缓冲液对Flag磁珠和链霉亲和素磁珠进行保存；
所述平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
3.根据权利要求2所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，在进行Flag磁珠和链霉亲和素磁珠保存之前，先使用超纯水和0.1mol/L的NaOH溶液对其进行清洗；
在采用Flag磁珠进行吸附之前，先采用重生缓冲液和平衡缓冲液分别洗脱Flag磁珠至少一次；
其中，重生缓冲液包括含0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至2.0-3.5。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，采用Flag磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到Flag磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次flag小肽溶液对该Flag磁珠进行洗脱即可；
采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析的过程为：将需要纯化的溶液加入到链霉亲和素磁珠中进行吸附，采用洗杂缓冲液冲洗后，再采用至少一次生物素溶液对该链霉亲和素磁珠进行洗脱即可。
5.根据权利要求4所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述洗杂缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
所述flag小肽溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
所述生物素溶液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，1～50mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
6.根据权利要求1-5任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述分子筛对层析液进行层析纯化时，分子筛的流动相缓冲液中包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，并采用HCl调节pH至7.0～7.5。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，在亲和层析步骤中，先采用链霉亲和素磁珠进行亲和层析，然后再采用Flag磁珠进行亲和层析。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的方法，其特征在于，所述亲和层析步骤之前，还包括冷冻离心和/或抽滤步骤；
优选的，所述冷冻离心的最大相对离心力为30000-40000g，离心时间为30-60min，抽滤的滤膜采用孔径≤0.22um的水溶性滤膜。
9.一种分离纯化重组TPH2蛋白的试剂盒，其特征在于，包括Flag磁珠、链霉亲和素磁珠、平衡缓冲液、洗杂缓冲液、flag小肽溶液和生物素溶液。
10.根据权利要求9所述的一种分离纯化重组TPH2蛋白的试剂盒，其特征在于，
平衡缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
洗杂缓冲液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，1～10mmol/L的ATP，1～10mmol/L的MgCl2，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
flag小肽溶液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，0.1～0.5mg/ml的flag，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
生物素溶液包括40～50mmol/L的Hepes、100～150mmol/L的NaCl，0.1～0.5mmol/L的FeSO4，0.5～1mmol/L的EDTA，0.1～0.5mmol/L的L-色氨酸，体积浓度为0.1％～1.0％的吐温20，体积浓度为10％的甘油，0.5～1.0mmol/L的PMSF，1～50mmol/L的生物素，并采用HCl调节pH至7.0～7.5；
优选的，该试剂盒还包括重生缓冲液；所述重生缓冲液为包括0.1mol/L的Gly的水溶液，并采用HCl调节pH至3.5。
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