CN113358765A - 一种植物中树莓苷含量的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种植物中树莓苷含量的检测方法，包括如下步骤：①样品提取：称取植物样品于水中，超声提取一次，分离后将上清液用水定容，摇匀，用滤膜过滤后得到测试用的样品；②测定：采用液质联用色谱测定步骤①样品中的树莓苷。本发明的检测方法可用于植物中树莓苷含量的快速检测，也可用于树莓苷的发现。该方法具有前处理方便，检测结果准确的特点。

Description

一种植物中树莓苷含量的检测方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种液质联用色谱检测植物中树莓苷含量的方法。
背景技术
树莓苷，又名对羟基苯基-2-丁酮-β-D-葡萄糖苷、覆盆子酮葡萄糖苷，是一种天然产物，很多植物中都含有树莓苷。Jakupovic J等[1]从白莲蒿中分离出树莓苷，Skouroumounis G K等[2]从葡萄中分离到树莓苷，高亮亮等[2]从唐古特大黄中分离到树莓苷，Park,SeonJu等[3]从波叶大黄根分离到树莓苷并发现该化合物具有一定的雌激素活性。倪霞[4]认为覆盆子酮的衍生物3-甲基覆盆子酮具有淡甜的浆果香气，甜美、轻扬而透发，留香尚可，可作为日化香精的修饰剂使用，且能与众多的香气和合，可望成为有实用价值的新香料，并以对羟基苯甲醛和丁酮为原料，经Claisen-Schmidt缩合和氢化反应得到3-甲基覆盆子酮。李安良等[5]认为这类化合物具有美白活性。陈沛金等[7]发明了化妆品中美白祛斑成分的检测方法和装置。
树莓苷是优良的一氧化氮捕捉剂，可以有效的消除皮肤中过多的一氧化氮自由基，从而降低络氨酸酶的活性，减少黑色素的形成。所以可以有效抵御电磁辐射电离空气形成的一氧化氮对皮肤的危害。在中医中药上有较大的潜在应用价值。
但是，目前还未有树莓苷的快速检测方法，特别是快速发现和检测植物样品中树莓苷含量的方法。
为解决上述问题提出本发明。
参考文献：
[1]Jakupovic J,Tan R,Bohlmann F,et al.Seco-and nor-sesquiterpenelactones with a new carbon skeleton from Artemisia santolinifolia.[J].Phytochemistry,1991,30(6):1941-1946.
[2]Skouroumounis G K,Winterhalter P.Glycosidically BoundNorisoprenoids from Vitisvinifera cv.Riesling Leaves[J].J.Agric.FoodChem.,1994,42(5):1068-1072.
[3]高亮亮,许旭东,南海江,等.唐古特大黄化学成分研究[J].中草药,2011,42(03):443-446.
[4]Park,SeonJu,Kim,et al.Estrogenic activity of constituents from therhizomes of Rheum undulatumLinne[J].Bio.Med.Chem.Let.,2018,28(4):552-557.
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[7]陈沛金等.化妆品中美白祛斑成分的检测方法和装置,CN104569187B[P].2016.
发明内容
本发明利用液质联用色谱仪提供一种植物中树莓苷含量的检测方法。本发明的方法优化了样品提取方法和检测条件，利用液质联用色谱，实现了植物中树莓苷含量的快速发现和测定。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。
本发明公开了一种植物中树莓苷的检测方法，包括如下步骤：
①样品提取：称取植物粉末1.0000～2.0000g，以20-40mL水为溶剂超声提取一次，离心后取适量上清液以0.22μm亲水性滤膜过滤即得测试样；
②测定：采用液质联用色谱测定步骤①样品中的树莓苷。
优选地，液质联用色谱的条件如下：
液相色谱条件为，色谱柱：C18柱，规格为：1.7μm，4.6mm×150mm；流速：0.25mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为乙腈，流动相B为水；洗脱条件：时间0-6.00min，20wt％流动相A+80wt％流动相B；6min，25wt％流动相A+75wt％流动相B。
质谱条件：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：100～130℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms。
优选地，树莓苷的质谱参数如下表所示：
母离子(m/z) 子离子(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能(V)
343.86 164.78 15 11
343.86 179.58 15 11
本发明的有益效果：
1、本发明采用纯净水超声提取植物中的树莓苷的方法，避免了现有技术的使用甲醇等有机溶剂提取的缺点，且一次就能提取完成，缩短了提取次数、提取时间。前处理方便，符合绿色环保要求。
2、本发明的树莓苷色谱峰分离度较好，检测较为灵敏，可用于痕量样品的检测。用于树莓苷含量较少的植物中的树莓苷的发现和检测。
3、本发明首次采用液质联用色谱方法快速测定植物中的树莓苷含量。使用本发明的方法可以用于测定唐古特大黄、白莲蒿等植物中树莓苷的含量，还可用用于树莓苷的发现，如在熟地黄、生地黄中发现了树莓苷并进行了含量测定
附图说明
图1为树莓苷的化学结构；
图2为树莓苷标准品水溶液的色谱图；
图3为实施例1样品水提取溶液的色谱图；
具体实施方式
本发明结合以下实施例作进一步描述，但并不限制本发明：
实施例1
对唐古特大黄中的树莓苷含量进行测定，步骤如下：
①样品提取：精确称取1.0000g唐古特大黄于具塞锥形瓶，加入20mL纯净水，超声提取30分钟；离心后，以0.22μm的尼龙滤膜过滤上清液即得测试样。
②测定：采用液质联用色谱法进行分析，仪器条件如下：
液相色谱条件为，色谱柱：C18柱，规格为：1.7μm，4.6mm×150mm；流速：0.25mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为乙腈，流动相B为水；
洗脱条件：时间0-6.00min，20wt％流动相A+80wt％流动相B；6min，25wt％流动相A+75wt％流动相B；
质谱条件：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：100～130℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms。
树莓苷的质谱参数如下表所示：
母离子(m/z) 子离子(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能(V)
343.86 164.78 15 11
343.86 179.58 15 11
标准溶液配制：精确称取5.0mg的树莓苷标准品于10mL的容量瓶，以水溶解定溶，即得0.50mg/mL的储备液；取2.0ml的储备液于10mL的容量瓶，以水定溶，即得一级标准溶液；根据一级标准溶液，依次制备0.5μg/mL～200μg/mL的标准液6个梯度；根据树莓苷的浓度和峰面积获得本次实验的标准曲线方程Y＝1106.08X+263198、相关系数R2＝0.9968，测得唐古特大黄中的含量是0.56mg/g。唐古特大黄中树莓苷的含量较高。图2为树莓苷标准品水溶液的色谱图。图3为唐古特大黄的样品水提取溶液的色谱图。
实施例2
对白莲蒿中的树莓苷含量进行测定，步骤如下：
①样品提取：精确称取0.1500g干燥的白莲蒿粉末于具塞锥形瓶中，加入20mL纯净水，超声提取30分钟；离心后以0.22μm的尼龙滤膜过滤上清液记得测试样；
②测定：采用液质联用色谱法进行分析，仪器条件同实施例1；树莓苷的质谱参数同实施例1。
标准溶液配制：精确称取5.0mg的树莓苷标准品于10mL的容量瓶，以水溶解定溶，即得0.50mg/mL的储备液。取2.0ml的储备液于10mL的容量瓶，以水定溶，即得一级标准溶液。根据一级标准溶液，依次制备0.5μg/mL～200μg/mL的标准液6个梯度。根据树莓苷的浓度和峰面积获得本次实验的标准曲线方程Y＝17621X+10058,相关系数R2＝0.9987，测得白莲蒿中的含量是3.54mg/g。白莲蒿中树莓苷的含量较高。
实施例3
对熟地黄中的树莓苷含量进行测定，步骤如下：
①样品提取：精确称取1.0000g熟地黄于具塞锥形瓶中，加入20mL纯净水，超声提取1次30分钟；离心后，以0.22μm的尼龙滤膜过滤上清液即得测试样。
②测定：采用液质联用色谱法进行分析，仪器条件同实施例1；树莓苷的质谱参数同实施例1；
标准溶液配制：精确称取5.0mg的树莓苷标准品于10mL的容量瓶，以水溶解定溶，即得0.50mg/mL的储备液。取2.0ml的储备液于10mL的容量瓶，以水定溶，即得一级标准溶液。根据一级标准溶液，依次制备0.5μg/mL～200μg/mL的标准液6个梯度。根据树莓苷的浓度和峰面积获得本次实验的标准曲线方程Y＝2178.03X+13947、相关系数R2＝0.9951；测得熟地黄中的含量是0.008mg/g。发现熟地黄中含有树莓苷，但含量较低。
实施例4
对生地黄中的树莓苷含量进行测定，步骤如下：
①样品提取：精确称取1.0000g生地黄于具塞锥形瓶中，加入20mL纯净水，超声提取30分钟；离心后，以0.22μm的尼龙滤膜过滤上清液即得测试样。
②测定：采用液质联用色谱法进行分析，仪器条件同实施例1，树莓苷的质谱参数同实施例1。
标准溶液配制：精确称取5.0mg的树莓苷标准品于10mL的容量瓶，以水溶解定溶，即得0.50mg/mL的储备液。取2.0ml的储备液于10mL的容量瓶，以水定溶，即得一级标准溶液。根据一级标准溶液，依次制备0.5μg/mL～200μg/mL的标准液6个梯度。根据树莓苷的浓度和峰面积获得本次实验的标准曲线方程Y＝3261.04X+10781，相关系数R2＝0.99617；测得生地黄中的含量是0.02mg/g。发现生地黄中也含有树莓苷，且生地黄中树莓苷的含量比熟地黄中树莓苷的含量要高。
以上显示和描述了本发明的主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的较优实例，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (3)

1.一种植物中树莓苷含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
①样品提取：称取植物粉末，以水为溶剂超声提取一次，离心后取适量上清液以0.22μm亲水性滤膜过滤即得测试样；
②测定：采用液质联用色谱测定步骤①样品中的树莓苷。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，液质联用色谱的条件如下：
液相色谱条件为，色谱柱：C18柱，规格为：1.7μm，4.6mm×150mm；流速：0.25mL/min；柱温：25～35℃；进样量：1～5μL；流动相A为乙腈，流动相B为水；洗脱条件：时间0-6.00min，20wt％流动相A+80wt％流动相B；6min，25wt％流动相A+75wt％流动相B。
质谱条件：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；喷雾电压：3200V；离子源温度：100～130℃；雾化气：550L/hr；气帘气：50L/hr；碰撞池电压：0.0035mbar；扫描时间：50ms。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，树莓苷的质谱参数如下表所示：
母离子(m/z) 子离子(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能(V) 343.86 164.78 15 11 343.86 179.58 15 11
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