CN113388473A - 一种具有调节肠道菌群、改善睡眠作用的复配酸枣果酒及其制备方法 - Google Patents

一种具有调节肠道菌群、改善睡眠作用的复配酸枣果酒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种具有调节肠道菌群、改善睡眠作用的复配酸枣果酒及其制备方法。本发明制备的复配酸枣果酒为酸枣仁提取物和具有抗氧化作用的酸枣果粉发酵酒复配而成，不仅具有延缓衰老、美容养颜的作用，还能够调节人体肠道菌群，调控肠道菌群结构进一步发挥改善睡眠的作用。

Description

一种具有调节肠道菌群、改善睡眠作用的复配酸枣果酒及其 制备方法
技术领域
本发明涉及一种具有调节肠道菌群、改善睡眠作用的复配酸枣果酒及其制备方法，属于食品、保健品及医药领域。
背景技术
酸枣(Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou)为鼠李科植物酸枣的成熟果实，是我国北方普遍分布的一种野生资源，至今已有三千多万年的生长历史。酸枣作为药物，始载于《神农本草经》，列为上品。本经有云：“久服安五脏，轻身延年”。酸枣具有很高的营养价值，含有多种氨基酸、维生素、矿物质、黄酮类及皂苷类成分以及大量的VC、蛋白质、碳水化合物、有机酸和钙、硒、铁等微量元素。随着现代微生物技术的快速发展，酸枣作为一种具有鲜明独特风味的果实，被广泛开发成酸枣果酒和酸枣醋等产品。酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣的干燥种子，味甘，性平，有宁心安神、养肝、敛汗生津之效，始载于《神农本草经》，在治疗失眠中药排行榜上位列第一，使用频率高达为67.3％，远远超过其他常用安神类中药。
近年来大量研究表明肠道菌群在CNS和胃肠道之间的沟通中起重要作用，并据此提出了“微生物-肠-脑轴”的概念。“微生物-肠-脑轴”理论指出肠道微生物、肠道以及大脑3者间有密切的信息交流，且肠道微生物在肠-脑轴相互作用中起非常的重要作用。已有研究表明肠道微生物通过“肠-脑轴”参与了失眠症的病理发病机制[Liu B，Lin W，Chen S，etal.Gut Microbiota as a Subjective Measurement for AuxiliaryDiagnosis ofInsomnia Disorder[J].Front Microbiol，2019，10:1770.]。此外，由肠道菌群产生的短链脂肪酸、d-乳酸、氨等代谢物也可通过迷走神经进入CNS，进而影响大脑功能、应激反应和睡眠结构。有研究显示失眠或睡眠剥夺会影响肠道菌群组成，如Sudo发现缺少肠道微生物的小鼠出现HPA轴活性增强，进而导致失眠的发生。补充益生菌则能改善失眠，如补充双歧杆菌能纠正功能失调的HPA轴，从而改善失眠症状[Sudo N.Postnatal microbialcolonization programs the ypothalamic-pituitary-adrenal system for stressresponse in mice[J].J Physiol，2004，558(1):263-275.]。这些都证实了肠道菌群与睡眠之间的密切联系。
酸枣、酸枣仁和茯苓是我国卫生与健康委员会公布的既是食品又是中药材物质，目前两者均是开发改善睡眠药物、保健食品、功能食品的热点研究对象，并且川芎和知母为国家卫生与健康委员会公布的可用于保健食品的物质。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺简单、绿色安全的复配酸枣果酒及其制备方法。
本发明所提供的复配酸枣果酒，通过包括以下步骤的方法制备得到：
1)取酸枣仁，粉碎，过筛，加入一定体积分数的乙醇溶液浸泡，加热回流提取，过滤，收集滤液，浓缩得到酸枣仁提取液；
2)取步骤1)酸枣仁提取液上大孔树脂，洗脱，收集洗脱液，浓缩，冻干得酸枣仁提取物；
3)取酸枣果粉，加入蒸馏水和果胶酶进行酶解浸提，收集酸枣果肉酶解浸提液；
4)将步骤3)得到的酸枣果肉酶解浸提液调节糖度和pH值，接种酵母菌进行酒精发酵，得到酸枣原酒；
5)将步骤4)得到的酸枣原酒添加步骤1)所得酸枣仁提取物，进行后发酵，后发酵结束后进行澄清、灭菌，得到复配酸枣果酒基酒；
6)将甘草、茯苓、川芎和知母饮片浸泡在步骤5)得到的复配酸枣果酒基酒中，浸泡得到复配酸枣果酒。
上述方法步骤1)中，所述乙醇体积分数为40％-80％；所述酸枣仁粉碎粒度可为10-50目；所述70％体积浓度的乙醇加入量为酸枣仁质量的5-15倍；
所述浸泡时间可为2-6h；
所述加热回流提取可进行多次，具体可为1-3次，每次0.5-4h；
所述酸枣仁提取液的浓度(按生药量浓度计算)可为5-20mg/mL；
步骤2)中，所述大孔树脂为AB-8、ADS-8、XDA-7和D101大孔树脂中的任一种；吸附流速为0.1-2mL/min；
所述洗脱为依次用水、30％、50％、70％体积浓度的乙醇洗脱，收集50％-70％乙醇洗脱液，洗脱流速为2-6BV/h。
步骤3)中，所述酸枣果粉为酸枣干法脱果肉制备的酸枣果粉(专利号CN109907263 A，专利名称：一种具有抗氧化作用的酸枣果粉及其制备方法)，粉碎粒度为过40-80目筛；所述蒸馏水用量为酸枣果粉质量的3-11倍；所述果胶酶(酶活为2500u/g)用量为酸枣果肉酶解液质量的0.06％-0.14％；所述酶解的温度为45-65℃；所述酶解时间为2-6h；
步骤4)中，所述糖度为18-26，调pH为2-5，60℃-100℃加热灭酶5-15min；所述酵母菌为葡萄酒酵母AC、白酒酵母、甜酵母、葡萄酒酵母M31、葡萄酒专用酵母SY或葡萄酒专用酵母RW；所述酒精发酵过程中酵母(酶活为2500u/g)接种量为酸枣果肉酶解液质量的0.3％-0.9％；所述酒精发酵的温度为25-35℃；所述发酵时间为3-7天。
步骤5)中，所述酸枣仁提取物的添加量为酸枣原酒(步骤4)制得)质量的0.01-0.2％；所述后发酵温度为5-20℃；所述后发酵时间为22-36天；所述澄清方法为硅藻土澄清，其中硅藻土添加量为0.2-2g/L；所述灭菌方法为60-90℃灭菌20-40min。
步骤6)中，所述甘草添加量为步骤5)制得的复配酸枣果酒基酒质量的0.5-3％；茯苓添加量为步骤5)制得的复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；川芎添加量为步骤5)制得的复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；知母添加量为步骤5)制得的复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；所述浸泡时间为30-60天。
上述复配酸枣果酒在调节肠道菌群、改善睡眠中的应用或在制备具有调节肠道菌群、改善睡眠的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
所述应用中，调节肠道菌群指使得厚壁菌门和拟杆菌门升高，变形菌门和放线菌门降低；
所述改善睡眠指减少小鼠的自主活动，延长小鼠睡眠时间。
所述产品可为功能饮料、基酒、酸枣酒精饮料、酸枣功能果酒、药酒。
本发明同时对复配酸枣果酒调节肠道菌群和改善睡眠作用进行考察。结果表明，复配酸枣果酒能调控肠道菌群，厚壁菌门和拟杆菌门升高，变形菌门和放线菌门降低；动物实验结果表明复配酸枣果酒显著减少小鼠的自主活动，延长小鼠睡眠时间，表明酸枣果酒具有显著的镇静催眠作用，可以根据使用需要应用于不同的保健食品和功能食品中。
本发明制备的酸枣果酒具有如下优点和效果：
(1)本发明采用干法制备的具有抗氧化作用的酸枣果粉进行酒精发酵，一方面替代了传统发酵中二氧化硫的抗氧化作用；另一方面从原料上对酸枣果酒质量进行控制，避免了霉菌的引入以及由于原料质量导致的成分损失。
(2)本发明制备的复配酸枣果酒为酸枣仁提取物和具有抗氧化作用的酸枣果粉发酵酒复配而成，不仅具有延缓衰老、美容养颜的作用，还能够调节人体肠道菌群，调控肠道菌群结构进一步发挥改善睡眠的作用。
本发明借鉴现代生物发酵技术，采用已有专利《一种具有抗氧化作用的酸枣果粉及其制备方法》中制备的具有抗氧化作用的干燥酸枣果粉为研究对象，利用酵母菌为工程菌，对酸枣进行微生物发酵。将发酵得到的酸枣原酒与酸枣仁提取物进行复配制备复配酸枣果酒基酒，进一步采用上述复配酸枣果酒基酒浸泡茯苓、甘草、川芎和知母制备复配酸枣果酒，达到既具有调节肠道菌群、发挥宁心安神的效果，又有延缓衰老、美容养颜等多种功效，可将复配酸枣果酒开发成高附加值的中药保健食品、中药功能食品、基酒和药酒等。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1酸枣酶解工艺优化
(1)酸枣果肉酶解浸提液单因素考察
酶解时间确定。称取酸枣果粉5g，分成5组，每组3份。加入7倍量的水和质量分数0.1％的果胶酶，匀浆机搅拌(300rpm)5min，分别于55℃条件下酶解浸提2、3、4、5、6h。结束后沸水浴灭酶10min，纱布初步过滤后3500rpm离心10min，取上清液测定固形物含量。综合考虑不同酶解时间对固形物含量的影响，选取4-6h为最佳酶解时间。
酶解温度确定。称取酸枣果粉5g，分成5组，每组3份。加入7倍量的水和质量分数0.1％的果胶酶，匀浆机搅拌(300rpm)5min，分别于45、50、55、60、65℃条件下酶解浸提4h。结束后沸水浴灭酶10min，纱布初步过滤后3500rpm离心10min，取上清液测定固形物含量。综合考虑不同酶解温度对固形物含量的影响，选取50-60℃为最佳酶解温度。
料液比确定。称取酸枣果粉5g，分成5组，每组3份。分别加入3、5、7、9、11倍量的水，加入质量分数0.1％的果胶酶，匀浆机搅拌(300rpm)5min，于55℃条件下酶解浸提4h。结束后沸水浴灭酶10min，纱布初步过滤后3500rpm离心10min，取上清液测定固形物含量。综合考虑不同料液比对固形物含量的影响，选取料液比为5-9倍为最佳料液比条件。
果胶酶添加量确定。称取酸枣果粉5g，分成5组，每组3份。加入7倍量的水，分别加入质量分数0.06％、0.08％、0.1％、0.12％、0.14％的果胶酶，匀浆机搅拌(300rpm)5min，于55℃条件下酶解浸提4h。结束后沸水浴灭酶10min，纱布初步过滤后3500rpm离心10min，取上清液测定固形物含量。综合考虑不同果胶酶添加量对固形物含量的影响，选取0.08-0.12％为最佳果胶酶添加量。
(2)响应面法优化试验
对上述单因素试验结果进行分析，确定响应面分析试验的因素与水平。运用Design-Expert软件，以固形物含量为评价指标进行四因素三水平响应面优化试验。测定结果见表1。
表1响应面试验设计及结果
Figure BDA0003165959820000051
经过响应曲面分析得到果胶酶酶解最优工艺制备的酸枣果肉酶解液的固形物含量为14.43％。根据模型提供的优化条件，结合实际情况，选择果胶酶添加量为0.06％-0.10％、料液比为(1:3)-(1:7)、浸提时间为4h-8h、浸提温度为51℃-55℃作为最佳酶解条件。
实施例2酸枣酒精发酵工艺优化
(1)酸枣酒精发酵单因素考察
酵母添加量的确定。取实施例1中最优工艺制备的酸枣果肉酶解液360mL，置于发酵罐中，分别加入0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％的酵母菌(葡萄酒酵母AC)到发酵液中，固定发酵温度为25℃，发酵时间5.5d，每隔12h测定酸枣果酒中的固形物、酒精度、还原糖以及总酸含量。综合考虑不同酵母添加量对各指标的影响，选取0.4-0.6％为最佳酵母添加量。
发酵温度的确定。取实施例1中最优工艺制备的酸枣果肉酶解液360mL，置于发酵罐中，固定酵母(葡萄酒酵母AC)接种量为0.4％，发酵时间5.5d，分别在20℃、25℃、30℃、35℃、40℃条件下发酵，每隔12h测定酸枣果酒中的固形物、酒精度、还原糖以及总酸含量。综合考虑不同发酵温度对各指标的影响，选取25-35℃为最佳发酵温度。
发酵时间的确定。取实施例1中最优工艺制备的酸枣果肉酶解液360mL，置于发酵罐中，固定酵母(葡萄酒酵母AC)接种量为0.4％，发酵温度25℃，分别发酵72h、84h、96h、108h、120h，每隔12h测定酸枣果酒中的固形物、酒精度、还原糖以及总酸含量。综合考虑不同发酵时间对各指标的影响，选取72-120h为最佳发酵时间。
(2)正交试验设计
依据单因素试验结果，选择发酵温度、发酵时间、酵母接种量为自变量，设计3因素3水平的正交试验，以固形物含量、酒精度、还原糖浓度、总酸含量为响应值，结果见表2。
表2发酵条件优化正交试验结果与分析
Figure BDA0003165959820000061
各因素对固形物影响的主次顺序为C>B>A，即发酵时间影响最大，其次是发酵温度，最后是酵母接种量。最佳组合是A1B2C2或A3B2C2；各因素对酒精度、总酸含量、还原糖浓度影响的主次顺序均为A>C>B，即酵母接种量影响最大，其次是发酵时间，最后是发酵温度。分别的最佳组合是A3B1C3或A3B2C3、A1B2C2、A3B2C3或A3B3C3；综合考虑确定酸枣果酒酒精发酵最佳工艺为酵母接种量为0.4％-0.6％，发酵温度为25℃-35℃，发酵时间为3d-7d。
实施例3
取酸枣仁(4kg)粉碎，过1号筛(10目)，精密称定，加入12倍量60％乙醇，浸泡2h，加热回流提取2次，每次1.5h。浓缩得到酸枣仁提取液(10mg/mL)。将酸枣仁提取液采用D101大孔树脂进行纯化，上样浓度为10mg/mL，吸附流速为1mL/min，洗脱溶剂分别为水、30％、50％、70％的乙醇，洗脱流速为4.5BV/h。收集70％乙醇部位洗脱液浓缩，冻干得酸枣仁提取物32.2g(得率为0.805％)。取上述酸枣仁提取物按照0.0525％比例加入实施例2最佳工艺制备的酸枣原酒中进行后发酵，后发酵温度为12℃，时间为29d。后发酵结束后添加1.2g/L硅藻土进行澄清，85℃灭菌30min，得到复配酸枣果酒基酒。将1.0％甘草、3.5％茯苓、3％川芎、2.5％知母添加到复配酸枣果酒基酒中浸泡60天，测定复配酸枣果酒固形物含量为10.7％，酒精度为9.5°，透光率为80.3％。
实施例4
取酸枣仁(4kg)粉碎，过1号筛(10目)，精密称定，加入10倍量70％乙醇，浸泡4h，加热回流提取2次，每次2h。浓缩得到酸枣仁提取液(10mg/mL)。将酸枣仁提取液采用AB-8大孔树脂进行纯化，上样浓度为10mg/mL，吸附流速为1mL/min，洗脱溶剂分别为水、30％、50％、70％的乙醇，洗脱流速为4BV/h。收集70％乙醇部位洗脱液浓缩，冻干得酸枣仁提取物35g(得率为0.875％)。取上述酸枣仁提取物按照0.105％比例加入实施例2最佳工艺制备的酸枣原酒中进行后发酵，后发酵温度为12℃，时间为29d。后发酵结束后添加1.0g/L硅藻土进行澄清，85℃灭菌30min，得到复配酸枣果酒基酒。将1.5％甘草、3％茯苓、3％川芎、3％知母添加到复配酸枣果酒基酒中浸泡60天，测定复配酸枣果酒固形物含量为10.8％，酒精度为9.5°，透光率为78.6％。
实施例5
取酸枣仁(4kg)粉碎，过1号筛(10目)，精密称定，加入8倍量70％乙醇，浸泡1h，加热回流提取3次，每次1.5h。浓缩得到酸枣仁提取液(10mg/mL)。将酸枣仁提取液采用AB-8大孔树脂进行纯化，上样浓度为10mg/mL，吸附流速为1mL/min，洗脱溶剂分别为水、30％、50％、70％的乙醇，洗脱流速为4BV/h。收集70％乙醇部位洗脱液浓缩，冻干得酸枣仁提取物34.48g(得率为0.862％)。取上述酸枣仁提取物按照0.0525％比例加入实施例2最佳工艺制备的酸枣原酒中进行后发酵，后发酵温度为7℃，时间为36d。后发酵结束后添加1.0g/L硅藻土进行澄清，85℃灭菌30min，得到复配酸枣果酒基酒。将2.0％甘草、3％茯苓、2.5％川芎、3％知母添加到复配酸枣果酒基酒中浸泡60天，测定复配酸枣果酒固形物含量为11％，酒精度为9.8°，透光率为80.3％。
实施例6
取酸枣仁(4kg)粉碎，过1号筛(10目)，精密称定，加入10倍量60％乙醇，浸泡3h，加热回流提取2次，每次1.5h。浓缩得到酸枣仁提取液(10mg/mL)。将酸枣仁提取液采用D101大孔树脂进行纯化，上样浓度为10mg/mL，吸附流速为1mL/min，洗脱溶剂分别为水、30％、50％、70％的乙醇，洗脱流速为3.5BV/h。收集70％乙醇部位洗脱液浓缩，冻干得酸枣仁提取物32.6g(得率为0.815％)。取上述酸枣仁提取物按照0.105％比例加入实施例2最佳工艺制备的酸枣原酒中进行后发酵，后发酵温度为7℃，时间为36d。后发酵结束后添加0.8g/L硅藻土进行澄清，85℃灭菌30min，得到复配酸枣果酒基酒。将1.5％甘草、3.5％茯苓、3％川芎、3.5％知母添加到复配酸枣果酒基酒中浸泡60天，测定复配酸枣果酒固形物含量为11％，酒精度为9.6°，透光率为75.4％。
实施例7
取酸枣仁(4kg)粉碎，过1号筛(10目)，精密称定，加入12倍量80％乙醇，浸泡4h，加热回流提取3次，每次1h。浓缩得到酸枣仁提取液(10mg/mL)。将酸枣仁提取液采用XDA-7大孔树脂进行纯化，上样浓度为10mg/mL，吸附流速为1mL/min，洗脱溶剂分别为水、30％、50％、70％的乙醇，洗脱流速为4BV/h。收集50％乙醇部位洗脱液浓缩，冻干得酸枣仁提取物27.28g(得率为0.682％)。取上述酸枣仁提取物按照0.0525％比例加入实施例2最佳工艺制备的酸枣原酒中进行后发酵，后发酵温度为18℃，时间为22d。后发酵结束后添加1.4g/L硅藻土进行澄清，85℃灭菌30min，得到复配酸枣果酒基酒。将1.0％甘草、2.5％茯苓、2.5％川芎、3.5％知母添加到复配酸枣果酒基酒中浸泡60天，测定复配酸枣果酒固形物含量为10.9％，酒精度为9.2°，透光率为79.5％。
实施例8复配酸枣果酒调节肠道菌群作用
实验方法
(1)分别选择6名正常人(3名男性，3名女性，年龄：20～27岁)和6名心肝血虚失眠病人(3名男性，3名女性，年龄：40～80岁)的新鲜粪便，置于超净工作台中，使用10倍量预先灭菌的DPBS缓冲液进行涡旋混悬，两层纱布过滤，滤液以2000rpm离心10min，取上清液，制备肠道菌群的粪便混悬液。
(2)吸取粪便混悬液3mL，与30mL预先灭菌的GAM培养基于50mL三角瓶中混匀，37℃条件下厌氧培养9h，加入实施例3制备的复配酸枣果酒1mL培育24h，同时制备肠道菌群-GAM培养基及复配酸枣果酒-GAM培养基2种阴性对照样品。
(3)将上述制备好的样品进行微生物总DNA提取和16S rRNA V3-V4可变区域的扩增。在Illumina MiSeq测序平台进行高通量测序。
实验结果
(1)复配酸枣果酒对肠道菌群丰度及多样性的影响
失眠病人肠道菌群alpha多样性低，经复配酸枣果酒干预后，失眠病人肠道菌群的alpha多样性指数明显升高，表明复配酸枣果酒可调控失眠病人的肠道菌群，增加其群落多样性及均匀度。
(2)复配酸枣果酒对肠道菌群物种组成的影响
1.对菌群门水平的影响
与正常人肠道菌群相比，失眠病人的肠道菌群发生了显著变化，失眠病人肠道菌群更富含变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria)等。经复配酸枣果酒干预后，门水平的丰富度都有所回调，厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)显著增加，富含病原菌的变形菌门和放线菌门显著降低。
2.对菌群属水平的影响
正常人肠道菌群丰富度较高，主要有双歧杆菌属(Bifidobacterium)、罗氏菌属(Roseburia)、拟杆菌属(Bacteroides)等。病人肠道菌群主要有双歧杆菌属(Bifidobacterium)、埃希氏菌属(Escherichia)、梭菌科梭菌属(Clostridium)、绿脓杆菌属(Turicibacter)等。经复配酸枣果酒干预后肠道菌群属丰富度增加，主要的属有埃希氏菌属(Escherichia)、拟杆菌属(Bacteroides)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)等。经复配酸枣果酒干预后，大多数属均有回调现象，表明复配酸枣果酒对失眠病人的肠道菌群有调控作用。
实施例9复配酸枣果酒改善睡眠活性研究
(1)对自主活动的影响
36只雄性小鼠随机分为6组，即空白组；模型组；复配酸枣果酒组(0.0525％酸枣仁提取物，29天，实施例3制备)、复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，29天)组(实施例4制备)、复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，36天)组(实施例5制备)、复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，36天)组(实施例6制备)。每组各6只小鼠，灌胃给药，其中空白组给予生理盐水，复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，29天)组、复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，29天)组、复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，36天)组按剂量分别给予相应复配酸枣果酒。在给药第4天给药30min后(禁食不禁水12h)，将小鼠放入自主活动仪的中心区域，待小鼠适应2min后，记录5min内小鼠总路程及静止时间。
表3复配酸枣果酒对小鼠自主活动的影响(
Figure BDA0003165959820000101
n＝6)
Figure BDA0003165959820000102
注：与空白组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
与空白组相比，模型组小鼠总路程显著增加(P<0.05)，静止时间显著降低(P<0.01)，说明PCPA小鼠失眠模型成立。给予复配酸枣果酒后与模型组相比总路程显著降低，静止时间显著增加(P<0.05)，提示复配酸枣果酒能够减少小鼠自主活动，具有一定的镇静作用。
(2)延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间实验
36只雄性小鼠随机分为6组，每组6只，空白组给予生理盐水，复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，29天)组、复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，29天)组、复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，36天)组、复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，36天)组按剂量分别给予相应复配酸枣果酒。连续灌胃5d，于最后给药30min后(禁食不禁水12h)后腹腔注射阈下剂量的戊巴比妥钠(44mg/kg)。提起小鼠尾部，将小鼠腹部朝上置于黑色泡沫垫上，以30min内小鼠翻正反射消失达1min以上者为入睡指标，记录睡眠潜伏期和睡眠时间。
表4复配酸枣果酒对小鼠睡眠时间的影响(
Figure BDA0003165959820000103
n＝6)
Figure BDA0003165959820000104
注：与空白组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
对于睡眠潜伏期，模型组睡眠潜伏期与空白组相比显著增加(P<0.05)，给予复配酸枣果酒后与模型组相比无显著性差异。对于睡眠时间，与模型组相比，空白组、给药组小鼠睡眠持续时间增加，其中复配酸枣果酒(0.105％酸枣仁提取物，29天)和复配酸枣果酒(0.0525％酸枣仁提取物，36天)组睡眠持续时间显著增加(P<0.05)，提示复配酸枣果酒具有明显的催眠作用。
实施例10
取复配酸枣果酒500mL，添加2％白砂糖、0.2％蜂蜜、0.1％苹果酸、0.02％柠檬酸进行调配后，得到甜酸适口、风味较好的复配酸枣功能饮料。
实施例11
取复配酸枣果酒基酒500mL，添加8％蜂蜜、12％白砂糖、15％酸枣汁，调配得到口感较佳的复配酸枣鸡尾酒。
实施例12
取复配酸枣果酒500mL，添加8％蜂蜜、0.02％柠檬酸，调节酒精度为12°，得到风味较好的复配酸枣功能果酒。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种制备复配酸枣果酒的方法，包括如下步骤：
1)取酸枣仁，粉碎，过筛，加入体积分数为40％-80％乙醇浸泡，加热回流提取，过滤，收集滤液，浓缩得到酸枣仁提取液；
2)取步骤1)酸枣仁提取液上大孔树脂，洗脱，收集洗脱液，浓缩，冻干得酸枣仁提取物；
3)取酸枣果粉，加入蒸馏水和果胶酶进行酶解浸提，收集酸枣果肉酶解浸提液；
4)将步骤3)得到的酸枣果肉酶解浸提液调节糖度和pH值，灭酶后接种酵母菌进行酒精发酵，得到酸枣原酒；
5)将步骤4)得到的酸枣原酒添加步骤1)所得酸枣仁提取物，进行后发酵，后发酵结束后进行澄清、灭菌，得复配酸枣果酒基酒；
6)将甘草、茯苓、川芎和知母饮片浸泡在步骤5)得到的复配酸枣果酒基酒中，浸泡得到复配酸枣果酒。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述酸枣仁粉碎粒度为10-50目；所述体积分数为40％-80％的乙醇加入量为酸枣仁粉末质量的5-15倍；
所述浸泡时间为2-6h；
所述加热回流提取进行多次，具体可为1-3次，每次0.5-4h，
所述酸枣仁提取液的浓度为5-20mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述大孔树脂为AB-8、ADS-8、XDA-7和D101大孔树脂中的任一种；吸附流速为0.1-2mL/min；
所述洗脱为依次用水、30％、50％、70％的乙醇洗脱，收集50％-70％乙醇的洗脱液；洗脱流速为2-6BV/h。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述酸枣果粉的粉碎粒度为过40-80目筛；所述蒸馏水用量为酸枣果粉质量的3-11倍；所述果胶酶用量为酸枣果肉酶解液质量的0.06％-0.14％；所述酶解的温度为45-65℃；所述酶解时间为2-6h。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤4)中，所述糖度为18-26，调pH为2-5；所述灭酶条件为60℃-100℃加热灭酶5-15min；所述酵母菌为葡萄酒酵母AC、白酒酵母、甜酵母、葡萄酒酵母M31、葡萄酒专用酵母SY或葡萄酒专用酵母RW；所述酒精发酵过程中酵母接种量为酸枣果肉酶解液质量的0.3％-0.9％；所述酒精发酵的温度为25-35℃；所述发酵时间为3-7天。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤5)中，所述酸枣仁提取物的添加量为酸枣原酒质量的0.01-0.2％；所述后发酵温度为5-20℃；所述后发酵时间为22-36天；所述澄清方法为硅藻土澄清，其中硅藻土添加量为0.2-2g/L；所述灭菌方法为60-90℃灭菌20-40min。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：步骤6)中，所述甘草添加量为复配酸枣果酒基酒质量的0.5-3％；茯苓添加量为复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；川芎添加量为复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；知母添加量为复配酸枣果酒基酒质量的1-5％；所述浸泡时间为30-60天。
8.权利要求1-7任一项所述方法制得的复配酸枣果酒。
9.权利要求8所述的复配酸枣果酒在调节肠道菌群、改善睡眠中的应用或在制备具有调节肠道菌群、改善睡眠的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述应用中，调节肠道菌群指使得厚壁菌门和拟杆菌门升高，变形菌门和放线菌门降低；
所述改善睡眠指减少小鼠的自主活动，延长小鼠睡眠时间；
所述产品为功能饮料、基酒、酸枣酒精饮料、酸枣功能果酒、药酒。
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