CN113413376B - 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用 - Google Patents

一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113413376B
CN113413376B CN202110819093.0A CN202110819093A CN113413376B CN 113413376 B CN113413376 B CN 113413376B CN 202110819093 A CN202110819093 A CN 202110819093A CN 113413376 B CN113413376 B CN 113413376B
Authority
CN
China
Prior art keywords
drug
compound
candida glabrata
application
resistant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110819093.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113413376A (zh
Inventor
郭兰萍
杨小龙
江玉凤
杨健
高原
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Materia Medica of CAMS
Original Assignee
Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Materia Medica of CAMS filed Critical Institute of Materia Medica of CAMS
Priority to CN202110819093.0A priority Critical patent/CN113413376B/zh
Publication of CN113413376A publication Critical patent/CN113413376A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113413376B publication Critical patent/CN113413376B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种联苯化合物在抗临床耐药真菌中的应用，属于抗菌活性研究技术领域。本发明提供了式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在抗菌中的应用。本发明的式Ⅰ所示化合物在低浓度的情况下可有效抑制耐药光滑念珠菌(Candidaglabrata)的生长，具有非常大的应用潜能。

Description

一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用
技术领域
本发明涉及抗真菌活性研究技术领域，具体涉及的是一种联苯化合物在抗临床耐药真菌中的应用。
背景技术
真菌耐药性问题日益严重，给人类生命健康造成了重大威胁。当前，现有抗真菌药物无法遏制耐药性真菌的蔓延。因此，发现和开发新型抗耐药真菌药物已成为我国创新药物研究的重大需求。
近年来，念珠菌感染性疾病对人类威胁愈加严重。除白念珠菌外，光滑念珠菌在部分国家和地区已成为第二常见的侵袭性念珠菌。临床分离的光滑念珠菌对一线抗真菌药物具有高度的耐药性，从而因其造成的死亡率可高达50％。寻找新型抗耐药光滑念珠菌的药物势在必行。
发明内容
本发明提供了一种联苯化合物在抗临床耐药真菌中的应用，该联苯化合物在低浓度的情况下能有效抑制一株临床来源耐药光滑念珠菌的生长，具有非常大的应用潜能。
本发明提供了式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在抗菌和/或制备抗菌剂中的应用；
Figure BDA0003171216960000011
上述的应用中，所述菌为真菌；具体可为临床耐药真菌。
上述的应用中，所述临床耐药真菌为耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)；具体的，所述耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)的保藏编号为GDMCC NO:61724。
上述的应用中，所述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在低浓度条件下能够有效抑制真菌的生长；
具体的，所述低浓度为1～100μg/mL；更具体的，所述低浓度为1～10μg/mL、 1～5μg/mL、1.5～3μg/mL、1.5～2μg/mL或1.77μg/mL。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明提供的联苯化合物能够在低浓度的情况下有效抑制耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)的生长，联苯化合物的最小抑菌浓度MIC为1.77μg/mL；该化合物在临床耐药真菌上具有非常大的应用潜能。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：Candida glabrata
生物材料的菌株编号：Candida glabrata 210413102-ITR-R
生物材料的保藏单位名称：广东省微生物菌种保藏中心
生物材料的保藏单位简称：GDMCC
生物材料的保藏单位地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮政编号510070
生物材料的保藏日期：2021年6月15日
生物材料的保藏中心登记入册编号：GDMCC NO:61724
附图说明
图1为实施例1制备的联苯化合物的1H NMR图和13C NMR图；其中，图1中的 a为1HNMR图，b为13C NMR图。
图2为不同浓度化合物对耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)的抑制效果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的所用的干燥的花楸悬浮细胞的制备方法，与下述文献中干燥的欧洲花楸悬浮细胞的制备方法一致，只是将其中的欧洲花楸替换为花楸(李佳兴，李慧梁，周良云等.酵母诱导欧洲花楸悬浮细胞的化学成分及抑菌活性[J].天然产物研究与开发，2019,031(012):2071-2076.)。
下述实施中所用的耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)分离自某三甲医院，ICU科室，男性，年龄68岁患者的尿液标本。采集患者清晨清洁中段尿5～10mL，取10ul 标本接种或者转种于沙保弱培养基(百博，济南)，35℃培养24h，肉眼可见有酵母菌生长转种至科玛嘉显色培养基(百博，济南)，同时采用VITEK Compact YST鉴定，药敏实验采用ATBFUNGUS药敏板条(梅里埃，法国)，质控菌株为白色念珠菌 ATCC14053。药敏结果解读依据美国临床和实验室标准协会(CLSI)标准。经鉴定患者尿液中检测出来单一种类光滑念珠菌，其菌落计数>10万/mL。药敏结果为伊曲康唑 MIC为2ug/ml，药敏解读为耐药，伏立康唑MIC为1ug/ml，药敏解读为耐药，氟康唑MIC为8ug/ml，药物解读为药物剂量依赖型敏感，氟胞嘧啶和两性霉素B敏感。上述生物菌种经过ITS测序，序列为序列表序列1所示；与NCBI数据库对比，此菌株为Candida glabrata，该菌株于2021年6月15号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:61724，该菌株的分类命名为Candida glabrata。
下述实施例中的Sephadex LH-20柱色谱购自GE Healthcare,Uppsala,Sweden。
实施例1、联苯化合物的制备
联苯化合物的制备方法具体如下：
1)取干燥的花楸悬浮细胞10kg，用甲醇在室温条件下冷浸提取5次，甲醇用量为20L/每次，提取时间为每次72h，合并提取液，40℃、0.08Mpa下减压浓缩提取液，得到浸膏约6kg；
2)所得浸膏用氯仿/甲醇(1:1，v/v，6L)溶解后用100-200目硅胶(ca.6kg)吸附拌样，经正相硅胶柱色谱粗分，先用石油醚洗脱，后依次用体积比为100:0、98:2、 95:5、90:10、80:20、70:30、50:50、0:100的二氯甲烷/甲醇混合溶剂梯度洗脱，得到 11个组分，依次编号为A1–A11；
3)将第5个组分A5进一步用正相硅胶柱(填料为100-200目硅胶)分离，分离的条件为依次采用体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:5、0:1的石油醚/丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，分离得到5个亚组分，亚组分依次编号为B1–B5；
4)第4个亚组份B4经Sephadex LH-20柱色谱(流动相为甲醇)进行目标化合物的富集；再经HPLC纯化(流动相为甲醇-水，洗脱条件为30％→100％(v/v)，洗脱时间为0min→30min，流速为10mL/min，检测波长为280nm)，得到化合物1(5mg， tR＝26.6min)。
通过质谱和核磁确定了获得的单体化合物的结构，所得化合物的物理性状、分子式、1H NMR和13C NMR数据如下：
化合物1:白色无定型粉末，分子式为C12H10O3。1H NMR(CD3OD,600MHz)δH: 7.47(2H,dd,J＝1.34,8.38Hz,H-2',6')；7.34(2H,t,J＝7.37Hz,H-3',5')；7.22(1H,t,J＝ 7.34Hz,H-4')；6.61(1H,d,J＝1.57Hz,H-2,6)；13C NMR(CDCl3,150MHz)δc: 147.5(C-3,5),144.3(C-1'),134.2(C-1),134.0(C-4),129.8(C-3',5'),127.6(C-4'),107.2(C-2, 6).
化合物1的1H NMR图和13C NMR图见图1；化合物1的结构式为下述式Ⅰ所示：
Figure BDA0003171216960000031
实施例2、抗菌实验
将实施例1所得的式Ⅰ所示化合物对1株临床耐药真菌进行MIC测定，采用二倍稀释法，具体步骤如下：
1)临床耐药真菌MIC的测定：将所得式Ⅰ所示化合物用DMSO配制成10mmol/mL 的贮备液。
2)配制500mL，2×1640培养基，具体操作为：取10.4g RPMI Medium 1640powder(gibco，USA)；20g葡萄糖(生工，上海)；34.53g MOPS(3-吗啉化丙磺酸)干粉(生工，上海)；溶于500mL蒸馏水；加入2.5g NaOH粉末(生工，上海)，经过0.22um滤膜过滤消毒。过滤后，4℃下放置待用。
3)菌悬液的配制：将耐药光滑念珠菌(Candida glabrata)(保藏编号为GDMCC NO:61724)作为测试菌株；复苏该菌株，接种于沙保弱培养基，挑取单个菌落，获得纯菌。利用麦氏比浊仪(梅里埃，法国)配制菌悬液，用0.9％(质量百分数)生理盐水稀释纯菌至麦氏浊度为0.5Mc的菌悬液，然后再用1640培养基1:50倍(体积比)稀释后再进行1:20(体积比)稀释，得到2倍终浓度接种菌液(1×103-5×103cells/ml)。
4)将式Ⅰ所示化合物的贮备液10mmol/mL，稀释10倍，得到浓度为1mmol/mL 抗菌药物溶液，吹打均匀。用1640培养基进行稀释，初筛设定100、50、25、12.5μmol/mL 的药物浓度。取无菌96孔板，第一孔至第四孔分别加入100μL浓度为100、50、25、 12.5μmol/mL的药物，然后再加入100μL配制好的菌悬液；第五孔为阴性对照，加入 100μL 1640培养基和100μL灭菌的蒸馏水；第六孔为阳性对照，分别加入100μL 1640 培养基和100μL菌悬液。每个孔设置3个重复，将处理好的96孔板放置到37℃的恒温培养箱中用锡箔纸包上避光培养，20～24h观察。如果某浓度的化合物具有活性，则在该浓度对应的孔是澄清的，反之浑浊。24h发现25μmol/mL的药物组完全抑制，12.5 μmol/mL有光滑念珠菌生长。阳性对照长满孔的底部，阴性对照无生长。即药物对耐药真菌(耐药光滑念珠菌)的完全抑制浓度在12.5～25μmol/mL之间。
5)为了确定完全抑菌浓度，又设置10～27.5μmol/mL之间一系列浓度，进行第二次筛选，设置浓度梯度为27.5、25、22.5、20、17.5、15、12.5、10μmol/mL，每孔加入100μL的浓度药物，然后再加入100μL配好的菌悬液。设置阴性对照和阳性对照(与上述4)相同)。每孔设置3个重复，将处理好的96孔板放置到37℃的恒温培养箱中用锡箔纸包上避光培养，20～24h观察。结果见图2，由图2可见，24h阳性对照长满孔的底部，阴性对照无生长，17.5μmol/mL孔中光滑念珠菌100％抑制，即工作浓度为 8.75μmol/mL的药物可以完全抑制耐药光滑念珠菌的生长，该联苯化合物的相对分子质量为202，即该化合物的浓度为1.77μg/mL。因此该联苯化合物对耐药光滑念珠菌 (Candida glabrata)(保藏编号为GDMCC NO:61724)最小抑制浓度为1.77μg/mL。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
序列表
<110> 中国中医科学院中药研究所
<120> 一种联苯化合物在抗临床耐药真菌中的应用
<130> GNCXY212144
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 869
<212> DNA
<213> Candida glabrata-210413102-ITR-R
<400> 1
cccgtttttg atatgcttaa gttcagcggg taaccctacc tgatttgagg tcaaacttaa 60
agacgtctgt ctgcccagca cgcacaaaac actcacttat ccctccctag atcaacaccg 120
agttggtaaa acctaataca gtattaaccc ccgccgctcg cgcaaacgag cagcagatta 180
atagagaagc ttgcgctcgt gtcccacata ctgatatggc ctacaatttc aagttaactc 240
aaaaacgaga gtatcactca ctaccaaaca caacgtgttt gagaaggaaa tgacgctcaa 300
acaggcatgc cccccggaat accagagggc gcaatgtgcg ttcaaagatt cgatgattca 360
cggaattctg caattcacat tacgtatcgc atttcgctgc gttcttcatc gatgcgagaa 420
ccaagagatc cattgttgaa agttttgaag ttgttttcta ctaaaagaaa tcttgtgttg 480
actgaattag tttaaaaaaa tatttgtttg tgtttgcatc cactgggaga actccccccc 540
cgaaagagag cgttccccca acgaacaaaa gaatagtagt aaagtaaact ccactgtgtg 600
tagtaattag aaagtgtcga gtcgtgtgat aaaacacctc ctttggaata gagagatcca 660
cgcacactcc caggtctttg tcggctccct ccccccactg cagaacaccc accaaccgcg 720
cacttaagcg caggcaggag aaatggcatt cacagcagag aaaatatttt aggaacctcc 780
tgagtgtcta cactggtcct ccccagagat gtctctctcc gagctcagac aaatcaatta 840
aatttcttta atgatccttc cgcagtcac 869

Claims (4)

1.式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备抗真菌剂中的应用；
Figure FDA0003778099960000011
所述真菌为耐药光滑念珠菌Candida glabrata。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述耐药光滑念珠菌Candida glabrata的保藏编号为GDMCC NO:61724。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在浓度为1～100μg/mL条件下能够有效抑制真菌的生长。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在浓度为1～10μg/mL条件下能够有效抑制真菌的生长。
CN202110819093.0A 2021-07-20 2021-07-20 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用 Active CN113413376B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110819093.0A CN113413376B (zh) 2021-07-20 2021-07-20 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110819093.0A CN113413376B (zh) 2021-07-20 2021-07-20 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113413376A CN113413376A (zh) 2021-09-21
CN113413376B true CN113413376B (zh) 2022-11-01

Family

ID=77721886

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110819093.0A Active CN113413376B (zh) 2021-07-20 2021-07-20 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113413376B (zh)

Also Published As

Publication number Publication date
CN113413376A (zh) 2021-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112094789B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用
CN113413376B (zh) 一种联苯化合物在制备抗真菌剂中的应用
CN113005048A (zh) 一种产黑链霉菌cys22、其代谢产物及应用
CN113444131B (zh) N-乙酰氨基葡萄糖类化合物及其制备方法和应用
CN113621526B (zh) 一种海洋真菌杂色曲霉m-7-sw9、混源萜类化合物及其提取方法和应用
CN108084089B (zh) 一种防治白色念珠菌的2-烷基胺喹啉类化合物及其制备方法与应用
CN108102933B (zh) 一株白黄黑链霉菌菌株及其应用
CN114149445B (zh) 一种氧杂蒽酮类化合物的制备方法及其在抗耐药细菌方面的应用
CN110327328A (zh) 25β-仲丁烯基-23β-异丁酰氧基米尔贝霉素衍生物在抗肿瘤中的应用
CN111228326A (zh) 一种甘草中生物碱类化合物的制备方法及用途
CN114957285A (zh) 一种稠合醚环单萜吲哚生物碱类化合物、制备方法和应用
CN115109023A (zh) 大环内酯类化合物fwyz52-a、其发酵菌株、发酵方法及应用
CN110790660B (zh) 一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用
CN108486011B (zh) 一种三联苯化合物、制备方法及其应用
CN108586218B (zh) 一种氯代环戊烯酮类化合物及其制备和应用
CN111588717A (zh) 两个四重内酯类抗生素作为抗mrsa药物的应用及其提取分离方法
CN106511420B (zh) 白薇作为抗真菌类药物的新用途
CN109251145B (zh) 一种邻苯二甲酸酯及其制备方法、菌株与应用
CN114350529B (zh) 一株产查尔酮类成分的甘草内生真菌及其应用
CN113173904B (zh) 新的抑菌化合物以及用于制备该化合物的曲霉
CN112159785B (zh) 麦氏交替单胞菌e6及其应用
CN111808116B (zh) 一种荧光类化合物及其制备方法与应用
CN112694406B (zh) 两种二聚己基衣康酸衍生物的制备方法和应用
CN114292193B (zh) 一种缩酚酸环醚类化合物、菌株、制备方法及应用
CN108276363B (zh) 帚状曲霉次生代谢物及其在制备抗真菌药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant