CN110790660B - 一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用 - Google Patents

一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用，将青霉菌接种至发酵培养基，在28℃条件下发酵培养，取发酵液进行分离纯化，获得所述聚酮化合物；本发明所涉及的聚酮化合物对三阴乳腺癌细胞MDA‑MB‑231的增殖具有较好的抑制作用。

Description

一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用
(一)技术领域
本发明涉及一种新的聚酮化合物及其制备方法和其在作用于三阴乳腺癌细胞活性方面的应用。
(二)背景技术
三阴乳腺癌指的是雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体-2均为阴性或低表达的乳腺癌。在中国，三阴乳腺癌约占所有乳腺癌患者的20％。与普通乳腺癌相比，三阴乳腺癌好发于绝经前的年轻女性，肿瘤分级更高，确诊时分期更晚，肝、肺和脑转移率极高，死亡风险较高。此外，由于缺乏相应的受体，目前临床上尚无针对性的三阴乳腺癌治疗方案，而对于普通乳腺癌治疗临床效果较好的内分泌治疗和分子靶向治疗方案，对于其均无效。由于其高发病率及低治愈率，三阴乳腺癌已成为女性健康的杀手之一。因此，三阴乳腺癌治疗药物的研发对于攻克该疾病和造福广大女性具有重要的现实意义。
真菌能够产生结构新颖多样的活性次级代谢产物，是药物先导化合物的重要来源之一。以青霉素、环孢菌素A和洛伐他丁等为代表的真菌来源药物为人类的健康作出了重大贡献。然而，真菌来源的抗三阴乳腺癌天然产物研究尚处于起步阶段，广泛深入地开展真菌中抗三阴乳腺癌作用的次级代谢产物研究，有望获得具有疗效明确的新型三阴乳腺癌治疗药物先导，助力该疾病临床治疗药物的研发。
(三)发明内容
本发明目的是针对目前临床尚无三阴乳腺癌治疗药物这一问题，提供一种具有强效抗三阴乳腺癌细胞活性的化合物及其制备与应用。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种式(1)所示的聚酮化合物，该化合物以青霉菌为发酵菌，按常规方法培养发酵、提取分离得到具有三环[5.3.1.03,8]十一烷骨架的聚酮化合物，
Figure BDA0002215688050000011
本发明还提供一种所述聚酮化合物的制备方法，所述方法为：(1)发酵：将青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11接种至发酵培养基后，在25～28℃、150～180rpm条件下发酵培养14天，获得发酵液；所述青霉菌ZJUT-HS-11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO.M 2019259，保藏地址为中国，武汉，武汉大学；所述发酵培养基质量终浓度组成为：碳源10-30g/L、氮源10-25g/L、无机盐0.5-1g/L，真菌化学表观遗传调控剂0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然，所述真菌化学表观遗传调控剂为辛二酰苯胺异羟肟酸、辛二酰二异羟肟酸、丁酸钠、烟酰胺或丙戊酸中的一种或任几种，优选辛二酰苯胺异羟肟酸，所述真菌化学表观遗传调控剂以40mg/ml二甲基亚砜溶液的形式加入；(2)提纯：将发酵液过滤，取菌丝体干燥后用丙酮室温浸泡提取(优选三次，每次1.5L，每次提取1小时，合并提取液)，提取液减压浓缩至无液体流出，获得丙酮提取物；将丙酮提取物悬浮于水中，用乙酸乙酯萃取(优选3次，每次500mL，合并有机层)，取有机层减压浓缩至无液体流出，得乙酸乙酯胞内萃取物；将乙酸乙酯胞内萃取物用石油醚-丙酮5:1混合溶剂溶解后进行硅胶柱层析，用体积比1-5:1的石油醚丙酮溶液为洗脱液(优选依次用体积比5:1的石油醚-丙酮溶液、体积比4:1的石油醚-丙酮溶液、体积比3:1的石油醚-丙酮溶液、体积比2:1的石油醚-丙酮溶液、体积比1:1的石油醚-丙酮溶液洗脱，每个洗脱液洗脱两个柱体积)，收集体积比3:1的石油醚-丙酮的流出液，浓缩至干用甲醇溶解后，再进行ODS C18柱层析，用体积比6:4的甲醇-水溶液洗脱，以氯仿-甲醇10:1(v/v)为展开剂进行薄层层析检测，收集Rf值为0.5的流出液，减压浓缩至干，即得式(1)所示聚酮化合物。
进一步，所述碳源为：葡萄糖、甘露醇、甘油、糊精或半乳糖中的一种或任几种，优选葡萄糖；所述氮源为黄豆粉、蛋白胨或马铃薯浸出粉中的一种或任几种，优选马铃薯浸出粉；所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，优选磷酸二氢钾。
进一步，优选所述发酵培养基组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉10-25g/L，磷酸氢二钾0.5-1g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然。最优选发酵培养基组成为：葡萄糖20g/L，马铃薯浸出粉25g/L，KH2PO4 5g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.08g/L，溶剂为水，pH自然，所述辛二酰苯胺异羟肟酸以40mg/mL二甲基亚砜溶液形式加入。
本发明青霉菌ZJUT-HS-11在发酵前先进行斜面活化和种子扩大培养，具体青霉菌ZJUT-HS-11发酵液制备方法为：(1)将青霉菌ZJUT-HS-11接种至斜面培养基，在28℃培养5-7天，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：碳源10-30g/L、氮源5-25g/L、无机盐0.5-1g/L，琼脂15-20g/L，溶剂为水，pH自然；所述碳源为：葡萄糖、甘露醇、甘油、糊精或半乳糖中的一种或任几种，优选葡萄糖；所述氮源为黄豆粉、蛋白胨或马铃薯浸出粉中的一种或任几种，优选蛋白胨；所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，优选磷酸二氢钾；优选斜面培养基终浓度组成为：葡萄糖30g/L，马铃薯浸出粉5g/L，KH2PO4 1g/L，琼脂18g/L，溶剂为水，pH值自然；(2)将斜面菌体接种至种子培养基，在28℃、185rpm、体积装液量30％条件下培养24h，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：碳源10-50g/L，氮源5-25g/L，无机盐0.5-2g/L，真菌化学表观遗传调控剂(同发酵培养基)0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH值自然；所述碳源为：葡萄糖、甘露醇、甘油、糊精或半乳糖中的一种或任几种，优选葡萄糖；所述氮源为黄豆粉、蛋白胨或马铃薯浸出粉中的一种或任几种，优选马铃薯浸出粉；所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，优选磷酸二氢钾；优选种子培养基终浓度组成为：葡萄糖30g/L，马铃薯浸出粉10g/L，KH2PO4 1g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.08g/L，溶剂为水，pH值自然，所述辛二酰苯胺异羟肟酸以40mg/ml二甲基亚砜溶液的形式加入；(3)将种子液以体积浓度5-10％(优选10％)的接种量接种至发酵培养基，在28℃、185rpm、体积装液量30％条件下振荡培养7天后继续静置培养7天，获得发酵液；所述发酵培养基终浓度组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉10-25g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然，所述辛二酰苯胺异羟肟酸以40mg/ml二甲基亚砜溶液的形式加入。
本发明所述发酵液分离纯化方法可以采用常规的方法进行提取分离，比如经过过滤得菌丝体，菌丝体干燥后可以用浸提、萃取、硅胶柱层析等常规方法和常用溶剂进行提取分离。
本发明还提供一种所述聚酮化合物在制备乳腺癌细胞活性抑制剂中的应用，所述乳腺癌细胞为三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231。
本发明还提供一种用于制备聚酮化合物的青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO.M2019259，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明筛选得到一株能够发酵产聚酮化合物的新菌株--青霉菌ZJUT-HS-11，将青霉菌ZJUT-HS-11接种至发酵培养基，在28℃条件下发酵培养，取发酵液进行分离纯化，获得所述聚酮化合物；本发明所述聚酮化合物对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖具有较好的抑制作用，IC50(μM)为16.43±0.77μM，与阳性药顺铂(IC50＝31.26±0.94μM)处于同一数量级。鉴于顺铂为目前临床治疗三阴乳腺癌的有效药物之一，化合物所表现出的优异活性表明其具有良好的开发前景。
(四)附图说明
图1为青霉菌ZJUT-HS-11菌落照片。
图2为化合物1的氢谱。
图3为化合物1的碳谱。
图4为化合物1的DEPT谱。
图5为化合物1的1H-1H COSY谱。
图6为化合物1的HSQC谱。
图7为化合物1的HMBC谱。
图8为化合物1的NOESY谱。
图9为化合物1的圆二色谱。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11分离及鉴定
1、菌株ZJUT-HS-11的分离
1)材料的清洗及表面消毒
选取无病害、无伤口的新鲜药用植物蛇足石杉(2016年9月采自福建省平潭市)，用自来水流动冲洗1h；用剪刀将根、叶与茎分开，放入装有蒸馏水的烧杯中，于超声洗涤器中超声清洗20min；超声清洗结束后，在无菌超净工作台中，按无菌操作方法进行以下操作：先用75％的乙醇水溶液浸泡2min，无菌水冲洗3次，5.2％的次氯酸钠水溶液浸泡2min，无菌水冲洗5次进行表面消毒处理。
2)内生真菌菌株的分离
将表面消毒后的蛇足石杉茎部用无菌手术剪刀剪成4-8mm的片段，置于马铃薯葡萄糖(PDA)平板培养基上，每皿植入3片，均匀分布，将平板置于培养箱中，28℃避光培养15d，见组织块断面边缘有菌丝产生，挑取前端菌丝转入PDA平板培养基上，通过平板划线法纯化得到单一菌落后。接入PDA斜面培养基，于28℃避光培养4-7d后，待菌丝长满整个斜面，转至4℃冰箱内保存备用。
在PDA平板培养基上，与28℃下培养，可见绿色孢子；培养7天，菌落即可铺满全皿，菌落有褶皱，中间呈绿色边缘呈白色，中间可见黄色分泌物，孢子呈粉末状，与培养基结合紧密，见图1。
2、菌株ZJUT-HS-11的分子生物学鉴定
1)DNA的提取
取培养6天的发酵液，离心收集菌丝体，将菌丝用液氮冷冻研磨后，用SK 8259Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒(生工生物工程(上海)有限公司)提取基因组DNA，进行琼脂糖凝胶电泳。
2)ITS区序列的PCR扩增。
引物序列为：ITS1:5’TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3’；ITS4:5’TCCTCCGCTTATTGATATGC3’。PCR体系(50μL)构成为：Template(基因组)10pmol，Primer 1(10μM)1μL，Primer 2(10μM)1μL，dNTP mix(10Mm each)1μL，10×Taq reaction Buffer 5μL，Taq(5U/μL)0.25μL，加水至50μL。PCR程序设定为：98℃预变性5mim，95℃变性35s，55℃复性35s，72℃延伸40s，35个循环，最后延伸72℃延伸8min。由PCR产物电泳结果切割所需DNA目的条带，经UNIO-10柱式DNA凝胶回收试剂盒(生工生物工程(上海)有限公司)纯化。纯化产物由生工生物工程(上海)有限公司测序。所得ITS碱基序列为(SEQ ID NO.1所示)：
TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTTTATTTTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTTAACTGGCCGCCGGGGGGCTTACGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACCCTCGAACTCTGTCTGAAGATTGTAGTCTGAGTGAAAATATAAATTATTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCCCCGTCCTCCGATCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGATCAACCCAAATTTTTATCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATA。
3)数据处理。
序列数据在美国国立生物信息中心(National Center for BiotechnologyInformation USA,NCBI)的Genbank中进行同源序列搜索比对，分析其同源性。将上述序列与GenBank中的序列进行比较，鉴定该菌株为青霉菌(Penicillium sp.)，命名为青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO：M 2019259，保藏单位地址为中国，武汉，武汉大学。
实施例2化合物1的制备方法
1、发酵培养制备青霉菌发酵物
1)斜面培养及保存
固体培养基：葡萄糖3g，马铃薯浸出粉0.5g，KH2PO4 0.5g，琼脂1.8g，加水到100mL，pH值自然。
固体培养方法：青霉菌ZJUT-HS-11接种于固体培养基斜面上，28℃培养5-7天。固体培养结束后，斜面放置4-10℃冷藏备用。30％的甘油冷冻管的制备：在无菌状态下，将试管斜面用6mL灭菌的30％甘油洗下，分装至甘油管中(3mL/支)，放置-20℃冷藏备用。
2)摇瓶种子培养
种子培养基：葡萄糖3g，马铃薯浸出粉1g，KH2PO4 0.5g，加水到100mL，pH自然，于121℃灭菌20分钟后，冷却至室温，加入200μL过滤除菌后的辛二酰苯胺异羟肟酸溶液(浓度为40mg/mL，溶剂为二甲基亚砜)，使得培养基中辛二酰苯胺异羟肟酸的终浓度为0.08g/L。
将30％的甘油冷冻菌丝3mL接种至装有100mL种子培养基的250mL三角瓶中，28℃、185rpm培养24h后，获得种子液。镜检菌丝粗壮，染色深，无染菌，菌浓≥15％。
3)摇瓶发酵培养
发酵培养基：葡萄糖2g，马铃薯浸出粉2.5g，KH2PO4 0.5g，加水到100mL，pH自然，于121℃灭菌20分钟后，冷却至室温，加入200μL过滤除菌后的辛二酰苯胺异羟肟酸溶液(浓度为40mg/mL，溶剂为二甲基亚砜)，使得培养基中辛二酰苯胺异羟肟酸的终浓度为0.08g/L。
以体积浓度10％的接种量将种子液接种至装有100ml发酵培养基的250mL三角瓶中，28℃、185rpm条件下培养14天，获得发酵液，100个平行样。
2、提取分离获得化合物1
将发酵液过滤，收集菌丝体30℃干燥，获得发酵干菌丝体共100g。将发酵干菌丝体100g用丙酮室温浸泡提取三次，每次1.5L，每次提取1小时，合并提取液，减压浓缩至无液体流出，得提取物5g；将上述提取物悬浮于500mL水中，用乙酸乙酯萃取3次(每次500mL)，合并有机层，减压浓缩至无液体流出后得乙酸乙酯提取物2g。乙酸乙酯提取物用石油醚-丙酮5:1混合溶剂溶解后进行硅胶柱层析，洗脱条件为(石油醚-丙酮5:1，石油醚-丙酮4:1，石油醚-丙酮3:1，石油醚-丙酮2:1，石油醚-丙酮1:1，以上体积比例溶剂均洗脱2个柱体积)，收集石油醚-丙酮(3:1)的流出液，减压浓缩至干去除溶剂，获得层析产物60mg；再将层析产物用甲醇溶解进行ODS C18柱层析纯化，洗脱条件为甲醇-水6:4(v/v)，以氯仿-甲醇10:1(v/v)为展开剂进行薄层层析检测，合并比移值(Rf值)为0.5的流出液，减压浓缩至干，即得化合物1(17mg)。收集比移值(Rf值)为0.6的流出液，减压浓缩至干，即得青霉酮A(penicillone A)7.3mg。
实施例3化合物1及penicillone A的理化性质及波谱数据
化合物1：无色透明油状物；分子式为C14H20O4；旋光
Figure BDA0002215688050000073
圆二色谱(MeOH)λmax(△ε)337(+9.8),303(-10.8),205(-51.7)；红外vmax 3535,3457,2933,2876,1737,1703,1570,1379,988,899cm-1；氢谱及碳谱见表1；高分辨质谱(ESI)m/z:275.1260[M+H]+。化合物1的氢谱见图2，碳谱见图3，DEPT谱见图4，1H-1H COSY谱见图5，HSQC谱见图6，HMBC谱见图7，NOESY谱见图8，圆二色谱见图9。
化合物1为聚酮化合物，具有三环[5.3.1.03,8]十一烷骨架，分子式C14H20O4，分子量为274，结构式如下：
Figure BDA0002215688050000071
表1化合物1核磁数据
Figure BDA0002215688050000072
Figure BDA0002215688050000081
Figure BDA0002215688050000082
penicillone A
化合物penicillone A的核磁共振氢谱和碳谱数据见表2，通过与文献(对比文献1：Liu WZ,Gu QQ,Zhu WM,Cui CB,Fan GT,Zhu TJ,Liu HB,Fang YC.Tetrahedron Lett.,2005,46,4993-4996.)数据比对，确定其结构。
表1化合物penicillone A的核磁数据
Figure BDA0002215688050000083
Figure BDA0002215688050000091
实施例4化合物1抗三阴乳腺癌活性评价
1、材料
三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231购于中国科学院上海细胞库，所有细胞均由本实验室复苏、传代、培养及冻存。SpectraMax M5酶标仪(美谷分子仪器有限公司)，Ti-s倒置显微镜(Nikon)，3111-Forma CO2培养箱(Thermo Scientific)，Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒(日本同仁化学研究所)，L-15培养基(Gibco)，胎牛血清(北京索莱宝科技有限公司)。
2、方法
将MDA-MB-231细胞用L-15培养基(品牌Gibco，购自ThermoFisher Scientific)配成单细胞悬液，计数后，调整细胞密度至5×107·L-1，按照每孔100μL细胞悬液接种于96孔板中，至培养箱中在温度：37℃；空气比例：95％；二氧化碳比例5％条件下孵育24h，弃去培养基。将化合物1和顺铂(阳性对照)依次用含10％胎牛血清的L-15培养基稀释为50、25、12、6、3μmol·L-1，以每孔100μL加入96孔板中，每个浓度分别设置5个平行复孔，同时设置阴性对照(替换化合物1为体积浓度0.1％DMSO)和空白对照组(扣除背景用，只有培养基，无细胞，不加药物)。在细胞培养48h后，弃去培养基，每孔中分别加入100μL新鲜含10％胎牛血清的L-15培养基和10μLCCK-8试剂，于培养箱中(温度：37℃；空气比例：95％；二氧化碳比例：5％)孵育1.5h后，在450nm波长处检测吸光度值(OD)。将药物浓度及其对应的吸光度值输入Graphpad Prism5分析软件中，得出IC50值。
3、结果
化合物1对MDA-MB-231细胞增殖的半数有效抑制浓度(IC50)为16.43±0.77μM，与阳性药顺铂(IC50＝31.26±0.94μM)处于同一数量级。鉴于顺铂为目前临床治疗三阴乳腺癌的有效药物之一，化合物1所表现出的优异活性表明其具有良好的开发前景。
表2化合物1对MDA-MB-231细胞的增值抑制活性
Figure BDA0002215688050000101
对比例1化合物penicillone A抗三阴乳腺癌活性
将实施例4中化合物1替换为penicillone A，其他条件相同，实验结果表明，penicillone A在同等条件下，活性较弱，其IC50＝37.20±1.85μM。
序列表
<110> 浙江工业大学
<120> 一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 562
<212> DNA
<213> 青霉菌(Penicillium sp.)
<400> 1
tgcggaagga tcattaccga gtgagggccc tctgggtcca acctcccacc cgtgtttatt 60
ttaccttgtt gcttcggcgg gcccgcctta actggccgcc ggggggctta cgcccccggg 120
cccgcgcccg ccgaagacac cctcgaactc tgtctgaaga ttgtagtctg agtgaaaata 180
taaattattt aaaactttca acaacggatc tcttggttcc ggcatcgatg aagaacgcag 240
cgaaatgcga tacgtaatgt gaattgcaaa ttcagtgaat catcgagtct ttgaacgcac 300
attgcgcccc ctggtattcc ggggggcatg cctgtccgag cgtcatttct gccctcaagc 360
acggcttgtg tgttgggccc cgtcctccga tcccggggga cgggcccgaa aggcagcggc 420
ggcaccgcgt ccggtcctcg agcgtatggg gctttgtcac ccgctctgta ggcccggccg 480
gcgcttgccg atcaacccaa atttttatcc aggttgacct cggatcaggt agggataccc 540
gctgaactta agcatatcaa ta 562

Claims (9)

1.一种式(1)所示聚酮化合物，
Figure FDA0003487607420000011
2.一种权利要求1所述聚酮化合物的制备方法，其特征在于所述方法为：(1)发酵：将青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11接种至发酵培养基，在25～28℃、150～180rpm条件下发酵培养，获得发酵液；所述青霉菌ZJUT-HS-11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO.M 2019259，保藏地址为中国，武汉，武汉大学；所述发酵培养基质量终浓度组成为：碳源10-30g/L、氮源10-25g/L、无机盐0.5-1g/L，真菌化学表观遗传调控剂0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然；所述真菌化学表观遗传调控剂为辛二酰苯胺异羟肟酸、辛二酰二异羟肟酸、丁酸钠、烟酰胺或丙戊酸中的一种或任几种；(2)提纯：将发酵液过滤，取菌丝体干燥后用丙酮室温浸泡提取，提取液减压浓缩至无液体流出，获得丙酮提取物；将丙酮提取物悬浮于水中，用乙酸乙酯萃取，取有机层减压浓缩至无液体流出，得乙酸乙酯胞内萃取物；将乙酸乙酯胞内萃取物进行硅胶柱层析，用以体积比1-5:1的石油醚丙酮溶液为洗脱液，收集体积比3:1的石油醚-丙酮的流出液，浓缩至干，再进行ODS C18柱层析，用体积比6:4的甲醇-水溶液洗脱，薄层层析检测各个流出液，收集Rf值为0.5的流出液，减压浓缩至干，即得式(1)所示聚酮化合物。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述碳源为：葡萄糖、甘露醇、甘油、糊精或半乳糖中的一种或任几种；所述氮源为黄豆粉、蛋白胨或马铃薯浸出粉中的一种或任几种。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉10-25g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然，所述辛二酰苯胺异羟肟酸以40mg/mL二甲基亚砜溶液形式加入。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于发酵液制备方法为：(1)将青霉菌ZJUT-HS-11接种至斜面培养基，在28℃培养5-7天，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉5-25g/L，KH2PO4 0.5-1g/L，琼脂15-20g/L，溶剂为水，pH值自然；(2)将斜面菌体接种至种子培养基，在28℃、185rpm、装液量30％条件下培养24小时，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：葡萄糖10-50g/L，马铃薯浸出粉5-25g/L，KH2PO4 0.5-2g/L，真菌化学表观遗传调控剂0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH值自然，所述真菌化学表观遗传调控剂以40mg/mL二甲基亚砜溶液形式加入；(3)将种子液以体积浓度5-10％的接种量接种至发酵培养基，在28℃、185rpm、装液量30％条件下培养7天后继续静置培养7天，获得发酵液；所述发酵培养基终浓度组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉10-25g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，辛二酰苯胺异羟肟酸0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然，所述辛二酰苯胺异羟肟酸以40mg/mL二甲基亚砜溶液形式加入。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述发酵液分离纯化方法为：将发酵液过滤，菌丝体干燥后用丙酮室温浸泡提取三次，合并提取液，减压浓缩至无液体流出，获得丙酮提取物；将丙酮提取物悬浮于水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，减压浓缩至无液体流出，得乙酸乙酯胞内萃取物；将乙酸乙酯胞内萃取物进行硅胶柱层析，依次用体积比5:1的石油醚-丙酮溶液、体积比4:1的石油醚-丙酮溶液、体积比3:1的石油醚-丙酮溶液、体积比2:1的石油醚-丙酮溶液、体积比1:1的石油醚-丙酮溶液洗脱，每个洗脱液洗脱2个柱体积，收集体积比3:1的石油醚-丙酮溶液的流出液，浓缩至干用甲醇溶解后，再用ODS C18柱层析进行纯化，用体积比6:4的甲醇-水溶液洗脱，薄层层析检测各个流出液，收集Rf值为0.5的流出液，减压浓缩至干，即得聚酮化合物。
8.一种权利要求1所述聚酮化合物在制备乳腺癌细胞活性抑制剂中的应用，其特征在于所述乳腺癌细胞为三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-231。
9.一种用于制备权利要求1聚酮化合物的青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO.M2019259，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
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