CN113151076B - 一种伯克霍尔德菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种伯克霍尔德菌及应用，属于微生物菌株技术领域，所述的伯克霍尔德菌XYQH‑1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2021105；所述菌株的培养液接种在盆栽茶苗的根部根际土壤后可促进茶苗生长，提高茶多酚总量的功效，本发明的伯克霍尔德菌XYQH‑1发酵条件易操作。同时，所述伯克霍尔德菌XYQH‑1还可以制备出天然的微生物肥料，能够促进茶树生长，增加茶多酚含量，为茶叶市场提供了一种可供选择，也是一种新型环保的肥料，能够大大减轻化学肥料带来的环境污染。

Description

一种伯克霍尔德菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种伯克霍尔德菌及其应用。
背景技术
伯克霍尔德菌属于伯克霍尔德菌属。是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的细菌。其分离的菌落在解钾培养基上28℃培养3-4天，直径8-13 mm，在LB培养基中活化或纯化培养24小时后菌落直径在8-10 mm左右，培养3天菌落直径可达15-20 mm。
茶多酚称“茶单宁”亦称 “茶鞣质”，是茶叶中的一种重要的生物活性成分，红茶中茶多酚是茶黄素的重要前体和提高红茶品质的主要指标，目前还没有关于伯克霍尔德菌株提高茶叶茶多酚总量的报道。本专利筛选出提高茶多酚总量的菌株，为开发微生物肥料奠定基础。
发明内容
本发明的目的提供一种伯克霍尔德菌XYQH-1及其应用，该菌株具有提高茶树叶片中茶多酚总量的特点，可用于制备微生物肥料，该菌株已于2021年1月18日保藏于在中国典型培养物保藏中心，该伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105，拉丁名：Burkholderia sp., 地址：湖北省武汉市武汉大学，邮编：430072，电话：027-68754052。
本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1菌落的特征为：菌落白色，呈圆形，表面光滑不透明，边缘完整。 。
所述伯克霍尔德菌XYQH-1的基因序列为：
CCTCCTTGCGGTTAGACTAGCCACTTCTGGTAAAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCATGCACTCGAGTTGCAGAGTGCAATCCGGACTACGATCGGTTTTCTGGGATTAGCTCCCCCTCGCGGGTTGGCAACCCTCTGTTCCGACCATTGTATGACGTGTGAAGCCCTACCCATAAGGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCTCTTGCGTAGCAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTATCGGTTCTCTTTCGAGCACTCCCACCTCTCAGCGGGATTCCGACCATGTCAAGGGTAGGTAAGGTTTTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATCATCCACCGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAATCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTCACGCGTTAGCTACGTTACTAAGGAAATGAATCCCCAACAACTAGTTGACATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCATGAGCGTCAGTATTGGCCCAGGGGGCTGCCTTCGCCATCGGTATTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACTGCTACACGTGGAATTCTACCCCCCTCTGCCATACTCTAGCCTGCCAGTCACCAATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCGGTCTTAGCAAACCGCCTGCGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTCCGGTACCGTCATCCCCCGACTGTATTAGAGCCAAGGATTTCTTTCCGGACAAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACACACGCGGCATTGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAAAATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCTGGTCGTCCTCTCAGACCAGCTACTGATCGTCGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATCAGCCATCGGCCAACCCTATAGCGCGAGGCCCGAAGGTCCCCCGCTTTCATCCGTAGATCGTATGCGGTATTAATCCGGCTTTCGCCGGGCTATCCCCCACTACAGGACATGTTCCGATGTATTACTCACCCGTTCGCCACTCGCCACCAGGTGCAAGCACCCGTGCTG。
同时，本发明提供了新筛选出来的伯克霍尔德菌XYQH-1的用途，具体为：
1、所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于灌根处理茶树幼苗，增加茶树株高。
2、所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于灌根处理茶树幼苗，可提高茶叶的茶多酚总量。
3、所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于制备高茶多酚茶叶的微生物肥料。
同时，本发明还基于伯克霍尔德菌XYQH-1提供一种提高茶叶中茶多酚总量的方法，所述处理方法如下：
①采用活化后的伯克霍尔德菌XYQH-1接种至LB液体培养基中，在28-30℃的条件下恒温摇床振荡培养，得到伯克霍尔德菌XYQH-1菌液；
②将所述伯克霍尔德菌XYQH-1菌液浇灌在茶树的根部；
③茶树生长成熟后，其茶叶中的茶多酚含量有显著提升；
其中，所述伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105。
同时，本发明还基于伯克霍尔德菌XYQH-1提供一种促进茶树生长及茶多酚合成的微生物肥料, 具体是所述微生物肥料中包括伯克霍尔德菌XYQH-1菌液，所述伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105。
其中，所述伯克霍尔德菌XYQH-1菌液的菌落总数为：0.5~3.0×108个/mL。
有益效果
首先，本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1具有与传统伯克霍尔德菌不相同的形态和功能，其分离自生产旺盛且高产茶多酚的茶园中。采用本发明的伯克霍尔德菌XYQH-1灌根处理茶苗，在处理后，使得茶苗的株高增加。由此可见，在伯克霍尔德菌XYQH-1处理的作用下，茶苗的生长速度得到了提升，发明人推测，有可能是本发明的伯克霍尔德菌附着于茶苗根部，促进了营养元素的吸收，从而使得茶苗生长高度增加。
其次，本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1能够显著提高茶树叶片的茶多酚总量，茶多酚作为红茶发酵的品质的主要指标之一，可增强红茶的色泽，而采用本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1处理后的茶树叶片茶多酚总量会显著增加，根据实验测得数据，经过其处理后，茶树叶片的茶多酚总量由开始的11.63%增加到14.14%（在同一标准曲线下测定，不同处理的计算值），可见，本发明的伯克霍尔德菌XYQH-1增加茶多酚（TP）的含量，茶多酚提高21.58%。发明人尚未查询到伯克霍尔德菌类提高茶树叶片茶多酚总量的相关报道。
申请人同时从土壤中分离的解钾菌短波单胞菌在相同施菌量和OD值的情况的条件下灌根中茶108，所有的条件和实施例3一样。采用不施菌的为对照，对照组的茶多酚含量为11.63%，短波单胞菌施菌后的茶多酚含量为11.73%，由此可以看出，其他的解钾菌并不能使得茶叶中茶多酚总量增加，解钾并不是茶叶中茶多酚总量增加的主要影响因素。
最后，本发明的伯克霍尔德菌XYQH-1能够很好的适应自然环境，同时，还能够提高茶树叶片中茶多酚总量，为茶树栽培提供新的思路。同时，本发明菌株的培养条件简单，培养成本低，有广泛的市场前景。
附图说明：
图1为本发明伯克霍尔德菌XYQH-1在LB培养基上的菌落形态图。
图2 为本发明伯克霍尔德菌XYQH-1菌种理化性质。
图3为经过本发明伯克霍尔德菌XYQH-1处理前后的茶苗株高图。
图4为叶片茶多酚总量和发酵模拟图。
具体实施方式
以下结合实例对本发明进行详细说明。所有方法及技术，如无特别说明，均为常规方法和技术。
实施例1
一种伯克霍尔德菌XYQH-1，所述菌株已于2021年1月18日保藏于在中国典型培养物保藏中心，该伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105 XYQH-1。
其中，本发明实施例所用的其他试剂均为分析纯。
本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1是从安徽省黄山市祁门县箬坑镇茶园根际土壤中分离得到的。具体步骤如下：
1）菌株的筛选：称取10.0 g新鲜土样，置于装90 mL无菌水的250 mL锥形瓶中，放在28-30℃、180 r·min-1全温振荡培养箱振荡30 min，充分混匀制成土壤悬液，取100 μL土壤悬液加入到盛有900 μL无菌水的1.5 mL的灭菌离心管中，采用十倍梯度稀释法，依次稀释至10-2、10-3、10-4，分别取50 μL稀释液涂布于固态培养基上，所述培养基的组成为：葡萄糖10.0 g，MgSO4•7H2O 0.2 g，Na2HPO4 0.2 g，CaCO3 5.0 g，NaCl 0.2 g，CaSO4•2H2O 0.2g，钾长石粉（K2O•Al2O3•6SiO2）2.5 g，琼脂粉20 g，H2O 1000 mL，pH 7.2-7.5。
2）菌株培养：培养基放入28-30℃培养箱中培养72-96 h。挑取培养基上单菌落于LB固体培养基中，LB固体培养基的组成为：蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化钠5 g，水1000 mL，琼脂粉20 g，pH 7.0-7.2。将菌株纯化后，选择菌圈半径最大直径用40%甘油保藏法保存于-80℃备用。
3）活化：取出保藏于甘油管中目标菌落于LB固体培养基进行活化，28-30℃培养2-3 d。
4）菌株形态特征及生理生化特征
形态特征：菌落白色，呈圆形，表面光滑不透明，边缘完整，其在LB培养基上的菌落形态见图1。
生理生化特征：经生理生化测定，目标菌株甲基红试验为阳性；吲哚试验为阳性；双乙酰试验为阴性；尿素酶试验为阳性；硝酸盐还原试验为阳性；糖酵解试验为阳性；淀粉水解试验为阴性；结果如图2。
表1 菌株生理生化特征
试验 阳/阴性
甲基红试验 +
吲哚试验 +
双乙酰试验 -
尿素酶试验 +
硝酸盐还原试验 +
糖酵解试验 +
淀粉水解试验 -
注：“+”阳性；“-”阴性
4）菌株DNA提取：将菌株接种于LB液体培养基中，28℃ 180r·min-1振荡培养24-36h，取1ml菌液于Eppendorf 1.5mL离心管中，8000rpm离心3min收集菌体，按照试剂盒方法(上海生工生物工程公司)提取菌株DNA。
5）菌株鉴定
16S rDNA基因PCR扩增：正向引物27F：（5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'）；反向引物1492R：（5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3'）。
PCR反应体系如表2所示：
表2 PCR反应体系
组分 反应液体积V（μL）
模板DNA 1
引物1 1
引物2 1
Master Mix 12.5
ddH<sub>2</sub>O 9.5
反应程序如表3
反应程序 温度(℃) 时间（min） 循环次数
预变性 94 4 1
变性 94 0.5 30
复性 55 0.5 30
延伸 72 1.5 30
终末延伸 72 10 1
保温 4 ∞ 1
PCR扩增细菌16S rDNA序列，扩增产物测序后与EzBioCloud中已知16S rDNA序列比对分析，与Burkholderia contaminans LMG23361T的16S rDNA序列相似度达到99.78%。因此，将目标菌鉴定为伯克霍尔德菌 (Burkholderia)属。
实施例2
一种伯克霍尔德菌XYQH-1在茶树栽培中的促生应用，具体如下：
2020年6月1号开始对当年生茶苗(中茶108)进行施菌处理，茶苗的株高测量于菌株培养液处理茶苗盆栽后的两个月即2020年8月1号。
1） 活化：取保藏于甘油中伯克霍尔德菌XYQH-1，上下摇晃甘油管使菌液与甘油分布均匀，之后用灼烧且冷却的接种环蘸取甘油管中的菌液，将蘸取菌液的接种环在LB固体培养基上划线活化，再对活化菌株的LB固体板用封口膜密封且用马克笔进行菌株名称及日期标记。其中，所述LB固体培养基的配方为蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g，水1000mL，琼脂粉20g，pH 7.0-7.2。
2） 培养：将划线的活化菌株密封板倒置放置于28-30℃恒温培养箱培养2-3d。
3） 菌液制备：待活化平板上长出单菌落后，用接种环挑取一单菌落接种于装有100 mL LB液体培养基的250 mL锥形瓶中，于28-30℃、180 r·min-1恒温摇床振荡培养约10-12 h，使用提前预热后的紫外分光光度计测定菌株培养液的OD600值，对照用LB液体培养基。待菌株培养液的OD600值在0.45-0.50时(菌落总数为2.3~2.8×108)停止恒温摇床的菌株扩大培养，则此时的菌株养液即为菌株的液体菌剂。将完成培养后的菌株培养液转移至550 mL的塑料瓶中，做好标记，备用。其中，所述LB液体培养基的配方为：蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化钠5 g，水1000 mL，pH 7.0-7.2。
4)施菌处理：2020年6月1日开始对茶苗进行施菌处理，先将茶苗四周的杂草及落叶清理，再用刨土铲沿茶苗四周3-5 cm且距离地面10-13 cm深处刨坑，将刨出的土壤按照刨坑的轮廓堆积，之后将培养后装在550 mL塑料瓶中的菌液按照每盆3.5 kg土壤施用50mL菌液，对照施用同体积水的方式沿茶苗四周灌根处理，最后将坑四周的土壤重新覆盖于施菌后的菌液表面，使菌液完全被覆盖，避免夏天的阳光直射。
5)2020年8月1日，测定从茶苗根部土壤表层到茶苗最高处叶片进行茶苗株高测量，结果如图3，发现施菌后株高显著高于对照处理。
实施例3
本发明分离的伯克霍尔德菌XYQH-1还可以提高茶树叶片中茶多酚总量，茶苗盆栽处理具体包括以下步骤：
1) 活化：取保藏于甘油中伯克霍尔德菌XYQH-1，上下摇晃甘油管使菌液与甘油分布均匀，之后用灼烧且冷却的接种环蘸取甘油管中的菌液，将蘸取菌液的接种环在LB固体培养基上划线活化，再对活化菌株的LB固体板用封口膜密封且用马克笔进行菌株名称及日期标记。其中LB固体培养基的配方为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g，水1000mL，琼脂粉20g，pH 7.0-7.2。
2)培养：将划线的活化菌株密封板倒置放置于28-30℃恒温培养箱培养2-3d 。
3)菌液制备：待活化平板上长出单菌落后，用接种环挑取一单菌落接种于装有100mL LB液体培养基的250 mL锥形瓶中，于28-30℃、180 r·min-1恒温摇床振荡培养约10-12h，使用提前预热后的紫外分光光度计测定菌株培养液的OD600值，对照用LB液体培养基。待菌株培养液的OD600值在0.45-0.50时(菌落总数为2.3~2.8×108)停止恒温摇床的菌株扩大培养，则此时的菌株养液即为菌株的液体菌剂。将完成培养后的菌株培养液转移至550 mL的塑料瓶中，做好标记，备用。其中，LB液体培养基的配方为：蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化钠5 g，水1000 mL，pH 7.0-7.2。
4)施菌处理：2020年6月1日开始对茶苗进行施菌处理，先将茶苗四周的杂草及落叶清理，再用刨土铲沿茶苗四周3-5 cm且距离地面10-13 cm深处刨坑，将刨出的土壤按照刨坑的轮廓堆积，之后将培养后装在550 mL塑料瓶中的菌液按照每盆3.5 kg土壤施用50mL菌液，对照施用同体积水的方式沿茶苗四周灌根处理，最后将坑四周的土壤重新覆盖于施菌后的菌液表面，使菌液完全被覆盖，避免夏天的阳光直射。
5)2020年8月1日，采处理后茶苗的一叶和二叶密封于提前标记好的自封袋中放在干冰盒后存放于-80℃冰箱备用，用于茶多酚总量测定。
6)茶多酚总量的测定具体操作步骤如下：
a混合冻干样品：将茶鲜叶一叶二叶放置于真空冷冻干燥机中干燥2天，2天后取出放在烘干的蓝色硅胶中，之后把同一处理的冻干样均匀混合在一起放在以干燥后的研钵中，用液氮遇冷使用研磨棒充分研磨，制成均匀混合样。
b母液制备：准确称取0.05g均匀磨碎的茶样到5mL离心管中，加入在70℃水浴中预热过的70%甲醇溶液1.25mL，用玻璃棒充分搅拌将茶样充分湿润，立即放入70℃水浴中，浸提10min(每隔5min搅拌一次)，浸提后冷却至室温，转入离心机在3500rpm/min转速下离心10min，将上清液转移至5mL离心管中。残渣再用1.25mL的70%甲醇溶液提取一次．重复以上操作，合并提取液定容至2.5mL（上清液及定容均在使用定量枪的条件下进行），摇匀备用。
c测试液制备：移取母液1.0mL置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。
d测定：用定量移液枪分别移取系列没食子酸工作液、水（作空白对照用）及测试液各1.0mL于10mL具塞刻度试管内，在每个试管内分別加入5.0mL 10%福林酚试剂，摇匀。反应3-8min内，加入4.0mL 7.5%Na2CO3溶液，摇匀。室温下放置1h。用10mm比色皿，在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度(A)。
e标准曲线制作：根据没食子酸工作液的吸光度（A）为纵坐标与其对应的各工作溶液的没食子酸浓度(μg/mL)为横坐标，制作标准曲线。求得线性回归方程和相关系数。
计算方法：比较试样和标准工作液的吸光度，按下式计算
Figure 43752DEST_PATH_IMAGE001
式中Ａ——测定的样品测试液吸光度；
V0——样品提取液体积（2.5mL）；
Ｄ——稀释因子(通常为1mL稀释成100mL，则其稀释因子为100)；
SLOPEsid—没食子酸标准曲线的斜率；
Ｗ——样品干物质含量（%）；
Ｍ——样品质量（g）；
福林酚法测定茶多酚总量如图4所示。伯克霍尔德菌XYQH-1处理后，茶多酚总量增加且模拟发酵实验发现叶片颜色展现出深红色。本发明保藏的伯克霍尔德菌可显著提高茶多酚总量。
本发明保藏的伯克霍尔德菌XYQH-1不仅可以促进茶树的生长，而且提高了叶片中茶多酚总量，有很强的实用性。
实施例4
本实施例提供一种灌根法施用的生物有机肥，本生物有机肥包括伯克霍尔德菌XYQH-1菌液，所述菌液的制备方法如下：
1) 活化：取保藏于甘油中伯克霍尔德菌XYQH-1，上下摇晃甘油管使菌液与甘油分布均匀，之后用灼烧且冷却的接种环蘸取甘油管中的菌液，将蘸取菌液的接种环在LB固体培养基上划线活化，再对活化菌株的LB固体板用封口膜密封且用马克笔进行菌株名称及日期标记。其中LB固体培养基的配方为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g，水1000mL，琼脂粉20g，pH 7.0-7.2。
2)培养：将划线的活化菌株密封板倒置放置于28-30℃恒温培养箱培养2-3d 。
3)菌液制备：待活化平板上长出单菌落后，用接种环挑取一单菌落接种于装有100mL LB液体培养基的250 mL锥形瓶中，于28-30℃、180 r·min-1恒温摇床振荡培养约10-12h，控制培养液的菌株含量为0.5~3.0×108个/mL，则此时的菌液即为所述生物有机肥。其中LB液体培养基的配方为蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化钠5 g，水1000 mL，pH 7.0-7.2。
对施肥前的盆栽茶苗进行刨坑处理即用刨土铲沿茶苗四周3-5cm且距离地面10-13cm深刨土，将培养后的菌液按照每盆3.5Kg土壤施用50mL生物有机肥，对茶树进行四周灌根处理后，再覆土，完成施菌处理。
本生物有机肥使用时，将上述生物有机肥浇灌在茶树的根部，也可以促进茶树快速生长，增加茶叶中茶多酚的含量。
实施例5
经过基因测序，本发明保藏的伯克霍尔德菌（Burkholderia sp.）的基因序列为：
CCTCCTTGCGGTTAGACTAGCCACTTCTGGTAAAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCATGCACTCGAGTTGCAGAGTGCAATCCGGACTACGATCGGTTTTCTGGGATTAGCTCCCCCTCGCGGGTTGGCAACCCTCTGTTCCGACCATTGTATGACGTGTGAAGCCCTACCCATAAGGGCCATGAGGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCTCTTGCGTAGCAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTATCGGTTCTCTTTCGAGCACTCCCACCTCTCAGCGGGATTCCGACCATGTCAAGGGTAGGTAAGGTTTTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATCATCCACCGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAATCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTCACGCGTTAGCTACGTTACTAAGGAAATGAATCCCCAACAACTAGTTGACATCGTTTAGGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGTGCATGAGCGTCAGTATTGGCCCAGGGGGCTGCCTTCGCCATCGGTATTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACTGCTACACGTGGAATTCTACCCCCCTCTGCCATACTCTAGCCTGCCAGTCACCAATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCGGTCTTAGCAAACCGCCTGCGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTCCGGTACCGTCATCCCCCGACTGTATTAGAGCCAAGGATTTCTTTCCGGACAAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCACACACGCGGCATTGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAAAATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCTGGTCGTCCTCTCAGACCAGCTACTGATCGTCGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATCAGCCATCGGCCAACCCTATAGCGCGAGGCCCGAAGGTCCCCCGCTTTCATCCGTAGATCGTATGCGGTATTAATCCGGCTTTCGCCGGGCTATCCCCCACTACAGGACATGTTCCGATGTATTACTCACCCGTTCGCCACTCGCCACCAGGTGCAAGCACCCGTGCTG。
序列表
<110> 安徽省祁门县祁红茶业有限公司
<120> 一种伯克霍尔德菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1380
<212> DNA
<213> 伯克霍尔德菌(Burkholderia sp. arc1)
<400> 1
cctccttgcg gttagactag ccacttctgg taaaacccac tcccatggtg tgacgggcgg 60
tgtgtacaag acccgggaac gtattcaccg cggcatgctg atccgcgatt actagcgatt 120
ccagcttcat gcactcgagt tgcagagtgc aatccggact acgatcggtt ttctgggatt 180
agctccccct cgcgggttgg caaccctctg ttccgaccat tgtatgacgt gtgaagccct 240
acccataagg gccatgagga cttgacgtca tccccacctt cctccggttt gtcaccggca 300
gtctccttag agtgctcttg cgtagcaact aaggacaagg gttgcgctcg ttgcgggact 360
taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acagccatgc agcacctgtg tatcggttct 420
ctttcgagca ctcccacctc tcagcgggat tccgaccatg tcaagggtag gtaaggtttt 480
tcgcgttgca tcgaattaat ccacatcatc caccgcttgt gcgggtcccc gtcaattcct 540
ttgagtttta atcttgcgac cgtactcccc aggcggtcaa cttcacgcgt tagctacgtt 600
actaaggaaa tgaatcccca acaactagtt gacatcgttt agggcgtgga ctaccagggt 660
atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg tgcatgagcg tcagtattgg cccagggggc 720
tgccttcgcc atcggtattc ctccacatct ctacgcattt cactgctaca cgtggaattc 780
tacccccctc tgccatactc tagcctgcca gtcaccaatg cagttcccag gttgagcccg 840
gggatttcac atcggtctta gcaaaccgcc tgcgcacgct ttacgcccag taattccgat 900
taacgctcgc accctacgta ttaccgcggc tgctggcacg tagttagccg gtgcttattc 960
ttccggtacc gtcatccccc gactgtatta gagccaagga tttctttccg gacaaaagtg 1020
ctttacaacc cgaaggcctt cttcacacac gcggcattgc tggatcaggc tttcgcccat 1080
tgtccaaaat tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc agtcccagtg 1140
tggctggtcg tcctctcaga ccagctactg atcgtcgcct tggtaggcct ttaccccacc 1200
aactagctaa tcagccatcg gccaacccta tagcgcgagg cccgaaggtc ccccgctttc 1260
atccgtagat cgtatgcggt attaatccgg ctttcgccgg gctatccccc actacaggac 1320
atgttccgat gtattactca cccgttcgcc actcgccacc aggtgcaagc acccgtgctg 1380

Claims (7)

1.一种伯克霍尔德菌（Burkholderia sp.）XYQH-1，其特征在于：所述伯克霍尔德菌XYQH-1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2021105。
2.一种权利要求1所述的伯克霍尔德菌XYQH-1在增加茶树株高的用途，其特征在于：所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于灌根处理茶树幼苗。
3.一种权利要求1所述的伯克霍尔德菌XYQH-1提高茶叶的茶多酚总量的用途，其特征在于：所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于灌根处理茶树幼苗。
4.一种权利要求1所述的伯克霍尔德菌XYQH-1在提高茶叶的茶多酚含量的微生物肥料的用途，其特征在于：所述伯克霍尔德菌XYQH-1用于提高茶叶的茶多酚含量的微生物肥料。
5.一种提高茶叶中茶多酚总量的方法，其特征在于：所述方法如下：
①采用活化后的伯克霍尔德菌XYQH-1接种至LB液体培养基中，在28-30℃的条件下恒温摇床振荡培养，得到伯克霍尔德菌XYQH-1菌液；
②将所述伯克霍尔德菌XYQH-1菌液浇灌在茶树的根部；
③茶树生长成熟后，其茶叶中的茶多酚含量有显著提升；
其中，所述伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105。
6.一种促进茶树生长及茶多酚合成的微生物肥料, 其特征在于：包括伯克霍尔德菌XYQH-1菌液，所述伯克霍尔德菌XYQH-1的保藏号为：CCTCC M 2021105。
7.根据权利要求6所述的促进茶树生长及茶多酚合成的微生物肥料, 其特征在于：所述伯克霍尔德菌XYQH-1菌液的菌落总数为：0.5~3.0×108个/mL。
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Denomination of invention: A Burkholderia species and its application

Granted publication date: 20220412

Pledgee: Qimen Anhui rural commercial bank Limited by Share Ltd.

Pledgor: ANHUI QIMEN COUNTY QIHONG TEA Co.,Ltd.

Registration number: Y2024980021667