CN113416650A - 一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用 - Google Patents

一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用，其中，所述水保植物促生菌为丛枝菌根真菌：摩西斗管囊霉和根内根孢囊霉；所述扩繁所述方法包括用纯河沙经过水洗，于121℃灭菌1h；采用塑料容器，装河沙至盆口1cm处，用无菌水浇透；高粱种子经70％酒精消毒1min后用无菌水润洗；用干净枪头在河沙内扎4个1.5cm深的孔，每个孔加入2g菌剂，然后每个孔放入2粒高粱种子，再用灭菌河沙掩埋；每个月浇低磷Hoagland营养液，每周浇灭菌水1次；于26℃‑光照/12h、22℃‑黑暗/12h条件下培养180d后收获，检查高粱根系侵染率和孢子密度后备用。本发明能够为菌根化苗开发及其在侵蚀劣地植被恢复中的应用提供有效解决方案。

Description

一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术与水土保持技术领域，具体涉及一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用。
背景技术
南方红壤区降雨强度大且集中，丘陵地形广泛分布，加之不合理的人类活动，长期以来水土流失严重，土壤表层乃至亚表层遭到剥蚀网纹层裸露，演变成红壤土侵蚀劣地。但是，该区域人口稠密，经济发达，人口压力和社会经济发展对环境提出更高的挑战。
植被恢复是生态修复的重要手段和目的，是协调社会进步和环境可持续发展的关键。红壤侵蚀劣地土壤养分贫乏、结构较差，保水保土能力弱，无法为林木生长提供必需条件，阻碍该区域的植被恢复。降雨冲刷导致土壤物质流失，造成侵蚀区土壤贫瘠和水分匮乏，成为限制该区域植被恢复的主要因素。
红壤区在我国经济发展和生态文明建设方面的重要地位，很多学者开展过红壤侵蚀劣地的植被恢复的相关研究，并取得了一定研究进展。但是，目前该区域仍然存在造林成活率低“年年植树不见树”和“远看绿油油、近看水土流”“小老头树”现象，未能形成稳定的植被体系，植被恢复效率低下是目前亟待解决的关键问题。
丛枝菌根(arbuscular mycorrhizal,AM)真菌在陆地生态系统广泛分布，和90％以上的植物根系形成互利共生体，通过其庞大的根外菌丝网络，大幅度改善植物养分状况，并能激发植物的抗逆代谢，显著提高植物对干旱的耐受能力。由于AM真菌对植物生长的促进作用，特别是逆境条件下更为显著，众多学者关注AM真菌在生态恢复中的潜力。已有成功案例表明，AM真菌在西部煤矿开采区复垦过程中成功提高植物成活率，促进植被恢复；AM真菌在黄土高原丘陵沟壑区修复过程中也发挥了积极作用。但是，红壤侵蚀区的土壤条件比较独特，AM真菌能否适应酸性、黏性较强的红壤，发挥其对水保植物抗旱性与生长的促进作用尚不清楚。目前，国内外关于水保植物菌根化苗的筛选及其适生性研究的报道甚少，关于典型水保植物木荷与AM真菌共生、菌根化苗抗旱性机制的研究尚未见报道。因此，利用AM真菌促进水保植物在侵蚀劣地中的抗旱性、营养吸收及生长，有望为菌根化苗开发及其在侵蚀劣地植被恢复中的应用提供有效解决方案。
发明内容
本发明所要解决的问题是：提供一种水保植物促生菌、扩繁方法及其应用，能够为菌根化苗开发及其在侵蚀劣地植被恢复中的应用提供有效解决方案。
本发明为解决上述问题所提供的技术方案为：一种水保植物促生菌，所述水保植物促生菌为丛枝菌根真菌：摩西斗管囊霉和根内根孢囊霉。
本发明还公开了一种水保植物促生菌的扩繁方法，所述方法包括
用纯河沙经过水洗，于121℃灭菌1h；
采用塑料容器，装河沙至盆口1cm处，用无菌水浇透；
高粱种子经70％酒精消毒1min后用无菌水润洗；
用干净枪头在河沙内扎4个1.5cm深的孔，每个孔加入2g水保植物促生菌菌剂，然后每个孔放入2粒高粱种子，再用灭菌河沙掩埋；
每个月浇低磷Hoagland营养液，每周浇灭菌水1次；于26℃-光照/12h、22℃-黑暗/12h条件下培养180d后收获，检查高粱根系侵染率和孢子密度后备用。
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用。
优选的，所述的典型水保植物为木荷、假俭草、类芦或黄栀子。
优选的，丛枝菌根真菌接种于非灭菌土壤中，使其和水保植物根系直接接触，诱导水保植物实现菌根化。
优选的，每kg土壤的接种量为50g菌剂(孢子数≥3000)，且将菌剂集中放置于直径4～5cm的小穴内，便于水保植物根系和丛枝菌根真菌接触。
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物营养吸收的应用。
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于促进典型水保植物生长的应用。
与现有技术相比，本发明的优点是：
1.本发明提供了一种基于植物抗旱性、营养吸收及生物量等指标的AM真菌-水保植物组合筛选方法，为建立水保植物菌根化苗技术提供技术支撑。
2.本发明对水保植物菌根化幼苗进行抗旱性机理研究，即从菌根化幼苗生物量、抗氧化酶活性、抗氧化剂含量、脯氨酸含量、丙二醛含量、叶绿素含量等指标分析AM真菌对水保植物抗旱性的影响。实验结果表明，AM真菌显著提高了木荷体内N、Mg、Ca、S的含量及抗氧化酶系统的响应。
3.本发明通过水保植物的菌根化育苗技术提高水保植物在侵蚀劣地的抗旱性与营养吸收能力，最终促进其生长。
4.本发明提供的AM真菌与水保植物共生体系在侵蚀劣地植被恢复中具有一定的应用潜力。本发明提供的AM真菌可用于木荷、假俭草、类芦或黄栀子等水保植物对侵蚀劣地干旱条件的耐受性，并且可促进上述水保植物的生长。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1是本发明干旱条件下AM真菌对木荷生长状况的影响。
具体实施方式
以下将配合附图及实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
一种水保植物促生菌，所述水保植物促生菌为丛枝菌根真菌：摩西斗管囊霉和根内根孢囊霉。
本发明还公开了一种水保植物促生菌的扩繁方法，所述方法包括
用纯河沙经过水洗，于121℃灭菌1h；
采用塑料容器，装河沙至盆口1cm处，用无菌水浇透；
高粱种子经70％酒精消毒1min后用无菌水润洗；
用干净枪头在河沙内扎4个1.5cm深的孔，每个孔加入2g水保植物促生菌菌剂，然后每个孔放入2粒高粱种子，再用灭菌河沙掩埋；
每个月浇低磷Hoagland营养液，每周浇灭菌水1次；于26℃-光照/12h、22℃-黑暗/12h条件下培养180d后收获，检查高粱根系侵染率和孢子密度后备用。
其中，Hoagland营养液的具体配方见下表：
Figure BDA0003051254930000031
Figure BDA0003051254930000041
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用。
在本方案中，所述的典型水保植物为木荷、假俭草、类芦或黄栀子。
在本方案中，丛枝菌根真菌接种于非灭菌土壤中，使其和水保植物根系直接接触，诱导水保植物实现菌根化。
在本方案中，每kg土壤的接种量为50g菌剂(孢子数≥3000)，且将菌剂集中放置于直径4～5cm的小穴内，便于水保植物根系和丛枝菌根真菌接触。
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物营养吸收的应用。
本发明还公开了一种水保植物促生菌用于促进典型水保植物生长的应用。
实施例1
AM真菌对典型水保植物抗旱性的影响
1.供试植物与菌种
供试植物为典型水保植物木荷，树苗购买自广州瑞景园林种苗批发中心。
2.供试土壤
供试土壤采自江西省宁都县稀土尾矿，土壤pH值为5.17，全氮0.18g/kg，全磷0.30g/kg，全钾45.49g/kg，速效磷1.90mg/kg，速效钾99.60g/kg，碱解氮72.46g/kg。
3.试验设计
采用双因素随机设计，包含AMF和干旱两个因素，AMF设置3个水平(接种Funneliformis mosseae YN02-FM,Rhizophagus intraradices BJ09-RI,不接种对照-CK，AMF处理接种50g/kg土壤对应菌剂，对照处理不接种)，首先在盆内装土3.5kg，在中间挖取直径4～5cm，深度6cm小穴，将木荷根系放入穴内并添加对应菌剂，覆土。干旱设置2个水平(干旱-DS、对照-WW)。
干旱处理前生长407d，通过降低浇水频率方式对四种植物施加干旱胁迫，胁迫持续82d，分为3段：隔次浇水(16d)----隔两次浇水(27d)----隔次浇水(39d)。
4.指标测定
(1)叶片SPAD：2020年9月1日，利用SPAD-502Plus便携式叶绿素仪测定植物叶SPAD值。
(2)叶绿素含量：称取0.2g新鲜样品，放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙粉及95％乙醇2-3mL，研磨成匀浆，再加95％乙醇5mL继续研磨至组织变白静置3-5min，将全部提取液转移至25mL容量瓶，并定容。将提取液稀释至合适浓度后，倒入1cm光径比色皿中，以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。
C叶绿素a(mg/L)＝13.95×A665-6.88×A649
C叶绿素b(mg/L)＝24.96×A649-7.32×A665
叶绿素a含量(mg/g)＝C叶绿素a(mg/L)×V×N/W×0.001
叶绿素b含量(mg/g)＝C叶绿素b(mg/L)×V×N/W×0.001
叶绿素总量(mg/g)＝叶绿素a含量+叶绿素b含量
(3)脯氨酸含量：
①标准曲线的绘制
取若干个25mL的容量瓶，分别加入100μg/mL脯氨酸标准溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、2.0mL，用蒸馏水定容至刻度，即得浓度分别为0、1、2、3、4、5、6、8μg/mL系列标准溶液。
取若干支试管，分别加入2mL系列标准溶液及2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮，在沸水浴中加热30min，冷却后分别加入4mL甲苯，振荡30s，静置片刻，以甲苯为对照，于520nm处，对各管甲苯层进行比色，测定吸光度，绘制标准曲线。
②样品提取
取新鲜植物样品0.5g，加5mL 3％磺基水杨酸研磨，沸水浴中浸提10min(经常摇动)，冷却后过滤于干净试管中，滤液为脯氨酸提取液。
③样品测定
将上述提取液稀释至合适浓度后，吸取2mL稀释液于另一洁净试管中，同标准曲线操作进行比色，测定吸光度值。
(4)可溶性总糖：
①标准曲线的制作
取20mL刻度试管若干支，分别加入0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL的100μg/mL蔗糖溶液，并用水补至2mL，然后按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮-乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作对照，在630nm波长下测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖含量为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
②样品中可溶性糖的提取
称取已粉碎样品0.2g于15mL离心管中，加入10mL蒸馏水，沸水浴提取30min，取出冷却，离心，上清液转移至25mL容量瓶中，再向残渣中加入10mL蒸馏水，沸水浴提取20min，取出冷却，全部转移至25mL容量瓶中，反复冲洗离心管及残渣，定容至刻度，过滤，滤液待测。
③显色测定
将上述提取液稀释至合适浓度后，取1mL样品稀释液于20mL刻度试管中，加蒸馏水补齐至2mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入蒽酮-乙酸乙酯试剂、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度。由标准线性方程求出糖的量(μg)，计算测试样品中的糖含量。
(5)还原糖测定：
①标准曲线的制作
取25mL刻度试管若干支，分别加入0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2mL的1mg/mL葡萄糖溶液，并用蒸馏水补至2mL，然后按顺序向试管中加入DNS试剂1.5mL，摇匀，放入沸水浴中保温5min，取出后立即放入盛有冷水的容器中冷却至室温，用蒸馏水定容至25mL刻度处，以空白管调零，在540nm波长下测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖含量为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。
②还原糖的提取
称取已粉碎样品0.5g放入15mL试管中，加入10mL蒸馏水，于50℃水浴中提取20min使还原糖浸出，离心或过滤，提取液过滤入25mL容量瓶中，用10mL蒸馏水反复冲洗试管及残渣至容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，混匀，过滤，滤液即为还原糖待测液。
③显色测定
吸取1mL样品液于25mL刻度试管中，并用水补至2mL，加1.5mL DNS试剂，其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管吸光度。
(6)维生素E：
①样本前处理：10％匀浆上清液制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(mL)＝1:9的比例加入试剂四(匀浆介质)，冰水浴条件下匀浆，2500转/分离心10min，取上清待测。
②组织匀浆中正庚烷维生素E的抽提(正庚烷试剂自备)：
Figure BDA0003051254930000071
漩涡混匀(充分抽提)1min，然后3000-4000转/分，离心5-10min，吸取上层正庚烷维生素E抽提液进行显色反应。
注：观察试管内液分为三层，最上层为正庚烷维生素E抽提液，第二层为水及无水乙醇，最下层为蛋白沉淀物。
③显色反应
Figure BDA0003051254930000072
Figure BDA0003051254930000081
混匀，静置2min，波长533nm,光径1cm，无水乙醇调零，测定各管吸光度值。
(7)过氧化氢酶(CAT)活性：
①组织匀浆液的制备
准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL)＝1:10的比例加入10倍体积的0.2mol/LPBS缓冲液(PH 7.2-7.4)，冰水浴条件下，制备成10％的组织匀浆，2500转/分离心10min，取上清，再用PBS缓冲液稀释成最佳取样浓度，待测。
②操作表
对照管 测定管
组织匀浆(mL) 0.05
试剂一(37℃预温)(mL) 1.0 1.0
试剂二(37℃预温)(mL) 0.1 0.1
混匀，37℃准确反应1min
试剂三(mL) 1.0 1.0
试剂四(mL) 0.1 0.1
组织匀浆(mL) 0.05
混匀，波长405nm，光径0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
(8)过氧化物酶(POD)活性：
①粗酶液提取
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测量步骤和加样表：
试剂名称(μL) 测定孔
样本 10
蒸馏水 60
试剂一 120
试剂二 30
试剂三 30
测定前将试剂一、二和三于25℃放置10min。在96孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和90s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。(9)超氧化物歧化酶(SOD)活性：
①粗酶液提取
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
②活性测定
a.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
b.测定前将试剂一、二和四室温放置。
c.在EP管中加入下列试剂：
试剂名称(μL) 测定管 对照管
试剂一 45 45
试剂二 100 100
试剂三 2 2
样本 18
试剂四 35 35
蒸馏水 18
充分混匀，室温静置30min后，560nm处测定各管的吸光值A。
(10)抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性：
①粗酶液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(mL)＝1:5-10的比例加入试剂一，冰水浴条件下，进行匀浆，13000g，4℃离心20min，取上清，待测。
②操作步骤：依次在1mL石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂一、20μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A1和A2，ΔA＝A1-A2。若酶的活性较低，则可加大取液量再测定。
(11)还原型谷胱甘肽(GSH)含量：
①粗酶液提取
按照组织质量(g)：试剂一体积(ml)为1:5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。细菌、真菌：按照细胞数量(104个)：试剂一体积(ml)为500～1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min)；8000g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
②分光光度计预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。
试剂二在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。
空白管：取1ml玻璃比色皿，依次加入100μL蒸馏水、700μL试剂二、200μL试剂三，混匀静置2min后测定412nm吸光度A1。
测定管：取1ml玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、700μL试剂二、200μL试剂三。混匀静置2min后测定412nm吸光度A2。
GSH标准曲线公示：y＝1.5x(x为GSH浓度，μmol/ml；y为吸光值)
按样本鲜重计算
GSH(μmol/g)＝(A2-A1)÷1.5×反总÷(V样×W÷V样总)
式中：
V样总：上清液总体积，mL；V样：加入反应体系中上清液体积，mL；W：样品质量，g。
5.数据分析
SPAD值、叶绿素含量、抗氧化酶、抗逆相关生理指标、矿质元素含量等数据经方差齐性检验(Levene)正态分布检验(Kolmogorov-Smirnov)后，通过二元方差分析检验，并利用Duncan分析进行事后检验。
6.实验结果
(1)AM真菌对典型水保植物木荷光合作用指标的影响
接种AM真菌干旱胁迫对木荷叶绿素含量无显著影响，表明木荷自身具有较强抗旱性(表1)。在后续叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素实测过程中，也为发现干旱胁迫和AM真菌的无显著影响(表2和3)。
表1干旱条件下AM真菌对木荷叶SPAD值的影响
Figure BDA0003051254930000101
注：WW和DS分别为正常浇水和干旱处理，FM、RI和CK分别代表接种F.mossea、R.intraradices和不接种对照。
表2干旱条件下AM真菌对木荷叶绿素含量的影响
Figure BDA0003051254930000111
注：Chlo-a、Chlo-b和Chlo分别代表叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量。WW和DS分别为正常浇水和干旱处理，FM、RI和CK分别代表接种F.mossea、R.intraradices和不接种对照。
表3干旱条件下AM真菌对木荷叶绿素影响的方差分析结果
Figure BDA0003051254930000112
注：Chlo-a、Chlo-b和Chlo分别代表叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量。WW和DS分别为正常浇水和干旱处理。
(2)AM真菌对典型水保植物木荷抗旱相关生理生化指标的影响
如表4所示，干旱胁迫显著增加了木荷叶的脯氨酸含量，且与对照相比，干旱条件下接种F.mosseae显著增加了木荷叶脯氨酸含量，增加幅度高达95.5％。
干旱胁迫和接种AM真菌对木荷叶可溶性糖含量无显著影响(表4)，但是接种AM真菌显著增加了木荷叶还原糖含量，特别是干旱条件下接种F.mosseae比对照增加21.8％。
干旱胁迫显著提高木荷叶的过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，但对抗坏血酸过氧化物酶(APX)和过氧化氢酶(CAT)无显著影响(表4)。接种AM真菌显著提高了木荷叶的这四种抗氧化酶的活性，而且，接种F.mosseae的效果优于R.intraradices。
表4干旱条件下AM真菌对木荷叶片生理生化指标的方差分析结果
Figure BDA0003051254930000113
Figure BDA0003051254930000121
注：每个指标重复数为4，post-hoc为在p＝0.05水平下的Duncan检验
实施例2
AM真菌对典型水保植物营养吸收的影响
待植物收获后，将植物根系测定营养含量。
1.氮素的测定
称取试样0.2g，精确至0.0001g，置于300mL消煮管中(勿将样品粘附在瓶颈上)。先滴入少些水湿润样品，然后加入5mL浓硫酸，轻轻摇匀并放置过夜。在管口放一弯颈小漏斗，在消煮炉上先250℃消煮(温度稳定后计时，时间约30min)，待H2SO4分解冒出大量白烟后再升高温度至400℃，当溶液呈均匀的棕黑色时取下(时间约3h)。稍冷后加10滴H2O2，摇匀，再加热至微沸，消煮约5min，取下稍冷后，重复加H2O2 5-10滴，再消煮。如此重复3-5次，每次添加的H2O2的量应逐次减少，消煮到溶液呈无色或清亮后(应该为水的颜色)，再加热约5-10min，以除尽剩余的H2O2。将消煮管取下，冷却。并用少量水冲洗弯颈漏斗，洗液流入消煮管。将消煮液无损的洗入50mL容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供氮的测定。
空白实验：除不加试样外，试剂用量和操作与测定试样时相同。
蒸馏前将配制好的氢氧化钠，硫酸标准液，混合指示剂，对定氮仪进行充分预热，进行空蒸镏清洗管道，直至读数稳定。吸取上述待测液5mL(含NH4 +-N约1mg)，注入凯氏定氮仪蒸馏管中，参数设置后，对待测液进行测定，其中加碱时间应设为3s。
2.钠、钾、镁、钙、磷、硫的测定
样品消解后，由电感耦合等离子体发射光谱仪测定，以元素的特征谱线波长定性；待测元素谱线信号强度与元素浓度成正比进行定量分析。
称取试样0.2g(精确至0.0001g)于聚四氟乙烯消解内罐，加硝酸5mL浸泡过夜。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入恒温干燥箱，80℃保持1-2h，120℃保持1-2h，再升至160℃保持4h，在箱内自然冷却至室温，打开后加热赶酸至近干，将消化液洗入25ml容量瓶中，用少量硝酸溶液(1％)洗涤内罐和内盖3次，洗液合并至容量瓶中并用1％硝酸定容至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。试液上机测定钠、钾、镁、钙、磷、硫等元素含量。
3.实验结果
干旱显著降低了木荷根K和S元素含量，但接种AM真菌显著增加了木荷根N、Mg、S和Ca含量(表5-6)，可见AM真菌对干旱胁迫下木荷大量元素和微量元素吸收均有促进作用。
表5干旱条件下AM真菌对木荷根矿质元素含量的影响
Figure BDA0003051254930000131
注：每个指标重复数为4，post-hoc为在p＝0.05水平下的Duncan检验
表6干旱条件下AM真菌对木荷根矿质元素影响的方差分析结果
Figure BDA0003051254930000132
Figure BDA0003051254930000141
注：每个指标重复数为4，post-hoc为在p＝0.05水平下的Duncan检验
实施例3
AM真菌对典型水保植物生长的影响
1.材料与方法
(1)生长指标：2020年4-8月，每个月15日测定木荷和枫香叶片数、株高和地径。
(2)生物量测定：试验结束后，分别测定各处理木荷的叶、茎和根的生物量。
2.实验结果
从图1可以看出，干旱胁迫抑制了木荷生长，特别是对叶片数造成一定影响。虽未达到显著水平，但接种AM真菌一定程度提高了木荷的生物量，特别是R.intraradices对木荷生长的促进作用更为明显，提高木荷叶干重32％，表明R.intraradices缓解了木荷受干旱抑制情况。
以上仅就本发明的最佳实施例作了说明，但不能理解为是对权利要求的限制。本发明不仅局限于以上实施例，其具体结构允许有变化。凡在本发明独立权利要求的保护范围内所作的各种变化均在本发明保护范围内。

Claims (8)

1.一种水保植物促生菌，其特征在于：所述水保植物促生菌为丛枝菌根真菌：摩西斗管囊霉和根内根孢囊霉。
2.一种如权利要求1所述的一种水保植物促生菌的扩繁方法，其特征在于：所述方法包括
用纯河沙经过水洗，于121℃灭菌1h；
采用塑料容器，装河沙至盆口1cm处，用无菌水浇透；
高粱种子经70％酒精消毒1min后用无菌水润洗；
用干净枪头在河沙内扎4个1.5cm深的孔，每个孔加入2g水保植物促生菌菌剂，然后每个孔放入2粒高粱种子，再用灭菌河沙掩埋；
每个月浇低磷Hoagland营养液，每周浇灭菌水1次；于26℃-光照/12h、22℃-黑暗/12h条件下培养180d后收获，检查高粱根系侵染率和孢子密度后备用。
3.一种如权利要求1所述的一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用。
4.根据权利要求3所述的一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用，其特征在于：所述的典型水保植物为木荷、假俭草、类芦或黄栀子。
5.根据权利要求3所述的一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用，其特征在于：丛枝菌根真菌接种于非灭菌土壤中，使其和水保植物根系直接接触，诱导水保植物实现菌根化。
6.根据权利要求3所述的一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物抗旱性的应用，其特征在于：每kg土壤的接种量为50g菌剂(孢子数≥3000)，且将菌剂集中放置于直径4～5cm的小穴内，便于水保植物根系和丛枝菌根真菌接触。
7.一种如权利要求1所述的一种水保植物促生菌用于提高典型水保植物营养吸收的应用。
8.一种如权利要求1所述的一种水保植物促生菌用于促进典型水保植物生长的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114303811A (zh) * 2021-11-30 2022-04-12 江西省水利科学院 一种基于am真菌的脐橙园磷素面源污染消减方法
CN114751776A (zh) * 2022-05-12 2022-07-15 东北师范大学 适用于低肥力农田化肥减施的混合真菌肥及应用方法
CN114830870A (zh) * 2022-05-25 2022-08-02 浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院) 一种丛枝菌根真菌在栀子种子萌发和扦插中的应用

Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103798052A (zh) * 2014-03-07 2014-05-21 安徽理工大学 一种丛枝菌根真菌诱导黄瓜抗旱的方法
CN103865812A (zh) * 2014-04-02 2014-06-18 兰州大学 丛枝菌根真菌地表球囊霉菌剂的温室扩繁方法
CN107493897A (zh) * 2017-09-06 2017-12-22 河南科技大学 用丛枝菌根真菌和有机肥促进甜高粱在盐碱地生长的方法
CN107493879A (zh) * 2017-08-28 2017-12-22 江西省水土保持科学研究院 一种假俭草茎段撒播种植方法
CN108693149A (zh) * 2017-04-06 2018-10-23 中国科学院地理科学与资源研究所 一种用于测定野外根际土壤原位酶谱的设备及方法
CN109856332A (zh) * 2019-01-30 2019-06-07 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 综合判断植物吸收利用水分的方法
WO2020027214A1 (ja) * 2018-07-31 2020-02-06 住友化学株式会社 Ｑｏ阻害剤に対して耐性を有するダイズさび病菌の防除方法
CN110892845A (zh) * 2019-12-06 2020-03-20 长江大学 一种利用接种丛枝菌根真菌提高柑橘果实品质的方法
CN112020302A (zh) * 2018-03-14 2020-12-01 先锋国际良种公司 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
WO2020262648A1 (ja) * 2019-06-28 2020-12-30 住友化学株式会社 アクリル酸エステル誘導体、その用途及びその製造中間体
CN112501072A (zh) * 2020-12-14 2021-03-16 河海大学 一种作物根际土壤调理剂及其制备方法和应用
WO2021085263A1 (ja) * 2019-11-01 2021-05-06 住友化学株式会社 ３－（ジフルオロメチル）－１－メチル－ｎ－（１，１，３－トリメチル－２，３－ジヒドロ－１ｈ－インデン－４－イル）－１ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミドの結晶
CN114303811A (zh) * 2021-11-30 2022-04-12 江西省水利科学院 一种基于am真菌的脐橙园磷素面源污染消减方法
CN114547919A (zh) * 2022-04-27 2022-05-27 江西省水利科学院 一种沙山区风力侵蚀监测及防治模拟系统和方法
CN114751776A (zh) * 2022-05-12 2022-07-15 东北师范大学 适用于低肥力农田化肥减施的混合真菌肥及应用方法

Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103798052A (zh) * 2014-03-07 2014-05-21 安徽理工大学 一种丛枝菌根真菌诱导黄瓜抗旱的方法
CN103865812A (zh) * 2014-04-02 2014-06-18 兰州大学 丛枝菌根真菌地表球囊霉菌剂的温室扩繁方法
CN108693149A (zh) * 2017-04-06 2018-10-23 中国科学院地理科学与资源研究所 一种用于测定野外根际土壤原位酶谱的设备及方法
CN107493879A (zh) * 2017-08-28 2017-12-22 江西省水土保持科学研究院 一种假俭草茎段撒播种植方法
CN107493897A (zh) * 2017-09-06 2017-12-22 河南科技大学 用丛枝菌根真菌和有机肥促进甜高粱在盐碱地生长的方法
CN112020302A (zh) * 2018-03-14 2020-12-01 先锋国际良种公司 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
WO2020027214A1 (ja) * 2018-07-31 2020-02-06 住友化学株式会社 Ｑｏ阻害剤に対して耐性を有するダイズさび病菌の防除方法
US20210307328A1 (en) * 2018-07-31 2021-10-07 Sumitomo Chemical Company, Limited METHOD FOR CONTROLLING SOYBEAN RUST FUNGUS HAVING RESISTANCE AGAINST Qo SITE INHIBITOR
CN109856332A (zh) * 2019-01-30 2019-06-07 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 综合判断植物吸收利用水分的方法
WO2020262648A1 (ja) * 2019-06-28 2020-12-30 住友化学株式会社 アクリル酸エステル誘導体、その用途及びその製造中間体
WO2021085263A1 (ja) * 2019-11-01 2021-05-06 住友化学株式会社 ３－（ジフルオロメチル）－１－メチル－ｎ－（１，１，３－トリメチル－２，３－ジヒドロ－１ｈ－インデン－４－イル）－１ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミドの結晶
CN110892845A (zh) * 2019-12-06 2020-03-20 长江大学 一种利用接种丛枝菌根真菌提高柑橘果实品质的方法
CN112501072A (zh) * 2020-12-14 2021-03-16 河海大学 一种作物根际土壤调理剂及其制备方法和应用
CN114303811A (zh) * 2021-11-30 2022-04-12 江西省水利科学院 一种基于am真菌的脐橙园磷素面源污染消减方法
CN114547919A (zh) * 2022-04-27 2022-05-27 江西省水利科学院 一种沙山区风力侵蚀监测及防治模拟系统和方法
CN114751776A (zh) * 2022-05-12 2022-07-15 东北师范大学 适用于低肥力农田化肥减施的混合真菌肥及应用方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABEER HASHEM 等: "Induction of Osmoregulation and Modulation of Salt Stress in Acacia gerrardii Benth. by Arbuscular Mycorrhizal Fungi and Bacillus subtilis (BERA 71)", 《BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL》 *
刘润进等: "菌根真菌与植物抗逆性研究进展", 《菌物研究》 *
吴会会等: "干旱胁迫下AMF对盆栽枳实生苗生长和活性氧代谢的影响", 《中国南方果树》 *
屈明华等: "喀斯特生境下AMF侵染对任豆生长的影响", 《生态环境学报》 *
祖艳群等: "丛枝菌根真菌在土壤重金属污染植物修复中的作用及机理研究进展", 《植物生理学报》 *
黎剑锦等: "丛枝菌根真菌在农业领域的作用与应用前景", 《热带林业》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114303811A (zh) * 2021-11-30 2022-04-12 江西省水利科学院 一种基于am真菌的脐橙园磷素面源污染消减方法
CN114751776A (zh) * 2022-05-12 2022-07-15 东北师范大学 适用于低肥力农田化肥减施的混合真菌肥及应用方法
CN114830870A (zh) * 2022-05-25 2022-08-02 浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院) 一种丛枝菌根真菌在栀子种子萌发和扦插中的应用

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