CN113321591B - 井冈类酯化物及其制备和抑菌应用 - Google Patents

井冈类酯化物及其制备和抑菌应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了井冈类酯化物及其制备和抑菌应用。所述井冈类酯化物的结构如下所示，其中R8为RCO‑，R1‑R7为H；R为含有一个双键的脂链烃基C17H33、含有两个双键的脂链烃基CnH2n‑3、含有三个双键的脂链烃基CmH2m‑5、苯基、卤代苯基或HOOC(CH2)8‑，n＝5‑21，m＝15‑21。本发明提供了一种所述井冈类酯化物的制备方法，具体为：井冈羟胺A在叔丁醇中于90‑110℃回流4‑6h制得井冈羟胺A饱和溶液，然后加入固定化酶Novozym 435和酸RCOOH在反应容器中充分反应，分离纯化得到井冈类酯化物。本发明提供了所述的井冈类酯化物在水稻纹枯病菌抑制剂中的应用，其具有良好的抑菌活性。

Description

井冈类酯化物及其制备和抑菌应用
技术领域
本发明涉及一类井冈类酯化物及其制备和抑菌应用。
技术背景
井冈霉素(Validamycin)作为一种微生物源抗生素，对水稻纹枯病具有良好的防治效果，是最为常用和有效的农药之一，具有药效长久、毒性小、安全系数大、对人畜无害的优势，是我国使用面积最大、亩用成本最低的农药之一。它是一类由氨基环多醇和葡萄糖组成的弱碱性化合物，包括井冈霉素A、B、C、D、E、F、G、H 8个组分，组分之间的主要区别是羟基和葡萄糖基的个数及位置的不同。各组分中，井冈霉素A是最主要的活性成分，也是含量最高的一个。在酸性条件下，1分子井冈霉素A可水解为1分子井冈羟胺A和1分子葡萄糖。井冈羟胺A是一种多羟基的假二糖化合物(如下式)，易溶于水、甲醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等强极性溶剂，微溶于乙醇，不溶于乙酸乙酯、氯仿与丙酮等溶剂，表现出水溶性强、脂溶性较差的特性。
Figure BDA0002530622420000011
在结构上，井冈羟胺A与海藻糖结构极为相似，海藻糖是生物体内的储备糖，可经海藻糖酶作用分解为葡萄糖，供生命体能量所需，井冈羟胺A的存在，可作为高效的海藻糖酶抑制剂，有效抑制海藻糖的分解，阻断生命体能量供应。但是由于井冈羟胺A具有多羟基的结构特点，水溶性较好，很难透过机体有机层到生物体内发挥药效，所以对离体的海藻糖酶抑制效果好，对活体内的海藻糖酶抑制效果不佳。羟基修饰可以改善其透过机体能力，而酯的合成是醇与酸结合的一种反应，可降低醇的水溶性。酶催化具有作用条件温和，特异型好的优点，且固定化酶易回收、可多次循环使用。本发明通过该方法共合成16种井冈类酯化物，进一步对其抑菌活性研究，研究表明，筛出抑菌效果优于井冈霉素A和井冈羟胺A的化合物，有望开发为新型抑菌剂。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一系列新型的井冈类酯化物，其具有良好的抑菌和杀虫活性。
本发明的第二个目的是提供一种反应条件温和、可准确控制反应位点的制备所述井冈类酯化物的方法。
本发明的第三个目的是提供所述井冈类酯化物在制备抑菌剂中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一系列井冈类酯化物，其结构如下所示：
Figure BDA0002530622420000021
其中，R8为RCO-，R1-R7为H；
R为含有一个双键的脂链烃基C17H33、含有两个双键的脂链烃基CnH2n-3、含有三个双键的脂链烃基CmH2m-5、苯基、卤代苯基或HOOC(CH2)8-，n＝5-21，m＝15-21。
作为优选，含有一个双键的脂链烃基C17H33为CH3(CH2)7CH＝CH(CH2)7-，其中的双键为顺式结构。
作为优选，n＝5-17，更优选为n＝17，特别优选：
R为CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7-，其中的双键均为顺式结构。
作为优选，m＝17，特别优选：
R为CH3CH2CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7-
或CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)4-，其中的双键均为顺式结构。
作为优选，卤代苯基为氯代苯基或氟代苯基，特别是对氯苯基或对氟苯基。
本发明特别优选所述R为下列之一：
①CH3(CH2)7CH＝CH(CH2)7-，即油酸酯；
②CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7-，即亚油酸酯；
③CH3CH2CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7-，即α-亚麻酸酯；
④CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)4-，即γ-亚麻酸酯；
⑤苯基；
且①～④所示的基团中，双键均为顺式结构。
第二方面，本发明提供了一种所述井冈类酯化物的制备方法，具体如下：井冈羟胺A在叔丁醇中于90-110℃回流4-6h制得井冈羟胺A饱和溶液，然后加入固定化酶Novozym435 和酸RCOOH在反应容器中充分反应，分离纯化得到井冈类酯化物。
本发明中合成井冈羟胺A的酯化物的反应过程采用薄板层析(展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为碘蒸气与茚三酮溶液)进行监控并确定反应终点，如制备一酯(即 R8＝CnH2n+1CO-，R1-R7＝H的化合物)时，产生除一酯外的化合物时即停止反应。
本发明中，所述RCOOH与井冈羟胺A的投料摩尔比为2-4:1，最优选3:1。
本发明中，所述Novozym 435酶加量以井冈羟胺A的摩尔数计为100-150g/mol，优选 120g/mol。
本发明中，反应温度为40-60℃，优选为50℃。
本发明中，反应时间30-80h，延长反应时间有利于提高转化率，但同时也会增加二酯产物，优选为40-72h。
本发明特别优选：所述RCOOH与井冈羟胺A的投料摩尔比为3:1；所述Novozym 435酶加量以井冈羟胺A的摩尔数计为120g/mol，反应温度为50℃，反应时间为40-72h。
作为优选，所述反应体系中还加入分子筛，其作用是除去酯化反应过程中生成的水，促使酯化反应向正方向进行，提高转化率。分子筛的加入量为10～50g/L。
作为优选，为使反应更为彻底，在反应进行24h时补加井冈羟胺A粉末，补加的井冈羟胺A粉末与反应开始时加入的井冈羟胺A等量。
本发明在反应结束后，所得反应液中可能同时存在一酯和二酯，通过分离纯化可得到一酯纯品。作为优选，所述的分离纯化步骤为：反应结束，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，然后正丁醇萃取，浓缩有机相，最后经硅胶柱分离得到井冈类酯化物，其中洗脱液为正丙醇和乙酸的混合液。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
本发明特别优选所述井冈类酯化物的制备方法按照如下步骤实施：在井冈羟胺A饱和溶液中，加入酸RCOOH、Novozym 435、分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加井冈羟胺A粉末，补加的井冈羟胺A粉末与反应开始时加入的井冈羟胺A等量，反应进行40-72h；反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离得到井冈类酯化物，洗脱液为正丙醇和乙酸的混合溶液；
其中，所述RCOOH与反应开始时加入的井冈羟胺A的投料摩尔比为3:1；所述Novozym 435酶加量以井冈羟胺A的摩尔数计为120g/mol，分子筛的加入量为10～50g/L。
第三方面，本发明提供了所述井冈类酯化物在制备抑菌剂或杀虫剂中的应用。
作为优选，所选的抑菌剂为致病菌为水稻纹枯病菌抑制剂或油菜菌核病菌抑制剂。
作为优选，所述的杀虫剂为蚜虫杀虫剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供了一系列新型井冈类酯化物，改善了底物井冈羟胺A的脂溶性，丰富了井冈类化合物库，该类酯化物具有良好的抑菌和杀虫效果。
(2)本发明提供的井冈类酯化物的制备方法，可准确控制反应位点，并最终得到一酯产物。
附图说明
图1和图2是井冈类酯化物对离体菌核病菌的抑制情况(200μM)。
图3和图4是井冈类酯化物的杀虫活性测定(500μg/mL)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
本发明实施例使用的井冈羟胺A饱和溶液通过如下方法制备：
90℃油浴锅中，井冈羟胺A(5g)在叔丁醇(300mL)中回流搅拌5h制得井冈羟胺A 饱和溶液。
作为对比，90℃油浴锅中，井冈羟胺A(5g)在叔丁醇(300mL)中不回流条件下搅拌30h制得井冈羟胺A饱和溶液。
两种溶液的溶解度如表0所示：
表0
Figure BDA0002530622420000051
实施例1：乙酸井冈羟胺A酯的制备(化合物a，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(90.075mg)乙酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝2:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.75(s,1H),4.54(d,J＝94.3Hz,2H),4.15(d,J＝7.7Hz,2H), 3.97(s,1H),3.77–3.45(m,4H),3.40(d,J＝14.2Hz,3H),3.33(s,1H),3.27(d,J＝9.5Hz,2H), 3.16(s,1H),3.09(d,J＝19.5Hz,2H),2.99(s,1H),2.50(s,1H),2.00(d,J＝17.7Hz,4H),1.40(s, 1H),1.12(s,1H).
HRMS(ESI):378.1741[M+H]+,400.1557[M+Na]+.
实施例2：丙酸井冈羟胺A酯的制备(化合物b，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(111mg)丙酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝4:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.75(s,1H),4.65(s,1H),4.46(s,1H),4.18(d,J＝7.7Hz,2H), 3.97(s,1H),3.72(d,J＝11.0Hz,4H),3.48(s,1H),3.38(s,2H),3.33(s,1H),3.26(d,J＝14.4Hz, 2H),3.16(s,1H),3.08(d,J＝18.9Hz,2H),2.99(s,1H),2.50(s,1H),2.28(s,2H),1.78(s,1H), 1.23(s,1H),1.11(s,1H),1.02(s,3H).
HRMS(ESI):392.1921[M+H]+,414.1739[M+Na]+.
实施例3：丁酸井冈羟胺A酯的制备(化合物c，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(132mg)丁酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝4:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ4.73(d,J＝13.9Hz,2H),4.56(s,1H),4.41(dd,J＝9.5,5.8Hz, 1H),4.31(s,1H),3.77(t,J＝8.4Hz,1H),3.53(dd,J＝10.4,3.8Hz,1H),3.49–3.41(m,1H),3.41 –3.23(m,6H),3.09(t,J＝8.7Hz,1H),2.13(dt,J＝11.2,6.9Hz,1H),1.89(s,5H),1.87–1.80(m, 1H),1.53(ddd,J＝14.9,11.7,5.8Hz,1H).
ESI-MS(406.2067[M+H]+,428.1890[M+Na]+.
实施例4：戊酸井冈羟胺A酯的制备(化合物d，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(153mg)戊酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝5:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.76(s,1H),5.44(s,1H),4.65(s,5H),4.17(dd,J＝10.6,2.8 Hz,1H),4.09–3.86(m,3H),3.70(d,J＝4.7Hz,1H),2.28(t,J＝7.3Hz,2H),2.03–1.93(m,1H), 1.77(d,J＝14.1Hz,1H),1.51(dt,J＝15.0,7.4Hz,2H),1.38–1.03(m,4H),0.86(t,J＝7.3Hz, 3H).
ESI-MS(420.2227[M+H]+,442.2040[M+Na]+.
实施例5：己酸井冈羟胺A酯的制备(化合物e，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(174mg)己酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝5:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.81(s,1H),4.68(d,J＝13.1Hz,1H),4.35(d,J＝13.2Hz,1H),3.96(d,J＝17.8Hz,1H),3.69(dd,J＝11.3,5.7Hz,2H),3.49(d,J＝3.8Hz,1H),3.46–3.17 (m,6H),2.31(dt,J＝22.2,7.3Hz,1H),2.15(t,J＝7.4Hz,1H),1.74(dd,J＝14.1,3.2Hz,1H), 1.56–1.36(m,2H),1.36–1.03(m,6H),0.89(t,J＝6.9Hz,3H).
ESI-MS(434.2381[M+H]+,456.2189[M+Na]+.
实施例6：庚酸井冈羟胺A酯的制备(化合物f，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(195mg)庚酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝6:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.79(s,1H),4.62(d,J＝13.3Hz,1H),4.33(d,J＝13.4Hz,1H),3.94(d,J＝17.4Hz,1H),3.71(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.45(d,J＝3.8Hz,1H),3.43–3.17 (m,6H),3.11–3.01(m,1H),2.31(dt,J＝22.2,7.3Hz,1H),2.18(t,J＝7.4Hz,1H),1.71(dd,J＝ 14.1,3.2Hz,1H),1.56–1.38(m,2H),1.36–1.03(m,8H),0.91(t,J＝7.0Hz,3H).
ESI-MS(448.2532[M+H]+,470.2341[M+Na]+.
实施例7：辛酸井冈羟胺A酯的制备(化合物g，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(216mg)辛酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝6:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.81(dd,J＝37.9,3.1Hz,1H),4.65(d,J＝13.2Hz,1H),4.31 (d,J＝13.4Hz,1H),3.94(d,J＝17.5Hz,1H),3.71(dd,J＝11.3,5.9Hz,1H),3.45(d,J＝3.7Hz, 1H),3.40–3.17(m,6H),3.11–3.01(m,1H),2.30(dt,J＝22.3,7.3Hz,1H),2.18(t,J＝7.1Hz, 1H),1.74(dd,J＝14.4,3.2Hz,1H),1.56–1.40(m,2H),1.36–1.01(m,10H),0.91(t,J＝6.8Hz, 3H).
ESI-MS(462.2686[M+H]+,484.2492[M+Na]+.
实施例8：壬酸井冈羟胺A酯的制备(化合物h，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(237mg)壬酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝7:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.79(dd,J＝37.3,3.0Hz,1H),4.66(d,J＝13.1Hz,1H),4.45 (d,J＝13.2Hz,1H),3.97(d,J＝17.8Hz,1H),3.71(dd,J＝11.3,5.7Hz,1H),3.48(d,J＝3.8Hz, 1H),3.45–3.18(m,6H),3.13–3.04(m,1H),2.29(dt,J＝22.2,7.3Hz,1H),2.17(t,J＝7.4Hz, 1H),1.76(dd,J＝14.1,3.2Hz,1H),1.58–1.40(m,2H),1.24(s,10H),1.16–1.00(m,2H),0.86(t, J＝6.9Hz,3H).
ESI-MS(476.2856[M+H]+,498.2616[M+Na]+.
实施例9：癸酸井冈羟胺A酯的制备(化合物i，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(258mg)癸酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝7:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.86(dd,J＝37.6,3.5Hz,1H),4.62(d,J＝13.0Hz,1H),4.48 (d,J＝13.2Hz,1H),3.92(d,J＝18.1Hz,1H),3.65(dd,J＝11.0,5.7Hz,1H),3.43(d,J＝3.6Hz, 1H),3.40–3.13(m,6H),3.11–3.04(m,1H),2.29(dt,J＝22.2,7.1Hz,1H),2.17(t,J＝7.7Hz, 1H),1.81(dd,J＝14.5,3.6Hz,1H),1.58–1.42(m,2H),1.24(s,12H),1.16–0.98(m,2H),0.86(t, J＝6.5Hz,3H).
ESI-MS(490.3008[M+H]+,498.2616[M+Na]+.
实施例10：十一酸井冈羟胺A酯的制备(化合物j，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(279mg)十一酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝8:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.92(dd,J＝37.8,3.7Hz,1H),4.71(d,J＝13.5Hz,1H),4.48 (d,J＝13.7Hz,1H),3.98(d,J＝17.2Hz,1H),3.71(dd,J＝11.8,5.4Hz,1H),3.46(d,J＝3.4Hz, 1H),3.42–3.18(m,6H),3.13–3.06(m,1H),2.30(dt,J＝22.2,7.2Hz,1H),2.21(t,J＝7.4Hz, 1H),1.85(dd,J＝14.0,3.2Hz,1H),1.56–1.42(m,2H),1.20(s,14H),1.16–0.98(m,2H),0.86(t, J＝6.3Hz,3H).
ESI-MS(504.3161[M+H]+,498.2616[M+Na]+.
实施例11：十二酸井冈羟胺A酯的制备(化合物k，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(300mg)十二酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝9:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.95(dd,J＝36.5,4.1Hz,1H),4.77(d,J＝12.8Hz,1H),4.50 (d,J＝12.8Hz,1H),3.41(d,J＝17.8Hz,1H),3.768(dd,J＝11.3,5.7Hz,1H),3.43(d,J＝3.8 Hz,1H),3.40–3.18(m,6H),3.13–3.06(m,1H),2.32(dt,J＝22.2,7.3Hz,1H),2.25(t,J＝7.4Hz, 1H),1.86(dd,J＝14.1,3.2Hz,1H),1.56–1.42(m,2H),1.23(s,12H),1.16–0.92(m,4H),0.81(t, J＝6.8Hz,3H).
ESI-MS(518.3310[M+H]+,498.2616[M+Na]+.
实施例12：十四酸井冈羟胺A酯的制备(化合物l，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(343mg)十四酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝10:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.93(dd,J＝37.3,3.0Hz,1H),4.70(d,J＝13.1Hz,1H),4.50 (d,J＝13.2Hz,1H),3.94(d,J＝17.4Hz,1H),3.72(dd,J＝11.3,5.7Hz,1H),3.48(d,J＝4.2Hz, 1H),3.44–3.17(m,6H),3.13–3.02(m,1H),2.31(dt,J＝22.2,7.3Hz,1H),2.24(t,J＝7.4Hz, 1H),1.87(dd,J＝14.1,3.2Hz,1H),1.65–1.40(m,2H),1.18(s,12H),1.15–0.81(m,6H),0.74(t, J＝6.4Hz,3H).
ESI-MS(546.3624[M+H]+,498.2616[M+Na]+.
实施例13：十五烷酸井冈羟胺A酯的制备(化合物m，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(363.6mg)十五烷酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝10:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.76(s,1H),4.65(s,1H),4.58(s,1H),4.46(d,J＝13.3Hz, 2H),4.29–3.88(m,5H),3.71(s,1H),3.38(d,J＝50.7Hz,3H),3.27(d,J＝13.5Hz,2H),3.16(s, 1H),3.08(d,J＝13.1Hz,2H),2.99(s,1H),2.51(s,1H),2.27(s,2H),1.78(s,1H),1.51(d,J＝6.7 Hz,3H),1.38–1.19(m,23H),0.86(s,3H).
HRMS(ESI):560.3776[M+H]+.
实施例14：软脂酸井冈羟胺A酯的制备(化合物n，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(384.63mg)软脂酸、60 mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝12:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.76(s,1H),4.65(s,1H),4.44(s,1H),4.16(d,J＝10.5Hz, 2H),3.98(s,1H),3.71(d,J＝6.1Hz,4H),3.52–3.35(m,4H),3.26(d,J＝9.4Hz,2H),3.05(dd,J ＝28.6,24.9Hz,4H),2.51(s,1H),2.27(s,2H),1.99(s,1H),1.60(d,J＝86.5Hz,3H),1.32–1.19 (m,25H),0.86(s,3H).
HRMS(ESI):574.3933[M+H]+.
实施例15：硬脂酸井冈羟胺A酯的制备(化合物o，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(426.72mg)硬脂酸、60 mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝15:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.76(s,1H),4.65(s,1H),4.47(s,1H),4.16(d,J＝10.1Hz, 2H),3.98(s,1H),3.71(d,J＝5.7Hz,4H),3.62–3.22(m,6H),3.17(s,1H),3.11–2.92(m,3H), 2.51(s,1H),2.27(s,2H),1.99(s,1H),1.61(d,J＝93.3Hz,3H),1.28(d,J＝46.4Hz,29H),0.86(s, 3H).
HRMS(ESI):602.4242[M+H]+,624.4066[M+Na]+.
实施例16：十九酸井冈羟胺A酯的制备(化合物p，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(447.75mg)十九酸、60 mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝15:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.50(s,1H),9.10(dd,J＝201.8,50.8Hz,5H),8.73(d,J＝ 15.3Hz,4H),8.66(s,1H),8.46(s,2H),8.41(s,1H),8.10(d,J＝16.7Hz,2H),7.99(s,1H),7.85 (d,J＝37.9Hz,2H),7.71(s,1H),7.25(s,1H),7.00(s,2H),6.72(s,1H),6.34(d,J＝90.9Hz,3H), 6.03(d,J＝53.2Hz,31H),5.59(s,3H).
HRMS(ESI):616.4438[M+H]+.
实施例17：二十二酸井冈羟胺A酯的制备(化合物q，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(510.87mg)二十二酸、60mg Novozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝16:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.75(s,1H),4.64(s,1H),4.43(s,1H),4.32–3.86(m,3H),3.66(d,J＝51.8Hz,4H),3.48(d,J＝10.0Hz,3H),3.42–3.31(m,3H),3.24(s,1H),3.16–2.55 (m,3H),2.50(s,1H),2.26(s,2H),1.98(s,1H),1.77(s,2H),1.51(s,1H),1.49–0.91(m,37H), 0.83(s,3H).
HRMS(ESI):658.4898[M+H]+,680.4724[M+Na]+.
实施例18：油酸井冈羟胺A酯的制备(化合物r，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(423.705mg)油酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A 粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝15:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ13.21(s,1H),10.50(s,1H),10.07(s,1H),9.40(d,J＝13.0Hz, 2H),9.21(s,2H),8.89(s,1H),8.70(d,J＝24.6Hz,4H),8.31(d,J＝151.5Hz,3H),8.02(s,1H), 7.90(s,1H),7.82(d,J＝12.1Hz,2H),7.74(t,J＝12.3Hz,3H),7.48(s,1H),7.25(s,2H),7.01(s, 4H),6.72(d,J＝5.4Hz,1H),6.57–6.39(m,4H),6.25(s,6H),5.99(s,14H),5.60(s,3H).
HRMS(ESI):600.4121[M+H]+.
实施例19：亚油酸井冈羟胺A酯的制备(化合物s，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(420.66mg)亚油酸、60 mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝18:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.50(s,1H),10.06(s,1H),9.39(s,1H),9.24–8.83(m,4H), 8.73(d,J＝28.2Hz,3H),8.47(s,1H),8.22(s,3H),8.08(t,J＝6.5Hz,4H),8.01(d,J＝10.3Hz, 2H),7.89(s,1H),7.81(s,1H),7.74(d,J＝8.9Hz,2H),7.47(s,2H),7.25(s,1H),7.01(s,2H), 6.73(s,4H),6.15(s,1H),6.02(d,J＝21.3Hz,3H),5.59(dd,J＝11.2,6.9Hz,15H),5.45(s,3H).
HRMS(ESI):598.3945[M+H]+,620.3764[M+Na]+.
实施例20：亚麻酸井冈羟胺A酯的制备(化合物t，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(417.645mg)α-亚麻酸、60mg Novozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝18:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),10.06(s,1H),9.39(s,1H),9.27–8.50(m,8H), 8.47(s,1H),8.23(d,J＝9.8Hz,4H),8.10(d,J＝21.5Hz,3H),8.02(s,1H),7.94(d,J＝51.9Hz, 3H),7.86–7.68(m,2H),7.62(s,1H),7.51(s,4H),7.25(s,1H),7.01(s,2H),6.76(s,2H),6.48(s, 3H),6.21(d,J＝44.2Hz,3H),6.08–5.76(m,9H),5.67(s,3H).
HRMS(ESI):596.3790[M+H]+,618.3608[M+Na]+.
实施例21：苯甲酸井冈羟胺A酯的制备(化合物u，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(183.18mg)苯甲酸、60 mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行72h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝8:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ7.97(s,2H),7.64(d,J＝7.2Hz,2H),7.52(s,2H),5.97(s,1H), 5.76(s,1H),4.92(d,J＝12.8Hz,2H),4.73(s,1H),4.50–4.24(m,5H),4.08(s,2H),3.94(s,1H), 3.72(d,J＝5.3Hz,2H),3.33(t,J＝6.6Hz,3H),3.14(s,1H),2.50(s,1H),1.76(s,1H),1.40(s, 1H),0.82(s,1H).
HRMS(ESI):440.1908[M+H]+,462.1724[M+Na]+.
实施例22：对氯苯甲酸井冈羟胺A酯的制备(化合物v，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(234.855mg)对氯苯甲酸、60mg Novozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol 井冈羟胺A粉末，反应进行72h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝10:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ7.96(s,2H),7.61(d,J＝6.3Hz,3H),5.96(s,1H),5.75(s,1H), 5.32(d,J＝13.5Hz,2H),4.91(s,1H),4.34(s,1H),3.90(d,J＝61.4Hz,4H),3.50(d,J＝92.9Hz, 3H),3.20(d,J＝30.0Hz,2H),2.98(dd,J＝101.0,72.3Hz,4H),2.50(s,1H),1.67(s,1H),1.22(s, 1H),1.03(s,1H).
HRMS(ESI):474.1513[M+H]+,496.1334[M+Na]+.
实施例23：对氟苯甲酸井冈羟胺A酯的制备(化合物w，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(210.165mg)对氟苯甲酸、60mg Novozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol 井冈羟胺A粉末，反应进行72h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝8:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ8.03(s,2H),7.87(s,1H),7.35(s,2H),5.76(s,1H),5.22(s, 1H),4.83(d,2H),4.72(s,1H),4.14(d,J＝180.7Hz,4H),3.85–3.29(m,4H),3.33–2.85(m,6H), 2.50(s,1H),2.08(s,1H),1.64(s,1H),1.23(s,1H).
HRMS(ESI):458.1815[M+H]+.
实施例24：山梨酸井冈羟胺A酯的制备(化合物x，一酯)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(168.195mg)山梨酸、 60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝10:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.95(d,J＝25.1Hz,2H),11.02(s,1H),10.60(d,J＝15.4Hz, 2H),10.50(s,1H),10.07(d,J＝4.7Hz,2H),9.47(d,J＝12.2Hz,2H),9.27(d,J＝12.9Hz,4H), 8.94(d,J＝8.1Hz,3H),8.83(s,1H),8.59(d,J＝124.9Hz,2H),8.07(dd,J＝113.6,72.1Hz,4H), 7.25(s,1H),6.83(s,1H),6.53(d,J＝22.7Hz,3H),5.80(s,1H).
HRMS(ESI):430.2078[M+H]+,452.1893[M+Na]+.
实施例25：皮脂酸井冈羟胺A酯的制备(化合物y)：
在21mL(0.5mmol井冈羟胺A)饱和溶液中，加入1.5mmol(303.375mg)皮脂酸、60mgNovozym 435、0.6g 4A°分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24h投加0.5mmol井冈羟胺A粉末，反应进行40h。反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离，洗脱液为正丙醇：乙酸＝15:1。TLC检测洗脱液，展开剂为正丙醇：水：乙酸＝4:1:1，显色剂为茚三酮溶液与碘蒸气。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ5.75(s,1H),5.23(s,1H),4.65(d,J＝12.5Hz,2H),4.44(d,J ＝12.5Hz,2H),4.14(d,J＝8.9Hz,2H),4.01–3.65(m,6H),3.56(s,1H),3.36(d,J＝20.7Hz, 2H),3.12(dd,J＝89.9,47.4Hz,4H),2.50(s,1H),2.25(s,2H),1.85(s,2H),1.50(s,1H),1.31– 1.01(m,5H),0.93–0.67(m,9H).
HRMS(ESI):520.2740[M+H]+,542.2543[M+Na]+.
实施例26：抗水稻纹枯病菌活性的测定
采用的测定方法是菌丝生长速率法。具体操作：用直径为6.0mm的打孔器在土豆培养基的边缘取活化好的R.solani菌碟，将菌碟菌丝面朝下，分别接种至含药琼脂培养基平板和对照组培养基平板的正中央，于25℃的恒温培养箱中培养，待对照菌落直径在60mm和80mm 之间时(一般需要36h)利用游标卡尺测量，由数据的平均值计算菌落直径，最终算得抑制率。菌丝生长抑制率计算公式如下(长度单位：mm)如下：
Figure BDA0002530622420000161
式中，R1：化合物处理菌落直径
R2：空白对照菌落直径
研究过程中，先以多个待测试剂稀释到2000μM的浓度得到的抑制率做参照，若抑制率小于对照品井冈霉素A和井冈羟胺A的抑制率则舍弃，相反，若抑制率大于井冈霉素A和井冈羟胺A的抑制率，则以1000μM、500μM、250μM、125μM、62.5μM等浓度梯度做抑菌活性测定。
药物毒力回归方程和有效中浓度EC50与EC5的计算：以菌丝生长抑制率表示药物对R.solani的毒力。对菌丝生长的抑制率换算成抑制几率值(y)，药剂浓度换算成浓度对数(x)，按最小二乘法求出药物对R.solani抑制几率值的回归方程决定系数R，根据毒力回归方程分别计算药物对菌丝生长的抑制中浓度EC5和EC50值。
表1不同药物对R.solani的毒力方程
Figure BDA0002530622420000171
从上表可见，该类化合物具有很好的生物活性，其中，部分化合物对水稻纹枯病菌的抑制作用超过了井冈霉素A，如化合物m和s的EC50均在井冈霉素A的EC50之下。
实施例27抗油菜菌核病菌活性初筛实验
分别称量制备的新型井冈羟胺A酯化物与井冈霉素A，水不溶化合物用DMSO溶解，再分别加入0.1％吐温-80的无菌水溶液中，配制成2000μM的含药母溶液8mL。
在直径为9.0cm的已灭菌培养皿中，分别加入1mL药液和9mL加热溶解的PDA培养基，用“8”字混匀法充分混匀，得到了在原药液浓度基础上稀释10倍的药物浓度。每个梯度设3个平行，以井冈霉素A和井冈羟胺A为对照，以加入1.0mL 0.1％吐温-80的无菌水和9.0mL已灭菌融化的琼脂培养基为空白。整个过程均要在无菌条件下操作，以免染菌，影响实验结果。
研究井冈霉素类衍生物对S.sclerotiorum的抑制效果，所采用的测定方法是菌丝生长速率法。具体操作：用直径为6.0mm的打孔器在PDA培养基的边缘取活化好的S.sclerotiorum菌碟，将菌碟菌丝面朝下，分别接种至含药PDA培养基平板和对照组培养基平板的正中央，于25℃的恒温培养箱中培养，待空白菌落直径在60mm和80mm之间时(一般需要36h)利用游标卡尺测量，由数据的平均值计算菌落直径，最终算得抑制率。
菌丝生长抑制率计算公式如下(长度单位：mm)如下：
Figure BDA0002530622420000181
式中，R1：化合物处理菌落直径
R2：空白对照菌落直径
结果如图1、图2所示，由图1、图2可知，当浓度为200μM时，化合物m、q、r、s、 t、u对菌核病菌的抑制效果高于井冈霉素A和井冈羟胺A。
实施例28:抗油菜菌核病菌活性复筛实验
分别称量制备的新型井冈羟胺A酯化物m、q、r、s、t、u与井冈霉素A，水不溶化合物用 DMSO溶解，再分别加入0.1％吐温-80的无菌水溶液中，配制成2000μM的含药母溶液8mL，然后取4mL该溶液，通过0.1％吐温-80的无菌水将溶液稀释成1000μM的含药溶液，依次类推，采用二倍稀释法分别配制成500，250，125，62.5μM的含药溶液。
在直径为9.0cm的已灭菌培养皿中，分别加入1mL药液和9mL加热溶解的PDA培养基，用“8”字混匀法充分混匀，得到了在原药液浓度基础上稀释10倍的药物浓度(该过程可以先在培养皿中加入药物，再统一加入加热溶解的药物)，即200，100，50，25，12.5，6.25μM的含药PDA培养基平板。每个梯度设3个平行，以加入1.0mL 0.1％吐温-80的无菌水和9.0mL已灭菌融化的琼脂培养基为空白。整个过程均要在无菌条件下操作，以免染菌，影响实验结果。
研究井冈霉素类衍生物对S.sclerotiorum的抑制效果，所采用的测定方法是菌丝生长速率法。具体操作：用直径为6.0mm的打孔器在PDA培养基的边缘取活化好的Ssclerotiorum菌碟，将菌碟菌丝面朝下，分别接种至含药PDA培养基平板和对照组培养基平板的正中央，于25℃的恒温培养箱中培养，待空白菌落直径在60mm和80mm之间时(一般需要36h)利用游标卡尺测量，由数据的平均值计算菌落直径，最终算得抑制率。
菌丝生长抑制率计算公式如下(长度单位：mm)如下：
Figure BDA0002530622420000191
式中，R1：化合物处理菌落直径
R2：空白对照菌落直径
药物毒力回归方程和有效中浓度EC50与EC5的计算：以菌丝生长抑制率表示药物对S. sclerotiorum的毒力。在实验数据处理过程中，将菌丝生长的抑制率换算成抑制几率值(y)，药剂浓度换算成浓度对数(x)，按最小二乘法求出药物对S.sclerotiorum抑制几率值的回归方程相关系数R，根据毒力回归方程分别计算药物对菌丝生长的抑制中浓度EC5和EC50值。
表2井冈类酯化物对离体S.sclerotiorum的抑制情况(单位：μM)
Figure BDA0002530622420000192
Figure BDA0002530622420000201
表3不同药物对S.sclerotiorum的毒力方程
Figure BDA0002530622420000202
多菌灵(Carbendazim)是一种对菌核病菌有很好抑制作用的杀菌剂，在浓度为6.25μM 时抑制率达81％，而新合成的酯化物中，r是抑制效果相对比较好的，在浓度为200μM时，对菌核病菌的抑制率为54％。其IC50值为184.8347μM，IC5值为1.7526μM。
实施例29：井冈类酯化物对蚜虫杀虫效果的初筛实验
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至500μg/mL，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
根据公式
Figure BDA0002530622420000203
Figure BDA0002530622420000211
式中，N1：死虫数
N2：供试虫数
Y1：处理死亡率
Y2：对照死亡率
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
结果如图3和图4所示。
实施例30：
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药化合物j用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至试验最大浓度，然后采用二倍稀释法稀释共六个浓度，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
实验中以啶虫脒和吡蚜酮为对照品。
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
表4啶虫脒的杀虫活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000212
表5吡蚜酮的杀虫活性测定(48h)
Figure BDA0002530622420000221
表6化合物j的杀虫活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000222
实施例31：
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药化合物m用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至试验最大浓度，然后采用二倍稀释法稀释共六个浓度，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
实验中以啶虫脒和吡蚜酮为对照品。
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
表7化合物m的杀虫活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000223
Figure BDA0002530622420000231
实施例32：
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药化合物r用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至试验最大浓度，然后采用二倍稀释法稀释共六个浓度，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
实验中以啶虫脒和吡蚜酮为对照品。
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
表8化合物r的杀虫活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000232
实施例33：
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药化合物s用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至试验最大浓度，然后采用二倍稀释法稀释共六个浓度，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
实验中以啶虫脒和吡蚜酮为对照品。
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
表9化合物s的生物活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000241
实施例34：
(1)植物准备：剪下豌豆苗上相同叶位、长势一致的带有蚜虫的叶片，放在有湿纱布的培养皿中，保湿备用；
(2)配药：将原药化合物t用水/正丙醇/DMSO溶解，用水稀释至试验最大浓度，然后采用二倍稀释法稀释共六个浓度，每个药物做三个平行；
(3)浸渍：将叶片在配制好的药液中浸润10s，于23℃环境中晾干；
(4)培养：于23℃培养箱中培养，24h、48h观察结果并记录。
实验中以啶虫脒和吡蚜酮为对照品。
计算各药物的死亡率、校正死亡率。
表10化合物t的杀虫活性测定(24h)
Figure BDA0002530622420000242
实施例35：
药物毒力回归方程和LD50、LD5值的计算：将校正死亡率值换算成死亡几率值(y)，将试验浓度值换算为浓度对数值(x)，按最小二乘法求出药物对蚜虫死亡几率值的回归方程决定系数R，根据毒力回归方程分别计算药物对蚜虫死亡中的浓度LD5和LD50值。
表11不同药物对Aphides的毒力方程
Figure BDA0002530622420000251
毒力方程显示，r的LD50值(0.0315mM)比吡蚜酮的LD50值(0.0526mM)要低1.6倍，而且致死效果快，r是处理后24h得到的数据，吡蚜酮是处理后48h的数据结果。

Claims (6)

1.井冈类酯化物，其结构如下所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
其中，R8为RCO-，R1-R7为H；
所述R为下列之一：
① CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7-；
② CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-；
③ CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7-；
且①~③所示的基团中，双键均为顺式结构。
2.一种如权利要求1所述的井冈类酯化物的制备方法，具体如下：井冈羟胺A在叔丁醇中于90-110℃回流4-6 h制得井冈羟胺A饱和溶液，然后加入固定化酶Novozym 435和酸RCOOH在反应容器中于40-60℃充分反应30-80h，分离纯化得到井冈类酯化物；反应初始加入的RCOOH与井冈羟胺A的投料摩尔比为2-4:1，所述Novozym 435酶加量以井冈羟胺A的摩尔数计为100-150g/mol。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述反应体系中还加入分子筛，分子筛的加入量为10~50 g/L。
4.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：在反应进行24h时补加井冈羟胺A粉末，补加的井冈羟胺A粉末与反应开始时加入的井冈羟胺A等量。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述井冈类酯化物的制备方法按照如下步骤实施：在井冈羟胺A饱和溶液中，加入酸RCOOH、Novozym 435、分子筛，在50℃恒温振荡器中反应，24 h投加井冈羟胺A粉末，补加的井冈羟胺A粉末与反应开始时加入的井冈羟胺A等量，反应进行40-72h；反应结束后，将反应液离心除去固定化酶及分子筛，蒸发浓缩，正丁醇萃取，浓缩有机相，硅胶柱分离得到井冈类酯化物，洗脱液为正丙醇和乙酸的混合溶液；
其中，所述RCOOH与反应开始时加入的井冈羟胺A的投料摩尔比为3:1；所述Novozym435酶加量以井冈羟胺A的摩尔数计为120g/mol，分子筛的加入量为10~50 g/L。
6.如权利要求1所述的井冈类酯化物在制备水稻纹枯病菌抑制剂中的应用。
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