CN113274393A - Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用。通过Linsitinib抗EV71活性研究实验，化合物Linsitinib抑制EV71在宿主细胞RD上产生的细胞病变效应(CPE)，增强细胞存活率，降低子代病毒产量，可在制备抗EV71病毒药物中应用。

Description

Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及抗病毒药物技术领域，具体涉及一种Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药 物中的应用。

背景技术

肠道病毒71型(EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus) 成员，是引起婴幼儿手足口病的最主要病原体之一，有时伴有严重的中枢神经系统并发症，包 括无菌性脑膜炎，脑炎，脊髓灰质炎样麻痹，神经性心肺衰竭等，甚至导致死亡。我国政府已 于2008年将手足口病列为丙类传染病纳入管理，并制定一系列相关法律法规，严控手足口病 的流行传播。目前对于由EV71感染的疾病治疗没有特效药物，相关的疫苗于2015年才上市， 其预防效果还有待进一步调查。因此开发特异有效的抗EV71药物势在必行。

Linsitinib(OSI-906)是一种选择性IGF-1R抑制剂，能够抑制IGF-IR自磷酸化和下游信号 蛋白AKT,ERK1/2和S6激酶的激活，IC₅₀为0.028到0.13μM。OSI-906通过与C-螺旋相互 作用而使靶点蛋白形成中间结构形态。OSI-906作用于肝脏微粒体，具有良好的代谢稳定性。 OSI-906浓度为1μM时，完全抑制IR和IGF-IR磷酸化。OSI-906抑制一些肿瘤细胞系增殖， 包括非小细胞肺癌和结肠直肠癌(CRC)肿瘤细胞系，EC₅₀为0.021-0.810μM。但是OSI-906用 于抗病毒治疗却鲜有报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是对Linsitinib(OSI-906)关于EV71病毒的抑制活性 进行了评估，在提供OSI-906作为抗EV71病毒筛选化合物。

为实现上述目的，本发明提供了一种Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用， 所述具有抗EV71活性的Linsitinib化合物即OSI-906化学结构式如下：

作为优选方案，所述OSI-906在25μM时对EV71的抑制率为85％。

进一步地，所述药物为化合物OSI-906添加药剂学能接受的辅料和载体，制备成抗EV71 病毒的制剂。

更进一步地，所述制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中任一种。

本发明的优点及有益效果如下：本发明目的的实现方式为，OSI-906通过标准的病毒活性 测试方法来对其进行活性测试。本发明通过大量的生物学实验，发现OSI-906具有抗EV71病 毒的活性。具体表现为可以抑制EV71病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，抑 制EV71病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。由此表明这种化合物有潜力制备抗 EV71感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

附图说明

图1是OSI-906对于EV71作用的RD细胞存活率的影响。

图2是OSI-906对于EV71引起的RD细胞CPE的抑制效应。

图3是OSI-906对于EV71子代病毒产量的抑制作用。

图4是OSI-906的化学结构式。

具体实施方式

以下结合附图与实施例对本发明的方案作进一步地详细阐述。

本发明所用的Linsitinib(OSI-906)购自试剂公司。本发明涉及Linsitinib(OSI-906)在制备抗 EV71病毒药物中的应用，是指Linsitinib(OSI-906)添加药剂学可接受的辅料和载体，用于制备 抗EV71病毒的制剂。制剂是颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂。

本发明的Linsitinib(OSI-906)有以下的化学结构式。

本发明OSI-906作为抗EV71病毒的应用，发现OSI-906抗EV71病毒效果明显。由此表 明这种化合物有潜力制备抗EV71感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

实施例1

本发明对上述化合物进行了抗EV71活性研究实验，实验情况如下：在下文中，如果未特 别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

1、试验内容：

化合物抗EV71活性分析：本发明将结合细胞病变效应分析和MTT测定细胞存活率检测 方法，对OSI-906抗EV71活性进行评估。

2、试验方法：

2.1.1化合物对于宿主RD细胞的毒性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO₂培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养，48h后显微镜目测并分别记录其细胞毒 性，MTT法测定细胞存活率。SPSS 11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(Median cyctoxic concentration，CC50)。细胞存活率＝(药物组平均OD₄₉₂值/细胞对照组平均OD₄₉₂值)×100％。

2.1.2化合物对于EV71的抑制活性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO₂培养箱培养长满单层后，弃去培养液，100TCID50 的EV71病毒液感染细胞1.5h，加入不同浓度的测试化合物(利巴韦林作为阳性对照药物)孵 育细胞。待继续培养约48h，病毒对照孔出现90％左右的CPE病变时，显微镜下观察细胞病 变效应(CPE)。CPE的观察记录方法：无细胞病变记做-，25％以下细胞病变记做+，25％-50％ 细胞病变记做++，50％-75％细胞病变记做+++，75％以上细胞病变记为++++。

CPE观察完毕后，利用MTT方法检测药物对EV71的抑制率。具体步骤为：每孔加入MTT 50μL(5mg·mL^-1)，孵育3-4h后去掉上清液，加入等体积的DMSO溶解沉淀。用酶标 仪在492nm处读取所对应的吸光度(OD₄₉₂值)。利用如下公式计算药物对EV71的抑制率。

用SPSS 11.5软件计算药物的半数有效浓度(Concentration for 50％ofmaximaleffect，EC50)。

2.1.3药物的治疗指数(TI)

TI＝CC50/EC50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。

3、实验结果

表1 OSI-906细胞毒性及抗EV71活性

化合物细胞毒性及抗EV71活性测试结果如表1所示。浓度依赖的化合物对于EV71作用 的RD细胞存活率的影响如图1所示。发现OSI-906在25μM时，最大抑制率约为85％。

实施例2

本发明对OSI-906进行了抗EV71活性的深入研究，实施了化合物对于EV71子代病毒产 量的抑制作用试验，试验情况如下：

1、试验内容

检测在EV71感染RD细胞后，化合物对于EV71子代病毒产量的抑制作用。

2、试验方法

对数生长期的RD细胞铺板24孔板，长满单层后100TCID₅₀ EV71感染细胞，37℃孵育1.5h后移去病毒液，PBS洗涤三次，加入含25μM浓度的细胞维持液。48h后收集细胞和上清培养液，-20℃和37℃三次冻融裂解后，TCID₅₀方法测定EV71病毒滴度。

3、试验结果

如图3所示，化合物处理的RD细胞相对于病毒对照组，其病毒滴度都有明显下降，相对 于病毒对照下降6.5log。

综上所述，OSI-906具有较强的抑制EV71活性，能够抑制EV71病毒引起的RD细胞病变效应，能制备成临床上有效对抗EV71感染的药物。

Claims (4)

1.一种Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用，其特征在于：所述具有抗EV71活性的Linsitinib化合物即OSI-906化学结构式如下：

2.根据权利要求1所述的Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用，其特征在于：所述OSI-906在25μM时对EV71的抑制率为85％。

3.根据权利要求1或2所述的Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用，其特征在于：所述药物为化合物OSI-906添加药剂学能接受的辅料和载体，制备成抗EV71病毒的制剂。

4.根据权利要求3所述的Linsitinib化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用，其特征在于：所述制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中任一种。

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