CN113264862A - 一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents
一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113264862A CN113264862A CN202110398873.2A CN202110398873A CN113264862A CN 113264862 A CN113264862 A CN 113264862A CN 202110398873 A CN202110398873 A CN 202110398873A CN 113264862 A CN113264862 A CN 113264862A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ring
- steroid compound
- ethyl acetate
- opening
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- -1 steroid compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 title claims description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 7
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 11
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims description 10
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 10
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 abstract 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000001026 1H--1H correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethyl n'-phenylcarbamimidothioate;dihydrobromide Chemical compound Br.Br.CCN(CC)CCSC(N)=NC1=CC=CC=C1 XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000122818 Aspergillus ustus Species 0.000 description 1
- 108010013198 Daptomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011482 antibacterial activity assay Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002815 broth microdilution Methods 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- DOAKLVKFURWEDJ-QCMAZARJSA-N daptomycin Chemical compound C([C@H]1C(=O)O[C@H](C)[C@@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@H](C)CC(O)=O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CCCCCCCCC)C(=O)C1=CC=CC=C1N DOAKLVKFURWEDJ-QCMAZARJSA-N 0.000 description 1
- 229960005484 daptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000003592 new natural product Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920001470 polyketone Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000005856 steroid saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C401/00—Irradiation products of cholesterol or its derivatives; Vitamin D derivatives, 9,10-seco cyclopenta[a]phenanthrene or analogues obtained by chemical preparation without irradiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/66—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing the quinoid structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
- C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
- C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
- C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
- C07C2602/26—All rings being cycloaliphatic the ring system containing ten carbon atoms
- C07C2602/28—Hydrogenated naphthalenes
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种9,11‑开环甾体类化合物及其制备方法和用途，特点是该甾体类化合物的结构式如Ⅰ所示，其制备方法步骤包括将保藏号为CCTCC NO:M2014086的海洋曲霉菌通过微生物发酵培养来获取9,11‑开环甾体类化合物的发酵物，然后将发酵物用乙酸乙酯浸泡提取得粗浸膏，经Sephadex LH‑20凝胶柱层析，正相中压柱层析、反相中压柱层析和反相半制备高效液相色谱分离纯化得到，优点是该9,11‑开环甾体类具有抗金黄色葡萄球菌的作用，可用于抑制由金黄色葡萄球菌引起的相关病害及感染的先导药物的开发和利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种甾体类化合物，尤其是涉及一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途。
背景技术
甾体化合物是一类具有广泛活性的化学实体。90年代后，从海洋生物中相继发现的具有全新结构特点的甾体皂苷，双甾体，开环甾体，多胺甾体和甾体多羟基硫酸酯等新型甾体化合物数不胜数，它们大多表现出显著的抗菌、抗真菌、抗肿瘤和抗病毒等生物活性，引起许多化学、生物学和医学工作者的极大的兴趣。在新药物的开发建立在对大量新化合物的广泛筛选基础上，海洋甾体类化合物无疑是抗癌、抗肿瘤等新型先导化合物开发和利用的一个重要来源。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为世界上已报道的食源性疾病中三大重要的致病原因之一。现有的抗生素如甲氧西林、万古霉素和达托霉素在很大程度上缓解了金黄色葡萄球菌感染治疗的问题，但由于抗生素的滥用，不可避免的出现了细菌耐药性！因此，抑制金黄色葡萄球菌的新型药物的发现迫在眉睫。
在药物开发过程中，海洋来源的真菌由于其遗传背景复杂、代谢产物种类多、产量高及显著的生物活性，成为海洋微生物天然产物的主要来源。其中，在近年天然产物的研究中，海洋曲霉属来源的新天然产物呈逐年增加的趋势，这些海洋曲霉来源的结构独特次级代谢产物包括甾体、萜烯、生物碱和聚酮类等，表现出抗癌、抑菌、自由基清除和抗寄生虫等多种生物活性。发明人在基于对一株海洋曲霉菌（保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2014086）在大米发酵下的乙酸乙酯提取物的化学成分研究中，发现了一个新型的甾体类的天然产物，随后对其进行了抑菌活性评估。目前尚未见该化合物的化学结构及抑菌活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种对金黄色葡萄球菌具有抑制作用的9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种9,11-开环甾体类化合物，该开环甾体类化合物的结构式如（I）所示；
上述9,11-开环甾体类化合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）发酵生产
将保藏号为CCTCC NO：M2014086的海洋曲霉菌在固体PDA培养基的平板上划线接种，于恒温培养箱中28 ℃培养活化3天，随后挑取单菌落接种于PDB培养基中，于温度28℃、150 rpm/min的转速下置于摇床培养3天后，收集种子液，将种子液按体积比10%的接种量接种到大米培养基中，于温度28 ℃培养30 天，获得发酵物；
（2）浸膏提取
在步骤（1）得到的发酵物中加入等体积的乙酸乙酯，反复萃取3次，随后将乙酸乙酯浸提液经减压蒸发后，继而加入由体积比为1：1的乙酸乙酯和水组成的混合溶液重复萃取3次，合并三次萃取所得乙酸乙酯相，最后对乙酸乙酯萃取液在减压浓缩蒸发后，获得粗浸膏；
（3）化合物的分离制备
将步骤（2）得到的粗浸膏用甲醇溶剂溶解后进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，采用体积比为1：1的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到12个组分；将收集的第3个组分进行正相中压柱层析，采用体积比为（100:1）-（0:1）的石油醚/乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到6个洗脱组分；将收集的第4个组分进行反相C-18中压柱层析，采用体积比40−100%的甲醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到10个洗脱组分；将收集的第6个组分蒸干后进行半制备反相高效液相色谱分离，采用体积比为42:58的乙腈/水溶液为流动相，分离纯化得到9,11-开环甾体类化合物，其结构如（I）所示：
步骤（1）中所述的大米培养基的配制方法如下：将80 g大米和35 g海盐溶于120mL蒸馏水中配制而成。
步骤（3）中所述的反相C-18中压柱层析中梯度洗脱剂为甲醇和水，甲醇从40~100%，洗脱时间120 min。
步骤（3）中所述的半制备反相高效液相色谱的化合物分离制备的流速为 2.0 mL/min。
上述9,11-开环甾体类化合物在制备金黄色葡萄球菌菌抑制药物方面的用途。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途，通过微生物发酵培养来获取9,11-开环甾体类的发酵物，然后通过将发酵物用乙酸乙酯浸泡提取，得粗浸膏，然后经凝胶柱层析，反向中压柱层析和反相半制备高效液相色谱分离纯化得到，该化合物具有中等抑制金黄色葡萄球菌的活性，因此可用于抑制由金黄色葡萄球菌引起的相关病害及感染的先导药物的开发和利用。
上述焦曲霉（Aspergillus ustus），该菌为DJ003菌株，保藏编号为CCTCC NO.M2014086，于2014年03月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种9,11-开环甾体类化合物的结构式如（I）所示：
实施例2
如实施例1结构式（I）所示的9,11-开环甾体类化合物的分离制备方法，具体包括如下步骤：
（1）发酵生产
将保藏号为CCTCC NO：M2014086的海洋曲霉菌在固体PDA培养基的平板上划线接种，于恒温培养箱中28 ℃培养活化3天，随后挑取单菌落接种于PDB培养基中，于温度28℃、150 rpm/min的转速下置于摇床培养3天后，收集种子液，将种子液按体积比10%的接种量接种到大米培养基中，于温度28 ℃培养30 天，获得发酵物；
（2）浸膏提取
在步骤（1）得到的发酵物中加入等体积乙酸乙酯，反复萃取3次，随后将乙酸乙酯浸提液经减压蒸发后，继而加入体积比1：1的乙酸乙酯和水的混合溶液重复萃取3次，合并三次萃取所得乙酸乙酯相后，对乙酸乙酯萃取液在减压浓缩蒸发后，获得粗浸膏；
（3）化合物的分离制备
将步骤（2）得到的粗浸膏用甲醇溶剂溶解后进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，采用体积比为1：1的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到12个组分；将收集的第3个组分进行正相中压柱层析，采用体积比为（100:1）-（0:1）的石油醚/乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到6个洗脱组分；将收集的第4个组分进行反相C-18中压柱层析，采用体积比40−100%的甲醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到10个洗脱组分；将收集的第6个组分蒸干后进行半制备反相高效液相色谱分离，采用体积比为42:58的乙腈/水溶液为流动相，分离纯化得到9,11-开环甾体类化合物，其结构如（I）所示：
步骤（1）发酵生产中中所述的大米培养基的配制方法如下：将80 g大米和35 g海盐溶于120 mL蒸馏水中配制而成，随后在灭菌锅中进行120℃高温灭菌。
步骤（3）所述的半制备反相高效液相色谱的化合物分离制备的流速为2.0 mL/min。
本发明化合物Ⅰ为无色油状，正离子模式下的高分辨质谱(HR-ESI-MS)给出其准分子离子峰m/z 485.3280 [M + Na]+。结合13C NMR谱确定其分子式为C30H44O5，该化合物的1H和13C NMR谱及二维谱数据见表1：
表1. 化合物Ⅰ的1D 和2D NMR 数据 (CD3Cl3)
注1 ：本表信号归属基于DEPT、1H-1H COSY、HMBC以及NOESY图谱解析结果。
注2：s—单重峰、d—二重峰、t—三重峰、 m—多重峰。
注3：1H 在600 MHz NMR获得；13C 在150 MHz NMR获得。
实施例3
如实施例1所述9,11-开环甾体类化合物活性及应用
（1） 实验样品
被测样品溶液的配制：测试样品为上述实施例1中分离纯化的化合物Ⅰ纯品，精密称取适量样品，用DMSO配制成所需浓度的溶液供测试抗菌活性。该实验使用的指示菌为金黄色葡萄球菌（CMCC 626003）。
（2） 实验方法
96孔板抗菌测试方法：在96孔板中，终体积为100μL/孔的Müeller-Hinton肉汤作为基本培养基，其中化合物的浓度为以二倍肉汤稀释法稀释至浓度256至1 µg/mL，并以5×105 CFU / mL的浊度添加细菌培养物。将板在37℃下孵育过夜，然后观察板，将肉眼不能观察到细菌的孔所对应的化合物浓度确定为该化合物的最低抑制浓度（MIC）。同时以氯霉素作阳性对照，通过不同浓度样品对应的抑菌圈直径与阴性对照滤纸片的直径比作为抑制率。
（3）实验结果
在96孔板抗菌测试中，化合物Ⅰ对金黄色葡萄球菌的MIC被确定为64 μg/mL。
表2不同浓度的化合物Ⅰ对金黄色葡萄球菌的抑制率（%）
由上述表2可知，化合物Ⅰ对金黄色葡萄球菌具较好的抗菌活性。
上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种9,11-开环甾体类化合物，其特征在于该开环甾体类化合物的结构式如（I）所示；
2.一种权利要求1所述的9,11-开环甾体类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）发酵生产
将保藏号为CCTCC NO：M2014086的海洋曲霉菌在固体PDA培养基的平板上划线接种，于恒温培养箱中28 ℃培养活化3天，随后挑取单菌落接种于PDB培养基中，于温度28 ℃、150rpm/min的转速下置于摇床培养3天后，收集种子液，将种子液按体积比10%的接种量接种到大米培养基中，于温度28 ℃培养30 天，获得发酵物；
（2）浸膏提取
在步骤（1）得到的发酵物中加入等体积的乙酸乙酯，反复萃取3次，随后将乙酸乙酯浸提液经减压蒸发后，继而加入由体积比为1：1的乙酸乙酯和水组成的混合溶液重复萃取3次，合并三次萃取所得乙酸乙酯相，最后对乙酸乙酯萃取液在减压浓缩蒸发后，获得粗浸膏；
（3）化合物的分离制备
将步骤（2）得到的粗浸膏用甲醇溶剂溶解后进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，采用体积比为1：1的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到12个组分；将收集的第3个组分进行正相中压柱层析，采用体积比为（100:1）-（0:1）的石油醚/乙酸乙酯溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到6个洗脱组分；将收集的第4个组分进行反相C-18中压柱层析，采用体积比40−100%的甲醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，按序合并相似流分，共收集得到10个洗脱组分；将收集的第6个组分蒸干后进行半制备反相高效液相色谱分离，采用体积比为42:58的乙腈/水溶液为流动相，分离纯化得到9,11-开环甾体类化合物，其结构如（I）所示：
3.根据权利要求2所述的一种9,11-开环甾体类化合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的大米培养基的配制方法如下：将80 g大米和35 g海盐溶于120 mL蒸馏水中配制而成。
4.根据权利要求2所述的一种9,11-开环甾体类化合物的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的反相C-18中压柱层析中梯度洗脱剂为甲醇和水，甲醇从40~100%，洗脱时间120min。
5.根据权利要求2所述的一种9,11-开环甾体类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的半制备反相高效液相色谱的化合物分离制备的流速为 2.0 mL/min。
6.一种权利要求1-5中任一项所述的9,11-开环甾体类化合物在制备金黄色葡萄球菌菌抑制药物方面的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110398873.2A CN113264862A (zh) | 2021-04-14 | 2021-04-14 | 一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110398873.2A CN113264862A (zh) | 2021-04-14 | 2021-04-14 | 一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113264862A true CN113264862A (zh) | 2021-08-17 |
Family
ID=77228790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110398873.2A Pending CN113264862A (zh) | 2021-04-14 | 2021-04-14 | 一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113264862A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110330544A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-10-15 | 宁波大学 | 一种4,4,1-双环甾类化合物及其制备方法和用途 |
| CN112209986A (zh) * | 2020-09-21 | 2021-01-12 | 西北农林科技大学 | 一种甾体类化合物、制备方法及应用 |
-
2021
- 2021-04-14 CN CN202110398873.2A patent/CN113264862A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110330544A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-10-15 | 宁波大学 | 一种4,4,1-双环甾类化合物及其制备方法和用途 |
| CN112209986A (zh) * | 2020-09-21 | 2021-01-12 | 西北农林科技大学 | 一种甾体类化合物、制备方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113105428B (zh) | 一种氧杂蒽酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN115806881B (zh) | 一种青霉属真菌及其在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN110863021B (zh) | 一种细胞松弛素类化合物的制备方法和应用 | |
| CN114380814B (zh) | 一种恶唑铁载体类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110357788B (zh) | 一种聚酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN114957198B (zh) | 一种抗霉素类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110003153B (zh) | 一种苯并呋喃类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110330544B (zh) | 一种4,4,1-双环甾类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN102453015A (zh) | 一种Azaphilone类衍生物及其制备和应用 | |
| CN108441427B (zh) | 一种节菱孢属真菌及其生产的吡啶酮生物碱类化合物 | |
| CN114380764B (zh) | 一种噻唑啉铁载体类型化合物及其制备方法和用途 | |
| CN107805188B (zh) | 一种联苯类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN115466772A (zh) | 一种麦角烷型甾体化合物及其制备方法和用途 | |
| CN108794502B (zh) | 一种单端孢霉烯类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN113264862A (zh) | 一种9,11-开环甾体类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN113264913B (zh) | 一种苯并吡喃酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110002996B (zh) | 一种二苯醚类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN107973803B (zh) | 一种七元内酯并呋喃衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN114702468B (zh) | 一种二氢苯并呋喃类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN113461699B (zh) | 一种四环吡咯生物碱类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110642823A (zh) | 一种吡喃衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN115504990B (zh) | 一种含糖-螺环-大环内酯类化合物fw-5-39及制备方法与应用 | |
| CN116041165B (zh) | 一种倍半萜类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN109575040B (zh) | 一种具有抗菌活性的化合物及其制备方法 | |
| CN113603666B (zh) | 化合物eutyscoparol H和L及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210817 |