CN113295871B - 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒 - Google Patents

一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN113295871B
CN113295871B CN202110749985.8A CN202110749985A CN113295871B CN 113295871 B CN113295871 B CN 113295871B CN 202110749985 A CN202110749985 A CN 202110749985A CN 113295871 B CN113295871 B CN 113295871B
Authority
CN
China
Prior art keywords
kit
antibody
combined
monoclonal antibody
fast red
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110749985.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113295871A (zh
Inventor
陈鹏
李三华
牛银银
杨潇燕
米贯勋
崔红米
刘畅
齐华
刘文弟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Original Assignee
Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Celnovtebio Biotechnology Inc filed Critical Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Priority to CN202110749985.8A priority Critical patent/CN113295871B/zh
Publication of CN113295871A publication Critical patent/CN113295871A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113295871B publication Critical patent/CN113295871B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4742—Keratin; Cytokeratin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒，包含过氧化物酶封闭剂、组合一抗、组合二抗、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、快红显色活化剂、快红缓冲液以及苏木素复染液，其中，所述组合一抗包括鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人P63单克隆抗体和兔抗人MHC单克隆抗体；所述组合二抗包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物和AP标记的抗兔二抗聚合物。本发明的试剂盒采用鸡尾酒组合一抗，能够在同一张组织切片上同时检测CK7、P63、MHC三种抗原靶标的表达情况，减少样本使用量，避免不同张切片带来的差异，解决微小组织样本染色重复性差的问题，且能直观鲜明的辨别正常组织和癌组织，为病理医师提供更全面可靠的诊断依据，提高诊断精准度。

Description

一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒。
背景技术
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，据2018年统计数据显示，全世界女性的乳腺癌发病率和死亡率分别为4.63‰和1.3‰，且呈现逐年上升的趋势。中国由于人口基数的原因，我国女性乳腺癌的发病人数和死亡人数均在世界首位。因此乳腺癌的早诊早治以及预防成为我国癌症控制的重点方向。
很多研究表明，乳腺癌的发生与发展是一个多步骤过程，先由正常的上皮增生到不典型性增生再到原位癌继而发展成浸润性癌最终变成转移癌。浸润性乳腺癌的一个十分明显的特征是肌上皮细胞层的缺失，当肌上皮细胞层这一保护屏障缺失后，癌细胞就很容易侵入间质及转移，因此肌上皮细胞存在与否常常是区别乳腺良恶性病变的重要依据之一。但是在临床上，从形态学上区分乳腺恶性病变中的原位癌与早期浸润癌，尤其是微浸润癌，始终是临床病理诊断的难题，对于乳腺组织较小的穿刺标本更是困难。
目前，对乳腺癌的病理检测主要依赖于免疫组织化学法(immunohistochemistry，IHC)，利用合适的免疫组化抗体来检测抗原靶标，通过不同指标的表达情况来鉴别疾病的分型。该方法的缺点是：①单个样本的染色切片数量多，需要判读多张切片的染色结果，综合分析，得到病理诊断结果；②IHC对取材样本的大小要求高，而随着技术的迭代发展，乳腺癌患者的肿瘤组织样本变成小活检或细针穿刺术，得到的石蜡块只有有限的肿瘤含量。从这些有限的部分中，病理学实验室必须制作对主要亚型进行诊断所必需的HE玻片(通常是两个)以及支持该诊断的其他玻片，所以存在很大的弊端。
针对这种现象，免疫显色试剂(双染)问世，该产品的改进在于：①与抗体结合的酶标二抗聚合物是辣根过氧化物(HRP)标记的抗鼠二抗聚合物和碱性磷酸酶(AP)标记的抗兔二抗聚合物的组合试剂；②显色剂有两种，分别是两种酶的显色底物，呈现不同的颜色，棕色和红色；③在同一张组织切片上可以呈现两种颜色，标记至少2种抗原靶标。但是，该技术仍然存在一些问题，在同一张切片上检测多个抗原靶标时，抗体试剂必须单个顺次孵育，造成免疫组化试验时间过长，技术操作工作量未减少，并且，试剂盒不包含抗体试剂。同时，该试剂仅可用于手工免疫组化试验的操作，没有实现自动化，也不利于日常的工作需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒，该试剂盒采用鸡尾酒组合一抗，能够在同一张组织切片上同时检测CK7、P63、MHC三种抗原靶标的表达情况，为病理医师提供更多诊断信息，提高诊断的精准度，同时解决微小组织样本染色重复性差的问题。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒，包括过氧化物酶封闭剂、组合一抗、组合二抗、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、快红显色活化剂、快红缓冲液以及苏木素复染液，其中，所述组合一抗包括鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人P63单克隆抗体和兔抗人MHC单克隆抗体；所述组合二抗包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物和AP标记的抗兔二抗聚合物。
优选的，所述组合一抗中鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体克隆号为EP16,鼠抗人P63单克隆抗体克隆号为MyR1-P63,兔抗人MHC单克隆抗体克隆号为SMMS-1。
优选的，所述组合一抗中鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体效价为1:50-1:400，鼠抗人P63单克隆抗体效价为1:50-1:300，兔抗人MHC单克隆抗体效价为1:50-1:350。
优选的，所述组合一抗还包括三羟甲基氨基甲烷、牛血清蛋白、氯化钠、果绿色素以及Proclin950。进一步优选的，所述组合一抗还包括6g/L的三羟甲基氨基甲烷、10g/L的牛血清蛋白、8g/L的氯化钠、0.2g/L的果绿色素以及质量浓度为0.15％的Proclin950。
优选的，所述组合二抗中HRP标记的抗鼠二抗聚合物的浓度为8-15μg/mL，AP标记的抗兔二抗聚合物的浓度为6-12μg/mL。
优选的，所述组合二抗还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清蛋白、吐温20、Proclin950。进一步优选的，所述组合二抗还包括6g/L的三羟甲基氨基甲烷、8g/L的氯化钠、5g/L的牛血清蛋白、质量浓度为0.1％的吐温20、质量浓度为0.1％的Proclin950。
优选的，所述试剂盒适用于全自动免疫组化染色机。
优选的，所述全自动免疫组化染色机的染色程序包括如下步骤：
1)石蜡组织切片脱蜡水化；
2)抗原修复：采用抗原修复缓冲液对切片进行高压修复，温度为100℃，修复20分钟，加样量100微升；
3)滴加3％～3.5％的过氧化物酶封闭剂进行内源性过氧化物酶的封闭，常温孵育5分钟，加样量为100微升；
4)组合一抗的孵育：37℃孵育30-60分钟，加样量为100微升；
5)组合二抗的孵育：37℃孵育25-30分钟，加样量为100微升；
6)快红显色液的孵育：常温孵育8分钟，加样量为100微升；快红显色剂的配置：快红显色剂、快红显色活化剂和快红缓冲液按照1：1：30的比例配置所得；
7)DAB显色液的孵育：常温孵育5分钟，加样量为100微升；DAB显色液的配置：DAB显色底物和DAB显色缓冲液1：20比例配制所得；
8)衬染：苏木素常温孵育1.5分钟，加样量为100微升；
9)水性封片胶封片。
本发明取得的有益效果：
1)目前，对于乳腺癌的诊断大多是通过免疫组化检测P63，或者P63+Colponin和P63+SMA的表达情况。与现有技术不同，本发明提供的试剂盒采用鸡尾酒组合一抗，能够在同一张组织切片上同时检测CK7、P63、MHC三种抗原靶标的表达情况，P63+MHC可以很好的勾勒出肌上皮的连续形态，同时MHC比SMA和Colponin更加的特异和灵敏，且与SMA和Colponin相比，MHC与肌纤维母细胞的交叉反应性轻，也更加具有优势。并且，本发明的一抗组合中还加入了CK7，在正常部位可以很直观的观察到腺上皮的组织形态，且不会和P63、MHC出现占位现象，对比十分鲜明；在癌症部位会发现P63、MHC的缺失，只有CK7染色的现象。这样在乳腺癌组织中可以非常直观鲜明的辨别正常组织和癌组织，为病理医师提供更多诊断信息，提高病理诊断的精准度。
2)乳腺癌的诊断上基本已全面普及穿刺技术，所获得的样本量极少，癌肿部位会更少，所以样本十分珍贵，本发明的试剂盒能够在同一张组织切片上同时检测CK7、P63、MHC三种抗原靶标的表达情况，可以大幅减少样本使用量，为其它检查(如分子诊断等)留存更多的样本。
3)本发明采用鸡尾酒组合一抗，在同一张组织切片中可直观的观察到3个抗原靶标的表达情况，便于病理医生观察靶标蛋白的相互作用、共生定位以及组织形态，避免不同张切片带来的差异，可以综合评判染色结果，提高诊断结果的精准度，避免了微小组织样本染色重复性差的问题。
附图说明
图1为实施例1中A1切片采用P1程序的免疫组化染色结果图；
图2为实施例1中A2切片采用P2程序的免疫组化染色结果图；
图3为实施例1中A3切片采用P3程序的免疫组化染色结果图；
图4为对比例中B1切片的免疫组化染色结果图；
图5为对比例中B2切片的免疫组化染色结果图；
图6为对比例中B3切片的免疫组化染色结果图；
图7为试验例中C1切片的免疫组化染色结果图；
图8为试验例中C2切片的免疫组化染色结果图；
图9为试验例中C3切片的免疫组化染色结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒
一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒，包含如下组分：
过氧化物酶封闭剂：购于河南赛诺特生物技术有限公司；货号：SN640501；
组合一抗：由纯水和以下成分组成：鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体(克隆号：EP16,抗体效价：1:200)、鼠抗人P63单克隆抗体(克隆号：MyR1-P63,抗体效价：1:200)、兔抗人MHC单克隆抗体(克隆号：SMMS-1,抗体效价：1:150)、6g/L的三羟甲基氨基甲烷、10g/L的牛血清蛋白、8g/L的氯化钠、0.2g/L的果绿色素、质量浓度为0.15％的Proclin950；在其他实施例中，鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体效价为1:50-1:400，可选1:50或1:400；鼠抗人P63单克隆抗体效价为1:50-1:300，可选1:50或1:300；兔抗人MHC单克隆抗体效价为1:50-1:350，可选1:50或1:350。
组合二抗：由纯水和以下成分组成：浓度为10.0μg/mL的HRP标记的抗鼠二抗聚合物(在其他实施例中，HRP标记的抗鼠二抗聚合物的浓度为8-15μg/mL，可选8μg/mL、12μg/mL或15μg/mL)、浓度为10.0μg/mL的AP标记的抗兔二抗聚合物(在其他实施例中，AP标记的抗兔二抗聚合物的浓度为6-12μg/mL，可选6μg/mL、8μg/mL或12μg/mL)、6g/L的三羟甲基氨基甲烷、8g/L的氯化钠、5g/L的牛血清蛋白、质量浓度为0.1％的吐温20、质量浓度为0.1％的Proclin950；
DAB显色底物：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN640503A；
DAB显色缓冲液：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN0503B；
快红显色剂：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN640833；
快红显色活化剂：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN640833；
快红缓冲液：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN640833；
苏木素复染液：购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN640504。
实施例2 CNT330全自动免疫组化染色(乳腺癌组织)
1)组装试剂盒：将以下成分组装成一整套完整的试剂盒，包括20mL过氧化物酶封闭剂、20mL组合一抗、20mL组合二抗、2mL快红显色剂、2mL快红显色活化剂、35mL快红缓冲液、3mL DAB显色底物、35mL DAB显色缓冲液、20mL苏木素复染液。
2)在乳腺癌组织上的免疫组化试验
①取乳腺癌组织一个，制备石蜡组织切片3张，厚度为3微米，65℃烤片1个小时，分别标记为A1、A2、A3。
②将本发明试剂盒放入全自动免疫组化染色机进行识别，设置病例编号，切片编号，将切片放入机器待启动。
③在CNT330上进行脱蜡、抗原修复、免疫组化染色以及复染，染色步骤及孵育时间在机器软件上预先进行设置，共设置三个程序，分别为P1、P2和P3。
④脱蜡水化：按照机器原始设置程序操作；
⑤预处理：使用抗原修复缓冲液Ⅱ对组织进行预处理，100℃高温修复20分钟。
⑥免疫组化染色程序设定如下表格所示：
⑦免疫组化染色：A1切片，采用P1程序；A2切片，采用P2程序；A3切片，采用P3程序。
⑧切片染色结束，用水性封片胶封片。
染色结果的判读：CK7阳性表达在腺上皮，染色为棕色；P63阳性表达在肌上皮，染色为棕色、MHC阳性表达在肌上皮，染色为红色。
免疫组化染色结果如图1-3所示：
图1为A1切片采用P1程序的免疫组化试验显色效果，良性组织中CK7、P63、MHC为阳性表达，但是P63和MHC的染色很弱；在癌症部位CK7阳性表达，P63和MHC阴性表达，显示肌上皮缺失，染色强度理想。
图2为A2切片采用P2程序的免疫组化试验显色效果，良性组织中CK7、P63、MHC为阳性表达，但是P63和MHC的染色很弱；在癌症部位CK7阳性表达，P63和MHC阴性表达，显示肌上皮缺失，染色强度理想。
图3为A3切片采用P3程序的免疫组化试验显色效果，良性组织中CK7、P63、MHC为阳性表达，但是三者的染色都很理想，区分度较高；在癌症部位CK7阳性表达，P63和MHC阴性表达，显示肌上皮缺失，染色强度理想。
对比例
基于传统的免疫组化检测试剂盒在乳腺癌组织上的试验：
1)取乳腺癌组织一个，制备石蜡组织切片3张，厚度为3微米，65℃烤片1个小时。
2)组织切片的标记，B1、B2和B3。分别用CK7、MHC和P63检测。
3)设置实验操作程序如下：
步骤 封闭 一抗 一抗后 二抗 显色 衬染
试剂 过氧化物酶封闭剂 单个靶标 一抗后试剂 多聚物 DAB染色液 苏木素
流程 5min 30min 20min 20min 5min 1min
4)将免疫显色试剂(厂家：河南赛诺特生物技术有限公司；货号：SN10907)
放入全自动免疫组化染色机进行识别，设置病例编号，切片编号，将切片放入机器待启动。
5)脱蜡水化：按照机器原始设置程序操作。
6)预处理：使用抗原修复缓冲液Ⅱ对组织进行预处理，100℃高温修复20分钟。
7)免疫组化染色：依据设置程序染色。
8)切片的脱水透明，然后用中性树胶进行封片。
免疫组化染色结果如图4-6所示：
图4为B1的染色结果，CK7显色强度为强，阳性表达，背景干净；
图5为B2的染色结果，P63显色强度为强，阳性表达，背景干净；
图6为B3的染色结果，MHC显色强度为强，阳性表达，背景干净。
试验例
1)用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒的组装(参见实施例2)；
2)取3个乳腺组织，分别制备石蜡组织切片1张，厚度为3微米，65℃烤片1个小时，分别标记为C1、C2和C3。
3)将本发明试剂盒放入全自动免疫组化染色机进行识别，设置病例编号，切片编号，将切片放入机器待启动，实验程序采用P3程序。
4)脱蜡水化：按照机器原始设置程序操作；
5)预处理：使用抗原修复缓冲液Ⅱ对组织进行预处理，100℃高温修复20分钟；
6)免疫组化染色：采用P3程序，全自动免疫组化染色机自动完成染色步骤；
7)切片染色结束，用水性封片胶封片。
免疫组化染色结果如图7-9所示：
图7为C1的染色结果图，如图所示，良性组织中，CK7、P63、MHC均为阳性表达，背景干净。
图8为C2的染色结果图，如图所示，良性组织中，CK7、P63、MHC均为阳性表达，背景干净；在癌症部位，P63和MHC阴性表达，显示肌上皮缺失，CK7阳性表达，背景干净。
图9为C3的染色结果图，如图所示，良性组织中，CK7、P63、MHC均为阳性表达，背景干净。

Claims (10)

1.一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒，其特征在于，包括过氧化物酶封闭剂、组合一抗、组合二抗、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、快红显色活化剂、快红缓冲液以及苏木素复染液，其中，所述组合一抗包括鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人P63单克隆抗体和兔抗人MHC单克隆抗体；所述组合二抗包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物和AP标记的抗兔二抗聚合物；所述乳腺癌为浸润性乳腺癌。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗中鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体克隆号为EP16，鼠抗人P63单克隆抗体克隆号为MyR1-P63，兔抗人MHC单克隆抗体克隆号为SMMS-1。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗中鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体效价为1:50-1:400，鼠抗人P63单克隆抗体效价为1:50-1:300，兔抗人MHC单克隆抗体效价为1:50-1:350。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗还包括三羟甲基氨基甲烷、牛血清蛋白、氯化钠、果绿色素以及Proclin950。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗还包括6g/L的三羟甲基氨基甲烷、10g/L的牛血清蛋白、8g/L的氯化钠、0 .2g/L的果绿色素以及质量浓度为0 .15％的Proclin950。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合二抗中HRP标记的抗鼠二抗聚合物的浓度为8-15μg/mL，AP标记的抗兔二抗聚合物的浓度为6-12μg/mL。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合二抗还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清蛋白、吐温20、Proclin950。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述组合二抗还包括6g/L的三羟甲基氨基甲烷、8g/L的氯化钠、5g/L的牛血清蛋白、质量浓度为0 .1％的吐温20、质量浓度为0.1％的Proclin950。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，其适用于全自动免疫组化染色机。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述全自动免疫组化染色机的染色程序包括如下步骤：
1)石蜡组织切片脱蜡水化；
2)抗原修复：采用抗原修复缓冲液对切片进行高压修复，温度为100℃，修复20分钟，加样量100微升；
3)滴加3％～3 .5％的过氧化物酶封闭剂进行内源性过氧化物酶的封闭，常温孵育5分钟，加样量为100微升；
4)组合一抗的孵育：37℃孵育30-60分钟，加样量为100微升；
5)组合二抗的孵育：37℃孵育25-30分钟，加样量为100微升；
6)快红显色液的孵育：常温孵育8分钟，加样量为100微升；快红显色剂的配置：快红显色剂、快红显色活化剂和快红缓冲液按照1：1：30的比例配置所得；
7)DAB显色液的孵育：常温孵育5分钟，加样量为100微升；DAB显色液的配置：DAB显色底物和DAB显色缓冲液1：20比例配制所得；
8)衬染：苏木素常温孵育1 .5分钟，加样量为100微升；
9)水性封片胶封片。
CN202110749985.8A 2021-07-02 2021-07-02 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒 Active CN113295871B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110749985.8A CN113295871B (zh) 2021-07-02 2021-07-02 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110749985.8A CN113295871B (zh) 2021-07-02 2021-07-02 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113295871A CN113295871A (zh) 2021-08-24
CN113295871B true CN113295871B (zh) 2023-07-21

Family

ID=77330273

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110749985.8A Active CN113295871B (zh) 2021-07-02 2021-07-02 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113295871B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117233393B (zh) * 2023-11-15 2024-02-09 四川大学华西医院 双重免疫组化染色试剂盒及其在鉴别良恶性胆管上皮肿瘤中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4612282A (en) * 1981-12-15 1986-09-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
CN103196731A (zh) * 2013-04-18 2013-07-10 王刚平 用于鉴别乳腺肌上皮病变的多重染色试剂及其检测方法
CN111766385A (zh) * 2020-07-06 2020-10-13 河南赛诺特生物技术有限公司 术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒
CN112964877A (zh) * 2021-03-09 2021-06-15 河南赛诺特生物技术有限公司 一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序
CN113008649A (zh) * 2021-03-26 2021-06-22 河南赛诺特生物技术有限公司 一种免疫组化联合弹性纤维多重染色试剂盒、染色方法及应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1945333A (zh) * 2006-09-28 2007-04-11 孙爱静 乳腺癌淋巴结转移快速免疫组化检测试剂及其检测方法
CN101598731B (zh) * 2009-05-07 2013-04-24 陈志南 一种用于肿瘤病理诊断用途的免疫组织化学诊断试剂盒
JP6192123B2 (ja) * 2012-01-09 2017-09-06 スージョウ マイクロダイアグ バイオメディスン カンパニー リミテッド 乳癌の予測および診断のためのバイオマーカー
US9234892B2 (en) * 2014-05-08 2016-01-12 Agilent Technologies, Inc. Multiple epitope detection in an FFPE tissue section
CN104730242A (zh) * 2015-02-15 2015-06-24 广州安必平医药科技股份有限公司 一种用于肝细胞良、恶性肿瘤辅助诊断的双染试剂盒及其应用
US20190265235A1 (en) * 2016-07-18 2019-08-29 Cell Idx, Inc. Reagent compounds, compositions, kits, and methods for amplified assays
CN108956242A (zh) * 2018-05-16 2018-12-07 绍兴文理学院 一种乳腺癌腋窝淋巴结离体组织标本的固定处理方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4612282A (en) * 1981-12-15 1986-09-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
CN103196731A (zh) * 2013-04-18 2013-07-10 王刚平 用于鉴别乳腺肌上皮病变的多重染色试剂及其检测方法
CN111766385A (zh) * 2020-07-06 2020-10-13 河南赛诺特生物技术有限公司 术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒
CN112964877A (zh) * 2021-03-09 2021-06-15 河南赛诺特生物技术有限公司 一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序
CN113008649A (zh) * 2021-03-26 2021-06-22 河南赛诺特生物技术有限公司 一种免疫组化联合弹性纤维多重染色试剂盒、染色方法及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
乳腺腺样囊性癌8例临床病理分析;刘宇飞;牛云;王昀;李杰;宋志刚;刘梅;刘爱军;;诊断病理学杂志(第02期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113295871A (zh) 2021-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112964877B (zh) 一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序
CN104007257B (zh) 一种检测非体液性稀有有核细胞的方法和试剂盒
US20100047825A1 (en) Immunoassay reagents and methods of use thereof
CN107085106B (zh) 用于前列腺癌进展预后的检测试剂及试剂盒
EP2329261B1 (en) Prostate cancer biomarker
CN110850094A (zh) 一种免疫组化双标单染试剂盒及其使用方法和应用
CN113008649A (zh) 一种免疫组化联合弹性纤维多重染色试剂盒、染色方法及应用
CN111766385B (zh) 术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒
CN113295871B (zh) 一种用于诊断乳腺癌的鸡尾酒免疫组化试剂盒
CN102435728A (zh) 一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法
CN109425527B (zh) 一种细胞染色方法
US9182403B2 (en) Kits for and methods of differential staining of cervical cancer cells and/or tissues
CN112326965B (zh) Daam1蛋白在制备肾透明细胞癌诊断及预后评估试剂盒中的应用
CN111665358B (zh) Nalcn蛋白在食管鳞癌预后预测中的应用
CN113063945A (zh) 一种免疫组化联合弹性纤维双重染色试剂盒、染色方法及应用
CN115074342B (zh) 一种抗人酸性磷酸酶单克隆抗体及其应用
CN111638349A (zh) 一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞ca125表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
CN116183935B (zh) 一种用于预测肝门部胆管癌预后的分子标志物及其应用
CN113607534B (zh) 一种染色方法、试剂盒及应用
CN116183896A (zh) 一种免疫组化单项染色方法
CN117269472B (zh) 一种通用型免疫组化辅助试剂盒
CN116879557A (zh) 肺癌组织学分型多重荧光组化检测方法及其试剂盒和应用
CN113504092A (zh) 一种幽门螺杆菌染色试剂盒及应用
Macrea Immunology II: immunohistochemistry: roots and review
CN113504370A (zh) Mapk15蛋白在前列腺癌的恶性程度或预后程度预测中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant