CN113260704B - CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途 - Google Patents

CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途 Download PDF

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Abstract

本申请涉及CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。本申请还涉及一种分离的核酸分子，其包含编码CYP4V2的多核苷酸以及编码RdCVF的多核苷酸。本申请还涉及所述分离的核酸分子编码的氨基酸序列、包含所述分离的核酸分子的载体、包含所述核酸或所述载体的细胞及其在制备用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症的药物中的用途。

Description

CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途。
背景技术
结晶样视网膜变性(Bietti’s crystalline dystrophy，BCD)是一种视网膜变性罕见病，其症状主要包括角膜中的晶体(透明覆盖物)，沉积在视网膜的光敏组织中的细小、黄色或白色晶体状的沉积物，以及视网膜、脉络膜毛细血管和脉络膜的进行性萎缩。沉积物会损伤视网膜，导致视力逐渐丧失。患有结晶样视网膜变性的人通常会在十几岁或二十几岁时开始察觉到视力问题，每只眼睛的视力问题可能以不同的速度恶化，即使在同一个家庭中症状的严重程度和进展在不同的个体中差异很大，然而大多数患者在四十或五十岁时就会失明。据估计，世界范围内每67,000人中有1人患有结晶样视网膜变性，在东亚人中更为常见，尤其是中国人和日本人。
现有研究表明BCD为常染色体隐性遗传疾病，并且是由CYP4V2基因突变引起的，目前国内外关于BCD患者的基因研究中已发现CYP4V2多个基因突变位点。CYP4V2基因是细胞色素P450超家族中的蛋白质之一，CYP4V2基因编码蛋白参与脂肪酸代谢的过程，一般认为结晶样视网膜变性中CYP4V2基因突变破坏了其参与脂肪酸代谢的酶功能，从而影响了脂质分解。然而CYP4V2如何导致了BCD的特定体征和症状尚不清楚。目前BCD的治疗主要参考视网膜色素变性(RP)的治疗方法，虽然CYP4V2基因突变的研究为未来的基因治疗提供了可能，但是目前还没有效的治疗方法。
发明内容
本申请提供了CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
在某些实施方式中，所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
在某些实施方式中，所述CYP4V2为人CYP4V2。
在某些实施方式中，所述CYP4V2包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述RdCVF为人RdCVF。
在某些实施方式中，所述RdCVF包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，其中所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述药物包含编码所述CYP4V2的多核苷酸以及编码所述RdCVF的多核苷酸。
在某些实施方式中，所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于不同的载体上。
在某些实施方式中，所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于同一载体上。
在某些实施方式中，所述载体包括病毒载体。
在某些实施方式中，所述载体为病毒载体，其所述病毒载体包括AAV载体。
在某些实施方式中，所述载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述启动子包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述载体还包含编码自我剪切肽的多核苷酸，所述编码自我剪切肽的多核苷酸位于所述编码CYP4V2的多核苷酸与所述编码RdCVF的多核苷酸之间。
在某些实施方式中，所述自我剪切肽包含P2A。
在某些实施方式中，所述编码自我剪切肽的多核苷酸包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸和所述多聚腺苷酸信号位点。
在某些实施方式中，所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点；或者，所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
在某些实施方式中，所述载体还包含内含子。
在某些实施方式中，所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
在某些实施方式中，所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
在某些实施方式中，所述载体包含SEQ ID NO:90-116中任一项所示的核苷酸序列。
本申请还提供了用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症的载体组合，其包括第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码CYP4V2的多核苷酸，所述第二载体包含编码RdCVF的多核苷酸。
在某些实施方式中，所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
在某些实施方式中，所述CYP4V2为人CYP4V2。
在某些实施方式中，所述CYP4V2包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述RdCVF为人RdCVF。
在某些实施方式中，所述RdCVF包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述载体包括病毒载体。
在某些实施方式中，所述载体为病毒载体，其所述病毒载体包括AAV载体。
在某些实施方式中，所述第一载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述第二载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述启动子包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述第一载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述第二载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述第一载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点；和/或，所述第二载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
在某些实施方式中，所述第一载体和/或所述第二载体还包含内含子。
在某些实施方式中，所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
在某些实施方式中，所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
在某些实施方式中，所述第一载体包含SEQ ID NO:90-95中任一项所示的核苷酸序列；和/或，所述第二载体包含SEQ ID NO:96-100中任一项所示的核苷酸序列。
本申请还提供一种或多种分离的核酸分子，其包含a)编码CYP4V2的多核苷酸以及b)编码RdCVF的多核苷酸。
在某些实施方式中，所述CYP4V2为人CYP4V2。
在某些实施方式中，所述CYP4V2包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述RdCVF为人RdCVF。
在某些实施方式中，所述RdCVF包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
在某些实施方式中，所述启动子包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子包含编码CYP4V2的多核苷酸和编码RdCVF的多核苷酸。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子还包含编码自我剪切肽的多核苷酸，所述编码自我剪切肽的多核苷酸位于所述编码CYP4V2的多核苷酸与所述编码RdCVF的多核苷酸之间。
在某些实施方式中，所述自我剪切肽包含P2A。
在某些实施方式中，所述编码自我剪切肽的多核苷酸包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
在某些实施方式中，所述的分离的核酸分子，其以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸和所述多聚腺苷酸信号位点。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子，其还包含内含子。
在某些实施方式中，所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
在某些实施方式中，所述其中内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
在某些实施方式中，所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO:101-115中任一项所示的核苷酸序列。
本申请还提供一种载体，其包含本申请所述的分离的核酸分子。
在某些实施方式中，所述载体为病毒载体。
在某些实施方式中，所述病毒载体包括AAV载体。
本申请还提供一种细胞，其包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体。
本申请还提供一种药物组合物，其包含本申请所述的分离的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞。
本申请还提供本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体、本申请所述的细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
在某些实施方式中，所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：
图1显示了本申请中不同CYP4V2启动子的表达效果。
图2显示了本申请中CAG、EF1a、OPEFS及EFS启动子的表达效果。
图3和图4显示了本申请中启动子后连接内含子的表达增强作用。
图5显示了本申请中表达载体选择不同PolyA信号位点对目的基因表达的影响。
图6显示了本申请中含有CYP4V2、RdCVF基因的表达载体在293T细胞中的表达情况。
图7显示了本申请中含有CYP4V2、RdCVF基因的表达载体在ARPE-19细胞中的表达情况。
图8显示了本申请中不同血清型AAV病毒对小鼠视网膜的感染情况，双箭头表示EGFP报告基因的表达范围。
图9显示了本申请中RPE细胞的制备过程中荧光显微镜观察到的肾上皮细胞、IPSC细胞、RPE细胞形态。
图10A显示了本申请中病毒滴度对人iPSC分化的RPE细胞死亡的影响，10B、10C分别显示了病毒滴度对人iPSC分化的RPE细胞中炎症因子NLRP3、TNF-α表达情况的影响，10D显示了不同病毒滴度条件下目的基因在人iPSC分化的RPE细胞的表达情况。
图11显示了本申请中不同病毒感染人iPSC分化的RPE细胞后CYP4V2、RdCVF的表达情况。
图12显示了本申请中包含不同启动子和CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠后对眼底结晶沉积情况的影响。
图13显示了本申请中包含不同启动子和CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠对眼底结晶沉积情况的影响的统计结果。
图14显示了本申请中包含不同启动子和CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠后CYP4V2免疫荧光染色结果。
图15显示了本申请中不同剂量的包含CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠后对眼底结晶沉积情况的影响。
图16显示了本申请中不同剂量的包含CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠后对眼底结晶沉积情况的影响的统计结果。
图17显示了本申请中不同剂量的包含CYP4V2基因的病毒处理BCD小鼠后对炎症因子TNF-α、IFN-γ、NLRP3表达水平的影响。
图18显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后对眼底结晶沉积情况的影响。
图19显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后对眼底结晶沉积情况的影响的统计结果。
图20显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后对视网膜功能(视网膜电图(ERG))的影响。
图21显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后CYP4V2、RdCVF的免疫荧光染色结果。
图22显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后对RPE细胞数量及形态的影响。
图23显示了本申请中不同病毒处理BCD小鼠后对RPE细胞数量影响的统计结果。
图24显示了本申请中启动子后不含有内含子的不同病毒处理BCD小鼠后对视网膜功能(视网膜电图(ERG))的影响。
图25显示了本申请中p1启动子不同病毒处理BCD小鼠后对视网膜功能(视网膜电图(ERG))的影响。
图26显示了本申请中WPRE-SV40 poly A信号位点不同病毒处理BCD小鼠后对视网膜功能(视网膜电图(ERG))的影响。
图27显示了本申请中不包含信号位点不同病毒处理BCD小鼠后对视网膜功能(视网膜电图(ERG))的影响。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
以下对本申请做进一步描述：在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
在本申请中，术语“分离的”通常指从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。
在本申请中，术语“分离的核酸分子”通常指任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从其天然环境分离的或人工合成的类似物。
在本申请中，术语“CYP4V2”通常是指一种蛋白质，其为细胞色素P450家族4亚家族V成员2。胞色素P450，也称作cytochromeP450或CYP450，通常是指一类亚铁血红素蛋白家族，属于单氧酶的一类，参与内源性物质或包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。根据氨基酸序列的同源程度，其成员又依次分为家族、亚家族和酶个体三级。细胞色素P450酶系统可以缩写为CYP，其中家族以阿拉伯数字表示，亚家族以大写英文字母表示，酶个体以阿拉伯数字表示，例如本申请中的CYP4V2。人CYP4V2基因(HGNC：23198)全长19.28kb，位于4q35，具有11个外显子，在脂肪酸代谢中发挥重要作用(Kumar S.,Bioinformation,2011,7:360-365)。CYP4V2几乎在所有组织中表达，但是在视网膜和视网膜色素上皮中以高水平表达，而角膜，组织中以稍低的水平表达，CYP4V2基因的突变可能导致BCD(Li等，Am J Hum Genet。74:817-826,2004)。
在本申请中，术语“RdCVF”也称作视杆细胞源性视锥细胞生长因子(Rod derivedcone survival factor)，通常是指一种截短的类硫氧还蛋白，其缺乏硫醇氧化还原酶活性。RdCVF是类核氧化还原蛋白1(nucleoredoxin-like 1,Nxnl1)基因的一种剪接变体，该基因另外的剪接产物是RdCVFL，RdCVFL是一种活性硫氧还蛋白，能够保护其结合配体即微管相关蛋白TAU免于氧化和聚集(Elachouri等，2015和Fridlich等，2009)。Nxnl1基因缺失的小鼠可以表现出年龄依赖性视杆细胞和视锥细胞功能丧失和视锥细胞退行性变化，以及视杆细胞和视锥细胞对氧化应激的超敏反应(Cronin等，2010)。Nxnl1的表达可以是视杆细胞依赖性的，其在视网膜色素变性(RP)中的视杆细胞死亡后显著减少(Delyfer等，2011；Reichman等，2010)。RdCVF可以在几种不同基因型的视网膜色素变性(RP)模型中保护视锥细胞功能(Byrne等,2015；Le′veillard等,2004；Yang等,2009)。RdCVF分子可作为信号肽分泌至细胞外，促进感光细胞对葡萄糖的吸收，有利于维持感光细胞的存活。Nxnl1基因在人类、黑猩猩、恒河猴、狗、牛、大鼠、小鼠、鸡、斑马鱼和青蛙中都是保守的。在人类中Nxnl1也称作Txnl6，Nxnl1位于19p13.11，包含两个外显子。Nxnl1可以在人体组织中普遍表达，包括晶状体、视网膜、胃、肾、心脏、结肠和脾，在晶状体、视网膜中有相对更高的表达水平。
在本申请中，术语“启动子”通常指一段能使特定基因进行转录的脱氧核糖核酸(DNA)序列。启动子可以被RNA聚合酶辨认，并开始转录合成RNA。在核糖核酸(RNA)合成中，启动子可以和调控基因转录的转录因子产生相互作用，控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。启动子包含核心启动子区域和调控区域，位于控制基因表达的调控序列中、基因转录起始位点的上游(DNA反义链的5’方向)，本身并无编译功能。根据其作用方式及功能分为三类：组成型启动子(在多数或全部组织中保持持续的活性)、特异型启动子(组织特异性或者发育时期的特异性)和诱导型启动子(受外界化学或物理信号调控)。
在本申请中，术语“可操作连接”通常是指将编码序列表达所必需的调控序列置于相对于编码序列的适当位置，以便实现编码序列的表达。例如，当第一核酸序列处于与第二核酸序列的功能关系中时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作连接。在某些实施方式中，可以表示表达载体中编码序列和转录控制元件的排列。所述控制元件可以包括启动子、增强子和终止元件。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则启动子被可操作地连接至编码序列。在某些实施方式中，“可操作连接”还可以是指目的基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节目的基因的转录和翻译的预期功能。
在本申请中，术语“自我剪切肽”，也称作2A肽(2A self-cleaving peptides)，通常是指一类长18-22个氨基酸残基的肽片段，能诱导细胞内含有2A肽的重组蛋白自我剪切。2A肽通常源自病毒基因组的2A区域。在基因工程操作中，2A肽可以使一个开放读框(ORF)转译出的肽链分为数个独立的肽链。在某些实施方式下，如果需要两个蛋白分开表达(例如需要一个蛋白进入细胞核、另一个蛋白在细胞质中表达)，又希望只在载体上构建一个开放读框，可以通过在它们的编码区中插入一段2A肽序列实现。在某些实施方式下，如果两个蛋白融合后的融合蛋白没有功能，可以在两个蛋白的编码区中间插入一段编码2A肽的序列，或将连结肽更换为2A肽，使转译完成后两个蛋白分开，独立进行折叠，从而提供使两个蛋白恢复功能的可能。2A肽可以包括P2A、E2A、F2A、T2A，它们都是以来源的病毒命名的。其中P2A源于猪捷申病毒(Porcine teschovirus)的2A肽。
在本申请中，术语“多聚腺苷酸序列”，也称作多聚腺苷酸尾，PolyA尾，通常是指转录后的mRNA在3’端加上的一段几十至几百个单一的腺苷酸链。多聚腺苷酸化通常发生在脱氧核糖核酸(DNA)在细胞核内转录成核糖核酸(RNA)的过程中及完成后，该反应通常是由多聚腺苷酸聚合酶完成的。在真核生物中，多聚腺苷酸化是一种机制，可以使mRNA分子于其3’端中断，多聚腺苷酸序列可以保护mRNA免受核酸外切酶攻击，并且对mRNA的细胞核输出、翻译和稳定性都十分重要。
在本申请中，术语“多聚腺苷酸信号位点”通常是指一段位于信使RNA(mRNA)的3’端能够被多聚腺苷酸化相关裂解因子识别的碱基序列。通常也是mRNA上的一段顺式调节信号。一般情况下加尾的过程(即多聚腺苷酸化)开始于转录终止后，多聚腺苷酸化相关裂解因子在多聚腺苷酸信号位点的调控下，在mRNA的3’UTR的后面加上几十到几百个单一的腺苷酸。常见的加尾信号包括SV40，BGH，HSV，TK信号等。所述多聚腺苷酸化相关裂解因子可以包括裂解/聚腺苷酸特异性因子(CPSF)、裂解刺激因子(CstF)、裂解因子I(CFI)、裂解因子II(CFII)。多聚腺苷酸信号位点通常可以包含AAUAAA序列，但是在真核生物组之间有所不同。例如，大多数人的多聚腺苷酸信号位点含有AAUAAA序列，但该序列在植物和真菌中较少见。
在本申请中，术语“内含子”可以包括经过转录的，但却从RNA转录本中通过将序列(外显子)两端的任一端拼接在一起而被去除的DNA片段。内含子通常被认为是基因的蛋白编码区内的干扰序列，且通常不含有由该基因产生的蛋白所代表的信息。
在本申请中，术语“载体”通常指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及病毒载体等。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。
在本申请中，术语“病毒载体”通常使指充当基因递送载体且包含包装于病毒衣壳内的重组病毒基因组的非野生型重组病毒颗粒。用作载体的动物病毒种类可以包括逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(例如SV40)。
在本申请中，术语“AAV载体”也称作腺相关病毒载体，通常是指腺病毒本身或其衍生物。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)通常是指一类属于微小病毒科、依赖病毒属的单链DNA病毒。AAV基因组可以包含DNA链两端的反向末端重复序列(ITR)和两个开放阅读框(ORF)。所述开放的阅读框可以包括rep和cap。rep由编码AAV生命周期所需的Rep蛋白的多个重叠基因组成，cap包含编码衣壳蛋白的重叠核苷酸序列，所述核苷酸序列可以包括VP1，VP2和VP3。所述衣壳蛋白相互作用形成衣壳。在缺少辅助病毒的情况下，AAV可以整合其基因组到人类19号染色体的一个特别位点(AAVS位点)，直到有辅助病毒将其从潜伏状态下拯救出来(Kotin等，1990)。通常认为AAV以不整合的形式为主。AAV的位点特异性的整合能力、其自然缺陷及其免疫原性低使其成为理想的基因治疗载体。AAV具有多种常见血清型,100多种病毒变种。在本申请中，AAV衣壳、ITR和其它所选AAV组件选自任何AAV，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8和AAVAnc80、任何已知或提及的AAV的变体或尚待发现的AAV或其变体或混合物。
在本申请中，术语“细胞”通常可以是或已经是核酸分子或载体的接受者的单个细胞、细胞系或细胞培养物。细胞可以包括本申请所述的核酸分子或本发明所述的载体。细胞可以包括单个细胞的后代。由于天然、偶然或有意的突变，后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总DNA互补体的形态上或在基因组上)。细胞可包括用本申请所述的载体在体外转染的细胞。细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞。在某些实施方案中，细胞为哺乳动物细胞。在某些实施方案中，哺乳动物细胞为HEK293T细胞。
在本申请中，术语“药物组合物”通常指涉及适合施用于患者、例如人患者的组合物。例如，本申请所述的药物组合物，其可以包含本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
在本申请中，术语“预防”通常是指对健康受试者预防性地施用组合，以预防某种疾病或病症的发生。其也可以包含对处于待治疗变应性疾病前期的患者预防性地施用组合。“预防”不需要100％消除疾病或病症发生的可能性，换句话说，“预防”通常指在所述施用组合的存在下疾病或病症发生的可能性降低了。
在本申请中，术语“缓解”指减少、缩减或迟滞某种病状、疾病、病症或表型。所述病状、疾病、病症或表型可以包括受试者主观感知例如疼痛、晕眩或其他生理性障碍，或者医学上可以检测的指征，例如通过医学检验手段检测到的病灶情况。
在本申请中，术语“治疗”通常指用于改变所处理的个体或细胞在临床病理过程中的自然过程的临床干预。可以包括改善病状态、消除病灶或改善的预后。
在本申请中，术语“视网膜色素上皮(RPE)”通常是指一层紧贴于视网膜感觉神经之外的色素细胞。视网膜色素上皮由单层六边形细胞组成，其内含有密集的色素颗粒。视网膜色素上皮(RPE)与其下的脉络膜和其上视网膜神经细胞紧密相连，其主要功能可以包括：控制视网膜下间隙的液体和营养，起到血-视网膜屏障的功能；合成生长因子调整局部的结构；吸收光，调节电平衡；视色素的再生和合成；吞噬和消化光感受器外节；维持视网膜的附着；损伤后的再生和修复。通常认为RPE是维持光感受器功能的重要组织，同时也受脉络膜和视网膜的很多病变影响。
在本申请中，术语“视网膜色素上皮(RPE)萎缩”通常是指视网膜色素上皮(RPE)表现为细胞死亡或功能障碍的退行性变化。年龄相关黄斑变性或视网膜色素变性(RP)通常伴有视网膜色素上皮萎缩。视网膜色素变性(Retinitis Pigmentosa，简称RP)也称视网膜色素病变，通常是指一类遗传性眼科疾病。其遗传方式有常染色体隐性、显性与X性连锁三种，也存在双基因和线粒体遗传。初期普遍的病征可以是夜盲、视野变窄，能够看到正前方景物而无法看见略偏左右的视野，之后视力将会逐渐消失。RP可以包括单眼性原发性视网膜色素变性、象限性原发性视网膜色素变性、中心性或旁中心性原发性视网膜色素变性、无色素性视网膜色素变性白点状视网膜变性、结晶样视网膜变性、静脉胖色素性视网膜色素变性、小动脉旁色素上皮保留型视网膜色素变性、Leber先天黑蒙和其他综合征中的视网膜色素变性。
在本申请中，术语“结晶样视网膜变性”通常是指一类由意大利眼科医生GBBietti博士于1937年首次描述的常染色体隐性遗传眼病。其主要症状包括角膜中的晶体(透明覆盖物)，沉积在视网膜的光敏组织中的细小、黄色或白色晶体状的沉积物，以及视网膜、脉络膜毛细血管和脉络膜的进行性萎缩。结晶样视网膜变性可以包括由CYP4V2基因突变引起的疾病。
在本申请中，术语“包含”或“包括”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
一方面，本申请提供了CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
在本申请中，所述药物可以包含编码所述CYP4V2的多核苷酸以及编码所述RdCVF的多核苷酸。例如，所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于不同的载体上。例如，所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于同一载体上。
另一方面，本申请还提供了用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症的载体组合，其包括第一载体和第二载体，所述第一载体可以包含编码CYP4V2的多核苷酸，所述第二载体可以包含编码RdCVF的多核苷酸。
另一方面，本申请还提供了一种分离的核酸分子，其可以包含编码CYP4V2的多核苷酸以及编码RdCVF的多核苷酸。
另一方面，本申请还提供了细胞，其可以包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体组合。
本申请还提供了药物组合物，其可以包含本申请所述的所述的核酸分子、本申请所述的载体组合和/或本申请所述的细胞。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体组合、本申请所述的细胞和/或本申请所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物可以用于预防、缓解和/或治疗视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
CYP4V2
在本申请中，CYP4V2可以包含一类其功能障碍或其编码基因突变可能导致结晶样视网膜变性的蛋白，包括但不限于人类、黑猩猩、大猩猩、恒河猴、狗、牛、小鼠、大鼠、鸡、果蝇、线虫或青蛙的CYP4V2或其功能性变体。
例如，所述CYP4V2可以包含人CYP4V2。
例如，所述CYP4V2可以包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述CYP4V2可以包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
例如，所述CYP4V2可以包含与SEQ ID NO:76-82所示的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同源的任意一种氨基酸序列，并且所述氨基酸序列与本申请所述的RdCVF联合施用能够改善与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
在本申请中，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
例如，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62所示的核酸序列。
例如，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含与SEQ ID NO:62-68所示的核酸序列至少90％同源的氨基酸序列，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同源的任意一种多核苷酸序列，并且所述核苷酸序列所编码的多肽与本申请所述的RdCVF联合施用能够改善与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
RdCVF
在本申请中，所述RdCVF可以包含一种由视杆细胞产生的并且有利于视锥细胞的蛋白。所述RdCVF包括但不限于人类、黑猩猩、大猩猩、恒河猴、狗、牛、大鼠、小鼠、鸡、斑马鱼和青蛙的RdCVF或其功能性变体。
例如，所述RdCVF可以包含人RdCVF。
例如，所述RdCVF可以包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述RdCVF可以包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列。
例如，所述RdCVF可以包含与SEQ ID NO:83-89所示的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同源的任意一种氨基酸序列，并且所述氨基酸序列与本申请所述的CYP4V2联合施用能够改善与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
在本申请中，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
例如，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69所示的核酸序列。
例如，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含与SEQ ID NO:69-75所示的核酸序列至少90％同源的氨基酸序列，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同源的任意一种多核苷酸序列，并且所述核苷酸序列所编码的多肽与本申请所述的CYP4V2联合施用能够改善与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
启动子
在本申请中，所述启动子可以包含RPE细胞特异性启动子、视网膜细胞特异性启动子、角膜细胞特异性启动子、眼细胞特异性启动子或组成型启动子。所述启动子还可以包含哺乳动物β肌动蛋白启动子或病毒启动子。所述启动子还可以包含CAG启动子(杂合CMV早期增强子/鸡β肌动蛋白启动子，也称为CAGGS启动子，CB启动子或CBA启动子)、人β肌动蛋白启动子、小CBA(smCBA)启动子、CBS启动子或CBh启动子、延伸因子1α短(EFS)启动子、延伸因子1α(EF-1α)启动子、CMV启动子、PGK启动子、UBC启动子、GUSB启动子、UCOE启动子、VMD2(也称为BEST1)启动子、OPEFS启动子、CYP4V2自身启动子、RPE65启动子或其杂合体或衍生物。
例如，所述启动子可以包含CYP4V2自身启动子，所述CYP4V2自身启动子可以包含所述编码CYP4V2的多核苷酸上游2000bp核苷酸序列的全部或部分。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述CYP4V2自身启动子可以包括CYP4V2-Pf启动子、CYP4V2-P1启动子、CYP4V2-P2启动子、CYP4V2-P3启动子、CYP4V2-P4启动子、CYP4V2-P5启动子、CYP4V2-P6启动子；所述CYP4V2-Pf启动子可以包含SEQ ID NO:6所示的核酸序列，所述CYP4V2-P1启动子可以包含SEQ ID NO:7所示的核酸序列，所述CYP4V2-P2启动子可以包含SEQ ID NO:8所示的核酸序列，所述CYP4V2-P3启动子可以包含SEQ ID NO:9所示的核酸序列，CYP4V2-P4启动子可以包含SEQ ID NO:10所示的核酸序列，所述CYP4V2-P5启动子可以包含SEQ ID NO:11所示的核酸序列，所述CYP4V2-P6启动子可以包含SEQ ID NO:12所示的核酸序列。
例如，所述启动子可以为OPEFS，包含SEQ ID NO:1所示的核酸序列。
例如，所述启动子可以为EFS，包含SEQ ID NO:2所示的核酸序列。
例如，所述启动子可以为EF1a，包含SEQ ID NO:3所示的核酸序列。
例如，所述启动子可以为CAG，包含SEQ ID NO:4所示的核酸序列。
例如，所述启动子可以为RPE65，包含SEQ ID NO:5所示的核酸序列。
多聚腺苷酸信号位点
在本申请中，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SV40信号位点、BGH信号位点、WPRE信号位点、WPRE-SV40信号位点、WPRE-BGH信号位点或其衍生物。
例如，所述多聚腺苷酸信号位点可被多聚腺苷酸化相关裂解因子识别从而产生SV40多聚腺苷酸序列、BGH信号多聚腺苷酸序列、HSV信号多聚腺苷酸序列、TK信号多聚腺苷酸序列、WPRE信号多聚腺苷酸序列等。
例如，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含AAUAAA序列。
例如，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SEQ ID NO:17-21所示的核酸序列。
自我剪切肽
在本申请中，所述编码自我剪切肽的多核苷酸位于所述编码CYP4V2的多核苷酸与所述编码RdCVF的多核苷酸之间。
例如，所述自我剪切肽可以包含T2A、P2A、E2A或F2A。
例如，所述自我剪切肽可以包含P2A。
例如，所述自我剪切肽可以包含SEQ ID NO:26-29中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列。
例如，所述剪切肽的N端还可以连接GSG(Gly-Ser-Gly，甘氨酸、丝氨酸、甘氨酸)序列。
内含子
在本申请中，所述内含子可以位于目的基因的5’端或者位于目的基因的核苷酸序列中。所述目的基因可以包括编码CYP4V2的多核苷酸或编码RdCVF的多核苷酸。所述内含子能够增强所述目的基因的表达。例如，所述内含子可以包含人β-globin内含子、SV40内含子、杂合CBA/MVM内含子或其他人工合成内含子。
例如，所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
分离的核酸分子
在本申请中，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含编码CYP4V2的多核苷酸、编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含编码所述RdCVF的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含编码所述RdCVF的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述分离的核酸分子还可以包含所述启动子。
例如，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
例如，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列、所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述分离的核酸分子还可以包含编码所述自我剪切肽的多核苷酸。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含启动子、编码CYP4V2的多核苷酸、编码自我剪切肽的多核苷酸、编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
例如，所述分离的核酸分子从5’端到3’端可以依次包含启动子、编码RdCVF的多核苷酸、编码自我剪切肽的多核苷酸、编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
例如，所述分离的核酸分子可以包含SEQ ID NO:101-105中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述分离的核酸分子还可以包含所述多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
在本申请中，所述分离的核酸分子还可以包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含可以包含如SEQ ID NO:17-21中任一项所示的核苷酸序列。
在本申请中，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SEQ ID NO:17-21中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述分离的核酸分子可以包含SEQ ID NO:106-108中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述分离的核酸分子还可以包含所述内含子。
例如，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述内含子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ IDNO:69-75中任一项所示的核酸序列。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述内含子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ IDNO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SEQ ID NO:17-21中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:116所述的核酸序列。
例如，所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述内含子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、插入了所述内含子的编码所述RdCVF的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ IDNO:62-68中任一项所示的核酸序列。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、所述内含子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述的分离的核酸分子从5’至3’方向可以依次包含所述启动子、插入了所述内含子的编码所述RdCVF的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述编码自我剪切肽的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ IDNO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SEQ ID NO:17-21中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述分离的核酸分子可以包含如SEQ ID NO:109-115中任一项所示的核苷酸序列。
载体
在本申请中，所述载体可以包括质粒、噬菌粒、柯斯质粒、人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)、噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及病毒载体。
例如，所述病毒载体可以包括逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒(AAV载体)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(例如SV40)。
例如，所述腺相关病毒载体(AAV载体)基因可以包含反向末端重复序列(ITR)、开放阅读框(ORF)，所述开放阅读框可以包括编码Rep蛋白的多核苷酸，还可以包括编码衣壳的多核苷酸。
例如，所述腺相关病毒载体(AAV载体)还可以包括重组腺相关病毒载体(rAAV载体)。
例如，所述重组腺相关病毒载体中衣壳、ITR和其它所选AAV组件可以选自任何AAV，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8和AAVAnc80、DJ、DJ/8、Rh10任何已知或提及的AAV的变体或尚待发现的AAV或其变体或混合物。
例如，所述AAV载体可以是AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8、AAVAnc80、DJ、DJ/8、Rh10中的任意一种。
例如，所述AAV载体为眼组织亲和性AAV载体，例如，AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV8、DJ/8或任意rAAV载体。
例如，所述AAV载体可以是AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8或AAV2/9。
例如，所述病毒载体可以包含pAAV-RC5-Amp、RC8-cap、AAV2/8、AAV-helper-Amp、AAV-helper。
例如，所述病毒载体可以包含SEQ ID NO:133-137中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述载体还可以包含如SEQ ID NO:90-115中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述载体还可以包含如SEQ ID NO:117-121中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述载体可以包含如SEQ ID NO:122-132中任一项所示的核苷酸序列。
在本申请中，所述载体可以包含本申请所述的分离的核酸分子。
例如，所述载体可以包含如SEQ ID NO:101-115中任一项所示的核苷酸序列。
在本申请中，所述载体可以包含编码所述CYP4V2的多核苷酸或者所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述载体还可以包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
例如，所述载体还可以包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
例如，所述载体还可以包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:62-68中任一项所示的编码CYP4V2的多核苷酸序列、如SEQ IDNO:17-21中任一项所示的多聚腺苷酸信号位点序列。
例如，所述载体可以包含SEQ ID NO:90-92中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述载体还可以包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:69-75中任一项所示的编码RdCVF的多核苷酸序列、如SEQ IDNO:17-21中任一项所示的多聚腺苷酸信号位点序列。
例如，所述载体可以包含如SEQ ID NO:96-98中任一项所示的核酸序列。
例如，所述载体还可以包含内含子。
例如，所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
例如，所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述内含子、所述编码CYP4V2的多核苷酸或所述编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸或插入了所述内含子的编码所述RdCVF的多核苷酸。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述内含子、所述编码CYP4V2的多核苷酸或所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸或插入了所述内含子的编码所述RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述启动子可以包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核酸序列，所述内含子可以包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核酸序列，所述编码CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列，所述编码RdCVF的多核苷酸可以包含SEQID NO:69-75中任一项所示的核酸序列，所述多聚腺苷酸信号位点可以包含SEQ ID NO:17-21中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述插入了所述内含子的编码所述CYP4V2的多核苷酸可以包含SEQ ID NO:116所述的核酸序列。
例如，所述载体可以包含SEQ ID NO:93-95和99-100中任一项所示的核苷酸序列。
载体组合
本申请还提供了用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症的载体组合，其包括第一载体和第二载体，所述第一载体可以包含编码CYP4V2的多核苷酸，所述第二载体可以包含编码RdCVF的多核苷酸。
例如，所述第一载体还可以包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
例如，所述第一载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:62-68中任一项所示的编码CYP4V2的多核苷酸序列。
例如，所述第一载体可以包含SEQ ID NO:117所示的多核苷酸序列。
例如，所述第二载体还可以包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
例如，所述第二载体可以包含SEQ ID NO:120所示的多核苷酸序列。
例如，所述第一载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:69-75中任一项所示的编码RdCVF的多核苷酸序列。
例如，所述第一载体还可以包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
例如，所述第二载体还可以包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
例如，所述第一载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点；和/或，所述第二载体以5’至3’方向可以依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
例如，所述第一载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:62-68中任一项所示的编码CYP4V2的多核苷酸序列、如SEQID NO:17-21中任一项所示的多聚腺苷酸信号位点序列。
例如所述第一载体可以包含如SEQ ID NO:90-92中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述第二载体以5’至3’方向可以依次包含：如SEQ ID NO:1-12中任一项所示的启动子序列、如SEQ ID NO:69-75中任一项所示的编码RdCVF的多核苷酸序列、如SEQID NO:17-21中任一项所示的多聚腺苷酸信号位点序列。
例如所述第二载体可以包含如SEQ ID NO:96-98中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述第一载体和/或所述第二载体还可以包含内含子。
例如，所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
例如，所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
例如，所述第一载体可以包含SEQ ID NO:93-95中任一项所示的核苷酸序列；和/或，所述第二载体可以包含SEQ ID NO:99-100中任一项所示的核苷酸序列。
例如，所述第一载体可以包含SEQ ID NO:118-119中任一项所示的核苷酸序列；和/或，所述第二载体可以包含SEQ ID NO:121中任一项所示的核苷酸序列。
细胞
本申请还提供了细胞，其可以包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体组合。
例如，所述细胞可以是使得所述核酸分子在其中表达的细胞。
例如，所述细胞可以包含单个细胞的后代。所述后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总DNA互补体的形态上或在基因组上)。
例如，所述细胞还可以包含用本发明所述的载体在体外转染的细胞。
例如，所述细胞可以包含细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞、293T细胞。
例如，所述细胞为来自结晶样视网膜变性患者的细胞。
例如，所述细胞可以包含体细胞或干细胞。
例如，所述细胞可以包含视网膜细胞、角膜细胞、脉络膜细胞、晶状体细胞、神经细胞、RPE细胞、干细胞，所述干细胞可以包含诱导性多能干细胞(iPSC)、胚胎干细胞(ESC)、间充质干细胞(MSC)、成体干细胞或源自干细胞的任何细胞。
例如，所述视网膜细胞、角膜细胞、脉络膜细胞、晶状体细胞、神经细胞、RPE细胞可以是由所述干细胞诱导分化的。
例如，所述细胞可以包含ARPE-19细胞、人iPSC诱导的RPE细胞。
药物组合物
本申请还提供了药物组合物，其可以包含本申请所述的所述的核酸分子、本申请所述的载体组合和/或本申请所述的细胞。
例如，所述药物组合物还可以包含任选地药学上可接受的佐剂。
例如，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。
例如，所述组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。
例如，所述药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
例如，所述药学上可接受的佐剂可以包括与药物给药相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂，通常安全、无毒，且既不是生物学上也非其它方面不合需要的。
例如，所述药物组合物可以包含肠胃外、经皮、腔内、动脉内、鞘内和/或眼内施用或直接注射到组织中。
例如，所述药物组合物可以通过滴注、输注或注射施用于患者或者受试者。
例如，所述药物组合物可以不间断(或连续)施用。
例如，所述不间断(或连续)施用可以通过患者佩戴的小泵系统来实现，以测量流入患者体内的治疗剂，如WO2015/036583所述。
在本申请中，所述受试者可以包括人类和非人类动物。例如，所述受试者可以包括但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症
在本申请中，所述视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症可以包括年龄相关黄斑变性或视网膜色素变性(RP)。
例如，所述视网膜色素变性可以包括单眼性原发性视网膜色素变性、象限性原发性视网膜色素变性、中心性或旁中心性原发性视网膜色素变性、无色素性视网膜色素变性白点状视网膜变性、结晶样视网膜变性、静脉胖色素性视网膜色素变性、小动脉旁色素上皮保留型视网膜色素变性、Leber先天黑蒙和其他综合征中的视网膜色素变性。
例如，所述视网膜色素变性可以包括结晶样视网膜变性。
例如，所述结晶样视网膜变性可以包括由CYP4V2基因突变引起的疾病。
例如，所述CYP4V2基因突变可以包括但不限于错义突变、复制错误、剪接位点错误、移码、碱基缺失或插入、无义突变、多态性(例如，单核苷酸多态性)、过早终止、CYP4V2部分或全基因缺失及尚未鉴定的与结晶样视网膜变性相关的CYP4V2基因变异。
例如，所述CYP4V2基因突变可以包括表1所示突变：
表1 CYP4V2基因突变部分类型
Figure BDA0002670028150000251
Figure BDA0002670028150000261
表1中所示的CYP4V2基因突变型可自数据库https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/？term＝CYP4V2[gene]获得。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请中的核酸分子、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。实施例不包括对传统方法的详细描述，如那些用于构建载体和质粒的方法，将编码蛋白的基因插入到这样的载体和质粒的方法或将质粒引入宿主细胞的方法。这样的方法对于本领域中具有普通技术的人员是众所周知的，并且在许多出版物中都有所描述，包括Sambrook,J.,Fritsch,E.F.and Maniais，T.(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2nd edition，Cold spring HarborLaboratory Press。未注明的化学试剂均可通过常规商业渠道购买获得。
实施例
实施例1.通过CYP4V2的表达验证启动子强度
(1)全长CYP4V2启动子序列为人源基因组CYP4V2(HGNC:23198)编码区上游2000bp，由苏州金唯智公司合成。
(2)设计不同长度启动子CYP4V2-Pf、CYP4V2-P1、CYP4V2-P2、CYP4V2-P3、CYP4V2-P4、CYP4V2-P5、CYP4V2-P6的引物序列，以步骤(1)所得核酸分子为模板进行PCR扩增，凝胶电泳回收扩增产物。引物序列如SEQ ID NO:30-37所示。
PCR反应体系(50μl)如下：
Figure BDA0002670028150000271
表2 PCR反应条件
Figure BDA0002670028150000272
(3)分别从CAG启动子两端扩增pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP载体(购自山东维真生物科技有限公司)，凝胶电泳回收扩增产物。引物序列如SEQ ID NO:38-39所示。PCR反应体系(50μl)如下：
Figure BDA0002670028150000273
表3 PCR反应条件
Figure BDA0002670028150000281
(4)将步骤(2)所得的不同CYP4V2启动子序列(如SEQ ID NO:6-12所示)同源连接至由步骤(3)所得的线性化pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP载体，代替原载体中的CAG启动子。
连接体系(置于冰上操作)如下：
Figure BDA0002670028150000282
在50℃水浴锅内放置40min，取5μl反应液转化transtb13大肠杆菌感受态细胞，摇菌测序，使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提质粒。
(5)第一天分293T细胞(ATCC，CRL-3216)到35mm细胞培养皿，第二天至70％左右，配制转染体系：100μl无血清DMEM分别加入2μg步骤(4)所得质粒，加入3μl PEI，混匀，静止20min；将所得转染体系加入细胞培养基中，晃匀，置于CO2培养箱中，6h后或过夜换液。
(6)48小时后RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞，跑蛋白胶。Westernblot检测CYP4V2的表达。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-actin(Abclonal，AC026)，goat-anti-rabbit(Abclonal，AS014)。
结果如图1所示，CYP4V2-PF启动子、CYP4V2-P1启动子、CYP4V2-P2启动子、CYP4V2-P3启动子、CYP4V2-P4启动子、CYP4V2-P5启动子、CYP4V2-P6启动子均能够实现CYP4V2的表达，其中CYP4V2-PF启动子、CYP4V2-P3启动子、CYP4V2-P4启动子、CYP4V2-P5启动子有较好的表达效果，而CYP4V2-P5序列更短更有优势。
实施例2.以EGFP为报告基因验证启动子强度
(1)PCR扩增启动子EF1a、EFS、OPEFS。EF1a引物序列如SEQ ID NO:40-41所示，EFS引物序列如SEQ ID NO:42-43所示。OPEFS启动子以通用启动子EFS为基础，设计引物采用两轮PCR将EFS改造为OPEFS。第一轮PCR反应所用引物为EFS正向引物(如SEQ ID NO:42所示)和OPEFS-overlapR1(如SEQ ID NO:44所示)，第二轮PCR反应所用引物为EFS正向引物(如SEQ ID NO:42所示)和OPEFS-overlapR2(如SEQ ID NO:45所示)。凝胶电泳回收扩增产物。PCR反应体系(50μl)如下：
Figure BDA0002670028150000291
表4 PCR反应条件
Figure BDA0002670028150000292
(2)将步骤(1)所得扩增产物(启动子OPEFS、EFS、EF1a核酸分子，序列如SEQ IDNO:1-3所示)同源重组连接到按照实施例1步骤(3)所得线性化的pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP中，得到pAV-EF1a-CYP4V2-P2A-EGFP，pAV-EFS-CYP4V2-P2A-EGFP和pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP。连接体系(置于冰上操作)如下：
Figure BDA0002670028150000293
在50℃水浴锅内放置40min，取5μl反应液转化transtb13大肠杆菌感受态细胞，摇菌测序，使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提质粒。
(3)按照实施例1步骤(5)的方法利用PEI(Polysciences 24765-1)分别将pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP,pAV-EF1a-CYP4V2-P2A-EGFP，pAV-EFS-CYP4V2-P2A-EGFP和pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP质粒转染提前铺于6孔板的293T细胞(ATCC，CRL-3216)，细胞密度为70％左右。
(4)24小时后荧光显微镜(Life AMF4305)观察荧光信号。
结果如图2所示，CAG、EF1a、OPEFS相对于EFS都具有较好的表达效果，其中OPEFS序列较短，更有优势。
实施例3.验证内含子的增强效果
(一)将内含子克隆到基因5’非编码区。
(1)P5-intron的克隆。以CYP4V2-P5启动子序列和人β-globin内含子为基础，设计引物，采用overlap PCR改造得到P5-intron。1)以CYP4V2-P5启动子序列为模板，利用CYP4V2-P5正向引物(CYP4V2-P5F，如SEQ ID NO:46所示)和CYP4V2-P5(in)反向引物(如SEQID NO:47所示)进行PCR扩增；2)以人β-globin内含子为模板，利用β-globin内含子(c)(如SEQ ID NO:48所示)和β-globin内含子反向引物(如SEQ ID NO:49所示)进行PCR扩增；3)分别回收扩增产物，将1)和2)所得目的产物作为共同模板，利用CYP4V2-P5正向引物(CYP4V2-P5F，如SEQ ID NO:46所示)和β-globin内含子反向引物，如SEQ ID NO:49所示)进行PCR扩增，PCR扩增按照实施例2步骤(1)的体系和条件进行。回收扩增所得P5-intron目的产物。
(2)将扩增得到的P5-intron序列进行测序，之后同源重组连接到按照实施例1步骤(3)所得线性化的pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP中，得到pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-EGFP。连接体系(置于冰上操作)如下：
Figure BDA0002670028150000301
(3)在50℃水浴锅内放置40min，取5μl反应液转化transtb13大肠杆菌感受态细胞，摇菌测序，使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提质粒。
(二)将内含子克隆到基因编码区。
(1)CYP4V2-CDSintron的克隆，在该片段中，内含子位于CYP4V2的第一个和第二个外显子之间。以CYP4V2的CDS序列和人β-globin内含子为基础，设计引物，采用overlap PCR改造得到CDSintron：
1)以CYP4V2的CDS序列为模板，利用引物对CYP4V2-Fpr/CYP4V2-E1-R(序列分别如SEQ ID NO:50、51所示)和CYP4V2-E2-F/CYP4V2-R(序列分别如SEQ ID NO:52、53所示)进行PCR扩增，分别得到PCR产物CYP4V2-E1和CYP4V2-E2～11；
2)以β-globin内含子为模板，利用引物对Intron-F/Intron-R(序列分别如SEQ IDNO:54、55所示)进行PCR扩增；
3)分别回收扩增产物，将1)所得目的产物CYP4V2-E1和2)所得目的产物作为共同模板，利用CYP4V2-CDS正向引物CYP4V2-Fpr(序列如SEQ ID NO:50所示)和β-globin内含子反向引物Intron-R(序列如SEQ ID NO:55所示)，进行PCR扩增，PCR扩增按照实施例2步骤(1)的体系和条件进行。回收扩增所得CYP4V2-E1-intron目的产物。
4)将3)所得目的产物CYP4V2-E1-intron和1)所得目的产物CYP4V2-E2～11作为共同模板，利用CYP4V2-CDS正向引物CYP4V2-Fpr和CYP4V2-CDS反向引物CYP4V2-R，进行PCR扩增，PCR扩增按照实施例2步骤(1)的体系和条件进行。
(2)将扩增得到的CDSintron序列进行测序。
(3)37℃，2h酶切pAV-p5-CYP4V2-P2A-EGFP得到线性化的载体，凝胶电泳回收。酶切体系如下：
Figure BDA0002670028150000311
(4)将CYP4V2-CDSintron同源重组连接到线性化的pAV-p5-CYP4V2-P2A-EGFP中，得到pAV-p5-CDSintron-CYP4V2-P2A-EGFP。连接体系(置于冰上操作)如下：
Figure BDA0002670028150000312
(5)在50℃水浴锅内放置40min，取5μl反应液转化transtb13大肠杆菌感受态细胞，摇菌测序，使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提质粒。
(三)验证内含子位于基因5’非编码区和编码区时的增强效果
(1)将pAV-p5-CYP4V2-P2A-EGFP，pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-EGFP和pAV-p5-CDSintron-CYP4V2-P2A-EGFP按照实施例1步骤(5)的方法利用PEI(Polysciences 24765-1)转染提前铺于6孔板的293T细胞(ATCC，CRL-3216)，细胞密度为70％左右。
(2)24小时后荧光显微镜(Life AMF4305)观察荧光信号。
(3)48小时后RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞，跑蛋白胶。Westernblot检测CYP4V2的表达。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-actin(Abclonal，AC026)，goat-anti-rabbit(Abclonal，AS014)。
结果如图3和图4所示，人β-globin内含子插入基因5’非编码区和编码区时后表达效果增强。
实施例4. PolyA信号位点的选择
(1)将实施例2所得pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP载体中的SV40分别替换为BGH，WPRE，WPRE-SV40和WPRE-BGH，序列如SEQ ID NO:19-21所示，得到pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP-BGH，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP-WPRE，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP-WPRE-SV40，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP-WPRE-BGH。该部分由北京擎科生物负责基因合成和亚克隆。
(2)将步骤(1)所得载体将测序验证后使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提取质粒。
(3)按照实施例1步骤(5)的方法利用PEI(Polysciences 24765-1)分别将本实施例步骤(2)所得质粒转染提前铺于6孔板的293T细胞(ATCC，CRL-3216)，细胞密度为70％左右。
(4)24小时后荧光显微镜(Life AMF4305)观察荧光信号。
(5)48小时后RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞，跑蛋白胶。Westernblot检测CYP4V2的表达。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-actin(Abclonal，AC026)，goat-anti-rabbit(Abclonal，AS014)。
结果如图5所示，其中M(mock)为空白对照，S为SV40，B为BGH，W为WPRE，WS为WPRE-SV40，WB为WPRE-BGH。各实验组相对于对照组均能够检测到CYP4V2的表达。
实施例5.表达载体构建
(1)pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH，pAV-OPEFS-RdCVF-BGH，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(卡纳抗性)的构建。pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-EGFP-BGH中氨苄抗性基因替换为卡纳抗性基因，由苏州金唯智负责载体改造；pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:90所示)，pAV-OPEFS-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:96所示)，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:106所示)由苏州金唯智负责相关基因的合成和载体(卡纳抗性)改造。
(2)pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:93所示)，pAV-p5-intron-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:99所示)，pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:113所示)(卡纳抗性)的构建。37℃酶切pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH，pAV-OPEFS-RdCVF-BGH，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(卡纳抗性)2h得到线性化的载体，凝胶电泳回收。酶切体系如下：
Figure BDA0002670028150000331
(3)从pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-EGFP中PCR扩增得到P5-intron片段，凝胶电泳回收。所用正向引物如SEQ ID NO:46所示，反向引物如如SEQ ID NO:55所示。
(4)将酶切的回收载体和需要与其重组的线性片段连接，连接体系(置于冰上操作)如下：
Figure BDA0002670028150000332
在50℃水浴锅内放置40min，取5μl反应液转化transtb13大肠杆菌感受态细胞，摇菌测序，使用中提试剂盒(Omega，D6915-04)提质粒。
实施例6. 293T细胞中的表达载体表达情况检测
(1)按照实施例1步骤(5)的方法利用PEI(Polysciences 24765-1)将实施例5步骤(1)改造得到的pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH，pAV-OPEFS-RdCVF-BGH，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH质粒转染提前铺于6孔板的293T细胞(ATCC，CRL-3216)，细胞密度为70％左右。
(2)48小时后收集细胞培养基上清(sup)，细胞用PBS洗后使用RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞(lys)，Western blot检测各组上清或细胞裂解液(lys)中CYP4V2和/或RdCVF的表达。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-actin(Abclonal,AC026),goat-anti-rabbit(Abclonal,AS014),RdCVF Antibody(TXNL6 Antibody，H00115861-D01P)。
结果如图6所示，其中M(mock)为空白对照，C表示OPEFS-CYP4V2组，C-R表示OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF组，R表示OPEFS-RdCVF组。空白对照组M组细胞的裂解液(lys)和细胞培养基上清(sup)中均没有CYP4V2或者RdCVF的表达；pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH转染的细胞裂解液中有CYP4V2的表达；pAV-OPEFS-RdCVF-BGH转染的细胞上清和裂解液中有RdCVF的表达；pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH转染的细胞裂解液中有CYP4V2的表达，同时细胞裂解液和上清中有RdCVF的表达。
实施例7. ARPE-19细胞中的表达载体表达情况检测
(1)按照实施例1步骤(5)的方法利用PEI(Polysciences 24765-1)将实施例5步骤(1)改造得到的pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH，pAV-OPEFS-RdCVF-BGH，pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH质粒转染提前铺于6孔板的ARPE-19细胞(ATCC，CRL-2302)，细胞密度为70％左右。
(2)48小时后收集细胞培养基上清(sup)，细胞用PBS洗后使用RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞(lys)，Western blot检测各组上清或细胞裂解液(lys)中CYP4V2和/或RdCVF的表达。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-actin(Abclonal,AC026),goat-anti-rabbit(Abclonal,AS014),TXNL6 Antibody(H00115861-D01P)。
结果如图7所示，其中M(mock)为空白对照，C表示OPEFS-CYP4V2组，C-R表示OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF组，R表示OPEFS-RdCVF组。空白对照组mock组细胞的裂解液和细胞培养基上清中均没有CYP4V2或者RdCVF的表达；pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH转染的细胞裂解液中有CYP4V2的表达；pAV-OPEFS-RdCVF-BGH转染的细胞上清和细胞裂解液中有RdCVF的表达；pAV-OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH，转染的细胞裂解液中有CYP4V2的表达，同时上清和细胞裂解液中有RdCVF的表达。
实施例8.病毒载体
(一)AAV血清型的选择：使用包装GFP报告基因的AAV2/2,AAV2/5,AAV2/8,AAV2/9血清型病毒(购自山东维真生物科技有限公司)，对野生型小鼠进行视网膜下腔注射。1个月后切片进行视网膜组织形态学观察。结果如图8所示，双箭头表示EGFP报告基因的表达范围，选择对视网膜偏嗜性较好的AAV2/8血清型。
AAV2/8载体的构建：
(1)在pAAV-RC5-Amp(购自北京西美杰科技有限公司，载体序列如SEQ ID NO:133所示)基础上改造。PCR扩增除Amp以外的pAAV-RC5序列，所用引物为RC5-F/RC5-R，如SEQ IDNO:56-57所示。
(2)Kana部分采用PCR方法从pEGFP-N1上扩增得到，所用引物为Kana-F/Kana-R，如SEQ ID NO:58-59所示。
(3)将以上PCR得到的两种DNA片段，采用同源重组的方法得到pAAV-RC5-Kana.
(4)在pAAV-RC5-Kana的基础上改造，采用PCR方法扩增除RC5-cap以外的pAAV-Kana序列，所用引物为RC5-Kana-F/RC5-Kana-R，如SEQ ID NO:60-61所示。
(5)将基因合成的RC8-cap序列(北京擎科生物，序列如SEQ ID NO:134所示)，与步骤(4)得到的pAAV-Kana线性化载体采用同源重组的方法得到pAAV-RC8-Kana(即AAV2/8)，载体序列如SEQ ID NO:135所示。
(二)AAV-helper选择：选择通用型AAV-helper辅助质粒将抗性由氨苄改为卡纳。具体改造过程如下：
1)在pAAV-helper-Amp(购自北京西美杰科技有限公司，载体序列如SEQ ID NO:136所示)基础上改造。采用PCR方法扩增除Amp以外的pAAV-helper序列，所用引物为RC5-F/RC5-R，如SEQ ID NO:56-57所示。
2)Kana部分采用PCR方法从pEGFP-N1上扩增得到，所用引物为Kana-F/Kana-R，如SEQ ID NO:58-59所示。
3)将以上PCR得到的两种DNA片段，采用同源重组的方法得到pAAV-helper-Kana，(即AAV-helper)，载体序列如SEQ ID NO:137所示。
实施例9.病毒包装和纯化
(一)病毒包装
(1)第0天：细胞接种(接种数为1x107)，将293T细胞接种于15cm培养皿中。
(2)第1天：293T细胞量在80％-90％时，换含10％血清(上海吉泰依科赛，FSP500)的完全培养基(Gibco，C11965500BT)20ml，进行质粒转染，具体转染体系见表5。
表5 转染体系
Figure BDA0002670028150000351
Figure BDA0002670028150000361
表5中的表达载体为按照实施例5的方法构建得到的表达载体。(3)第2天：转染12-18小时后换新鲜完全培养基30ml。
(4)第3天：转染48小时换新鲜完全培养基30ml。
(5)第4天：转染72h后按照常规方法胰酶消化293T细胞，并收集至50ml离心管中，用PBS洗两次，1200rpm离心5min，吸干PBS，冻存于-80℃冰箱。
(二)病毒纯化
1)将本实施例步骤(5)所得的AAV293T细胞15℃-25℃解冻。
2)每个15cm培养皿用2ml细胞裂解液(150mM NaCl，50mM Tris，pH8.5)重悬细胞(每个50ml离心管收集了3个15cm培养皿的细胞，3个即为6ml细胞裂解液)。
3)离心管内加入细胞裂解液半数体积(3ml)的氯仿，拧紧管口，水平放置于37℃摇床250rpm摇动30min。
4)加入水相四分之一体积(1.5ml)5M的氯化钠，混匀。转移至高速离心管，11000rpm离心25min。
5)取上层水相，将交界处不易吸取的部分转移至1.5ml离心管，12000rpm离心30s，合并上清，往上层水相中加入核酸酶(Benzonase)至终浓度50U/ml，加入脱氧胆酸纳至终浓度0.4％，添加终浓度为10mM的MgCl2，0.5mM的CaCl2，5IU/ml的Turbo DNase I，25ug/ml的RNaseA(储存液浓度10mg/ml)。
6)37℃水浴30min。
7)加入水相四分之一(2ml)体积的50％PEG8000，震荡混匀，冰上放置1hr，11000rpm离心25min。
8)吸取并弃上清，再次离心1min，去除残余上清。
9)按最终溶解体积需求加入PBS，吹打悬浮，转移至1.5ml离心管，转移时小体积移液(<200μl)，避免因沉淀粘附而损失病毒。
10)加入500μl氯仿，震荡，12000rpm离心20min。
11)无菌条件下吸取上清，分装-80℃保存。
实施例10.病毒滴度测定
(一)标品pAAV-EGFP的配制
1.标品梯度：1x108拷贝/5μl，1x107拷贝/5μl，1x106拷贝/5μl，1x105拷贝/5μl，1x104拷贝/5μl，1x103拷贝/μl，1x102拷贝/5μl。
2.稀释步骤：
a.将原液十倍稀释后用Nano定量，以此定量结果为准做后续稀释。
b.将定量后的样品逐级稀释质粒至1ng/μl。
c.将1ng/μl样品稀释至1x108拷贝/μl。
d.将1x108拷贝/μl稀释液五倍稀释至1x108拷贝/5μl。
e.依次十倍稀释至1x102拷贝/5μl。
(二)样品的处理与稀释
1. 17μl DNase1+1ml 1×buffer(全式金GD-201-01)配制成50U/ml的buffer。
2. 吸取实施例9步骤11)获得的待测样品5μl加入95μl步骤1配制的buffer中稀释样品(10倍稀释)。
3. 混合均匀(涡旋振荡5s)，PCR仪上37℃放置30min；75℃放置15min。
4. 震荡混匀步骤3的反应液，吸取其中50μl，加入450μl去核酶水中，作为第一稀释梯度(200倍稀释)。
5. 吸取步骤4混匀的第一梯度反应液50μl，加入450μl去核酶水中，作为第二稀释梯度(2000倍稀释)。
6. 吸取步骤5混匀的第一梯度反应液50μl，加入450μl去核酶水中，作为第三稀释梯度(2000倍稀释)。
(三)荧光定量PCR
表6 荧光定量PCR扩增体系：
SYBR Master Mix 2×(ABI,4472908) 10μl
10uM ITR-F(如SEQ ID NO:154所示) 1μl
10uM ITR-R(如SEQ ID NO:155所示) 1μl
待测样品 5μl
H2O 3μl
Total 20μl
表7 荧光定量PCR扩增条件(ABI 7500实时荧光定量PCR仪)：
Figure BDA0002670028150000381
表8 病毒滴度定量结果
Figure BDA0002670028150000382
检测结果表8显示AAV-OPEFS-EGFP、AAV-OPEFS-CYP4V2病毒滴度分别为1.00E+13vg/ml，3.06E+13vg/ml，可用于后续感染实验；本申请实施例中使用的其他病毒的滴度测定均以本实施例的方法进行。
实施例11.不同剂量病毒感染人iPSC分化的RPE细胞
(1)人诱导多潜能干细胞(IPSC)的制备。使用Urineasy尿液细胞分离试剂盒(北京赛贝，CA3102500)从尿液中提取肾上皮细胞，使用Urineasy尿液细胞扩增试剂盒(北京赛贝，CA3103200)培养扩增，选取3-4代汇合度达到70-80％细胞进行重编程实验。重编程实验使用hiPSC重编程试剂盒(北京赛贝，CA5002002)，按照试剂盒说明书中的操作方法进行操作，获得人IPSC用于下一步细胞分化实验。
(2)RPE细胞的制备。按照文献(da Cruz,L.,et al.(2018)，Phase 1clinicalstudy of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch inage-related macμlar degeneration，Nat Biotechnol 36(4):328-337.)中记载的方法制备RPE细胞。将3*104/cm2人IPSC培养于T25瓶的TESR-E8培养基4ml(STEMCELL,CAT#05990,#05991)中，5天后更换为含有20％的血清替代物(Gibco，CAT#A3181502)6ml的培养基(Gibco，CAT#10829018)，培养2天后换为6ml无血清培养基(Gibco，CAT#10829018)继续培养约20周。得到椭圆形深色的可分裂细胞，即RPE细胞。图9显示了荧光显微镜(Life AMF4305)在白光下分别在4、10、10倍镜下观察到的肾上皮细胞、IPSC细胞、RPE细胞。
(3)采用剂量梯度(MOI＝0，1x103，1x104，1x105)将含有pAV-OPEFS-EGFP-BGH或pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH的包装病毒感染等量人iPSC分化的RPE细胞。
(4)72h后消化细胞，并将各组分为三份，一份用cell titer glow(Promega，G9241)按照说明书分析细胞死亡情况。一份按照实施例6步骤(2)的方法Western blot检测CYP4V2的表达。一份用于提取RNA，RT-qPCR检测炎症因子mRNA水平：NLRP3,TNF-α,IFN-γ。其中，使用RNA提取试剂盒(天根，DP430)按照说明书提取RNA；使用反转录试剂盒(Takara，RR407A)按照说明书反转录cDNA。RT-qPCR按照实施例10步骤(三)的方法进行，RT-qPCR引物序列如SEQ ID NO:138-145所示。
结果如图10A-10D显示，随着pAV-OPEFS-EGFP-BGH病毒滴度的增加，EGFP表达量随之增加，炎症因子TNF-α和NLRP3表达水平随之增加，细胞死亡率随之增加；随着pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH病毒滴度的增加，CYP4V2表达量随之增加，炎症因子TNF-α和NLRP3表达水平随之增加，细胞死亡率随之增加。说明对于人iPSC分化的RPE细胞，高滴度的AAV病毒存在细胞毒性，因此可以选择1x104以下的剂量用于后续人iPSC分化的RPE细胞实验。
实施例12.不同病毒感染BCD病人iPSC分化的RPE细胞的效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQID NO:93所示)；B:pAV-p5-intron-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:99所示)；C:pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:113所示)；D:pAV-p5-intron-EGFP-BGH。
(2)采用MOI＝1x104的病毒A,B,C,D以及1/2MOI的病毒A+1/2MOI的病毒B(下文成为E组)感染等量BCD病人(基因型为CYP4V2：c.802-8_810del17bpinsGC纯合突变)iPSC分化的RPE细胞，RPE细胞的制备方法见实施例11。BCD病人为于2018年11月至2018年12月在北京大学第三医院眼科收治的患者。北京大学第三医院伦理委员会批准了本研究的所有方面，并从受试者(或其法定监护人)处获得了样品采集的知情同意书。患者尿液样本在收集后1小时内按照实施例11的方法进行操作。
(3)72h后显微镜下观察脂质沉积情况。
(4)收细胞，收集细胞培养基上清(sup)；细胞用PBS洗后使用RIPA裂解液(北京普利莱C1053-100)裂解细胞，得到细胞裂解液(lys)，western检测蛋白表达水平。所使用抗体：anti-CYP4V2(Atlas，HPA029122)，anti-β-actin(Abclonal,AC026)，goat-anti-rabbit(Abclonal,AS014)，TXNL6 Antibody(H00115861-D01P)。
蛋白表达结果如图11A显示，无病毒感染的空白对照M(Mock)组的BCD病人iPSC分化的RPE细胞无CYP4V2或RdCVF表达；感染病毒D组的BCD病人iPSC分化的RPE细胞无CYP4V2或RdCVF表达，有EGFP表达；感染病毒A组的BCD病人iPSC分化的RPE细胞裂解液中可检测到CYP4V2表达；感染病毒B组的BCD病人iPSC分化的RPE细胞上清和细胞裂解液中可检测RdCVF表达；感染病毒C组及E组的BCD病人iPSC分化的RPE细胞裂解液中可检测到CYP4V2表达，同时细胞上清和细胞裂解液中可检测RdCVF表达。
脂质沉积观察结果如图11B显示，与M组相比，A组、C组和E组的脂质沉积情况都有改善。D组由于EGFP表达与脂质染色的荧光互相感染，故不计入比较。
实施例13.病毒转染BCD小鼠的启动子选择
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQID NO:93所示)；B:pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:90所示)。启动子A：p5-intron；启动子B：OPEFS。BCD小鼠(购自北京百奥赛图基因生物技术有限公司，Cyp4v3-/-)1月龄进行视网膜下腔注射，两种启动子病毒分别注射10只小鼠，双侧眼球注射治疗载体(pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:93所示)/pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:90所示))，注射后3个月观察。
视网膜下腔注射方法：
1)准备实验物品，将小鼠用1％阿托品散瞳，后按80mg/kg氯胺酮+8mg/kg甲苯噻嗪安腹腔内注射麻醉。
2)麻醉后再次用1％阿托品散瞳，然后将小鼠置于眼外科手术显微镜(Topcon，OMS800)的动物实验平台前方，在小鼠眼球上滴加0.5％丙美卡因局麻。
3)以荧光素钠：病毒＝100：1的浓度在病毒里加入荧光素钠原液，用移液枪吸混。
4)用胰岛素针在小鼠眼球睫状体平坦部预扎一个小孔，用微量注射器的针头穿过该小孔后进入小鼠眼球玻璃体腔，这时在小鼠眼球上滴加适量2％羟甲基纤维素使在镜下能见到小鼠眼底，再继续将针头避开晶状体插入对侧周边的视网膜下，缓慢推入带有荧光素钠的病毒，每只眼睛注射量为1μl，病毒浓度为1x109，以荧光素钠为指示剂判断是否注射入视网膜下腔。
术后用生理盐水清洗眼球表面，置于笼子里等小鼠苏醒。
(2)在体眼底照相观察结晶样沉积情况
1)取空白对照(KO)、注射启动子A:pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQID NO:93所示)、启动子B:pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:90所示)的小鼠，小鼠眼球用1％阿托品散瞳，后按80mg/kg氯胺酮+8mg/kg甲苯噻嗪安腹腔内注射麻醉。
2)使麻醉后的小鼠平躺于Micro III小动物视网膜影像系统(Phoenix ResearchLaboratory，Micro III)的实验台，在小鼠眼球上滴加适量2％羟甲基纤维素以改善镜头及角膜的接触效果。
3)升降、旋转实验台调整小鼠眼睛的位置，调整焦距与光强得到小鼠眼底图像，用Micro III软件拍摄。
4)摄片完成后，利用GraphPad Prism软件进行结晶沉积定量分析。
眼底摄片结果如图12显示；图13为注射含小鼠有不同启动子的病毒后，小鼠的眼底结晶数量统计结果(n＝5)。图12和13表明注射含有不同启动子的病毒后，眼底结晶沉积情况均有所改善。
(3)视网膜组织形态学观察：
1)固定脱水：颈椎脱臼处死小鼠，摘取眼球，将小鼠眼球放入1.5ml EP管内，加入1ml4％多聚甲醛4℃过夜。然后将眼球转入盛有1ml 30％蔗糖溶液的1.5ml EP管内脱水，眼球沉底即可。
2)将小鼠眼球放入装有冷冻包埋剂(OCT)的1.5ml EP管中，用镊子将小鼠眼睛摆成直视前方的方位，盖好EP管后放入液氮内，待完全冻上后可进行冰冻切片，切片厚度为7μm。4℃丙酮固定10min后，放入-80℃保存。
3)取出切片，待切片恢复至室温后，用PBS洗3次，每次5min。
4)将玻片无组织处擦干，每张切片滴加40μl封闭液(5％驴血清)，室温封闭1h。
5)用5％驴血清稀释一抗，滴加40μl左右抗体工作液，使完全覆盖小鼠眼球组织，4℃过夜。本实验所用一抗有：CYP4V2(1：50，购自Sigma)，
6)取出玻片，PBS洗3次，每次5min。
7)用PBS以1:800的比例稀释二抗(购自Thermo Fisher Scientific)，滴加40μl左右二抗工作液，使完全覆盖小鼠眼睛组织，室温孵育1h。
8)PBS洗3遍后，滴加DAPI稀释液(1：5000)，室温孵育15min。
9)在载玻片中滴加防荧光淬灭封片剂，盖上盖玻片，-20℃避光保存。
10)用配备有NIS-Elements C软件的尼康A1激光共聚焦显微镜观察，拍照。
图14的免疫荧光结果显示，注射启动子A病毒和启动子B病毒的BCD小鼠均可以表达CYP4V2(图中双箭头指示范围)。
实施例14.病毒感染BCD小鼠的剂量选择
(1)按照实施例13的方法验证病毒剂量。BCD小鼠(Cyp4v3-/-)1月龄进行视网膜下腔注射，双侧眼球注射治疗载体pAV-OPEFS-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:90所示)，每只眼分别注射1E8vg，1E9vg，1E10vg病毒。注射后3个月观察。
结晶样沉积情况如图15的摄片结果所示；图16为注射1E8vg和1E9vg病毒的BCD小鼠与未注射病毒的BCD小鼠相同面积眼底结晶数量的统计结果。与未注射病毒BCD小鼠相比，注射1E8vg，1E9vg病毒的BCD小鼠显示结晶沉积数量减少，注射1E9vg病毒的BCD小鼠结晶数量减少更明显。注射1E10vg病毒的BCD小鼠显示结晶沉积情况未见明显改善，且损伤严重。
(2)剥离RPE细胞层，提RNA，检测炎症因子TNF-α、IFN-γ、NLRP3的表达水平。提取RNA和反转录过程按照实施例11步骤(4)方法进行，RT-qPCR按照实施例10步骤(三)的方法进行。qPCR引物序列如SEQ ID NO:146-153所示。
图17显示注射1E10vg病毒使得炎症因子TNF-α、IFN-γ、NLRP3表达升高，说明1E10vg的病毒剂量对于BCD小鼠有毒副反应，1E9vg好于1E8vg。因此，选择以1E10vg以下的病毒剂量病毒剂量进行后续实验。
实施例15.不同病毒转染BCD小鼠的效果
(一)p5-intron启动子病毒感染BCD小鼠的效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQID NO:93所示)；B:pAV-p5-intron-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:99所示)；C:pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:113所示)。
(2)取1月龄BCD小鼠(Cyp4v3-/-)分为五组：KO组，A组，B组，A+B组，C组，使用1E9vg的病毒A,B,C以及病毒A+病毒B(A、B分别为5E8vg)，KO组为空白对照，不做处理。按照实施例13的方法进行视网膜下腔注射。
(3)按照实施例13的方法体眼底照相观察结晶样沉积情况。图18显示使用不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后的BCD小鼠眼底摄片结果显示结晶沉积情况。图19为使用不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后的BCD小鼠眼底结晶数量统计结果(n＝5)。结果表明病毒A+B组和病毒C组的小鼠结晶数量减少更显著。病毒B组小鼠眼底结晶情况未见明显改善。
(4)在体视网膜功能检查：视网膜电图(ERG)
1)小鼠暗适应：将小鼠暗适应至少16小时，之后所有操作在暗红光下进行。
2)小鼠麻醉：按80mg/kg氯胺酮+8mg/kg甲苯噻嗪安腹腔内注射麻醉。
3)麻醉完成后，在暗红光照明下小鼠眼睛用1％阿托品散瞳，将小鼠用胶带固定放置在视觉电生理仪Espion E2的动物实验平台前方，双眼一致，充分暴露。将地电极针插入小鼠尾巴根部，参考电极针插入小鼠下颌，两个金环记录电极夹在动物实验平台的电极支架上，调整其角度，使其分别轻微的接触左右眼角膜的中心顶端，滴加适量2％羟甲基纤维素，改善金环电极及角膜的接触效果。
4)在计算机Espion E2系统内输入小鼠编号与月龄信息后运行程序。分别行暗适应闪光强度为0.003，0.01，0.1，1，3，10，100cd·s/m2(背景光强度为0cd·s/m2，刺激间隔为15s，记录3个ERG信号的平均值)；明适应闪光强度为3，10，30，100cd·s/m2(明适应时间5min，背景光强度为30cd·s/m2，刺激间隔为15s，记录5个ERG信号的平均值)。程序运行结束后自动保存运行结果，使用GraphPad Prism统计结果。
图20为使用不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后BCD小鼠的ERG记录结果，结果显示病毒B组小鼠ERG波幅没有明显改变，病毒A组，病毒A+B组，病毒C组小鼠的ERG波幅均有增高(p<0.05)，且病毒A+B组和病毒C组好于病毒A组(p<0.05)。
(5)按照实施例13步骤(3)的方法检测BCD小鼠CYP4V2、RdCVF表达情况。RdCVF(1：50，H00115861-D01P)。
图21为使用不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后的BCD小鼠免疫荧光染色图。结果显示病毒A组小鼠表达CYP4V2(双箭头指示范围)，病毒B组小鼠表达RdCVF(单箭头指示范围)，病毒A+B组和病毒C组均可检测到CYP4V2和RdCVF的表达。
(6)小鼠眼球RPE铺片染色检查RPE细胞数量及形态
1)在1.5mlEP管中加入预冷的PBS，处死小鼠后将小鼠眼球取下，浸入PBS中15min。
2)将小鼠眼球转移到1ml 4％多聚甲醛的1.5mlEP管中固定1h。
3)在体视显微镜(Olympus，SZ61-SET)下去除小鼠眼球前节，将神经视网膜层与RPE层分离，并将RPE层剪成4瓣。
4)将RPE铺片放入预冷的PBS中清洗3次，每次5min。
5)将RPE铺片放入0.1％Triton中通透20min，后用PBS清洗3次，每次5min。
6)将RPE铺片放入96孔板的一个孔内，加入按1：200比例PBS稀释后的Phalloidin工作液，室温孵育1h。
7)PBS清洗3次，每次5min，将RPE铺片至于载玻片上展平，滴加少量封片剂后用盖玻片封片，在Nikon荧光显微镜下观察。
图22的Phalloidin标记的F-actin染色结果显示，注射启动子A病毒和启动子B病毒的BCD小鼠与未注射病毒的BCD小鼠相比，RPE细胞的六边形形态更完整，排列紧密。
图22的Phalloidin标记的F-actin染色结果显示，B组相对于KO组没有明显变化，病毒A+B组和C组相对于其他三组显示RPE细胞的六边形形态更完整，排列紧密，图23取同等面积计数RPE细胞数量统计结果显示，病毒A+B组和病毒C组的同等面积内RPE细胞数量多于病毒A组(n＝5)。
综合结晶样沉积、视网膜电图(ERG)和RPE细胞数量及形态观察结果可知，单独表达RdCVF(B组)没有改善BCD小鼠的结晶样沉积、视网膜电图(ERG)和RPE细胞数量及形态的情况；RdCVF与CYP4V2共表达(A+B组和C组)则显著提高了单独表达CYP4V2对于BCD小鼠的结晶样沉积、视网膜电图(ERG)和RPE细胞数量及形态的改善情况，表明共表达CYP4V2和RdCVF相较于单独表达CYP4V2或RdCVF有明显的协同作用。
(二)启动子后不含有内含子的病毒感染BCD小鼠的ERG效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:91所示)；B:pAV-p5-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:97所示)；C:pAV-p5-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:107所示)。
(2)取1月龄BCD小鼠(Cyp4v3-/-)分为五组：KO组，A组，B组，A+B组，C组，使用1E9vg的病毒A,B,C以及病毒A+病毒B(A、B分别为5E8vg)，KO组为空白对照，不做处理。按照实施例13的方法进行视网膜下腔注射。
(3)按照本实施例(一)步骤(4)的方法进行在体视网膜功能检查：视网膜电图(ERG)。图24为使用上述不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后BCD小鼠的ERG记录结果，结果显示病毒B组小鼠ERG波幅没有明显改变，病毒A组，病毒A+B组，病毒C组小鼠的ERG波幅均有增高(p<0.05)，且病毒A+B组和病毒C组好于病毒A组(p<0.05)。
(三)p1启动子病毒感染BCD小鼠的ERG效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p1-CYP4V2-BGH(表达序列如SEQ ID NO:92所示)；B:pAV-p1-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:98所示)；C:pAV-p1-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH(表达序列如SEQ ID NO:108所示)。
(2)取1月龄BCD小鼠(Cyp4v3-/-)分为五组：KO组，A组，B组，A+B组，C组，使用1E9vg的病毒A,B,C以及病毒A+病毒B(A、B分别为5E8vg)，KO组为空白对照，不做处理。按照实施例13的方法进行视网膜下腔注射。
(3)按照本实施例(一)步骤(4)的方法进行在体视网膜功能检查：视网膜电图(ERG)。图25为使用上述不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后BCD小鼠的ERG记录结果，结果显示病毒B组小鼠ERG波幅没有明显改变，病毒A组，病毒A+B组，病毒C组小鼠的ERG波幅均有增高(p<0.05)，且病毒A+B组和病毒C组好于病毒A组(p<0.05)。
(四)WPRE-SV40poly A信号位点病毒感染BCD小鼠的ERG效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-intron-CYP4V2-WPRE-SV40(表达序列如SEQ ID NO:94所示)；B:pAV-p5-intron-RdCVF-WPRE-SV40(表达序列如SEQ ID NO:100所示)；C:pAV-p5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF-WPRE-SV40(表达序列如SEQ ID NO:114所示)。
(2)取1月龄BCD小鼠(Cyp4v3-/-)分为五组：KO组，A组，B组，A+B组，C组，使用1E9vg的病毒A,B,C以及病毒A+病毒B(A、B分别为5E8vg)，KO组为空白对照，不做处理。按照实施例13的方法进行视网膜下腔注射。
(3)按照本实施例(一)步骤(4)的方法进行在体视网膜功能检查：视网膜电图(ERG)。图26为使用上述不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后BCD小鼠的ERG记录结果，结果显示病毒B组小鼠ERG波幅没有明显改变，病毒A组，病毒A+B组，病毒C组小鼠的ERG波幅均有增高(p<0.05)，且病毒A+B组和病毒C组好于病毒A组(p<0.05)。
(五)不包含信号位点病毒感染BCD小鼠的效果
(1)按照实施例7的方法包装病毒：A:pAV-p5-CYP4V2(如SEQ ID NO:117所示)；B:pAV-p5-RdCVF(如SEQ ID NO:120所示)；C:pAV-p5-CYP4V2-P2A-RdCV(如SEQ ID NO:122所示)。
(2)取1月龄BCD小鼠(Cyp4v3-/-)分为五组：KO组，A组，B组，A+B组，C组，使用1E9vg的病毒A,B,C以及病毒A+病毒B(A、B分别为5E8vg)，KO组为空白对照，不做处理。按照实施例13的方法进行视网膜下腔注射。
(3)按照本实施例(一)步骤(4)的方法进行在体视网膜功能检查：视网膜电图(ERG)。
图27为使用上述不同病毒进行视网膜下腔注射治疗后BCD小鼠的ERG记录结果，结果显示，与对照相比，病毒B组小鼠ERG波幅没有明显改变，病毒A组，病毒A+B组，病毒C组小鼠的ERG波幅均有增高，且病毒A+B组和病毒C组好于病毒A组(p<0.05)。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方式的范围内。
序列表
<110> 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院）；北京中因科技有限公司
<120> CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途
<130> 0138-PA-007CN
<160> 155
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 345
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS启动子
<400> 1
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtat caaggttaca agacaggttt 240
aaggagacca atagaaactg ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg 300
cacctattgg tcttactgac atccactttg cctttctctc cacag 345
<210> 2
<211> 212
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EFS启动子
<400> 2
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac ag 212
<210> 3
<211> 1162
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EF1a启动子
<400> 3
gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag aagttggggg 60
gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg 120
atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag 180
tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag gtaagtgccg 240
tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta cgggttatgg cccttgcgtg ccttgaatta 300
cttccacctg gctccagtac gtgattcttg atcccgagct ggagccaggg gcgggccttg 360
cgctttagga gccccttcgc ctcgtgcttg agttgaggcc tggcctgggc gctggggccg 420
ccgcgtgcga atctggtggc accttcgcgc ctgtctcgct gctttcgata agtctctagc 480
catttaaaat ttttgatgac ctgctgcgac gctttttttc tggcaagata gtcttgtaaa 540
tgcgggccag gatctgcaca ctggtatttc ggtttttggg gccgcgggcg gcgacggggc 600
ccgtgcgtcc cagcgcacat gttcggcgag gcggggcctg cgagcgcggc caccgagaat 660
cggacggggg tagtctcaag ctggccggcc tgctctggtg cctggcctcg cgccgccgtg 720
tatcgccccg ccctgggcgg caaggctggc ccggtcggca ccagttgcgt gagcggaaag 780
atggccgctt cccggccctg ctccaggggg ctcaaaatgg aggacgcggc gctcgggaga 840
gcgggcgggt gagtcaccca cacaaaggaa aggggccttt ccgtcctcag ccgtcgcttc 900
atgtgactcc acggagtacc gggcgccgtc caggcacctc gattagttct ggagcttttg 960
gagtacgtcg tctttaggtt ggggggaggg gttttatgcg atggagtttc cccacactga 1020
gtgggtggag actgaagtta ggccagcttg gcacttgatg taattctcct tggaatttgc 1080
cctttttgag tttggatctt ggttcattct caagcctcag acagtggttc aaagtttttt 1140
tcttccattt caggtgtcgt ga 1162
<210> 4
<211> 939
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CAG启动子
<400> 4
ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga 60
cgtcaatggg tggagtsaat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc 120
atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg 180
cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg 240
ctattaccat ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct 300
ccccaccccc aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg 360
gggggggggg ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga 420
ggcggagagg tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg 480
cgaggcggcg gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg 540
cgacgctgcc ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc 600
tgactgaccg cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc tccgggctgt 660
aattagcgct tggtttaatg acggcttgtt tcttttctgt ggctgcgtga aagccttgag 720
gggctccggg agggcccttt gtgcgggggg agcggctcgg ggctgtccgc ggggggacgg 780
ctgccttcgg gggggacggg gcagggcggg gttcggcttc tggcgtgtga ccggcggctc 840
tagagcctct gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt 900
gctggttatt gtgctgtctc atcattttgg caaagaatt 939
<210> 5
<211> 1614
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RPE65启动子
<400> 5
tattgtgcaa ataagtgctc actccaaatt agtggtatat ttattgaagt ttaatattgt 60
gtttgtgata cagaagtatt tgctttaatt ctaaataaaa attttatgct tttattgctg 120
gtttaagaag atttggatta tccttgtact ttgaggagaa gtttcttatt tgaaatattt 180
tggaaacagg tcttttaatg tggaaagata gatattaatc tcctcttcta ttactctcca 240
agatccaaca aaagtgatta taccccccaa aatatgatgg tagtatctta tactaccatc 300
attttatagg catagggctc ttagctgcaa ataatggaac taactctaat aaagcagaac 360
gcaaatattg taaatattag agagctaaca atctctggga tggctaaagg atggagcttg 420
gaggctaccc agccagtaac aatattccgg gctccactgt tgaatggaga cactacaact 480
gccttggatg ggcagagata ttatggatgc taagccccag gtgctaccat taggacttct 540
accactgtcc ctaacgggtg gagcccatca catgcctatg ccctcactgt aaggaaatga 600
agctactgtt gtatatcttg ggaagcactt ggattaattg ttatacagtt ttgttgaaga 660
agacccctag ggtaagtagc cataactgca cactaaattt aaaattgtta atgagtttct 720
caaaaaaaat gttaaggttg ttagctggta tagtatatat cttgcctgtt ttccaaggac 780
ttctttgggc agtaccttgt ctgtgctggc aagcaactga gacttaatga aagagtattg 840
gagatatgaa tgaattgatg ctgtatactc tcagagtgcc aaacatatac caatggacaa 900
gaaggtgagg cagagagcag acaggcatta gtgacaagca aagatatgca gaatttcatt 960
ctcagcaaat caaaagtcct caacctggtt ggaagaatat tggcactgaa tggtatcaat 1020
aaggttgcta gagagggtta gaggtgcaca atgtgcttcc ataacatttt atacttctcc 1080
aatcttagca ctaatcaaac atggttgaat actttgttta ctataactct tacagagtta 1140
taagatctgt gaagacaggg acagggacaa tacccatctc tgtctggttc ataggtggta 1200
tgtaatagat atttttaaaa ataagtgagt taatgaatga gggtgagaat gaaggcacag 1260
aggtattagg gggaggtggg ccccagagaa tggtgccaag gtccagtggg gtgactggga 1320
tcagctcagg cctgacgctg gccactccca cctagctcct ttctttctaa tctgttctca 1380
ttctccttgg gaaggattga ggtctctgga aaacagccaa acaactgtta tgggaacagc 1440
aagcccaaat aaagccaagc atcaggggga tctgagagct gaaagcaact tctgttcccc 1500
ctccctcagc tgaaggggtg gggaagggct cccaaagcca taactccttt taagggattt 1560
agaaggcata aaaaggcccc tggctgagaa cttccttctt cattctgcag ttgg 1614
<210> 6
<211> 2000
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-Pf启动子
<400> 6
acccacctca tcctgcacct gtcactgcgt gggaccctgt gctccaggca ggggcacctc 60
actgccccct gagctcattt tacccctcct ggctctgcag catttctgac catttctgcc 120
caggccgaga ctcactgctg cccagagcaa tctcccttct ctccttctgg aggggagggg 180
ttgtatgtta cccgcctggt tttatccaca gaggttagca gagactgata cagacaaacc 240
ctttttcttt ctaattttag attcaagagc acatgtgcag gtttgttaaa tttgcctgac 300
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 360
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 420
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 480
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 540
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 600
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 660
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 720
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 780
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 840
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 900
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 960
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 1020
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 1080
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 1140
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 1200
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 1260
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 1320
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 1380
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 1440
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 1500
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 1560
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1620
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1680
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1740
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1800
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1860
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1920
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1980
cgcggccgcc agccggggcg 2000
<210> 7
<211> 1700
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P1启动子
<400> 7
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 60
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 120
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 180
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 240
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 300
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 360
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 420
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 480
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 540
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 600
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 660
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 720
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 780
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 840
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 900
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 960
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 1020
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 1080
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 1140
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 1200
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 1260
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1320
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1380
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1440
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1500
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1560
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1620
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1680
cgcggccgcc agccggggcg 1700
<210> 8
<211> 1400
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P2启动子
<400> 8
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 60
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 120
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 180
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 240
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 300
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 360
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 420
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 480
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 540
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 600
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 660
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 720
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 780
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 840
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 900
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 960
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1020
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1080
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1140
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1200
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1260
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1320
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1380
cgcggccgcc agccggggcg 1400
<210> 9
<211> 1100
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P3启动子
<400> 9
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 60
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 120
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 180
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 240
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 300
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 360
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 420
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 480
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 540
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 600
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 660
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 720
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 780
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 840
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 900
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 960
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1020
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1080
cgcggccgcc agccggggcg 1100
<210> 10
<211> 800
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P4启动子
<400> 10
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 60
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 120
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 180
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 240
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 300
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 360
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 420
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 480
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 540
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 600
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 660
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 720
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 780
cgcggccgcc agccggggcg 800
<210> 11
<211> 500
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P5启动子
<400> 11
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg 500
<210> 12
<211> 200
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P6启动子
<400> 12
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 60
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 120
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 180
cgcggccgcc agccggggcg 200
<210> 13
<211> 133
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人β-globin内含子
<400> 13
gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat agaaactggg cttgtcgaga 60
cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc ttactgacat ccactttgcc 120
tttctctcca cag 133
<210> 14
<211> 99
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> SV40 内含子
<400> 14
gtaagtttag tctttttgtc ttttatttca ggtcccggat ccggtggtgg tgcaaatcaa 60
agaactgctc ctcagtggat gttgccttta cttctaggc 99
<210> 15
<211> 296
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工内含子
<400> 15
gaattaattc gctgtctgcg agggccagct gttggggtga gtactccctc tcaaaagcgg 60
gcatgacttc tgcgctaaga ttgtcagttt ccaaaaacga ggaggatttg atattcacct 120
ggcccgcggt gatgcctttg agggtggccg cgtccatctg gtcagaaaag acaatctttt 180
tgttgtcaag cttgaggtgt ggcaggcttg agatctggcc atacacttga gtgacaatga 240
catccacttt gcctttctct ccacaggtgt ccactcccag gtccaactgc aggtcg 296
<210> 16
<211> 409
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> hybrid CBA/MVM内含子
<400> 16
ggagtcgctg cgacgctgcc ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc 60
gccccggctc tgactgaccg cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc 120
tccgggctgt aattagcgct tggtttaatg acggcttgtt tcttttctgt ggctgcgtga 180
aagccttgag gggctccggg agggcccttt gtgcgggggg agcggctcgg ggctgtccgc 240
ggggggacgg ctgccttcgg gggggacggg gcagggcggg gttcggcttc tggcgtgtga 300
ccggcggctc tagagcctct gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc 360
tgggcaacgt gctggttatt gtgctgtctc atcattttgg caaagaatt 409
<210> 17
<211> 122
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> SV40信号位点
<400> 17
aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca 60
aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct 120
ta 122
<210> 18
<211> 225
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> BGH 信号位点
<400> 18
ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60
tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120
tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180
gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatgg 225
<210> 19
<211> 589
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> WPRE信号位点
<400> 19
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589
<210> 20
<211> 717
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> WPRE-SV40信号位点
<400> 20
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcg gtaacaactt 600
gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa 660
agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatctta 717
<210> 21
<211> 820
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> WPRE-BGH信号位点
<400> 21
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tcgagctgtg 600
ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa 660
ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt 720
aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa 780
gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg ggctctatgg 820
<210> 22
<211> 66
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2A剪切肽
<400> 22
ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60
ggacct 66
<210> 23
<211> 63
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> T2A剪切肽
<400> 23
ggaagcggag agggcagagg aagtctgcta acatgcggtg acgtcgagga gaatcctgga 60
cct 63
<210> 24
<211> 69
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E2A剪切肽
<400> 24
ggaagcggac agtgtactaa ttatgctctc ttgaaattgg ctggagatgt tgagagcaac 60
cctggacct 69
<210> 25
<211> 75
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> F2A剪切肽
<400> 25
ggaagcggag tgaaacagac tttgaatttt gaccttctca agttggcggg agacgtggag 60
tccaaccctg gacct 75
<210> 26
<211> 22
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2A剪切肽
<400> 26
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 27
<211> 22
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> T2A剪切肽
<400> 27
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 28
<211> 23
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E2A剪切肽
<400> 28
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 29
<211> 25
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> F2A剪切肽
<400> 29
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 30
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-Pf启动子正向引物
<400> 30
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccggat ccacccacct catcct 46
<210> 31
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P1启动子正向引物
<400> 31
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccgctg aggtttgagt ttctat 46
<210> 32
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P2启动子正向引物
<400> 32
cgtctagtac tagtcgcgta ggatcccccc atcttcattc ccactc 46
<210> 33
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P3启动子正向引物
<400> 33
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccgcat ccaggacatt cagttt 46
<210> 34
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P4启动子正向引物
<400> 34
cgtctagtac tagtcgcgta ggatcccctc gcccgccttc ctctcc 46
<210> 35
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P5启动子正向引物
<400> 35
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccgagc cggatgcgcc ttcctt 46
<210> 36
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P6启动子正向引物
<400> 36
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccgcgc aggaacagcc ccgtgg 46
<210> 37
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-Pf/P1/P2/P3/P4/P5/P6启动子反向引物
<400> 37
agagccccgc catggtggcg gaattccgcc ccggctggcg gccgcg 46
<210> 38
<211> 18
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP载体线性化正向引物
<400> 38
gaattccgcc accatggc 18
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-CAG-CYP4V2-P2A-EGFP载体线性化反向引物
<400> 39
tacgcgacta gtactagacg 20
<210> 40
<211> 28
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EF1a正向引物
<400> 40
cgtaggatcc gctccggtgc ccgtcagt 28
<210> 41
<211> 30
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EF1a反向引物
<400> 41
cgtagaattc tcacgacacc tgaaatggaa 30
<210> 42
<211> 31
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EFS正向引物
<400> 42
cgtaggatcc gggcagagcg cacatcgccc a 31
<210> 43
<211> 30
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EFS反向引物
<400> 43
cgtagaattc ctgtgttctg gcggcaaacc 30
<210> 44
<211> 89
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-overlapR1引物
<400> 44
gagtcttctc tgtctcgaca agcccagttt ctattggtct ccttaaacct gtcttgtaac 60
cttgatactt acctgtgttc tggcggcaa 89
<210> 45
<211> 89
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-overlapR2引物
<400> 45
cagtgaattc ctgtggagag aaaggcaaag tggatgtcag taagaccaat aggtgcctat 60
cagaaacgca agagtcttct ctgtctcga 89
<210> 46
<211> 46
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P5F引物
<400> 46
cgtctagtac tagtcgcgta ggatccgagc cggatgcgcc ttcctt 46
<210> 47
<211> 31
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-P5(in)反向引物
<400> 47
ttgatactta ccgccccggc tggcggccgc g 31
<210> 48
<211> 35
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> β-globin intron（c）正向引物
<400> 48
agccggggcg gtaagtatca aggttacaag acagg 35
<210> 49
<211> 50
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> β-globin intron反向引物
<400> 49
agccagagcc ccgccatggt ggcggaattc ctgtggagag aaaggcaaag 50
<210> 50
<211> 33
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-Fpr引物序列
<400> 50
cgccagccgg ggcggaattc cgccaccatg gcg 33
<210> 51
<211> 34
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-E1-R引物序列
<400> 51
aaccttgata cttacctcgc ccgtccggct tcat 34
<210> 52
<211> 48
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-E2-F引物序列
<400> 52
cctttctctc cacagaattt tttcagcaga tcattgagta cacagagg 48
<210> 53
<211> 45
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CYP4V2-R
<400> 53
gtagctccgc ttccacgcgt tttatcgtcg tcatccttat aatcg 45
<210> 54
<211> 40
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Intron-F
<400> 54
agccggacgg gcgaggtaag tatcaaggtt acaagacagg 40
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Intron-R
<400> 55
tctgctgaaa aaattctgtg gagagaaagg caa 33
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RC5-F
<400> 56
ctgtcagacc aagtttactc 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RC5-R
<400> 57
cacatttccc cgaaaagtgc 20
<210> 58
<211> 40
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Kana-F
<400> 58
gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt 40
<210> 59
<211> 41
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Kana-R
<400> 59
gagtaaactt ggtctgacag tcagaagaac tcgtcaagaa g 41
<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RC5-Kana-F
<400> 60
ttgcttgtta atcaataaac 20
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RC5-Kana-R
<400> 61
acctgattta aatcatttat 20
<210> 62
<211> 1575
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人CYP4V2编码序列
<400> 62
atggcggggc tctggctggg gctcgtgtgg cagaagctgc tgctgtgggg cgcggcgagt 60
gccctttccc tggccggcgc cagtctggtc ctgagtctgc tgcagagggt ggcgagctac 120
gcgcggaaat ggcagcagat gcggcccatc cccacggtgg cccgcgccta cccactggtg 180
ggccacgcgc tgctgatgaa gccggacggg cgagaatttt ttcagcagat cattgagtac 240
acagaggaat accgccacat gccgctgctg aagctctggg tcgggccagt gcccatggtg 300
gccctttata atgcagaaaa tgtggaggta attttaacta gttcaaagca aattgacaaa 360
tcctctatgt acaagttttt agaaccatgg cttggcctag gacttcttac aagtactgga 420
aacaaatggc gctccaggag aaagatgtta acacccactt tccattttac cattctggaa 480
gatttcttag atatcatgaa tgaacaagca aatatattgg ttaagaaact tgaaaaacac 540
attaaccaag aagcatttaa ctgctttttt tacatcactc tttgtgcctt agatatcatc 600
tgtgaaacag ctatggggaa gaatattggt gctcaaagta atgatgattc cgagtatgtc 660
cgtgcagttt atagaatgag tgagatgata tttcgaagaa taaagatgcc ctggctttgg 720
cttgatctct ggtaccttat gtttaaagaa ggatgggaac acaaaaagag ccttcagatc 780
ctacatactt ttaccaacag tgtcatcgcg gaacgggcca atgaaatgaa cgccaatgaa 840
gactgtagag gtgatggcag gggctctgcc ccctccaaaa ataaacgcag ggcctttctt 900
gacttgcttt taagtgtgac tgatgacgaa gggaacaggc taagtcatga agatattcga 960
gaagaagttg acaccttcat gtttgagggg cacgatacaa ctgcagctgc aataaactgg 1020
tccttatacc tgttgggttc taacccagaa gtccagaaaa aagtggatca tgaattggat 1080
gacgtgtttg ggaagtctga ccgtcccgct acagtagaag acctgaagaa acttcggtat 1140
ctggaatgtg ttattaagga gacccttcgc ctttttcctt ctgttccttt atttgcccgt 1200
agtgttagtg aagattgtga agtggcaggt tacagagttc taaaaggcac tgaagccgtc 1260
atcattccct atgcattgca cagagatccg agatacttcc ccaaccccga ggagttccag 1320
cctgagcggt tcttccccga gaatgcacaa gggcgccatc catatgccta cgtgcccttc 1380
tctgctggcc ccaggaactg tataggtcaa aagtttgctg tgatggaaga aaagaccatt 1440
ctttcgtgca tcctgaggca cttttggata gaatccaacc agaaaagaga agagcttggt 1500
ctagaaggac agttgattct tcgtccaagt aatggcatct ggatcaagtt gaagaggaga 1560
aatgcagatg aacgc 1575
<210> 63
<211> 1578
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 黑猩猩CYP4V2编码序列
<400> 63
atggcggggc tctggctggg gctcgtgtgg cagaagctgc tgctgtgggg cgcggcgagt 60
gccgtttccc tggcgggcgc cagtctggtc ctgagcctgc tgcagagggt agcgacctac 120
gcgcggaaat ggcagcagat gcggcccatc cccacggtgg cccgcgccta cccactggtg 180
ggccacgcgc tgctgatgaa gccggacggg cgagaatttt ttcagcagat cattgagtac 240
acagaggagt accgccacat gccgctgctg aagctctggg tcgggccggt gcccatggtg 300
gccctttata atgcagaaaa tgtggaggta attttaacta gttcaaagca aattgacaaa 360
tcctctatgt acaagttttt agaaccatgg cttggcctag gacttcttac aagtactgga 420
aacaaatggc gctccaggag aaagatgtta acacccactt tccattttac cattctggaa 480
gatttcttag atatcatgaa tgaacaagca aatacattgg ttaagaaact tgaaaaacac 540
attaaccaag aagcatttaa ctgctttttt tacatcactc tttgtgcctt agatatcatc 600
tgtgaaacag ctatggggaa gaatattggt gctcaaagta atgatgattc cgagtatgtc 660
cgtgcagttt atagaatgag tgagatgata tttcgaagaa taaagatgcc ctggctttgg 720
cttgatctct ggtaccttat gtttaaagaa ggatgggaac acaaaaagag ccttaagatc 780
ctacatactt ttaccaacag tgtcatcgct gaacgggcca atgaaatgaa cgccaatgaa 840
gactgtagag gtgatggcag gggctctgcc ccctccaaaa ataaacgcag ggcctttctt 900
gacttgcttt taagtgtgac tgatgacgaa gggaacaggc taagtcatga agatattcga 960
gaagaagttg acaccttcat gtttgagggg cacgacacaa ctgcagctgc aataaactgg 1020
tccttatacc tgttgggttc taacccagaa gtccagaaaa aagtggatca tgaattggat 1080
gacgtgtttg ggaagtctga ccgtcccgct acggtagaag acctgaagaa acttcggtat 1140
ttggaatgtg ttattaagga gacccttcgc ctttttcctt ctgttccttt atttgcccgt 1200
agtgttagtg aagattgtga agtggcaggt tacagagttc taaaaggcac tgaagccgtc 1260
atcattccct atgcattgca cagagatccg agatacttcc ccaaccccga ggagttccag 1320
cctgagcggt tcttccccaa gaatgcacaa gggcgccatc catatgccta tgtgcccttc 1380
tctgctggcc ccaggaactg tataggtcaa aagtttgctg tgatggagga aaagaccatt 1440
ctttcatgca tcctgaggca cttttggata gaatccaacc agaaaagaga agagcttggt 1500
ctagaaggac agttgattct tcgtccaagt aatggcatct ggatcaagtt gaagaggaga 1560
aatgcagatg aacgctaa 1578
<210> 64
<211> 1578
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大猩猩CYP4V2编码序列
<400> 64
atggcggggc tctggctggg gctcgtgtgg cagaagctgc tgctgtgggg cgcggcgagt 60
gccgtttccc tggccggcgc cagtctggtc ctgagcctgc tgcagagggt ggcgagctac 120
gcgcggaaat ggcagcagat gcgacccatc cccacggtgg cccgcgccta cccactggtg 180
ggccacgcgc tgctgatgaa gccggacggg cgagaatttt ttcagcagat cattgagtac 240
acagaggagt accgccacat gccgctgctg aagctctggg tcgggccggt gcccatggtg 300
gccctttata atgcagaaaa tgtggaggta attttaacta gttcaaagca aattgacaaa 360
tcctctatgt acaagttttt agaaccatgg cttggcctag gacttcttac aagtactgga 420
aacaaatggc gctccaggag aaagatgtta acacccactt tccattttac cattctggaa 480
gatttcttag atatcatgaa tgaacaagca aatatattgg ttaagaaact tgaaaaacac 540
attaaccaag aagcatttaa ctgctttttt tacatcactc tttgtgcctt agatatcatc 600
tgtgaaacag ctatggggaa gaatattggt gctcaaagta atgatgattc cgagtatgtc 660
cgtgcagttt atagaatgag tgagatgata tttcgaagaa taaagatgcc ctggctttgg 720
cttgatctct ggtaccttat gtttaaagaa ggatgggaac acaaaaagag ccttaagatc 780
ctacatactt ttaccaacag tgtcatcgct gaacgggcca atgaaatgaa cgccaatgaa 840
gactgtagag gtgatggcag gggctctgcc ccctccaaaa ataaacgcag ggcctttctt 900
gacttgcttt taagtgtgac tgatgacgaa gggaacaggc taagtcatga agatattcga 960
gaagaagttg acaccttcat gtttgagggg cacgacacaa ctgcagctgc aataaactgg 1020
tccttatacc tgttgggttc taacccagaa gtccagaaaa aagtggatca tgaattggat 1080
gacgtgtttg ggaagtctga ccgtcccgct acggtagaag acctgaagaa acttcggtat 1140
ctggaatgtg ttattaagga gacccttcgc ctttttcctt ctgttccttt atttgcccgt 1200
agtgttagtg aagattgtga agtggcaggt tacagagttc taaaaggcac tgaagccgtc 1260
atcattccct atgcattgca cagagatcca agatacttcc ccaaccccga ggagttccag 1320
cctgagcgtt tcttccccga gaatgcacaa gggcgccatc cgtatgccta cgtgcccttc 1380
tctgctggcc ccaggaactg tataggtcaa aagtttgctg tgatggaaga aaagaccatt 1440
ctttcgtgca tcctgagaca cttttggata gaatccaacc agaaaagaga agagcttggt 1500
ctagaaggac agttgattct tcgtccaagt aatggcatct ggatcaagtt gaagaggaga 1560
aatgcagatg aacgctaa 1578
<210> 65
<211> 1578
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 食蟹猕猴CYP4V2编码序列
<400> 65
atggcgggca tctggctggg gctcgtgtgg cagaagctgc tgctgtgggg cgcggcgagt 60
gccgtgtccc tggccggcgc cagtctggtc ctgagcctgc tgcagagggt ggcgagctac 120
gtgaggaaat ggcagcagat gcggcccatc cccacggtgg cccgcgccta cccactggtg 180
ggccacgcgc tgctgatgaa gcgggacggg cgagaatttt ttcagcagat cattgagtac 240
acagaggaat accgccacat gccactcctg aagctctggg tcgggccggt gcccatggtg 300
gccctttata atgcagaaaa tgtggaggta attttaacta gttcaaagca aattgacaaa 360
tcctctatgt acaagttttt agaaccatgg cttggcctag gacttcttac aagtactgga 420
aacaaatggc gctccaggag aaagatgtta acacccactt tccattttac cattctggaa 480
gatttcttag atatcatgaa tgaacaagca aatatattgg ttaagaaact tgaaaaacat 540
gttaaccaag aagcatttaa ctgctttgtt tacatcactc tttgtgcctt agatatcatc 600
tgtgaaacag ctatggggaa gaatattggt gctcaaagta acgatgattc cgagtatgtc 660
cgtgcagttt atagaatgag tgagatgata tttcgaagaa taaagatgcc gtggctttgg 720
cttgacctct ggtaccttat gtttaaagag ggatgggaac acaaaaagag ccttaagatc 780
ctacatgctt ttaccaacaa tgttatcgct gaacgggcca atgaaatgaa cgtggatgaa 840
gactgtagag gtgatggcag ggactccgcc ccctccaaaa ataaacgcag ggcctttctt 900
gacttgcttt taagtgtgac tgacgacgaa gggaacaggc taagtcatga agatattcga 960
gaagaagttg acaccttcat gtttgagggc cacgacacaa ctgcagctgc aatgaactgg 1020
tccttatacc tgttggggtc taacccagaa gtccagaaaa aagtggacca tgaactggat 1080
gacgtgtttg ggaggtctga ccgtcccgct actgtagaag acctgaagaa acttcggtat 1140
ctggaatgtg ttattaagga gacccttcgc ctttttcctt ctgttccttt atttgcccgc 1200
agtgttagtg aagattgtga agtggcaggt tacagagttc tgaaaggcac tgaagccgtc 1260
atcattccct atgcattgca tagagatcca agatacttcc ccaaccctga ggagttccgg 1320
cctgagcggt tcttccccga gaatgcacaa gggcgccatc catatgccta cgtgcccttc 1380
tctgctggcc ccaggaactg tataggtcaa aagtttgctg tgatggaaga aaagaccatt 1440
ctttcatgca tcctaaggca cttttggata gaatccaacc agaaaagaga agaacttggt 1500
ctagaaggac agttgattct tcgtccaact aatggcatct ggatcaagtt gaagaggaga 1560
aatgcagatg aaccctaa 1578
<210> 66
<211> 1578
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠 CYP4V3编码序列
<400> 66
atgttgtggc tgtggttagg gctcagtggg cagaaactat tgctttgggg cgcagcgagc 60
gcggtctccc tggccggcgc cactatcctg atcagcatct ttccgatgct ggtaagctac 120
gcgcggaaat ggcagcagat gcggtcaatc ccgtcggtgg cccgcgccta ccccttggtg 180
ggacacgcgc tttatatgaa gcccaacaac gcagaatttt ttcagcagct aatttattac 240
acagaagaat ttcgacacct gccgatcatt aaactttgga ttggacccgt gcccctggtg 300
gcactttata aggcagagaa tgtggaggtg attttgacca gttctaagca aattgataaa 360
tcgtttttgt acaagttcct acagccatgg ctgggactag gacttcttac aagtacgggg 420
agcaaatggc gcaccaggag gaagatgcta acgcccactt tccattttac cattctggag 480
aacttcttgg atgtcatgaa tgagcaagca aatatattgg ttaataagct tgaaaaacac 540
gtcaaccaag aagcctttaa ttgttttttt tacatcactc tttgtgctct ggatataatc 600
tgtgaaacgg ctatggggaa gaacatcgga gctcaaagca ataatgattc cgagtatgtc 660
cgtacagtgt ataggatgag tgatatgata tatagaagaa tgaagatgcc ctggctttgg 720
tttgaccttt ggtaccttgt gtttaaagaa ggacgggacc acaaaagggg actcaaatgc 780
ctacatactt tcaccaacaa tgtcattgct gaacgagtca aagaaaggaa ggcagaggaa 840
gactggacgg gtgctggcag gggtcctatc ccctccaaaa ataagcgcaa ggctttcctt 900
gacttgcttt tgagtgtgac tgatgaggaa ggaaacagat taagccagga agacatccga 960
gaggaagttg acaccttcat gtttgagggt cacgatacaa ctgctgctgc aatcaactgg 1020
tccttatacc tattgggcac gaatccagaa gtccagagga aagtggatca ggagctggat 1080
gaagtgtttg gaagatccca tcgtcctgtc accttggaag acctgaagaa acttaaatat 1140
ttggattgcg tcattaagga gactctccga gttttcccat ctgtcccttt atttgcccgg 1200
agtcttagcg aggactgtga agtgggcggt tacaaagtca caaaaggaac ggaagcaatc 1260
atcattccct acgcactaca ccgagacccc agatacttcc cagatccaga ggaattccga 1320
ccagagcggt tctttcctga aaattcccaa ggacgccatc cctatgccta tgtgccattt 1380
tctgctggac ctcgaaactg tattggtcaa aagtttgctg tcatggagga gaagaccatt 1440
cttgcctgta tcctgaggca gttttgggta gaatccaacc agaagagaga agaactcggc 1500
ctggctggag atttgattct taggccaaat aatggcatct ggatcaagct gaagaggaga 1560
catgaagatg acccctaa 1578
<210> 67
<211> 1578
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大鼠CYP4V3编码序列
<400> 67
atgttgtggc tgtggttagg gctcagcggg cagaagctat tgctttgggg cgcagcgagc 60
gcggtctccg tggccggcgc cactgtcttg ctcaacatcc tgcagatgtt ggtaagctat 120
gcacgaaagt ggcagcagat gcggccaatc ccgtcggtgg ctcgcgctta ccccttggtg 180
ggacatgcgc tgtttatgaa gcccaacaac acagaatttt ttcagcagat aattcagtac 240
acagaagaat tccgacacct gcccatcatt aaactctgga ttggaccagt gcccctggtg 300
gcactttata aggcagagaa tgtggaggtg attttgacca gttcgaagca aattgataaa 360
tcctttatgt acaagttcct acagccatgg ctgggactag gacttcttac aagtactggg 420
agcaaatggc gtgccaggag gaagatgtta acacccagtt tccattttac aattctggag 480
gatttcttag atgtcatgaa tgagcaagca aatatattgg ttaacaagct tgaaaaacat 540
gtcaatcaag aggcctttaa ctgctttttc cccatcactc tttgtgctct ggatataatc 600
tgtgaaacgg ctatggggaa gaacattgga gctcaaagta atggtgattc tgagtatgtc 660
cgtacagtgt ataggatgag cgatatgata tacagaagaa tgaagatgcc ctggttttgg 720
tttgaccttt ggtaccttat gtttaaagaa ggaagggacc acaaaaaggg actaaagagt 780
ctacatactt ttaccaacaa tgtcattgct gaacgggtta atgcaaggaa ggcagagcaa 840
gactgcatag gtgctgggag gggtcctctc ccctcgaaaa ctaagcgcaa ggcctttctt 900
gacttgcttt tgagtgtgac tgatgaggaa ggaaacaaat taagccatga agacatccga 960
gaggaagttg acaccttcat gtttgagggt cacgatacaa ctgctgctgc cataaactgg 1020
tccttatacc tcctgggctc taatccagaa gtccagagga aagtggacaa ggagctggat 1080
gatgtgtttg gaagatccca tcgccctgtc accttggaag acctgaagaa acttaaatat 1140
ctggattgtg tcattaagga gaccctccgt gttttcccat ctgtcccttt atttgcccgg 1200
agtcttagcg aagactgtga agtggcgggt tacaaaatct caaaaggaac ggaagcagtc 1260
atcattccct atgcactaca tcgagaccct agatacttcc cagaccctga ggaattccag 1320
ccagagcggt tctttcctga aaactcccaa ggacgccacc cctatgccta tgtgccattc 1380
tctgctggac ctagaaactg cattggtcaa aagtttgcgg tcatggagga aaagaccatt 1440
cttgcctgta tcctgaggga gttttggata gaatccaacc agaagagaga agaactcggc 1500
ctggctggag atttgattct taggccaaat aatggcatct ggatcaagct gaagaggagg 1560
catgaagatg acccctaa 1578
<210> 68
<211> 1572
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 狗CYP4V2编码序列
<400> 68
cccctgtggc tggtgcccct tgggcagaaa ctgcttttgt ggggcgcctt gggccccccc 60
tccttggggg gcccccccct agtggtaagg ttcctccaaa tgctggcaag ttacgcccaa 120
aaatgccacc aaatgagggc cttccccagt ttaccggggg cttacccgtt ggtggaacac 180
tcccttttaa taaacccccc cggaaaagaa ttttttcagc aggtcattct ttacagcgaa 240
gaatcccgac acctgccact cctgaaactc tggcttgggc ccataccaat agtggccatt 300
tatagtgctg aaaatgtaga ggtaatttta actagttcaa ggcaaatcga caaatcctat 360
gtatacaagt tcctagaacc atggcttggc ctaggacttc ttacaagtac tggaaacaaa 420
tggcgatcta ggagaaaaat gttaacaccc actttccatt ttacgattct ggaagatttc 480
ttagatgtca tgaatgaaca cgcaaatata ttggttaata agcttgaaaa acatgttaac 540
caagaagcat ttaactgctt tttttacatc actctttgtg cattagatat aatttgtgaa 600
acagctatgg ggaagaatat tggggctcaa aataatgagg attctgagta tgttcgtgcc 660
atctacagaa tgagtgatac gatacatcga agaatgaaga tgccctggct ctggcttgac 720
tttttgtttc ttatgtttaa agaaggccgg gaacacaaaa ggaacctaga gatcctacat 780
aattttacca ataatgtcat cactgaacgg gccagtgaac tgaagagaga cgaagaacat 840
ggaagtgctg acaaggactg ctccccctcc aaaaataaac gcagagcttt tcttgacttg 900
cttttaaatg tgactgatga tgaagggaac aagctacgtc atgaagatgt tcgagaagaa 960
gttgacacct tcatgtttga gggccatgat acgacagcag cggcgataaa ctggtcctta 1020
tatctcttgg gttcttaccc agaagtccag aaacaagtgg acagtgaact ggaggacgtg 1080
tttgggaagt ctgatcgtcc tgctacctta gaagacctga agaaactcaa atacctggag 1140
tgtgtcatta aggagagcct tcgccttttt ccttcagttc ccttatttgc ccgtaatctt 1200
aacgaagatt gtgtagttgc gggttacaag gttgtgaaag gctcccaagc gatcatcatt 1260
ccctacgcac ttcatagaga tccaagatat ttcccaaatc ccgaggagtt ccagccagag 1320
cggttctttc ctgaaaattt gcaaggacgc cacccatatg catacattcc cttttctgct 1380
ggacccagaa actgtatagg tcaaaggttt gccataatgg aagaaaagac tgttctttcc 1440
tgtgtcctga ggcatttttg ggtagaatcc aaccagaaaa gagaagaact tggtctggca 1500
ggagagttga ttcttcgtcc aactaatggc atctggatca agttgaagag gagaaatgca 1560
gatgaatctt aa 1572
<210> 69
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人RdCVF截短体编码序列
<400> 69
atggcctccc tgttctctgg ccgcatcctg atccgcaaca atagcgacca ggacgagctg 60
gatacggagg ctgaggtcag tcgcaggctg gagaaccggc tggtgctgct gttctttggt 120
gctggggctt gtccacagtg ccaggccttc gtgcccatcc tcaaggactt cttcgtgcgg 180
ctcacagatg agttctatgt actgcgggcg gctcagctgg ccctggtgta cgtgtcccag 240
gactccacgg aggagcagca ggacctgttc ctcaaggaca tgccaaagaa atggcttttc 300
ctgccctttg aggatgatct gaggagg 327
<210> 70
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 黑猩猩RdCVF截短体编码序列
<400> 70
atggcctccc tgttctctgg ccgcatcctg atccgcaaca atagcgacca ggacgaactg 60
gatacggagg ctgaggtcag tcgcaggctg gagaaccggc tggtgctgct gttctttggt 120
gccggggctt gtccacagtg ccaggccttc gtgcccatcc tcaaggactt cttcgtgcgg 180
ctcacagatg agttctatgt actgcgggcg gctcagctgg ccctggtgta cgtgtcccag 240
gactccacgg aggagcagca ggacctgttc ctcaaggaca tgccaaagaa gtggcttttc 300
ctgccctttg aggatgatct gaggagg 327
<210> 71
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大猩猩RdCVF截短体编码序列
<400> 71
atggcctccc tgttctctgg ccgcatcctg atccgcaaca atagcgacca ggacgagctg 60
gatacggagg ctgaggtcag tcgcaggctg gagaaccggc tggtgctgct gttctttggt 120
gctggggctt gtccacagtg ccaggccttc gtgcccatcc tcaaggactt cttcgtgcgg 180
ctcacagatg agttctatgt actgcgggcg gctcagctgg ccctggtgta cgtgtcccag 240
gactccacgg aggagcagca ggacctgttc ctcaaggaca tgccaaagaa atggcttttc 300
ctgccctttg aggatgatct gaggagg 327
<210> 72
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 食蟹猕猴RdCVF截短体编码序列
<400> 72
atggcctccc tgttctctgg ccgcatcctg atccgcaaca atagcgacca ggacgagctg 60
gatacggagg ctgaggtcag tcgcaggctg gagaaccggc tggtgctgct gttctttggt 120
gctggggctt gtccacagtg ccaggccttc gtgcccatcc tcaaggactt cttcgtgcgg 180
ctcacagatg agttctatgt actgcgggcg gctcagctgg ccctggtgta cgtgtcccag 240
gactccacgg aggagcagca ggacctgttc ctcaaggaca tgccaaagaa atggcttttc 300
ctgccctttg aggatgatct gaggagg 327
<210> 73
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠RdCVF截短体编码序列
<400> 73
atggcatctc tcttctctgg acgcatcttg atcaggaaca acagcgacca ggatgaagtg 60
gagacagagg cagagctgag ccgtaggtta gagaatcgtc tggtgttgct gttcttcggc 120
gccggcgcct gtccccagtg ccaggccttt gccccagtcc tcaaagactt cttcgtgcgg 180
ctcactgacg agttctacgt gctgcgggca gcacagctgg ccctggtcta tgtgtcccag 240
gaccctacag aggagcaaca ggacctcttc ctcagggaca tgcctgaaaa atggctcttc 300
ctgccgttcc atgatgaact gaggagg 327
<210> 74
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大鼠RdCVF截短体编码序列
<400> 74
atggtgtctc tcttctctgg ccgcatcttg atcaggaaca acagcgacca ggatgaagtg 60
gagacagagg cagagctgag ccgccggtta gagaatcgtc ttgtgctact gttcttcggt 120
gctggggcct gtccccagtg ccaggccttc gccccagtcc tcaaagactt cttcgtgcgg 180
ctcactgatg agttctacgt gctacgggca gcacagctgg ccctggtcta tgtgtcccag 240
gaccctacag aggagcaaca ggacctgttc ctccgggaca tgcctgaaaa gtggctcttc 300
ctgccgttcc atgatgacct gaggaga 327
<210> 75
<211> 327
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 狗RdCVF截短体编码序列
<400> 75
atggcctcct tgttctctgg ccgcgtcctg attcgcaaca acagtgacca ggacgagctg 60
gacacggagg ccgagctcag ccgcaggctg gagaaccggc tggtgctgct gttctttggc 120
gccgggtcgt gcccgcagtg ccaagccttc gcgcctatcc tcagggattt ctttgtgagg 180
ctcacagatg agttctatgt gctgcgggca gcccaactgg ctctggtgta cgtgtcccag 240
gaccccacag aggagcagca ggatctgttt ctcagggaca tgccgaagaa gtggctcttc 300
ctgccctttg aggatgacct gaggagg 327
<210> 76
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人CYP4V2多肽序列
<400> 76
Met Ala Gly Leu Trp Leu Gly Leu Val Trp Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Leu Ser Leu Ala Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
Leu Leu Gln Arg Val Ala Ser Tyr Ala Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Pro Ile Pro Thr Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Leu Met Lys Pro Asp Gly Arg Glu Phe Phe Gln Gln Ile Ile Glu Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Tyr Arg His Met Pro Leu Leu Lys Leu Trp Val Gly Pro
85 90 95
Val Pro Met Val Ala Leu Tyr Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Ser Met Tyr Lys Phe Leu Glu
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Asn Lys Trp Arg
130 135 140
Ser Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asp Phe Leu Asp Ile Met Asn Glu Gln Ala Asn Ile Leu Val Lys Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Ile Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Tyr Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Asp Asp Ser Glu Tyr Val Arg Ala Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Glu Met Ile Phe Arg Arg Ile Lys Met Pro Trp Leu Trp
225 230 235 240
Leu Asp Leu Trp Tyr Leu Met Phe Lys Glu Gly Trp Glu His Lys Lys
245 250 255
Ser Leu Gln Ile Leu His Thr Phe Thr Asn Ser Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Ala Asn Glu Met Asn Ala Asn Glu Asp Cys Arg Gly Asp Gly Arg Gly
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Lys Asn Lys Arg Arg Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Asp Glu Gly Asn Arg Leu Ser His Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Ile Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Lys Lys Val Asp His Glu Leu Asp Asp Val Phe Gly Lys Ser Asp Arg
355 360 365
Pro Ala Thr Val Glu Asp Leu Lys Lys Leu Arg Tyr Leu Glu Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Val Ser Glu Asp Cys Glu Val Ala Gly Tyr Arg Val Leu Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Val Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asn Pro Glu Glu Phe Gln Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn
435 440 445
Ala Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ser Cys Ile Leu Arg His Phe Trp Ile Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Glu Gly Gln Leu Ile Leu Arg Pro Ser Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Glu Arg
515 520 525
<210> 77
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 黑猩猩CYP4V2多肽序列
<400> 77
Met Ala Gly Leu Trp Leu Gly Leu Val Trp Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Val Ser Leu Ala Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
Leu Leu Gln Arg Val Ala Thr Tyr Ala Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Pro Ile Pro Thr Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Leu Met Lys Pro Asp Gly Arg Glu Phe Phe Gln Gln Ile Ile Glu Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Tyr Arg His Met Pro Leu Leu Lys Leu Trp Val Gly Pro
85 90 95
Val Pro Met Val Ala Leu Tyr Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Ser Met Tyr Lys Phe Leu Glu
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Asn Lys Trp Arg
130 135 140
Ser Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asp Phe Leu Asp Ile Met Asn Glu Gln Ala Asn Thr Leu Val Lys Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Ile Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Tyr Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Asp Asp Ser Glu Tyr Val Arg Ala Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Glu Met Ile Phe Arg Arg Ile Lys Met Pro Trp Leu Trp
225 230 235 240
Leu Asp Leu Trp Tyr Leu Met Phe Lys Glu Gly Trp Glu His Lys Lys
245 250 255
Ser Leu Lys Ile Leu His Thr Phe Thr Asn Ser Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Ala Asn Glu Met Asn Ala Asn Glu Asp Cys Arg Gly Asp Gly Arg Gly
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Lys Asn Lys Arg Arg Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Asp Glu Gly Asn Arg Leu Ser His Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Ile Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Lys Lys Val Asp His Glu Leu Asp Asp Val Phe Gly Lys Ser Asp Arg
355 360 365
Pro Ala Thr Val Glu Asp Leu Lys Lys Leu Arg Tyr Leu Glu Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Val Ser Glu Asp Cys Glu Val Ala Gly Tyr Arg Val Leu Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Val Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asn Pro Glu Glu Phe Gln Pro Glu Arg Phe Phe Pro Lys Asn
435 440 445
Ala Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ser Cys Ile Leu Arg His Phe Trp Ile Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Glu Gly Gln Leu Ile Leu Arg Pro Ser Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Glu Arg
515 520 525
<210> 78
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大猩猩CYP4V2多肽序列
<400> 78
Met Ala Gly Leu Trp Leu Gly Leu Val Trp Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Val Ser Leu Ala Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
Leu Leu Gln Arg Val Ala Ser Tyr Ala Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Pro Ile Pro Thr Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Leu Met Lys Pro Asp Gly Arg Glu Phe Phe Gln Gln Ile Ile Glu Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Tyr Arg His Met Pro Leu Leu Lys Leu Trp Val Gly Pro
85 90 95
Val Pro Met Val Ala Leu Tyr Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Ser Met Tyr Lys Phe Leu Glu
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Asn Lys Trp Arg
130 135 140
Ser Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asp Phe Leu Asp Ile Met Asn Glu Gln Ala Asn Ile Leu Val Lys Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Ile Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Tyr Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Asp Asp Ser Glu Tyr Val Arg Ala Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Glu Met Ile Phe Arg Arg Ile Lys Met Pro Trp Leu Trp
225 230 235 240
Leu Asp Leu Trp Tyr Leu Met Phe Lys Glu Gly Trp Glu His Lys Lys
245 250 255
Ser Leu Lys Ile Leu His Thr Phe Thr Asn Ser Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Ala Asn Glu Met Asn Ala Asn Glu Asp Cys Arg Gly Asp Gly Arg Gly
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Lys Asn Lys Arg Arg Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Asp Glu Gly Asn Arg Leu Ser His Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Ile Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Lys Lys Val Asp His Glu Leu Asp Asp Val Phe Gly Lys Ser Asp Arg
355 360 365
Pro Ala Thr Val Glu Asp Leu Lys Lys Leu Arg Tyr Leu Glu Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Val Ser Glu Asp Cys Glu Val Ala Gly Tyr Arg Val Leu Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Val Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asn Pro Glu Glu Phe Gln Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn
435 440 445
Ala Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ser Cys Ile Leu Arg His Phe Trp Ile Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Glu Gly Gln Leu Ile Leu Arg Pro Ser Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Glu Arg
515 520 525
<210> 79
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 食蟹猕猴CYP4V2多肽序列
<400> 79
Met Ala Gly Ile Trp Leu Gly Leu Val Trp Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Val Ser Leu Ala Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
Leu Leu Gln Arg Val Ala Ser Tyr Val Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Pro Ile Pro Thr Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Leu Met Lys Arg Asp Gly Arg Glu Phe Phe Gln Gln Ile Ile Glu Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Tyr Arg His Met Pro Leu Leu Lys Leu Trp Val Gly Pro
85 90 95
Val Pro Met Val Ala Leu Tyr Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Ser Met Tyr Lys Phe Leu Glu
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Asn Lys Trp Arg
130 135 140
Ser Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asp Phe Leu Asp Ile Met Asn Glu Gln Ala Asn Ile Leu Val Lys Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Val Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Val Tyr Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Asp Asp Ser Glu Tyr Val Arg Ala Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Glu Met Ile Phe Arg Arg Ile Lys Met Pro Trp Leu Trp
225 230 235 240
Leu Asp Leu Trp Tyr Leu Met Phe Lys Glu Gly Trp Glu His Lys Lys
245 250 255
Ser Leu Lys Ile Leu His Ala Phe Thr Asn Asn Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Ala Asn Glu Met Asn Val Asp Glu Asp Cys Arg Gly Asp Gly Arg Asp
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Lys Asn Lys Arg Arg Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Asp Glu Gly Asn Arg Leu Ser His Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Met Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Lys Lys Val Asp His Glu Leu Asp Asp Val Phe Gly Arg Ser Asp Arg
355 360 365
Pro Ala Thr Val Glu Asp Leu Lys Lys Leu Arg Tyr Leu Glu Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Val Ser Glu Asp Cys Glu Val Ala Gly Tyr Arg Val Leu Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Val Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asn Pro Glu Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn
435 440 445
Ala Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ser Cys Ile Leu Arg His Phe Trp Ile Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Glu Gly Gln Leu Ile Leu Arg Pro Thr Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Glu Pro
515 520 525
<210> 80
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠CYP4V3多肽序列
<400> 80
Met Leu Trp Leu Trp Leu Gly Leu Ser Gly Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Val Ser Leu Ala Gly Ala Thr Ile Leu Ile Ser
20 25 30
Ile Phe Pro Met Leu Val Ser Tyr Ala Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Ser Ile Pro Ser Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Tyr Met Lys Pro Asn Asn Ala Glu Phe Phe Gln Gln Leu Ile Tyr Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Phe Arg His Leu Pro Ile Ile Lys Leu Trp Ile Gly Pro
85 90 95
Val Pro Leu Val Ala Leu Tyr Lys Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Phe Leu Tyr Lys Phe Leu Gln
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Ser Lys Trp Arg
130 135 140
Thr Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asn Phe Leu Asp Val Met Asn Glu Gln Ala Asn Ile Leu Val Asn Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Val Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Tyr Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Asn Asp Ser Glu Tyr Val Arg Thr Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Asp Met Ile Tyr Arg Arg Met Lys Met Pro Trp Leu Trp
225 230 235 240
Phe Asp Leu Trp Tyr Leu Val Phe Lys Glu Gly Arg Asp His Lys Arg
245 250 255
Gly Leu Lys Cys Leu His Thr Phe Thr Asn Asn Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Val Lys Glu Arg Lys Ala Glu Glu Asp Trp Thr Gly Ala Gly Arg Gly
275 280 285
Pro Ile Pro Ser Lys Asn Lys Arg Lys Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Glu Glu Gly Asn Arg Leu Ser Gln Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Ile Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Thr Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Arg Lys Val Asp Gln Glu Leu Asp Glu Val Phe Gly Arg Ser His Arg
355 360 365
Pro Val Thr Leu Glu Asp Leu Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Asp Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Val Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Leu Ser Glu Asp Cys Glu Val Gly Gly Tyr Lys Val Thr Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Ile Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asp Pro Glu Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn
435 440 445
Ser Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ala Cys Ile Leu Arg Gln Phe Trp Val Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Ala Gly Asp Leu Ile Leu Arg Pro Asn Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg His Glu Asp Asp Pro
515 520 525
<210> 81
<211> 525
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大鼠CYP4V2多肽序列
<400> 81
Met Leu Trp Leu Trp Leu Gly Leu Ser Gly Gln Lys Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Gly Ala Ala Ser Ala Val Ser Val Ala Gly Ala Thr Val Leu Leu Asn
20 25 30
Ile Leu Gln Met Leu Val Ser Tyr Ala Arg Lys Trp Gln Gln Met Arg
35 40 45
Pro Ile Pro Ser Val Ala Arg Ala Tyr Pro Leu Val Gly His Ala Leu
50 55 60
Phe Met Lys Pro Asn Asn Thr Glu Phe Phe Gln Gln Ile Ile Gln Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Glu Phe Arg His Leu Pro Ile Ile Lys Leu Trp Ile Gly Pro
85 90 95
Val Pro Leu Val Ala Leu Tyr Lys Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu
100 105 110
Thr Ser Ser Lys Gln Ile Asp Lys Ser Phe Met Tyr Lys Phe Leu Gln
115 120 125
Pro Trp Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Ser Lys Trp Arg
130 135 140
Ala Arg Arg Lys Met Leu Thr Pro Ser Phe His Phe Thr Ile Leu Glu
145 150 155 160
Asp Phe Leu Asp Val Met Asn Glu Gln Ala Asn Ile Leu Val Asn Lys
165 170 175
Leu Glu Lys His Val Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Pro Ile
180 185 190
Thr Leu Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn
195 200 205
Ile Gly Ala Gln Ser Asn Gly Asp Ser Glu Tyr Val Arg Thr Val Tyr
210 215 220
Arg Met Ser Asp Met Ile Tyr Arg Arg Met Lys Met Pro Trp Phe Trp
225 230 235 240
Phe Asp Leu Trp Tyr Leu Met Phe Lys Glu Gly Arg Asp His Lys Lys
245 250 255
Gly Leu Lys Ser Leu His Thr Phe Thr Asn Asn Val Ile Ala Glu Arg
260 265 270
Val Asn Ala Arg Lys Ala Glu Gln Asp Cys Ile Gly Ala Gly Arg Gly
275 280 285
Pro Leu Pro Ser Lys Thr Lys Arg Lys Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu
290 295 300
Ser Val Thr Asp Glu Glu Gly Asn Lys Leu Ser His Glu Asp Ile Arg
305 310 315 320
Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala
325 330 335
Ala Ile Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Pro Glu Val Gln
340 345 350
Arg Lys Val Asp Lys Glu Leu Asp Asp Val Phe Gly Arg Ser His Arg
355 360 365
Pro Val Thr Leu Glu Asp Leu Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Asp Cys Val
370 375 380
Ile Lys Glu Thr Leu Arg Val Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg
385 390 395 400
Ser Leu Ser Glu Asp Cys Glu Val Ala Gly Tyr Lys Ile Ser Lys Gly
405 410 415
Thr Glu Ala Val Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr
420 425 430
Phe Pro Asp Pro Glu Glu Phe Gln Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn
435 440 445
Ser Gln Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Val Pro Phe Ser Ala Gly Pro
450 455 460
Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Val Met Glu Glu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ala Cys Ile Leu Arg Glu Phe Trp Ile Glu Ser Asn Gln Lys Arg
485 490 495
Glu Glu Leu Gly Leu Ala Gly Asp Leu Ile Leu Arg Pro Asn Asn Gly
500 505 510
Ile Trp Ile Lys Leu Lys Arg Arg His Glu Asp Asp Pro
515 520 525
<210> 82
<211> 523
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 狗CYP4V2多肽序列
<400> 82
Pro Leu Trp Leu Val Pro Leu Gly Gln Lys Leu Leu Leu Trp Gly Ala
1 5 10 15
Leu Gly Pro Pro Ser Leu Gly Gly Pro Pro Leu Val Val Arg Phe Leu
20 25 30
Gln Met Leu Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Cys His Gln Met Arg Ala Phe
35 40 45
Pro Ser Leu Pro Gly Ala Tyr Pro Leu Val Glu His Ser Leu Leu Ile
50 55 60
Asn Pro Pro Gly Lys Glu Phe Phe Gln Gln Val Ile Leu Tyr Ser Glu
65 70 75 80
Glu Ser Arg His Leu Pro Leu Leu Lys Leu Trp Leu Gly Pro Ile Pro
85 90 95
Ile Val Ala Ile Tyr Ser Ala Glu Asn Val Glu Val Ile Leu Thr Ser
100 105 110
Ser Arg Gln Ile Asp Lys Ser Tyr Val Tyr Lys Phe Leu Glu Pro Trp
115 120 125
Leu Gly Leu Gly Leu Leu Thr Ser Thr Gly Asn Lys Trp Arg Ser Arg
130 135 140
Arg Lys Met Leu Thr Pro Thr Phe His Phe Thr Ile Leu Glu Asp Phe
145 150 155 160
Leu Asp Val Met Asn Glu His Ala Asn Ile Leu Val Asn Lys Leu Glu
165 170 175
Lys His Val Asn Gln Glu Ala Phe Asn Cys Phe Phe Tyr Ile Thr Leu
180 185 190
Cys Ala Leu Asp Ile Ile Cys Glu Thr Ala Met Gly Lys Asn Ile Gly
195 200 205
Ala Gln Asn Asn Glu Asp Ser Glu Tyr Val Arg Ala Ile Tyr Arg Met
210 215 220
Ser Asp Thr Ile His Arg Arg Met Lys Met Pro Trp Leu Trp Leu Asp
225 230 235 240
Phe Leu Phe Leu Met Phe Lys Glu Gly Arg Glu His Lys Arg Asn Leu
245 250 255
Glu Ile Leu His Asn Phe Thr Asn Asn Val Ile Thr Glu Arg Ala Ser
260 265 270
Glu Leu Lys Arg Asp Glu Glu His Gly Ser Ala Asp Lys Asp Cys Ser
275 280 285
Pro Ser Lys Asn Lys Arg Arg Ala Phe Leu Asp Leu Leu Leu Asn Val
290 295 300
Thr Asp Asp Glu Gly Asn Lys Leu Arg His Glu Asp Val Arg Glu Glu
305 310 315 320
Val Asp Thr Phe Met Phe Glu Gly His Asp Thr Thr Ala Ala Ala Ile
325 330 335
Asn Trp Ser Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Tyr Pro Glu Val Gln Lys Gln
340 345 350
Val Asp Ser Glu Leu Glu Asp Val Phe Gly Lys Ser Asp Arg Pro Ala
355 360 365
Thr Leu Glu Asp Leu Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Glu Cys Val Ile Lys
370 375 380
Glu Ser Leu Arg Leu Phe Pro Ser Val Pro Leu Phe Ala Arg Asn Leu
385 390 395 400
Asn Glu Asp Cys Val Val Ala Gly Tyr Lys Val Val Lys Gly Ser Gln
405 410 415
Ala Ile Ile Ile Pro Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro Arg Tyr Phe Pro
420 425 430
Asn Pro Glu Glu Phe Gln Pro Glu Arg Phe Phe Pro Glu Asn Leu Gln
435 440 445
Gly Arg His Pro Tyr Ala Tyr Ile Pro Phe Ser Ala Gly Pro Arg Asn
450 455 460
Cys Ile Gly Gln Arg Phe Ala Ile Met Glu Glu Lys Thr Val Leu Ser
465 470 475 480
Cys Val Leu Arg His Phe Trp Val Glu Ser Asn Gln Lys Arg Glu Glu
485 490 495
Leu Gly Leu Ala Gly Glu Leu Ile Leu Arg Pro Thr Asn Gly Ile Trp
500 505 510
Ile Lys Leu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Glu Ser
515 520
<210> 83
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人RdCVF截短体多肽序列
<400> 83
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Arg Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Leu Asp Thr Glu Ala Glu Val Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Val Pro Ile Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Ser Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Lys Asp Met Pro Lys
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe Glu Asp Asp Leu Arg Arg
100 105
<210> 84
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 黑猩猩RdCVF截短体多肽序列
<400> 84
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Arg Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Leu Asp Thr Glu Ala Glu Val Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Val Pro Ile Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Ser Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Lys Asp Met Pro Lys
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe Glu Asp Asp Leu Arg Arg
100 105
<210> 85
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大猩猩RdCVF截短体多肽序列
<400> 85
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Cys Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Leu Asp Thr Glu Ala Glu Val Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Val Pro Ile Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Ser Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Lys Asp Met Pro Lys
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe Glu Asp Asp Leu Arg Arg
100 105
<210> 86
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 食蟹猕猴RdCVF截短体多肽序列
<400> 86
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Cys Asn Asn Asn Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Leu Asp Thr Glu Ala Glu Val Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Val Pro Ile Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Ser Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Lys Asp Met Pro Lys
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe Glu Asp Glu Leu Arg Arg
100 105
<210> 87
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠RdCVF截短体多肽序列
<400> 87
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Arg Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Val Glu Thr Glu Ala Glu Leu Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Ala Pro Val Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Pro Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Arg Asp Met Pro Glu
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe His Asp Glu Leu Arg Arg
100 105
<210> 88
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 大鼠RdCVF截短体多肽序列
<400> 88
Met Val Ser Leu Phe Ser Gly Arg Ile Leu Ile Arg Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Val Glu Thr Glu Ala Glu Leu Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ala Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Ala Pro Val Leu Lys Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Pro Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Arg Asp Met Pro Glu
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe His Asp Asp Leu Arg Arg
100 105
<210> 89
<211> 109
<212> PRT
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 狗RdCVF截短体多肽序列
<400> 89
Met Ala Ser Leu Phe Ser Gly Arg Val Leu Ile Arg Asn Asn Ser Asp
1 5 10 15
Gln Asp Glu Leu Asp Thr Glu Ala Glu Leu Ser Arg Arg Leu Glu Asn
20 25 30
Arg Leu Val Leu Leu Phe Phe Gly Ala Gly Ser Cys Pro Gln Cys Gln
35 40 45
Ala Phe Ala Pro Ile Leu Arg Asp Phe Phe Val Arg Leu Thr Asp Glu
50 55 60
Phe Tyr Val Leu Arg Ala Ala Gln Leu Ala Leu Val Tyr Val Ser Gln
65 70 75 80
Asp Pro Thr Glu Glu Gln Gln Asp Leu Phe Leu Arg Asp Met Pro Lys
85 90 95
Lys Trp Leu Phe Leu Pro Phe Glu Asp Asp Leu Arg Arg
100 105
<210> 90
<211> 2337
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-CYP4V2-BGH
<400> 90
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtat caaggttaca agacaggttt 240
aaggagacca atagaaactg ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg 300
cacctattgg tcttactgac atccactttg cctttctctc cacaggaatt ccgccaccat 360
ggcggggctc tggctggggc tcgtgtggca gaagctgctg ctgtggggcg cggcgagtgc 420
cctttccctg gccggcgcca gtctggtcct gagtctgctg cagagggtgg cgagctacgc 480
gcggaaatgg cagcagatgc ggcccatccc cacggtggcc cgcgcctacc cactggtggg 540
ccacgcgctg ctgatgaagc cggacgggcg agaatttttt cagcagatca ttgagtacac 600
agaggaatac cgccacatgc cgctgctgaa gctctgggtc gggccagtgc ccatggtggc 660
cctttataat gcagaaaatg tggaggtaat tttaactagt tcaaagcaaa ttgacaaatc 720
ctctatgtac aagtttttag aaccatggct tggcctagga cttcttacaa gtactggaaa 780
caaatggcgc tccaggagaa agatgttaac acccactttc cattttacca ttctggaaga 840
tttcttagat atcatgaatg aacaagcaaa tatattggtt aagaaacttg aaaaacacat 900
taaccaagaa gcatttaact gcttttttta catcactctt tgtgccttag atatcatctg 960
tgaaacagct atggggaaga atattggtgc tcaaagtaat gatgattccg agtatgtccg 1020
tgcagtttat agaatgagtg agatgatatt tcgaagaata aagatgccct ggctttggct 1080
tgatctctgg taccttatgt ttaaagaagg atgggaacac aaaaagagcc ttcagatcct 1140
acatactttt accaacagtg tcatcgcgga acgggccaat gaaatgaacg ccaatgaaga 1200
ctgtagaggt gatggcaggg gctctgcccc ctccaaaaat aaacgcaggg cctttcttga 1260
cttgctttta agtgtgactg atgacgaagg gaacaggcta agtcatgaag atattcgaga 1320
agaagttgac accttcatgt ttgaggggca cgatacaact gcagctgcaa taaactggtc 1380
cttatacctg ttgggttcta acccagaagt ccagaaaaaa gtggatcatg aattggatga 1440
cgtgtttggg aagtctgacc gtcccgctac agtagaagac ctgaagaaac ttcggtatct 1500
ggaatgtgtt attaaggaga cccttcgcct ttttccttct gttcctttat ttgcccgtag 1560
tgttagtgaa gattgtgaag tggcaggtta cagagttcta aaaggcactg aagccgtcat 1620
cattccctat gcattgcaca gagatccgag atacttcccc aaccccgagg agttccagcc 1680
tgagcggttc ttccccgaga atgcacaagg gcgccatcca tatgcctacg tgcccttctc 1740
tgctggcccc aggaactgta taggtcaaaa gtttgctgtg atggaagaaa agaccattct 1800
ttcgtgcatc ctgaggcact tttggataga atccaaccag aaaagagaag agcttggtct 1860
agaaggacag ttgattcttc gtccaagtaa tggcatctgg atcaagttga agaggagaaa 1920
tgcagatgaa cgctaaacgc gtggtttatc cgatccaccg gatctagata agatatccga 1980
tccaccggat ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt 2040
gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattggc 2100
ggccgcctcg agctgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc 2160
cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg 2220
catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca 2280
agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc tctatgg 2337
<210> 91
<211> 2492
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-CYP4V2-BGH
<400> 91
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcgg ggctctggct ggggctcgtg 540
tggcagaagc tgctgctgtg gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg 600
gtcctgagtc tgctgcagag ggtggcgagc tacgcgcgga aatggcagca gatgcggccc 660
atccccacgg tggcccgcgc ctacccactg gtgggccacg cgctgctgat gaagccggac 720
gggcgagaat tttttcagca gatcattgag tacacagagg aataccgcca catgccgctg 780
ctgaagctct gggtcgggcc agtgcccatg gtggcccttt ataatgcaga aaatgtggag 840
gtaattttaa ctagttcaaa gcaaattgac aaatcctcta tgtacaagtt tttagaacca 900
tggcttggcc taggacttct tacaagtact ggaaacaaat ggcgctccag gagaaagatg 960
ttaacaccca ctttccattt taccattctg gaagatttct tagatatcat gaatgaacaa 1020
gcaaatatat tggttaagaa acttgaaaaa cacattaacc aagaagcatt taactgcttt 1080
ttttacatca ctctttgtgc cttagatatc atctgtgaaa cagctatggg gaagaatatt 1140
ggtgctcaaa gtaatgatga ttccgagtat gtccgtgcag tttatagaat gagtgagatg 1200
atatttcgaa gaataaagat gccctggctt tggcttgatc tctggtacct tatgtttaaa 1260
gaaggatggg aacacaaaaa gagccttcag atcctacata cttttaccaa cagtgtcatc 1320
gcggaacggg ccaatgaaat gaacgccaat gaagactgta gaggtgatgg caggggctct 1380
gccccctcca aaaataaacg cagggccttt cttgacttgc ttttaagtgt gactgatgac 1440
gaagggaaca ggctaagtca tgaagatatt cgagaagaag ttgacacctt catgtttgag 1500
gggcacgata caactgcagc tgcaataaac tggtccttat acctgttggg ttctaaccca 1560
gaagtccaga aaaaagtgga tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc 1620
gctacagtag aagacctgaa gaaacttcgg tatctggaat gtgttattaa ggagaccctt 1680
cgcctttttc cttctgttcc tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca 1740
ggttacagag ttctaaaagg cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat 1800
ccgagatact tccccaaccc cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca 1860
caagggcgcc atccatatgc ctacgtgccc ttctctgctg gccccaggaa ctgtataggt 1920
caaaagtttg ctgtgatgga agaaaagacc attctttcgt gcatcctgag gcacttttgg 1980
atagaatcca accagaaaag agaagagctt ggtctagaag gacagttgat tcttcgtcca 2040
agtaatggca tctggatcaa gttgaagagg agaaatgcag atgaacgcta aacgcgtggt 2100
ttatccgatc caccggatct agataagata tccgatccac cggatctaga taactgatca 2160
taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc 2220
ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttggcggccg cctcgagctg tgccttctag 2280
ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 2340
tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 2400
ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag 2460
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<210> 92
<211> 3692
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1-CYP4V2-BGH
<400> 92
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tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 300
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 360
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caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 480
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ttatccgatc caccggatct agataagata tccgatccac cggatctaga taactgatca 3360
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ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 3540
tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 3600
ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag 3660
caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat gg 3692
<210> 93
<211> 2625
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-CYP4V2-BGH
<400> 93
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
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gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
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tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
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cggcgccagt ctggtcctga gtctgctgca gagggtggcg agctacgcgc ggaaatggca 780
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gattcttcgt ccaagtaatg gcatctggat caagttgaag aggagaaatg cagatgaacg 2220
ctaaacgcgt ggtttatccg atccaccgga tctagataag atatccgatc caccggatct 2280
agataactga tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac 2340
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ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 2460
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<210> 94
<211> 3117
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-CYP4V2-WPRE-SV40
<400> 94
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
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tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat 540
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gctggggctc gtgtggcaga agctgctgct gtggggcgcg gcgagtgccc tttccctggc 720
cggcgccagt ctggtcctga gtctgctgca gagggtggcg agctacgcgc ggaaatggca 780
gcagatgcgg cccatcccca cggtggcccg cgcctaccca ctggtgggcc acgcgctgct 840
gatgaagccg gacgggcgag aattttttca gcagatcatt gagtacacag aggaataccg 900
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ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 2820
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 2880
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 2940
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcg gtaacaactt 3000
gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa 3060
agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatctta 3117
<210> 95
<211> 2624
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-CDSintron-CYP4V2-BGH
<400> 95
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gaattcgcca ccatggcggg gctctggctg gggctcgtgt 540
ggcagaagct gctgctgtgg ggcgcggcga gtgccctttc cctggccggc gccagtctgg 600
tcctgagtct gctgcagagg gtggcgagct acgcgcggaa atggcagcag atgcggccca 660
tccccacggt ggcccgcgcc tacccactgg tgggccacgc gctgctgatg aagccggacg 720
ggcgaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa actgggcttg 780
tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac tgacatccac 840
tttgcctttc tctccacaga attttttcag cagatcattg agtacacaga ggaataccgc 900
cacatgccgc tgctgaagct ctgggtcggg ccagtgccca tggtggccct ttataatgca 960
gaaaatgtgg aggtaatttt aactagttca aagcaaattg acaaatcctc tatgtacaag 1020
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aggagaaaga tgttaacacc cactttccat tttaccattc tggaagattt cttagatatc 1140
atgaatgaac aagcaaatat attggttaag aaacttgaaa aacacattaa ccaagaagca 1200
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ttcatgtttg aggggcacga tacaactgca gctgcaataa actggtcctt atacctgttg 1680
ggttctaacc cagaagtcca gaaaaaagtg gatcatgaat tggatgacgt gtttgggaag 1740
tctgaccgtc ccgctacagt agaagacctg aagaaacttc ggtatctgga atgtgttatt 1800
aaggagaccc ttcgcctttt tccttctgtt cctttatttg cccgtagtgt tagtgaagat 1860
tgtgaagtgg caggttacag agttctaaaa ggcactgaag ccgtcatcat tccctatgca 1920
ttgcacagag atccgagata cttccccaac cccgaggagt tccagcctga gcggttcttc 1980
cccgagaatg cacaagggcg ccatccatat gcctacgtgc ccttctctgc tggccccagg 2040
aactgtatag gtcaaaagtt tgctgtgatg gaagaaaaga ccattctttc gtgcatcctg 2100
aggcactttt ggatagaatc caaccagaaa agagaagagc ttggtctaga aggacagttg 2160
attcttcgtc caagtaatgg catctggatc aagttgaaga ggagaaatgc agatgaacgc 2220
taaacgcgtg gtttatccga tccaccggat ctagataaga tatccgatcc accggatcta 2280
gataactgat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc 2340
tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattggcggc cgcctcgagc 2400
tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct 2460
ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct 2520
gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg 2580
ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc ggtgggctct atgg 2624
<210> 96
<211> 1092
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-RdCVF-BGH
<400> 96
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtat caaggttaca agacaggttt 240
aaggagacca atagaaactg ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg 300
cacctattgg tcttactgac atccactttg cctttctctc cacaggaatt ccgccaccat 360
ggcctccctg ttctctggcc gcatcctgat ccgcaacaat agcgaccagg acgagctgga 420
tacggaggct gaggtcagtc gcaggctgga gaaccggctg gtgctgctgt tctttggtgc 480
tggggcttgt ccacagtgcc aggccttcgt gcccatcctc aaggacttct tcgtgcggct 540
cacagatgag ttctatgtac tgcgggcggc tcagctggcc ctggtgtacg tgtcccagga 600
ctccacggag gagcagcagg acctgttcct caaggacatg ccaaagaaat ggcttttcct 660
gccctttgag gatgatctga ggaggtgata aacgcgtggt ttatccgatc caccggatct 720
agataagata tccgatccac cggatctaga taactgatca taatcagcca taccacattt 780
gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa 840
atgaatgcaa ttggcggccg cctcgagctg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt 900
gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat 960
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<210> 97
<211> 1247
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-RdCVF-BGH
<400> 97
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcct ccctgttctc tggccgcatc 540
ctgatccgca acaatagcga ccaggacgag ctggatacgg aggctgaggt cagtcgcagg 600
ctggagaacc ggctggtgct gctgttcttt ggtgctgggg cttgtccaca gtgccaggcc 660
ttcgtgccca tcctcaagga cttcttcgtg cggctcacag atgagttcta tgtactgcgg 720
gcggctcagc tggccctggt gtacgtgtcc caggactcca cggaggagca gcaggacctg 780
ttcctcaagg acatgccaaa gaaatggctt ttcctgccct ttgaggatga tctgaggagg 840
tgataaacgc gtggtttatc cgatccaccg gatctagata agatatccga tccaccggat 900
ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 960
acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattggc ggccgcctcg 1020
agctgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac 1080
cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg 1140
tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca agggggagga 1200
ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc tctatgg 1247
<210> 98
<211> 2447
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1-RdCVF-BGH
<400> 98
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 60
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 120
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 180
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 240
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 300
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 360
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 420
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 480
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 540
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 600
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 660
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 720
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 780
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 840
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 900
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 960
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 1020
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 1080
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 1140
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 1200
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 1260
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1320
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1380
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1440
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1500
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1560
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1620
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1680
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcct ccctgttctc tggccgcatc 1740
ctgatccgca acaatagcga ccaggacgag ctggatacgg aggctgaggt cagtcgcagg 1800
ctggagaacc ggctggtgct gctgttcttt ggtgctgggg cttgtccaca gtgccaggcc 1860
ttcgtgccca tcctcaagga cttcttcgtg cggctcacag atgagttcta tgtactgcgg 1920
gcggctcagc tggccctggt gtacgtgtcc caggactcca cggaggagca gcaggacctg 1980
ttcctcaagg acatgccaaa gaaatggctt ttcctgccct ttgaggatga tctgaggagg 2040
tgataaacgc gtggtttatc cgatccaccg gatctagata agatatccga tccaccggat 2100
ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 2160
acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattggc ggccgcctcg 2220
agctgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac 2280
cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg 2340
tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca agggggagga 2400
ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc tctatgg 2447
<210> 99
<211> 1380
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-RdCVF-BGH
<400> 99
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat 540
agaaactggg cttgtcgaga cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc 600
ttactgacat ccactttgcc tttctctcca caggaattcc gccaccatgg cctccctgtt 660
ctctggccgc atcctgatcc gcaacaatag cgaccaggac gagctggata cggaggctga 720
ggtcagtcgc aggctggaga accggctggt gctgctgttc tttggtgctg gggcttgtcc 780
acagtgccag gccttcgtgc ccatcctcaa ggacttcttc gtgcggctca cagatgagtt 840
ctatgtactg cgggcggctc agctggccct ggtgtacgtg tcccaggact ccacggagga 900
gcagcaggac ctgttcctca aggacatgcc aaagaaatgg cttttcctgc cctttgagga 960
tgatctgagg aggtgataaa cgcgtggttt atccgatcca ccggatctag ataagatatc 1020
cgatccaccg gatctagata actgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta 1080
cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt 1140
ggcggccgcc tcgagctgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg 1200
tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa 1260
ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca 1320
gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg ggctctatgg 1380
<210> 100
<211> 1869
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-RdCVF-WPRE-SV40
<400> 100
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat 540
agaaactggg cttgtcgaga cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc 600
ttactgacat ccactttgcc tttctctcca caggaattcc gccaccatgg cctccctgtt 660
ctctggccgc atcctgatcc gcaacaatag cgaccaggac gagctggata cggaggctga 720
ggtcagtcgc aggctggaga accggctggt gctgctgttc tttggtgctg gggcttgtcc 780
acagtgccag gccttcgtgc ccatcctcaa ggacttcttc gtgcggctca cagatgagtt 840
ctatgtactg cgggcggctc agctggccct ggtgtacgtg tcccaggact ccacggagga 900
gcagcaggac ctgttcctca aggacatgcc aaagaaatgg cttttcctgc cctttgagga 960
tgatctgagg aggtgaacgc gtggtttatc cgatccaccg gatctagata agatatccga 1020
tccaccggat ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt 1080
gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattggc 1140
ggccgcctcg agaatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt 1200
aactatgttg ctccttttac gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct 1260
attgcttccc gtatggcttt cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt 1320
tatgaggagt tgtggcccgt tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac 1380
gcaaccccca ctggttgggg cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct 1440
ttccccctcc ctattgccac ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca 1500
ggggctcggc tgttgggcac tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt 1560
ccttggctgc tcgcctgtgt tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc 1620
ccttcggccc tcaatccagc ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct 1680
cttccgcgtc ttcgccttcg ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg 1740
cggtaacaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa 1800
tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa 1860
tgtatctta 1869
<210> 101
<211> 2329
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 101
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtat caaggttaca agacaggttt 240
aaggagacca atagaaactg ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg 300
cacctattgg tcttactgac atccactttg cctttctctc cacaggaatt ccgccaccat 360
ggcggggctc tggctggggc tcgtgtggca gaagctgctg ctgtggggcg cggcgagtgc 420
cctttccctg gccggcgcca gtctggtcct gagtctgctg cagagggtgg cgagctacgc 480
gcggaaatgg cagcagatgc ggcccatccc cacggtggcc cgcgcctacc cactggtggg 540
ccacgcgctg ctgatgaagc cggacgggcg agaatttttt cagcagatca ttgagtacac 600
agaggaatac cgccacatgc cgctgctgaa gctctgggtc gggccagtgc ccatggtggc 660
cctttataat gcagaaaatg tggaggtaat tttaactagt tcaaagcaaa ttgacaaatc 720
ctctatgtac aagtttttag aaccatggct tggcctagga cttcttacaa gtactggaaa 780
caaatggcgc tccaggagaa agatgttaac acccactttc cattttacca ttctggaaga 840
tttcttagat atcatgaatg aacaagcaaa tatattggtt aagaaacttg aaaaacacat 900
taaccaagaa gcatttaact gcttttttta catcactctt tgtgccttag atatcatctg 960
tgaaacagct atggggaaga atattggtgc tcaaagtaat gatgattccg agtatgtccg 1020
tgcagtttat agaatgagtg agatgatatt tcgaagaata aagatgccct ggctttggct 1080
tgatctctgg taccttatgt ttaaagaagg atgggaacac aaaaagagcc ttcagatcct 1140
acatactttt accaacagtg tcatcgcgga acgggccaat gaaatgaacg ccaatgaaga 1200
ctgtagaggt gatggcaggg gctctgcccc ctccaaaaat aaacgcaggg cctttcttga 1260
cttgctttta agtgtgactg atgacgaagg gaacaggcta agtcatgaag atattcgaga 1320
agaagttgac accttcatgt ttgaggggca cgatacaact gcagctgcaa taaactggtc 1380
cttatacctg ttgggttcta acccagaagt ccagaaaaaa gtggatcatg aattggatga 1440
cgtgtttggg aagtctgacc gtcccgctac agtagaagac ctgaagaaac ttcggtatct 1500
ggaatgtgtt attaaggaga cccttcgcct ttttccttct gttcctttat ttgcccgtag 1560
tgttagtgaa gattgtgaag tggcaggtta cagagttcta aaaggcactg aagccgtcat 1620
cattccctat gcattgcaca gagatccgag atacttcccc aaccccgagg agttccagcc 1680
tgagcggttc ttccccgaga atgcacaagg gcgccatcca tatgcctacg tgcccttctc 1740
tgctggcccc aggaactgta taggtcaaaa gtttgctgtg atggaagaaa agaccattct 1800
ttcgtgcatc ctgaggcact tttggataga atccaaccag aaaagagaag agcttggtct 1860
agaaggacag ttgattcttc gtccaagtaa tggcatctgg atcaagttga agaggagaaa 1920
tgcagatgaa cgcggaagcg gagctactaa cttcagcctg ctgaagcagg ctggagacgt 1980
ggaggagaac cctggaccta tggcctccct gttctctggc cgcatcctga tccgcaacaa 2040
tagcgaccag gacgagctgg atacggaggc tgaggtcagt cgcaggctgg agaaccggct 2100
ggtgctgctg ttctttggtg ctggggcttg tccacagtgc caggccttcg tgcccatcct 2160
caaggacttc ttcgtgcggc tcacagatga gttctatgta ctgcgggcgg ctcagctggc 2220
cctggtgtac gtgtcccagg actccacgga ggagcagcag gacctgttcc tcaaggacat 2280
gccaaagaaa tggcttttcc tgccctttga ggatgatctg aggaggtga 2329
<210> 102
<211> 2484
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 102
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcgg ggctctggct ggggctcgtg 540
tggcagaagc tgctgctgtg gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg 600
gtcctgagtc tgctgcagag ggtggcgagc tacgcgcgga aatggcagca gatgcggccc 660
atccccacgg tggcccgcgc ctacccactg gtgggccacg cgctgctgat gaagccggac 720
gggcgagaat tttttcagca gatcattgag tacacagagg aataccgcca catgccgctg 780
ctgaagctct gggtcgggcc agtgcccatg gtggcccttt ataatgcaga aaatgtggag 840
gtaattttaa ctagttcaaa gcaaattgac aaatcctcta tgtacaagtt tttagaacca 900
tggcttggcc taggacttct tacaagtact ggaaacaaat ggcgctccag gagaaagatg 960
ttaacaccca ctttccattt taccattctg gaagatttct tagatatcat gaatgaacaa 1020
gcaaatatat tggttaagaa acttgaaaaa cacattaacc aagaagcatt taactgcttt 1080
ttttacatca ctctttgtgc cttagatatc atctgtgaaa cagctatggg gaagaatatt 1140
ggtgctcaaa gtaatgatga ttccgagtat gtccgtgcag tttatagaat gagtgagatg 1200
atatttcgaa gaataaagat gccctggctt tggcttgatc tctggtacct tatgtttaaa 1260
gaaggatggg aacacaaaaa gagccttcag atcctacata cttttaccaa cagtgtcatc 1320
gcggaacggg ccaatgaaat gaacgccaat gaagactgta gaggtgatgg caggggctct 1380
gccccctcca aaaataaacg cagggccttt cttgacttgc ttttaagtgt gactgatgac 1440
gaagggaaca ggctaagtca tgaagatatt cgagaagaag ttgacacctt catgtttgag 1500
gggcacgata caactgcagc tgcaataaac tggtccttat acctgttggg ttctaaccca 1560
gaagtccaga aaaaagtgga tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc 1620
gctacagtag aagacctgaa gaaacttcgg tatctggaat gtgttattaa ggagaccctt 1680
cgcctttttc cttctgttcc tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca 1740
ggttacagag ttctaaaagg cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat 1800
ccgagatact tccccaaccc cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca 1860
caagggcgcc atccatatgc ctacgtgccc ttctctgctg gccccaggaa ctgtataggt 1920
caaaagtttg ctgtgatgga agaaaagacc attctttcgt gcatcctgag gcacttttgg 1980
atagaatcca accagaaaag agaagagctt ggtctagaag gacagttgat tcttcgtcca 2040
agtaatggca tctggatcaa gttgaagagg agaaatgcag atgaacgcgg aagcggagct 2100
actaacttca gcctgctgaa gcaggctgga gacgtggagg agaaccctgg acctatggcc 2160
tccctgttct ctggccgcat cctgatccgc aacaatagcg accaggacga gctggatacg 2220
gaggctgagg tcagtcgcag gctggagaac cggctggtgc tgctgttctt tggtgctggg 2280
gcttgtccac agtgccaggc cttcgtgccc atcctcaagg acttcttcgt gcggctcaca 2340
gatgagttct atgtactgcg ggcggctcag ctggccctgg tgtacgtgtc ccaggactcc 2400
acggaggagc agcaggacct gttcctcaag gacatgccaa agaaatggct tttcctgccc 2460
tttgaggatg atctgaggag gtga 2484
<210> 103
<211> 3984
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pf-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 103
acccacctca tcctgcacct gtcactgcgt gggaccctgt gctccaggca ggggcacctc 60
actgccccct gagctcattt tacccctcct ggctctgcag catttctgac catttctgcc 120
caggccgaga ctcactgctg cccagagcaa tctcccttct ctccttctgg aggggagggg 180
ttgtatgtta cccgcctggt tttatccaca gaggttagca gagactgata cagacaaacc 240
ctttttcttt ctaattttag attcaagagc acatgtgcag gtttgttaaa tttgcctgac 300
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 360
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 420
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 480
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 540
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 600
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 660
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 720
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 780
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 840
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 900
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 960
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 1020
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 1080
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 1140
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 1200
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 1260
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 1320
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 1380
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 1440
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 1500
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 1560
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1620
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1680
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1740
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1800
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1860
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1920
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1980
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcgg ggctctggct ggggctcgtg 2040
tggcagaagc tgctgctgtg gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg 2100
gtcctgagtc tgctgcagag ggtggcgagc tacgcgcgga aatggcagca gatgcggccc 2160
atccccacgg tggcccgcgc ctacccactg gtgggccacg cgctgctgat gaagccggac 2220
gggcgagaat tttttcagca gatcattgag tacacagagg aataccgcca catgccgctg 2280
ctgaagctct gggtcgggcc agtgcccatg gtggcccttt ataatgcaga aaatgtggag 2340
gtaattttaa ctagttcaaa gcaaattgac aaatcctcta tgtacaagtt tttagaacca 2400
tggcttggcc taggacttct tacaagtact ggaaacaaat ggcgctccag gagaaagatg 2460
ttaacaccca ctttccattt taccattctg gaagatttct tagatatcat gaatgaacaa 2520
gcaaatatat tggttaagaa acttgaaaaa cacattaacc aagaagcatt taactgcttt 2580
ttttacatca ctctttgtgc cttagatatc atctgtgaaa cagctatggg gaagaatatt 2640
ggtgctcaaa gtaatgatga ttccgagtat gtccgtgcag tttatagaat gagtgagatg 2700
atatttcgaa gaataaagat gccctggctt tggcttgatc tctggtacct tatgtttaaa 2760
gaaggatggg aacacaaaaa gagccttcag atcctacata cttttaccaa cagtgtcatc 2820
gcggaacggg ccaatgaaat gaacgccaat gaagactgta gaggtgatgg caggggctct 2880
gccccctcca aaaataaacg cagggccttt cttgacttgc ttttaagtgt gactgatgac 2940
gaagggaaca ggctaagtca tgaagatatt cgagaagaag ttgacacctt catgtttgag 3000
gggcacgata caactgcagc tgcaataaac tggtccttat acctgttggg ttctaaccca 3060
gaagtccaga aaaaagtgga tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc 3120
gctacagtag aagacctgaa gaaacttcgg tatctggaat gtgttattaa ggagaccctt 3180
cgcctttttc cttctgttcc tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca 3240
ggttacagag ttctaaaagg cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat 3300
ccgagatact tccccaaccc cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca 3360
caagggcgcc atccatatgc ctacgtgccc ttctctgctg gccccaggaa ctgtataggt 3420
caaaagtttg ctgtgatgga agaaaagacc attctttcgt gcatcctgag gcacttttgg 3480
atagaatcca accagaaaag agaagagctt ggtctagaag gacagttgat tcttcgtcca 3540
agtaatggca tctggatcaa gttgaagagg agaaatgcag atgaacgcgg aagcggagct 3600
actaacttca gcctgctgaa gcaggctgga gacgtggagg agaaccctgg acctatggcc 3660
tccctgttct ctggccgcat cctgatccgc aacaatagcg accaggacga gctggatacg 3720
gaggctgagg tcagtcgcag gctggagaac cggctggtgc tgctgttctt tggtgctggg 3780
gcttgtccac agtgccaggc cttcgtgccc atcctcaagg acttcttcgt gcggctcaca 3840
gatgagttct atgtactgcg ggcggctcag ctggccctgg tgtacgtgtc ccaggactcc 3900
acggaggagc agcaggacct gttcctcaag gacatgccaa agaaatggct tttcctgccc 3960
tttgaggatg atctgaggag gtga 3984
<210> 104
<211> 3146
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> EF1a-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 104
gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag aagttggggg 60
gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg 120
atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag 180
tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag gtaagtgccg 240
tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta cgggttatgg cccttgcgtg ccttgaatta 300
cttccacctg gctccagtac gtgattcttg atcccgagct ggagccaggg gcgggccttg 360
cgctttagga gccccttcgc ctcgtgcttg agttgaggcc tggcctgggc gctggggccg 420
ccgcgtgcga atctggtggc accttcgcgc ctgtctcgct gctttcgata agtctctagc 480
catttaaaat ttttgatgac ctgctgcgac gctttttttc tggcaagata gtcttgtaaa 540
tgcgggccag gatctgcaca ctggtatttc ggtttttggg cccgcggccg gcgacggggc 600
ccgtgcgtcc cagcgcacat gttcggcgag gcggggcctg cgagcgcggc caccgagaat 660
cggacggggg tagtctcaag ctggccggcc tgctctggtg cctggcctcg cgccgccgtg 720
tatcgccccg ccctgggcgg caaggctggc ccggtcggca ccagttgcgt gagcggaaag 780
atggccgctt cccggccctg ctccaggggg ctcaaaatgg aggacgcggc gctcgggaga 840
gcgggcgggt gagtcaccca cacaaaggaa aagggccttt ccgtcctcag ccgtcgcttc 900
atgtgactcc acggagtacc gggcgccgtc caggcacctc gattagttct ggagcttttg 960
gagtacgtcg tctttaggtt ggggggaggg gttttatgcg atggagtttc cccacactga 1020
gtgggtggag actgaagtta ggccagcttg gcacttgatg taattctcct tggaatttgg 1080
cctttttgag tttggatctt ggttcattct caagcctcag acagtggttc aaagtttttt 1140
tcttccattt caggtgtcgt gagaattccg ccaccatggc ggggctctgg ctggggctcg 1200
tgtggcagaa gctgctgctg tggggcgcgg cgagtgccct ttccctggcc ggcgccagtc 1260
tggtcctgag tctgctgcag agggtggcga gctacgcgcg gaaatggcag cagatgcggc 1320
ccatccccac ggtggcccgc gcctacccac tggtgggcca cgcgctgctg atgaagccgg 1380
acgggcgaga attttttcag cagatcattg agtacacaga ggaataccgc cacatgccgc 1440
tgctgaagct ctgggtcggg ccagtgccca tggtggccct ttataatgca gaaaatgtgg 1500
aggtaatttt aactagttca aagcaaattg acaaatcctc tatgtacaag tttttagaac 1560
catggcttgg cctaggactt cttacaagta ctggaaacaa atggcgctcc aggagaaaga 1620
tgttaacacc cactttccat tttaccattc tggaagattt cttagatatc atgaatgaac 1680
aagcaaatat attggttaag aaacttgaaa aacacattaa ccaagaagca tttaactgct 1740
ttttttacat cactctttgt gccttagata tcatctgtga aacagctatg gggaagaata 1800
ttggtgctca aagtaatgat gattccgagt atgtccgtgc agtttataga atgagtgaga 1860
tgatatttcg aagaataaag atgccctggc tttggcttga tctctggtac cttatgttta 1920
aagaaggatg ggaacacaaa aagagccttc agatcctaca tacttttacc aacagtgtca 1980
tcgcggaacg ggccaatgaa atgaacgcca atgaagactg tagaggtgat ggcaggggct 2040
ctgccccctc caaaaataaa cgcagggcct ttcttgactt gcttttaagt gtgactgatg 2100
acgaagggaa caggctaagt catgaagata ttcgagaaga agttgacacc ttcatgtttg 2160
aggggcacga tacaactgca gctgcaataa actggtcctt atacctgttg ggttctaacc 2220
cagaagtcca gaaaaaagtg gatcatgaat tggatgacgt gtttgggaag tctgaccgtc 2280
ccgctacagt agaagacctg aagaaacttc ggtatctgga atgtgttatt aaggagaccc 2340
ttcgcctttt tccttctgtt cctttatttg cccgtagtgt tagtgaagat tgtgaagtgg 2400
caggttacag agttctaaaa ggcactgaag ccgtcatcat tccctatgca ttgcacagag 2460
atccgagata cttccccaac cccgaggagt tccagcctga gcggttcttc cccgagaatg 2520
cacaagggcg ccatccatat gcctacgtgc ccttctctgc tggccccagg aactgtatag 2580
gtcaaaagtt tgctgtgatg gaagaaaaga ccattctttc gtgcatcctg aggcactttt 2640
ggatagaatc caaccagaaa agagaagagc ttggtctaga aggacagttg attcttcgtc 2700
caagtaatgg catctggatc aagttgaaga ggagaaatgc agatgaacgc ggaagcggag 2760
ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct ggacctatgg 2820
cctccctgtt ctctggccgc atcctgatcc gcaacaatag cgaccaggac gagctggata 2880
cggaggctga ggtcagtcgc aggctggaga accggctggt gctgctgttc tttggtgctg 2940
gggcttgtcc acagtgccag gccttcgtgc ccatcctcaa ggacttcttc gtgcggctca 3000
cagatgagtt ctatgtactg cgggcggctc agctggccct ggtgtacgtg tcccaggact 3060
ccacggagga gcagcaggac ctgttcctca aggacatgcc aaagaaatgg cttttcctgc 3120
cctttgagga tgatctgagg aggtga 3146
<210> 105
<211> 2941
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CAG-CYP4V2-T2A-RdCVF
<400> 105
ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga 60
cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat 120
atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc 180
cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct 240
attaccatgg tcgaggtgag ccccacgttc tgcttcactc tccccatctc ccccccctcc 300
ccacccccaa ttttgtattt atttattttt taattatttt gtgcagcgat gggggcgggg 360
gggggggggg ggcgcgcgcc aggcggggcg gggcggggcg aggggcgggg cggggcgagg 420
cggagaggtg cggcggcagc caatcagagc ggcgcgctcc gaaagtttcc ttttatggcg 480
aggcggcggc ggcggcggcc ctataaaaag cgaagcgcgc ggcgggcggg agtcgctgcg 540
acgctgcctt cgccccgtgc cccgctccgc cgccgcctcg cgccgcccgc cccggctctg 600
actgaccgcg ttactcccac aggtgagcgg gcgggacggc ccttctcctc cgggctgtaa 660
ttagcgcttg gtttaatgac ggcttgtttc ttttctgtgg ctgcgtgaaa gccttgaggg 720
gctccgggag ggccctttgt gcggggggag cggctcgggg ctgtccgcgg ggggacggct 780
gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc ggcggctcta 840
gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg ggcaacgtgc 900
tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattgga tcggtaccga ggagatctgc 960
cgccgcgatc gccatggcgg ggctctggct ggggctcgtg tggcagaagc tgctgctgtg 1020
gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg gtcctgagtc tgctgcagag 1080
ggtggcgagc tacgcgcgga aatggcagca gatgcggccc atccccacgg tggcccgcgc 1140
ctacccactg gtgggccacg cgctgctgat gaagccggac gggcgagaat tttttcagca 1200
gatcattgag tacacagagg aataccgcca catgccgctg ctgaagctct gggtcgggcc 1260
agtgcccatg gtggcccttt ataatgcaga aaatgtggag gtaattttaa ctagttcaaa 1320
gcaaattgac aaatcctcta tgtacaagtt tttagaacca tggcttggcc taggacttct 1380
tacaagtact ggaaacaaat ggcgctccag gagaaagatg ttaacaccca ctttccattt 1440
taccattctg gaagatttct tagatatcat gaatgaacaa gcaaatatat tggttaagaa 1500
acttgaaaaa cacattaacc aagaagcatt taactgcttt ttttacatca ctctttgtgc 1560
cttagatatc atctgtgaaa cagctatggg gaagaatatt ggtgctcaaa gtaatgatga 1620
ttccgagtat gtccgtgcag tttatagaat gagtgagatg atatttcgaa gaataaagat 1680
gccctggctt tggcttgatc tctggtacct tatgtttaaa gaaggatggg aacacaaaaa 1740
gagccttcag atcctacata cttttaccaa cagtgtcatc gcggaacggg ccaatgaaat 1800
gaacgccaat gaagactgta gaggtgatgg caggggctct gccccctcca aaaataaacg 1860
cagggccttt cttgacttgc ttttaagtgt gactgatgac gaagggaaca ggctaagtca 1920
tgaagatatt cgagaagaag ttgacacctt catgtttgag gggcacgata caactgcagc 1980
tgcaataaac tggtccttat acctgttggg ttctaaccca gaagtccaga aaaaagtgga 2040
tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc gctacagtag aagacctgaa 2100
gaaacttcgg tatctggaat gtgttattaa ggagaccctt cgcctttttc cttctgttcc 2160
tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca ggttacagag ttctaaaagg 2220
cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat ccgagatact tccccaaccc 2280
cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca caagggcgcc atccatatgc 2340
ctacgtgccc ttctctgctg gccccaggaa ctgtataggt caaaagtttg ctgtgatgga 2400
agaaaagacc attctttcgt gcatcctgag gcacttttgg atagaatcca accagaaaag 2460
agaagagctt ggtctagaag gacagttgat tcttcgtcca agtaatggca tctggatcaa 2520
gttgaagagg agaaatgcag atgaacgcgg aagcggagag ggcagaggaa gtctgctaac 2580
atgcggtgac gtcgaggaga atcctggacc tatggcctcc ctgttctctg gccgcatcct 2640
gatccgcaac aatagcgacc aggacgagct ggatacggag gctgaggtca gtcgcaggct 2700
ggagaaccgg ctggtgctgc tgttctttgg tgctggggct tgtccacagt gccaggcctt 2760
cgtgcccatc ctcaaggact tcttcgtgcg gctcacagat gagttctatg tactgcgggc 2820
ggctcagctg gccctggtgt acgtgtccca ggactccacg gaggagcagc aggacctgtt 2880
cctcaaggac atgccaaaga aatggctttt cctgcccttt gaggatgatc tgaggaggtg 2940
a 2941
<210> 106
<211> 2733
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OPEFS-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH
<400> 106
gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa 60
ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc 120
gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc 180
tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac aggtaagtat caaggttaca agacaggttt 240
aaggagacca atagaaactg ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg 300
cacctattgg tcttactgac atccactttg cctttctctc cacaggaatt ccgccaccat 360
ggcggggctc tggctggggc tcgtgtggca gaagctgctg ctgtggggcg cggcgagtgc 420
cctttccctg gccggcgcca gtctggtcct gagtctgctg cagagggtgg cgagctacgc 480
gcggaaatgg cagcagatgc ggcccatccc cacggtggcc cgcgcctacc cactggtggg 540
ccacgcgctg ctgatgaagc cggacgggcg agaatttttt cagcagatca ttgagtacac 600
agaggaatac cgccacatgc cgctgctgaa gctctgggtc gggccagtgc ccatggtggc 660
cctttataat gcagaaaatg tggaggtaat tttaactagt tcaaagcaaa ttgacaaatc 720
ctctatgtac aagtttttag aaccatggct tggcctagga cttcttacaa gtactggaaa 780
caaatggcgc tccaggagaa agatgttaac acccactttc cattttacca ttctggaaga 840
tttcttagat atcatgaatg aacaagcaaa tatattggtt aagaaacttg aaaaacacat 900
taaccaagaa gcatttaact gcttttttta catcactctt tgtgccttag atatcatctg 960
tgaaacagct atggggaaga atattggtgc tcaaagtaat gatgattccg agtatgtccg 1020
tgcagtttat agaatgagtg agatgatatt tcgaagaata aagatgccct ggctttggct 1080
tgatctctgg taccttatgt ttaaagaagg atgggaacac aaaaagagcc ttcagatcct 1140
acatactttt accaacagtg tcatcgcgga acgggccaat gaaatgaacg ccaatgaaga 1200
ctgtagaggt gatggcaggg gctctgcccc ctccaaaaat aaacgcaggg cctttcttga 1260
cttgctttta agtgtgactg atgacgaagg gaacaggcta agtcatgaag atattcgaga 1320
agaagttgac accttcatgt ttgaggggca cgatacaact gcagctgcaa taaactggtc 1380
cttatacctg ttgggttcta acccagaagt ccagaaaaaa gtggatcatg aattggatga 1440
cgtgtttggg aagtctgacc gtcccgctac agtagaagac ctgaagaaac ttcggtatct 1500
ggaatgtgtt attaaggaga cccttcgcct ttttccttct gttcctttat ttgcccgtag 1560
tgttagtgaa gattgtgaag tggcaggtta cagagttcta aaaggcactg aagccgtcat 1620
cattccctat gcattgcaca gagatccgag atacttcccc aaccccgagg agttccagcc 1680
tgagcggttc ttccccgaga atgcacaagg gcgccatcca tatgcctacg tgcccttctc 1740
tgctggcccc aggaactgta taggtcaaaa gtttgctgtg atggaagaaa agaccattct 1800
ttcgtgcatc ctgaggcact tttggataga atccaaccag aaaagagaag agcttggtct 1860
agaaggacag ttgattcttc gtccaagtaa tggcatctgg atcaagttga agaggagaaa 1920
tgcagatgaa cgcggaagcg gagctactaa cttcagcctg ctgaagcagg ctggagacgt 1980
ggaggagaac cctggaccta tggcctccct gttctctggc cgcatcctga tccgcaacaa 2040
tagcgaccag gacgagctgg atacggaggc tgaggtcagt cgcaggctgg agaaccggct 2100
ggtgctgctg ttctttggtg ctggggcttg tccacagtgc caggccttcg tgcccatcct 2160
caaggacttc ttcgtgcggc tcacagatga gttctatgta ctgcgggcgg ctcagctggc 2220
cctggtgtac gtgtcccagg actccacgga ggagcagcag gacctgttcc tcaaggacat 2280
gccaaagaaa tggcttttcc tgccctttga ggatgatctg aggaggtgat aaacgcgtgg 2340
tttatccgat ccaccggatc tagataagat atccgatcca ccggatctag ataactgatc 2400
ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc 2460
cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attggcggcc gcctcgagct gtgccttcta 2520
gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca 2580
ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc 2640
attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata 2700
gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tgg 2733
<210> 107
<211> 2888
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH
<400> 107
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 420
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
cgcggccgcc agccggggcg gaattccgcc accatggcgg ggctctggct ggggctcgtg 540
tggcagaagc tgctgctgtg gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg 600
gtcctgagtc tgctgcagag ggtggcgagc tacgcgcgga aatggcagca gatgcggccc 660
atccccacgg tggcccgcgc ctacccactg gtgggccacg cgctgctgat gaagccggac 720
gggcgagaat tttttcagca gatcattgag tacacagagg aataccgcca catgccgctg 780
ctgaagctct gggtcgggcc agtgcccatg gtggcccttt ataatgcaga aaatgtggag 840
gtaattttaa ctagttcaaa gcaaattgac aaatcctcta tgtacaagtt tttagaacca 900
tggcttggcc taggacttct tacaagtact ggaaacaaat ggcgctccag gagaaagatg 960
ttaacaccca ctttccattt taccattctg gaagatttct tagatatcat gaatgaacaa 1020
gcaaatatat tggttaagaa acttgaaaaa cacattaacc aagaagcatt taactgcttt 1080
ttttacatca ctctttgtgc cttagatatc atctgtgaaa cagctatggg gaagaatatt 1140
ggtgctcaaa gtaatgatga ttccgagtat gtccgtgcag tttatagaat gagtgagatg 1200
atatttcgaa gaataaagat gccctggctt tggcttgatc tctggtacct tatgtttaaa 1260
gaaggatggg aacacaaaaa gagccttcag atcctacata cttttaccaa cagtgtcatc 1320
gcggaacggg ccaatgaaat gaacgccaat gaagactgta gaggtgatgg caggggctct 1380
gccccctcca aaaataaacg cagggccttt cttgacttgc ttttaagtgt gactgatgac 1440
gaagggaaca ggctaagtca tgaagatatt cgagaagaag ttgacacctt catgtttgag 1500
gggcacgata caactgcagc tgcaataaac tggtccttat acctgttggg ttctaaccca 1560
gaagtccaga aaaaagtgga tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc 1620
gctacagtag aagacctgaa gaaacttcgg tatctggaat gtgttattaa ggagaccctt 1680
cgcctttttc cttctgttcc tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca 1740
ggttacagag ttctaaaagg cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat 1800
ccgagatact tccccaaccc cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca 1860
caagggcgcc atccatatgc ctacgtgccc ttctctgctg gccccaggaa ctgtataggt 1920
caaaagtttg ctgtgatgga agaaaagacc attctttcgt gcatcctgag gcacttttgg 1980
atagaatcca accagaaaag agaagagctt ggtctagaag gacagttgat tcttcgtcca 2040
agtaatggca tctggatcaa gttgaagagg agaaatgcag atgaacgcgg aagcggagct 2100
actaacttca gcctgctgaa gcaggctgga gacgtggagg agaaccctgg acctatggcc 2160
tccctgttct ctggccgcat cctgatccgc aacaatagcg accaggacga gctggatacg 2220
gaggctgagg tcagtcgcag gctggagaac cggctggtgc tgctgttctt tggtgctggg 2280
gcttgtccac agtgccaggc cttcgtgccc atcctcaagg acttcttcgt gcggctcaca 2340
gatgagttct atgtactgcg ggcggctcag ctggccctgg tgtacgtgtc ccaggactcc 2400
acggaggagc agcaggacct gttcctcaag gacatgccaa agaaatggct tttcctgccc 2460
tttgaggatg atctgaggag gtgataaacg cgtggtttat ccgatccacc ggatctagat 2520
aagatatccg atccaccgga tctagataac tgatcataat cagccatacc acatttgtag 2580
aggttttact tgctttaaaa aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga 2640
atgcaattgg cggccgcctc gagctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2700
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2760
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 2820
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 2880
ctctatgg 2888
<210> 108
<211> 4088
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P1-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH
<400> 108
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 60
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 120
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 180
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 240
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 300
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 360
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caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 480
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gaagtccaga aaaaagtgga tcatgaattg gatgacgtgt ttgggaagtc tgaccgtccc 2820
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acggaggagc agcaggacct gttcctcaag gacatgccaa agaaatggct tttcctgccc 3660
tttgaggatg atctgaggag gtgataaacg cgtggtttat ccgatccacc ggatctagat 3720
aagatatccg atccaccgga tctagataac tgatcataat cagccatacc acatttgtag 3780
aggttttact tgctttaaaa aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga 3840
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ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 3960
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gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 4080
ctctatgg 4088
<210> 109
<211> 2617
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 109
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 120
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 180
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 240
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 300
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 360
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tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 480
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cggcgccagt ctggtcctga gtctgctgca gagggtggcg agctacgcgc ggaaatggca 780
gcagatgcgg cccatcccca cggtggcccg cgcctaccca ctggtgggcc acgcgctgct 840
gatgaagccg gacgggcgag aattttttca gcagatcatt gagtacacag aggaataccg 900
ccacatgccg ctgctgaagc tctgggtcgg gccagtgccc atggtggccc tttataatgc 960
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gattcttcgt ccaagtaatg gcatctggat caagttgaag aggagaaatg cagatgaacg 2220
cggaagcgga gctactaact tcagcctgct gaagcaggct ggagacgtgg aggagaaccc 2280
tggacctatg gcctccctgt tctctggccg catcctgatc cgcaacaata gcgaccagga 2340
cgagctggat acggaggctg aggtcagtcg caggctggag aaccggctgg tgctgctgtt 2400
ctttggtgct ggggcttgtc cacagtgcca ggccttcgtg cccatcctca aggacttctt 2460
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gtcccaggac tccacggagg agcagcagga cctgttcctc aaggacatgc caaagaaatg 2580
gcttttcctg ccctttgagg atgatctgag gaggtga 2617
<210> 110
<211> 3183
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P3-SV40intron-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 110
gcatccagga cattcagttt catcttcctg gcactttagt gtttaggaag ggcctggcct 60
ctcggggagc gacactcctc gcccggccac tttgtaagaa gcatcgagcg tggaaaaggg 120
gctggggtca gcactggggc cctctgccgg gaagagagac tggcggccag cacacgcgtc 180
tccccaggct gaaatggggc accctctcgc ggcccttccc tcccttcccg ggctgggtgg 240
caggtcttgg ctcttctgcg agtaccccgc ggctgcggtc tcccggcacc cgctgagcag 300
cctcgcccgc cttcctctcc cacccgcccc tgcgtgctct ccggggctcc ggcttcctcg 360
gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 420
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 480
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 540
ccgcctcccg gggctgcaag ttgcgcaggg agcgagcgat gcgcagcaga gctgggctcc 600
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 660
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 720
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 780
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 840
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 900
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 960
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1020
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1080
cgcggccgcc agccggggcg gtaagtttag tctttttgtc ttttatttca ggtcccggat 1140
ccggtggtgg tgcaaatcaa agaactgctc ctcagtggat gttgccttta cttctaggcg 1200
aattccgcca ccatggcggg gctctggctg gggctcgtgt ggcagaagct gctgctgtgg 1260
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atcattgagt acacagagga ataccgccac atgccgctgc tgaagctctg ggtcgggcca 1500
gtgcccatgg tggcccttta taatgcagaa aatgtggagg taattttaac tagttcaaag 1560
caaattgaca aatcctctat gtacaagttt ttagaaccat ggcttggcct aggacttctt 1620
acaagtactg gaaacaaatg gcgctccagg agaaagatgt taacacccac tttccatttt 1680
accattctgg aagatttctt agatatcatg aatgaacaag caaatatatt ggttaagaaa 1740
cttgaaaaac acattaacca agaagcattt aactgctttt tttacatcac tctttgtgcc 1800
ttagatatca tctgtgaaac agctatgggg aagaatattg gtgctcaaag taatgatgat 1860
tccgagtatg tccgtgcagt ttatagaatg agtgagatga tatttcgaag aataaagatg 1920
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agccttcaga tcctacatac ttttaccaac agtgtcatcg cggaacgggc caatgaaatg 2040
aacgccaatg aagactgtag aggtgatggc aggggctctg ccccctccaa aaataaacgc 2100
agggcctttc ttgacttgct tttaagtgtg actgatgacg aagggaacag gctaagtcat 2160
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aaacttcggt atctggaatg tgttattaag gagacccttc gcctttttcc ttctgttcct 2400
ttatttgccc gtagtgttag tgaagattgt gaagtggcag gttacagagt tctaaaaggc 2460
actgaagccg tcatcattcc ctatgcattg cacagagatc cgagatactt ccccaacccc 2520
gaggagttcc agcctgagcg gttcttcccc gagaatgcac aagggcgcca tccatatgcc 2580
tacgtgccct tctctgctgg ccccaggaac tgtataggtc aaaagtttgc tgtgatggaa 2640
gaaaagacca ttctttcgtg catcctgagg cacttttgga tagaatccaa ccagaaaaga 2700
gaagagcttg gtctagaagg acagttgatt cttcgtccaa gtaatggcat ctggatcaag 2760
ttgaagagga gaaatgcaga tgaacgcgga agcggagcta ctaacttcag cctgctgaag 2820
caggctggag acgtggagga gaaccctgga cctatggcct ccctgttctc tggccgcatc 2880
ctgatccgca acaatagcga ccaggacgag ctggatacgg aggctgaggt cagtcgcagg 2940
ctggagaacc ggctggtgct gctgttcttt ggtgctgggg cttgtccaca gtgccaggcc 3000
ttcgtgccca tcctcaagga cttcttcgtg cggctcacag atgagttcta tgtactgcgg 3060
gcggctcagc tggccctggt gtacgtgtcc caggactcca cggaggagca gcaggacctg 3120
ttcctcaagg acatgccaaa gaaatggctt ttcctgccct ttgaggatga tctgaggagg 3180
tga 3183
<210> 111
<211> 4083
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Pf-SV40intron-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 111
acccacctca tcctgcacct gtcactgcgt gggaccctgt gctccaggca ggggcacctc 60
actgccccct gagctcattt tacccctcct ggctctgcag catttctgac catttctgcc 120
caggccgaga ctcactgctg cccagagcaa tctcccttct ctccttctgg aggggagggg 180
ttgtatgtta cccgcctggt tttatccaca gaggttagca gagactgata cagacaaacc 240
ctttttcttt ctaattttag attcaagagc acatgtgcag gtttgttaaa tttgcctgac 300
gctgaggttt gagtttctat tgatcccctc acctgaatag ggaacacagt acccaataca 360
cagtttttca accattactc cccttccttc ctccccctat tttagaatcc ccagtatgta 420
gacaaattgt ttacttttat agctgtaatt aaccttatta tagctcagcc tcaacccttt 480
agagaggagg aaactaaagc ccatgagact tgcttaaaga tactaagtga acatatttat 540
tttttaaagt gttaaagtga ttaaacaatg tagacgtgaa tgaaataaaa agcgtaagtt 600
ccccatcttc attcccactc catagagctg atcagtattt ttacttgcag acattagtgg 660
agccgtagag aaagaaacct tttctccaaa agaaggcatt actttacaca ctccgttctg 720
caacttgttt tgttcacttg ctatttcacg tcagcccatg cagatgactt aaaacaaatt 780
caaatggaga aaagccttag gcatgttttt ctctgcacta aagaggccct gcaggtggct 840
gtggccaact tatgcagtgg cttcgagtga acgaacgtaa ttagtaatta agcaaagcgg 900
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gtctggtgcc tggtgcgtat tttggaaaat acctggctca taaccacctc attgagctcc 1320
cagtgtccca gtgggccagc ggacacacac gggtagctga cttccctaac gtgtccccaa 1380
agcctccctg gattacagcg cccgctgctc catgtgaccc cgcgggagcc aggacgcgcc 1440
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gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 1560
gtagagcaac ctcgcagcac cctcagaaca gccccgctgg ggcgcgccgg gctgccgcgg 1620
tgacctttcc gacgcccctg accccgcatc cggaggcggc cggaagtgtc gccggcctcc 1680
tcccggcgca gcctccgggc ctccagtgca atcactacgc cctggggccc ggaaaccgtt 1740
ttccggtctt tcgctttcgg ctggggcgtg gaggccgcgg tgctgcgtag gccgggccgg 1800
gcgcaggaac agccccgtgg cgccctctct ggccgccgcc cgggcgggaa acgtcgttcc 1860
ggggaccggg cgaccccgca gcggggagcg cgccaggtcc gcgcggggaa gtgggcggtg 1920
tgcggccggc accgcctcgc accacgcccc cgcgggcccg cactttcccg gagtgcaccc 1980
cgcggccgcc agccggggcg gtaagtttag tctttttgtc ttttatttca ggtcccggat 2040
ccggtggtgg tgcaaatcaa agaactgctc ctcagtggat gttgccttta cttctaggcg 2100
aattccgcca ccatggcggg gctctggctg gggctcgtgt ggcagaagct gctgctgtgg 2160
ggcgcggcga gtgccctttc cctggccggc gccagtctgg tcctgagtct gctgcagagg 2220
gtggcgagct acgcgcggaa atggcagcag atgcggccca tccccacggt ggcccgcgcc 2280
tacccactgg tgggccacgc gctgctgatg aagccggacg ggcgagaatt ttttcagcag 2340
atcattgagt acacagagga ataccgccac atgccgctgc tgaagctctg ggtcgggcca 2400
gtgcccatgg tggcccttta taatgcagaa aatgtggagg taattttaac tagttcaaag 2460
caaattgaca aatcctctat gtacaagttt ttagaaccat ggcttggcct aggacttctt 2520
acaagtactg gaaacaaatg gcgctccagg agaaagatgt taacacccac tttccatttt 2580
accattctgg aagatttctt agatatcatg aatgaacaag caaatatatt ggttaagaaa 2640
cttgaaaaac acattaacca agaagcattt aactgctttt tttacatcac tctttgtgcc 2700
ttagatatca tctgtgaaac agctatgggg aagaatattg gtgctcaaag taatgatgat 2760
tccgagtatg tccgtgcagt ttatagaatg agtgagatga tatttcgaag aataaagatg 2820
ccctggcttt ggcttgatct ctggtacctt atgtttaaag aaggatggga acacaaaaag 2880
agccttcaga tcctacatac ttttaccaac agtgtcatcg cggaacgggc caatgaaatg 2940
aacgccaatg aagactgtag aggtgatggc aggggctctg ccccctccaa aaataaacgc 3000
agggcctttc ttgacttgct tttaagtgtg actgatgacg aagggaacag gctaagtcat 3060
gaagatattc gagaagaagt tgacaccttc atgtttgagg ggcacgatac aactgcagct 3120
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catgaattgg atgacgtgtt tgggaagtct gaccgtcccg ctacagtaga agacctgaag 3240
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<211> 3728
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RPE65-intron-CYP4V2-T2A-RdCVF
<400> 112
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<220>
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<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-intron-CYP4V2-P2A-RdCVF-WPRE-SV40
<400> 114
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<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P5-CDSintron-CYP4V2-P2A-RdCVF-BGH
<400> 115
gagccggatg cgccttcctt tcctctccag agcaggctgc ccgcccgcgg aatcccgcac 60
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gtgcggctca cagatgagtt ctatgtactg cgggcggctc agctggccct ggtgtacgtg 2520
tcccaggact ccacggagga gcagcaggac ctgttcctca aggacatgcc aaagaaatgg 2580
cttttcctgc cctttgagga tgatctgagg aggtgataaa cgcgtggttt atccgatcca 2640
ccggatctag ataagatatc cgatccaccg gatctagata actgatcata atcagccata 2700
ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga 2760
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tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct 2880
ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg 2940
gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg 3000
ggatgcggtg ggctctatgg 3020
<210> 116
<211> 1711
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CDSintron-CYP4V2
<400> 116
atggcggggc tctggctggg gctcgtgtgg cagaagctgc tgctgtgggg cgcggcgagt 60
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<210> 117
<211> 5521
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ?pAV-p5-CYP4V2
<400> 117
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
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t 5521
<210> 118
<211> 5885
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-p5-intron-CYP4V2-BGH
<400> 118
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct gcggccggtc gcgtctagta ctagtcgcgt aggatccgag ccggatgcgc 180
cttcctttcc tctccagagc aggctgcccg cccgcggaat cccgcacgta gagcaacctc 240
gcagcaccct cagaacagcc ccgctggggc gcgccgggct gccgcggtga cctttccgac 300
gcccctgacc ccgcatccgg aggcggccgg aagtgtcgcc ggcctcctcc cggcgcagcc 360
tccgggcctc cagtgcaatc actacgccct ggggcccgga aaccgttttc cggtctttcg 420
ctttcggctg gggcgtggag gccgcggtgc tgcgtaggcc gggccgggcg caggaacagc 480
cccgtggcgc cctctctggc cgccgcccgg gcgggaaacg tcgttccggg gaccgggcga 540
ccccgcagcg gggagcgcgc caggtccgcg cggggaagtg ggcggtgtgc ggccggcacc 600
gcctcgcacc acgcccccgc gggcccgcac tttcccggag tgcaccccgc ggccgccagc 660
cggggcggta agtatcaagg ttacaagaca ggtttaagga gaccaataga aactgggctt 720
gtcgagacag agaagactct tgcgtttctg ataggcacct attggtctta ctgacatcca 780
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tggcagaagc tgctgctgtg gggcgcggcg agtgcccttt ccctggccgg cgccagtctg 900
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cgcctttttc cttctgttcc tttatttgcc cgtagtgtta gtgaagattg tgaagtggca 2040
ggttacagag ttctaaaagg cactgaagcc gtcatcattc cctatgcatt gcacagagat 2100
ccgagatact tccccaaccc cgaggagttc cagcctgagc ggttcttccc cgagaatgca 2160
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taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc 2520
ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttggcggccg cctcgagctg tgccttctag 2580
ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 2640
tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 2700
ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag 2760
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gagcgcgcag ctgcctgcag gggcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg 3000
gtatttcaca ccgcatacgt caaagcaacc atagtacgcg ccctgtagcg gcacattaag 3060
cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccttagcgcc 3120
cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc 3180
tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa 3240
aaaacttgat ttgggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg 3300
ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac 3360
actcaactct atctcgggct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggtcta 3420
ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca aaatattaac 3480
gtttacaatt ttatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat agttaagcca 3540
gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc 3600
cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc 3660
atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt 3720
catgataata atggtttctt agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac 3780
ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc 3840
ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtcct gaggcggaaa gaaccagctg 3900
tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg 3960
caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 4020
ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact 4080
ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta 4140
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atcgtttcgc atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga 4320
gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt 4380
ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct 4440
gaatgaactg caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg 4500
cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt 4560
gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc 4620
tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc 4680
gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga 4740
tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgag 4800
catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat 4860
ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg 4920
ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc 4980
tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta 5040
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aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc 5340
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<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-p5-CYP4V2-P2A-RdCV
<400> 122
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<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-Pf-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 123
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
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<213>人工序列（Artificial Sequence）
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<212> DNA
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<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-RPE65-intron-CYP4V2-T2A-RdCVF
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tatcttggga agcacttgga ttaattgtta tacagttttg ttgaagaaga cccctagggt 840
aagtagccat aactgcacac taaatttaaa attgttaatg agtttctcaa aaaaaatgtt 900
aaggttgtta gctggtatag tatatatctt gcctgttttc caaggacttc tttgggcagt 960
accttgtctg tgctggcaag caactgagac ttaatgaaag agtattggag atatgaatga 1020
attgatgctg tatactctca gagtgccaaa catataccaa tggacaagaa ggtgaggcag 1080
agagcagaca ggcattagtg acaagcaaag atatgcagaa tttcattctc agcaaatcaa 1140
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agggttagag gtgcacaatg tgcttccata acattttata cttctccaat cttagcacta 1260
atcaaacatg gttgaatact ttgtttacta taactcttac agagttataa gatctgtgaa 1320
gacagggaca gggacaatac ccatctctgt ctggttcata ggtggtatgt aatagatatt 1380
tttaaaaata agtgagttaa tgaatgaggg tgagaatgaa ggcacagagg tattaggggg 1440
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gacgctggcc actcccacct agctcctttc tttctaatct gttctcattc tccttgggaa 1560
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aggggtgggg aagggctccc aaagccataa ctccttttaa gggatttaga aggcataaaa 1740
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tctggaagat ttcttagata tcatgaatga acaagcaaat atattggtta agaaacttga 2460
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caacactcaa ctctatctcg ggctattctt ttgatttata agggattttg ccgatttcgg 4920
tctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat 4980
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ctcacatgt 7389
<210> 129
<211> 7744
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pAV-CYP4V2 Pf-SV40intron-CYP4V2-P2A-RdCVF
<400> 129
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
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gaaacctttt ctccaaaaga aggcattact ttacacactc cgttctgcaa cttgttttgt 900
tcacttgcta tttcacgtca gcccatgcag atgacttaaa acaaattcaa atggagaaaa 960
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tcgggcgagc agtcttccag gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg 420
aaggcgctaa gacggctcct ggaaagaaga gaccggtaga gccatcaccc cagcgttctc 480
cagactcctc tacgggcatc ggcaagaaag gccaacagcc cgccagaaaa agactcaatt 540
ttggtcagac tggcgactca gagtcagttc cagaccctca acctctcgga gaacctccag 600
cagcgccctc tggtgtggga cctaatacaa tggctgcagg cggtggcgca ccaatggcag 660
acaataacga aggcgccgac ggagtgggta gttcctcggg aaattggcat tgcgattcca 720
catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca 780
acaaccacct ctacaagcaa atctccaacg ggacatcggg aggagccacc aacgacaaca 840
cctacttcgg ctacagcacc ccctgggggt attttgactt taacagattc cactgccact 900
tttcaccacg tgactggcag cgactcatca acaacaactg gggattccgg cccaagagac 960
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ccatcgccaa taacctcacc agcaccatcc aggtgtttac ggactcggag taccagctgc 1080
cgtacgttct cggctctgcc caccagggct gcctgcctcc gttcccggcg gacgtgttca 1140
tgattcccca gtacggctac ctaacactca acaacggtag tcaggccgtg ggacgctcct 1200
ccttctactg cctggaatac tttccttcgc agatgctgag aaccggcaac aacttccagt 1260
ttacttacac cttcgaggac gtgcctttcc acagcagcta cgcccacagc cagagcttgg 1320
accggctgat gaatcctctg attgaccagt acctgtacta cttgtctcgg actcaaacaa 1380
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caaccgggca aaacaacaat agcaactttg cctggactgc tgggaccaaa taccatctga 1560
atggaagaaa ttcattggct aatcctggca tcgctatggc aacacacaaa gacgacgagg 1620
agcgtttttt tcccagtaac gggatcctga tttttggcaa acaaaatgct gccagagaca 1680
atgcggatta cagcgatgtc atgctcacca gcgaggaaga aatcaaaacc actaaccctg 1740
tggctacaga ggaatacggt atcgtggcag ataacttgca gcagcaaaac acggctcctc 1800
aaattggaac tgtcaacagc cagggggcct tacccggtat ggtctggcag aaccgggacg 1860
tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaga ttcctcacac ggacggcaac ttccacccgt 1920
ctccgctgat gggcggcttt ggcctgaaac atcctccgcc tcagatcctg atcaagaaca 1980
cgcctgtacc tgcggatcct ccgaccacct tcaaccagtc aaagctgaac tctttcatca 2040
cgcaatacag caccggacag gtcagcgtgg aaattgaatg ggagctgcag aaggaaaaca 2100
gcaagcgctg gaaccccgag atccagtaca cctccaacta ctacaaatct acaagtgtgg 2160
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tcacccgtaa tctgtaattg cttgttaatc aataaac 2257
<210> 135
<211> 7663
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AAV2/8
<400> 135
atcgttaacg ccccgcgccg gccgctctag aactagtgga tcccccggaa gatcagaagt 60
tcctattccg aagttcctat tctctagaaa gtataggaac ttctgatctg cgcagccgcc 120
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 180
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 240
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 300
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 360
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 420
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 480
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 540
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 600
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gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 780
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 840
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gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1740
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1800
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ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1980
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cggacccttc aacggactcg acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct 2220
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cacaggaaac agctatgacc atgattacgc caagcgcgcc gat 7663
<210> 136
<211> 11635
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AAV-helper-Amp
<400> 136
ggtacccaac tccatgctta acagtcccca ggtacagccc accctgcgtc gcaaccagga 60
acagctctac agcttcctgg agcgccactc gccctacttc cgcagccaca gtgcgcagat 120
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gcgtcggtgt tggagatctg caccacattt cggccccacc ggttcttcac gatcttggcc 900
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acgtgctcct tatttatcat aatgctcccg tgtagacact taagctcgcc ttcgatctca 1020
gcgcagcggt gcagccacaa cgcgcagccc gtgggctcgt ggtgcttgta ggttacctct 1080
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aacttctacc ccgtatttgc cgtgccagag gtgcttgcca cctatcacat ctttttccaa 2400
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cgctccctgg tctgcaattc gcaactgctt agcgaaagtc aaattatcgg tacctttgag 3660
ctgcagggtc cctcgcctga cgaaaagtcc gcggctccgg ggttgaaact cactccgggg 3720
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ccgccgccgc agccctatca gcagccgcgg gcccttgctt cccaggatgg cacccaaaaa 4020
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ggcgccccag aaattggcaa ccgttcccag catcgctaca acctccgctc ctcaggcgcc 4260
gccggcactg cctgttcgcc gacccaaccg tagatgggac accactggaa ccagggccgg 4320
taagtctaag cagccgccgc cgttagccca agagcaacaa cagcgccaag gctaccgctc 4380
gtggcgcggg cacaagaacg ccatagttgc ttgcttgcaa gactgtgggg gcaacatctc 4440
cttcgcccgc cgctttcttc tctaccatca cggcgtggcc ttcccccgta acatcctgca 4500
ttactaccgt catctctaca gcccctactg caccggcggc agcggcagcg gcagcaacag 4560
cagcggtcac acagaagcaa aggcgaccgg atagcaagac tctgacaaag cccaagaaat 4620
ccacagcggc ggcagcagca ggaggaggag cgctgcgtct ggcgcccaac gaacccgtat 4680
cgacccgcga gcttagaaat aggatttttc ccactctgta tgctatattt caacaaagca 4740
ggggccaaga acaagagctg aaaataaaaa acaggtctct gcgctccctc acccgcagct 4800
gcctgtatca caaaagcgaa gatcagcttc ggcgcacgct ggaagacgcg gaggctctct 4860
tcagcaaata ctgcgcgctg actcttaagg actagtttcg cgccctttct caaatttaag 4920
cgcgaaaact acgtcatctc cagcggccac acccggcgcc agcacctgtc gtcagcgcca 4980
ttatgagcaa ggaaattccc acgccctaca tgtggagtta ccagccacaa atgggacttg 5040
cggctggagc tgcccaagac tactcaaccc gaataaacta catgagcgcg ggaccccaca 5100
tgatatcccg ggtcaacgga atccgcgccc accgaaaccg aattctcctc gaacaggcgg 5160
ctattaccac cacacctcgt aataacctta atccccgtag ttggcccgct gccctggtgt 5220
accaggaaag tcccgctccc accactgtgg tacttcccag agacgcccag gccgaagttc 5280
agatgactaa ctcaggggcg cagcttgcgg gcggctttcg tcacagggtg cggtcgcccg 5340
ggcgttttag ggcggagtaa cttgcatgta ttgggaattg tagttttttt aaaatgggaa 5400
gtgacgtatc gtgggaaaac ggaagtgaag atttgaggaa gttgtgggtt ttttggcttt 5460
cgtttctggg cgtaggttcg cgtgcggttt tctgggtgtt ttttgtggac tttaaccgtt 5520
acgtcatttt ttagtcctat atatactcgc tctgtacttg gcccttttta cactgtgact 5580
gattgagctg gtgccgtgtc gagtggtgtt ttttaatagg tttttttact ggtaaggctg 5640
actgttatgg ctgccgctgt ggaagcgctg tatgttgttc tggagcggga gggtgctatt 5700
ttgcctaggc aggagggttt ttcaggtgtt tatgtgtttt tctctcctat taattttgtt 5760
atacctccta tgggggctgt aatgttgtct ctacgcctgc gggtatgtat tcccccgggc 5820
tatttcggtc gctttttagc actgaccgat gttaaccaac ctgatgtgtt taccgagtct 5880
tacattatga ctccggacat gaccgaggaa ctgtcggtgg tgctttttaa tcacggtgac 5940
cagttttttt acggtcacgc cggcatggcc gtagtccgtc ttatgcttat aagggttgtt 6000
tttcctgttg taagacaggc ttctaatgtt taaatgtttt tttttttgtt attttatttt 6060
gtgtttaatg caggaacccg cagacatgtt tgagagaaaa atggtgtctt tttctgtggt 6120
ggttccggaa cttacctgcc tttatctgca tgagcatgac tacgatgtgc ttgctttttt 6180
gcgcgaggct ttgcctgatt ttttgagcag caccttgcat tttatatcgc cgcccatgca 6240
acaagcttac ataggggcta cgctggttag catagctccg agtatgcgtg tcataatcag 6300
tgtgggttct tttgtcatgg ttcctggcgg ggaagtggcc gcgctggtcc gtgcagacct 6360
gcacgattat gttcagctgg ccctgcgaag ggacctacgg gatcgcggta tttttgttaa 6420
tgttccgctt ttgaatctta tacaggtctg tgaggaacct gaatttttgc aatcatgatt 6480
cgctgcttga ggctgaaggt ggagggcgct ctggagcaga tttttacaat ggccggactt 6540
aatattcggg atttgcttag agacatattg ataaggtggc gagatgaaaa ttatttgggc 6600
atggttgaag gtgctggaat gtttatagag gagattcacc ctgaagggtt tagcctttac 6660
gtccacttgg acgtgagggc agtttgcctt ttggaagcca ttgtgcaaca tcttacaaat 6720
gccattatct gttctttggc tgtagagttt gaccacgcca ccggagggga gcgcgttcac 6780
ttaatagatc ttcattttga ggttttggat aatcttttgg aataaaaaaa aaaaaacatg 6840
gttcttccag ctcttcccgc tcctcccgtg tgtgactcgc agaacgaatg tgtaggttgg 6900
ctgggtgtgg cttattctgc ggtggtggat gttatcaggg cagcggcgca tgaaggagtt 6960
tacatagaac ccgaagccag ggggcgcctg gatgctttga gagagtggat atactacaac 7020
tactacacag agcgagctaa gcgacgagac cggagacgca gatctgtttg tcacgcccgc 7080
acctggtttt gcttcaggaa atatgactac gtccggcgtt ccatttggca tgacactacg 7140
accaacacga tctcggttgt ctcggcgcac tccgtacagt agggatcgcc tacctccttt 7200
tgagacagag acccgcgcta ccatactgga ggatcatccg ctgctgcccg aatgtaacac 7260
tttgacaatg cacaacgtga gttacgtgcg aggtcttccc tgcagtgtgg gatttacgct 7320
gattcaggaa tgggttgttc cctgggatat ggttctgacg cgggaggagc ttgtaatcct 7380
gaggaagtgt atgcacgtgt gcctgtgttg tgccaacatt gatatcatga cgagcatgat 7440
gatccatggt tacgagtcct gggctctcca ctgtcattgt tccagtcccg gttccctgca 7500
gtgcatagcc ggcgggcagg ttttggccag ctggtttagg atggtggtgg atggcgccat 7560
gtttaatcag aggtttatat ggtaccggga ggtggtgaat tacaacatgc caaaagaggt 7620
aatgtttatg tccagcgtgt ttatgagggg tcgccactta atctacctgc gcttgtggta 7680
tgatggccac gtgggttctg tggtccccgc catgagcttt ggatacagcg ccttgcactg 7740
tgggattttg aacaatattg tggtgctgtg ctgcagttac tgtgctgatt taagtgagat 7800
cagggtgcgc tgctgtgccc ggaggacaag gcgtctcatg ctgcgggcgg tgcgaatcat 7860
cgctgaggag accactgcca tgttgtattc ctgcaggacg gagcggcggc ggcagcagtt 7920
tattcgcgcg ctgctgcagc accaccgccc tatcctgatg cacgattatg actctacccc 7980
catgtaggcg tggacttccc cttcgccgcc cgttgagcaa ccgcaagttg gacagcagcc 8040
tgtggctcag cagctggaca gcgacatgaa cttaagcgag ctgcccgggg agtttattaa 8100
tatcactgat gagcgtttgg ctcgacagga aaccgtgtgg aatataacac ctaagaatat 8160
gtctgttacc catgatatga tgctttttaa ggccagccgg ggagaaagga ctgtgtactc 8220
tgtgtgttgg gagggaggtg gcaggttgaa tactagggtt ctgtgagttt gattaaggta 8280
cggtgatcaa tataagctat gtggtggtgg ggctatacta ctgaatgaaa aatgacttga 8340
aattttctgc aattgaaaaa taaacacgtt gaaacataac atgcaacagg ttcacgattc 8400
tttattcctg ggcaatgtag gagaaggtgt aagagttggt agcaaaagtt tcagtggtgt 8460
attttccact ttcccaggac catgtaaaag acatagagta agtgcttacc tcgctagttt 8520
ctgtggattc actagaatcg atgtaggatg ttgcccctcc tgacgcggta ggagaagggg 8580
agggtgccct gcatgtctgc cgctgctctt gctcttgccg ctgctgagga ggggggcgca 8640
tctgccgcag caccggatgc atctgggaaa agcaaaaaag gggctcgtcc ctgtttccgg 8700
aggaatttgc aagcggggtc ttgcatgacg gggaggcaaa cccccgttcg ccgcagtccg 8760
gccggcccga gactcgaacc gggggtcctg cgactcaacc cttggaaaat aaccctccgg 8820
ctacagggag cgagccactt aatgctttcg ctttccagcc taaccgctta cgccgcgcgc 8880
ggccagtggc caaaaaagct agcgcagcag ccgccgcgcc tggaaggaag ccaaaaggag 8940
cgctcccccg ttgtctgacg tcgcacacct gggttcgaca cgcgggcggt aaccgcatgg 9000
atcacggcgg acggccggat ccggggttcg aaccccggtc gtccgccatg atacccttgc 9060
gaatttatcc accagaccac ggaagagtgc ccgcttacag gctctccttt tgcacggtct 9120
agagcgtcaa cgactgcgca cgcctcaccg gccagagcgt cccgaccatg gagcactttt 9180
tgccgctgcg caacatctgg aaccgcgtcc gcgactttcc gcgcgcctcc accaccgccg 9240
ccggcatcac ctggatgtcc aggtacatct acggattacg tcgacgttta aaccatatga 9300
tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 9360
aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 9420
tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 9480
tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 9540
cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 9600
agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 9660
tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 9720
aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 9780
ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 9840
cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 9900
accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 9960
ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 10020
ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 10080
gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt 10140
aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt 10200
gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc 10260
gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg 10320
cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc 10380
gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg 10440
gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca 10500
ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga 10560
tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct 10620
ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg 10680
cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca 10740
accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata 10800
cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct 10860
tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact 10920
cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa 10980
acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc 11040
atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga 11100
tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga 11160
aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt 11220
aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag 11280
aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga 11340
acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg 11400
aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc 11460
ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg 11520
aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc 11580
gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgatg gatcc 11635
<210> 137
<211> 11962
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AAV-helper
<400> 137
ggtacccaac tccatgctta acagtcccca ggtacagccc accctgcgtc gcaaccagga 60
acagctctac agcttcctgg agcgccactc gccctacttc cgcagccaca gtgcgcagat 120
taggagcgcc acttcttttt gtcacttgaa aaacatgtaa aaataatgta ctaggagaca 180
ctttcaataa aggcaaatgt ttttatttgt acactctcgg gtgattattt accccccacc 240
cttgccgtct gcgccgttta aaaatcaaag gggttctgcc gcgcatcgct atgcgccact 300
ggcagggaca cgttgcgata ctggtgttta gtgctccact taaactcagg cacaaccatc 360
cgcggcagct cggtgaagtt ttcactccac aggctgcgca ccatcaccaa cgcgtttagc 420
aggtcgggcg ccgatatctt gaagtcgcag ttggggcctc cgccctgcgc gcgcgagttg 480
cgatacacag ggttgcagca ctggaacact atcagcgccg ggtggtgcac gctggccagc 540
acgctcttgt cggagatcag atccgcgtcc aggtcctccg cgttgctcag ggcgaacgga 600
gtcaactttg gtagctgcct tcccaaaaag ggtgcatgcc caggctttga gttgcactcg 660
caccgtagtg gcatcagaag gtgaccgtgc ccggtctggg cgttaggata cagcgcctgc 720
atgaaagcct tgatctgctt aaaagccacc tgagcctttg cgccttcaga gaagaacatg 780
ccgcaagact tgccggaaaa ctgattggcc ggacaggccg cgtcatgcac gcagcacctt 840
gcgtcggtgt tggagatctg caccacattt cggccccacc ggttcttcac gatcttggcc 900
ttgctagact gctccttcag cgcgcgctgc ccgttttcgc tcgtcacatc catttcaatc 960
acgtgctcct tatttatcat aatgctcccg tgtagacact taagctcgcc ttcgatctca 1020
gcgcagcggt gcagccacaa cgcgcagccc gtgggctcgt ggtgcttgta ggttacctct 1080
gcaaacgact gcaggtacgc ctgcaggaat cgccccatca tcgtcacaaa ggtcttgttg 1140
ctggtgaagg tcagctgcaa cccgcggtgc tcctcgttta gccaggtctt gcatacggcc 1200
gccagagctt ccacttggtc aggcagtagc ttgaagtttg cctttagatc gttatccacg 1260
tggtacttgt ccatcaacgc gcgcgcagcc tccatgccct tctcccacgc agacacgatc 1320
ggcaggctca gcgggtttat caccgtgctt tcactttccg cttcactgga ctcttccttt 1380
tcctcttgcg tccgcatacc ccgcgccact gggtcgtctt cattcagccg ccgcaccgtg 1440
cgcttacctc ccttgccgtg cttgattagc accggtgggt tgctgaaacc caccatttgt 1500
agcgccacat cttctctttc ttcctcgctg tccacgatca cctctgggga tggcgggcgc 1560
tcgggcttgg gagaggggcg cttctttttc tttttggacg caatggccaa atccgccgtc 1620
gaggtcgatg gccgcgggct gggtgtgcgc ggcaccagcg catcttgtga cgagtcttct 1680
tcgtcctcgg actcgagacg ccgcctcagc cgcttttttg ggggcgcgcg gggaggcggc 1740
ggcgacggcg acggggacga cacgtcctcc atggttggtg gacgtcgcgc cgcaccgcgt 1800
ccgcgctcgg gggtggtttc gcgctgctcc tcttcccgac tggccatttc cttctcctat 1860
aggcagaaaa agatcatgga gtcagtcgag aaggaggaca gcctaaccgc cccctttgag 1920
ttcgccacca ccgcctccac cgatgccgcc aacgcgccta ccaccttccc cgtcgaggca 1980
cccccgcttg aggaggagga agtgattatc gagcaggacc caggttttgt aagcgaagac 2040
gacgaggatc gctcagtacc aacagaggat aaaaagcaag accaggacga cgcagaggca 2100
aacgaggaac aagtcgggcg gggggaccaa aggcatggcg actacctaga tgtgggagac 2160
gacgtgctgt tgaagcatct gcagcgccag tgcgccatta tctgcgacgc gttgcaagag 2220
cgcagcgatg tgcccctcgc catagcggat gtcagccttg cctacgaacg ccacctgttc 2280
tcaccgcgcg taccccccaa acgccaagaa aacggcacat gcgagcccaa cccgcgcctc 2340
aacttctacc ccgtatttgc cgtgccagag gtgcttgcca cctatcacat ctttttccaa 2400
aactgcaaga tacccctatc ctgccgtgcc aaccgcagcc gagcggacaa gcagctggcc 2460
ttgcggcagg gcgctgtcat acctgatatc gcctcgctcg acgaagtgcc aaaaatcttt 2520
gagggtcttg gacgcgacga gaaacgcgcg gcaaacgctc tgcaacaaga aaacagcgaa 2580
aatgaaagtc actgtggagt gctggtggaa cttgagggtg acaacgcgcg cctagccgtg 2640
ctgaaacgca gcatcgaggt cacccacttt gcctacccgg cacttaacct accccccaag 2700
gttatgagca cagtcatgag cgagctgatc gtgcgccgtg cacgacccct ggagagggat 2760
gcaaacttgc aagaacaaac cgaggagggc ctacccgcag ttggcgatga gcagctggcg 2820
cgctggcttg agacgcgcga gcctgccgac ttggaggagc gacgcaagct aatgatggcc 2880
gcagtgcttg ttaccgtgga gcttgagtgc atgcagcggt tctttgctga cccggagatg 2940
cagcgcaagc tagaggaaac gttgcactac acctttcgcc agggctacgt gcgccaggcc 3000
tgcaaaattt ccaacgtgga gctctgcaac ctggtctcct accttggaat tttgcacgaa 3060
aaccgcctcg ggcaaaacgt gcttcattcc acgctcaagg gcgaggcgcg ccgcgactac 3120
gtccgcgact gcgtttactt atttctgtgc tacacctggc aaacggccat gggcgtgtgg 3180
cagcaatgcc tggaggagcg caacctaaag gagctgcaga agctgctaaa gcaaaacttg 3240
aaggacctat ggacggcctt caacgagcgc tccgtggccg cgcacctggc ggacattatc 3300
ttccccgaac gcctgcttaa aaccctgcaa cagggtctgc cagacttcac cagtcaaagc 3360
atgttgcaaa actttaggaa ctttatccta gagcgttcag gaattctgcc cgccacctgc 3420
tgtgcgcttc ctagcgactt tgtgcccatt aagtaccgtg aatgccctcc gccgctttgg 3480
ggtcactgct accttctgca gctagccaac taccttgcct accactccga catcatggaa 3540
gacgtgagcg gtgacggcct actggagtgt cactgtcgct gcaacctatg caccccgcac 3600
cgctccctgg tctgcaattc gcaactgctt agcgaaagtc aaattatcgg tacctttgag 3660
ctgcagggtc cctcgcctga cgaaaagtcc gcggctccgg ggttgaaact cactccgggg 3720
ctgtggacgt cggcttacct tcgcaaattt gtacctgagg actaccacgc ccacgagatt 3780
aggttctacg aagaccaatc ccgcccgcca aatgcggagc ttaccgcctg cgtcattacc 3840
cagggccaca tccttggcca attgcaagcc atcaacaaag cccgccaaga gtttctgcta 3900
cgaaagggac ggggggttta cctggacccc cagtccggcg aggagctcaa cccaatcccc 3960
ccgccgccgc agccctatca gcagccgcgg gcccttgctt cccaggatgg cacccaaaaa 4020
gaagctgcag ctgccgccgc cgccacccac ggacgaggag gaatactggg acagtcaggc 4080
agaggaggtt ttggacgagg aggaggagat gatggaagac tgggacagcc tagacgaagc 4140
ttccgaggcc gaagaggtgt cagacgaaac accgtcaccc tcggtcgcat tcccctcgcc 4200
ggcgccccag aaattggcaa ccgttcccag catcgctaca acctccgctc ctcaggcgcc 4260
gccggcactg cctgttcgcc gacccaaccg tagatgggac accactggaa ccagggccgg 4320
taagtctaag cagccgccgc cgttagccca agagcaacaa cagcgccaag gctaccgctc 4380
gtggcgcggg cacaagaacg ccatagttgc ttgcttgcaa gactgtgggg gcaacatctc 4440
cttcgcccgc cgctttcttc tctaccatca cggcgtggcc ttcccccgta acatcctgca 4500
ttactaccgt catctctaca gcccctactg caccggcggc agcggcagcg gcagcaacag 4560
cagcggtcac acagaagcaa aggcgaccgg atagcaagac tctgacaaag cccaagaaat 4620
ccacagcggc ggcagcagca ggaggaggag cgctgcgtct ggcgcccaac gaacccgtat 4680
cgacccgcga gcttagaaat aggatttttc ccactctgta tgctatattt caacaaagca 4740
ggggccaaga acaagagctg aaaataaaaa acaggtctct gcgctccctc acccgcagct 4800
gcctgtatca caaaagcgaa gatcagcttc ggcgcacgct ggaagacgcg gaggctctct 4860
tcagcaaata ctgcgcgctg actcttaagg actagtttcg cgccctttct caaatttaag 4920
cgcgaaaact acgtcatctc cagcggccac acccggcgcc agcacctgtc gtcagcgcca 4980
ttatgagcaa ggaaattccc acgccctaca tgtggagtta ccagccacaa atgggacttg 5040
cggctggagc tgcccaagac tactcaaccc gaataaacta catgagcgcg ggaccccaca 5100
tgatatcccg ggtcaacgga atccgcgccc accgaaaccg aattctcctc gaacaggcgg 5160
ctattaccac cacacctcgt aataacctta atccccgtag ttggcccgct gccctggtgt 5220
accaggaaag tcccgctccc accactgtgg tacttcccag agacgcccag gccgaagttc 5280
agatgactaa ctcaggggcg cagcttgcgg gcggctttcg tcacagggtg cggtcgcccg 5340
ggcgttttag ggcggagtaa cttgcatgta ttgggaattg tagttttttt aaaatgggaa 5400
gtgacgtatc gtgggaaaac ggaagtgaag atttgaggaa gttgtgggtt ttttggcttt 5460
cgtttctggg cgtaggttcg cgtgcggttt tctgggtgtt ttttgtggac tttaaccgtt 5520
acgtcatttt ttagtcctat atatactcgc tctgtacttg gcccttttta cactgtgact 5580
gattgagctg gtgccgtgtc gagtggtgtt ttttaatagg tttttttact ggtaaggctg 5640
actgttatgg ctgccgctgt ggaagcgctg tatgttgttc tggagcggga gggtgctatt 5700
ttgcctaggc aggagggttt ttcaggtgtt tatgtgtttt tctctcctat taattttgtt 5760
atacctccta tgggggctgt aatgttgtct ctacgcctgc gggtatgtat tcccccgggc 5820
tatttcggtc gctttttagc actgaccgat gttaaccaac ctgatgtgtt taccgagtct 5880
tacattatga ctccggacat gaccgaggaa ctgtcggtgg tgctttttaa tcacggtgac 5940
cagttttttt acggtcacgc cggcatggcc gtagtccgtc ttatgcttat aagggttgtt 6000
tttcctgttg taagacaggc ttctaatgtt taaatgtttt tttttttgtt attttatttt 6060
gtgtttaatg caggaacccg cagacatgtt tgagagaaaa atggtgtctt tttctgtggt 6120
ggttccggaa cttacctgcc tttatctgca tgagcatgac tacgatgtgc ttgctttttt 6180
gcgcgaggct ttgcctgatt ttttgagcag caccttgcat tttatatcgc cgcccatgca 6240
acaagcttac ataggggcta cgctggttag catagctccg agtatgcgtg tcataatcag 6300
tgtgggttct tttgtcatgg ttcctggcgg ggaagtggcc gcgctggtcc gtgcagacct 6360
gcacgattat gttcagctgg ccctgcgaag ggacctacgg gatcgcggta tttttgttaa 6420
tgttccgctt ttgaatctta tacaggtctg tgaggaacct gaatttttgc aatcatgatt 6480
cgctgcttga ggctgaaggt ggagggcgct ctggagcaga tttttacaat ggccggactt 6540
aatattcggg atttgcttag agacatattg ataaggtggc gagatgaaaa ttatttgggc 6600
atggttgaag gtgctggaat gtttatagag gagattcacc ctgaagggtt tagcctttac 6660
gtccacttgg acgtgagggc agtttgcctt ttggaagcca ttgtgcaaca tcttacaaat 6720
gccattatct gttctttggc tgtagagttt gaccacgcca ccggagggga gcgcgttcac 6780
ttaatagatc ttcattttga ggttttggat aatcttttgg aataaaaaaa aaaaaacatg 6840
gttcttccag ctcttcccgc tcctcccgtg tgtgactcgc agaacgaatg tgtaggttgg 6900
ctgggtgtgg cttattctgc ggtggtggat gttatcaggg cagcggcgca tgaaggagtt 6960
tacatagaac ccgaagccag ggggcgcctg gatgctttga gagagtggat atactacaac 7020
tactacacag agcgagctaa gcgacgagac cggagacgca gatctgtttg tcacgcccgc 7080
acctggtttt gcttcaggaa atatgactac gtccggcgtt ccatttggca tgacactacg 7140
accaacacga tctcggttgt ctcggcgcac tccgtacagt agggatcgcc tacctccttt 7200
tgagacagag acccgcgcta ccatactgga ggatcatccg ctgctgcccg aatgtaacac 7260
tttgacaatg cacaacgtga gttacgtgcg aggtcttccc tgcagtgtgg gatttacgct 7320
gattcaggaa tgggttgttc cctgggatat ggttctgacg cgggaggagc ttgtaatcct 7380
gaggaagtgt atgcacgtgt gcctgtgttg tgccaacatt gatatcatga cgagcatgat 7440
gatccatggt tacgagtcct gggctctcca ctgtcattgt tccagtcccg gttccctgca 7500
gtgcatagcc ggcgggcagg ttttggccag ctggtttagg atggtggtgg atggcgccat 7560
gtttaatcag aggtttatat ggtaccggga ggtggtgaat tacaacatgc caaaagaggt 7620
aatgtttatg tccagcgtgt ttatgagggg tcgccactta atctacctgc gcttgtggta 7680
tgatggccac gtgggttctg tggtccccgc catgagcttt ggatacagcg ccttgcactg 7740
tgggattttg aacaatattg tggtgctgtg ctgcagttac tgtgctgatt taagtgagat 7800
cagggtgcgc tgctgtgccc ggaggacaag gcgtctcatg ctgcgggcgg tgcgaatcat 7860
cgctgaggag accactgcca tgttgtattc ctgcaggacg gagcggcggc ggcagcagtt 7920
tattcgcgcg ctgctgcagc accaccgccc tatcctgatg cacgattatg actctacccc 7980
catgtaggcg tggacttccc cttcgccgcc cgttgagcaa ccgcaagttg gacagcagcc 8040
tgtggctcag cagctggaca gcgacatgaa cttaagcgag ctgcccgggg agtttattaa 8100
tatcactgat gagcgtttgg ctcgacagga aaccgtgtgg aatataacac ctaagaatat 8160
gtctgttacc catgatatga tgctttttaa ggccagccgg ggagaaagga ctgtgtactc 8220
tgtgtgttgg gagggaggtg gcaggttgaa tactagggtt ctgtgagttt gattaaggta 8280
cggtgatcaa tataagctat gtggtggtgg ggctatacta ctgaatgaaa aatgacttga 8340
aattttctgc aattgaaaaa taaacacgtt gaaacataac atgcaacagg ttcacgattc 8400
tttattcctg ggcaatgtag gagaaggtgt aagagttggt agcaaaagtt tcagtggtgt 8460
attttccact ttcccaggac catgtaaaag acatagagta agtgcttacc tcgctagttt 8520
ctgtggattc actagaatcg atgtaggatg ttgcccctcc tgacgcggta ggagaagggg 8580
agggtgccct gcatgtctgc cgctgctctt gctcttgccg ctgctgagga ggggggcgca 8640
tctgccgcag caccggatgc atctgggaaa agcaaaaaag gggctcgtcc ctgtttccgg 8700
aggaatttgc aagcggggtc ttgcatgacg gggaggcaaa cccccgttcg ccgcagtccg 8760
gccggcccga gactcgaacc gggggtcctg cgactcaacc cttggaaaat aaccctccgg 8820
ctacagggag cgagccactt aatgctttcg ctttccagcc taaccgctta cgccgcgcgc 8880
ggccagtggc caaaaaagct agcgcagcag ccgccgcgcc tggaaggaag ccaaaaggag 8940
cgctcccccg ttgtctgacg tcgcacacct gggttcgaca cgcgggcggt aaccgcatgg 9000
atcacggcgg acggccggat ccggggttcg aaccccggtc gtccgccatg atacccttgc 9060
gaatttatcc accagaccac ggaagagtgc ccgcttacag gctctccttt tgcacggtct 9120
agagcgtcaa cgactgcgca cgcctcaccg gccagagcgt cccgaccatg gagcactttt 9180
tgccgctgcg caacatctgg aaccgcgtcc gcgactttcc gcgcgcctcc accaccgccg 9240
ccggcatcac ctggatgtcc aggtacatct acggattacg tcgacgttta aaccatatga 9300
tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 9360
aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 9420
tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 9480
tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 9540
cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 9600
agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 9660
tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 9720
aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 9780
ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 9840
cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 9900
accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 9960
ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 10020
ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 10080
gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt 10140
aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gtcagaagaa ctcgtcaaga 10200
aggcgataga aggcgatgcg ctgcgaatcg ggagcggcga taccgtaaag cacgaggaag 10260
cggtcagccc attcgccgcc aagctcttca gcaatatcac gggtagccaa cgctatgtcc 10320
tgatagcggt ccgccacacc cagccggcca cagtcgatga atccagaaaa gcggccattt 10380
tccaccatga tattcggcaa gcaggcatcg ccatgggtca cgacgagatc ctcgccgtcg 10440
ggcatgctcg ccttgagcct ggcgaacagt tcggctggcg cgagcccctg atgctcttcg 10500
tccagatcat cctgatcgac aagaccggct tccatccgag tacgtgctcg ctcgatgcga 10560
tgtttcgctt ggtggtcgaa tgggcaggta gccggatcaa gcgtatgcag ccgccgcatt 10620
gcatcagcca tgatggatac tttctcggca ggagcaaggt gagatgacag gagatcctgc 10680
cccggcactt cgcccaatag cagccagtcc cttcccgctt cagtgacaac gtcgagcaca 10740
gctgcgcaag gaacgcccgt cgtggccagc cacgatagcc gcgctgcctc gtcttgcagt 10800
tcattcaggg caccggacag gtcggtcttg acaaaaagaa ccgggcgccc ctgcgctgac 10860
agccggaaca cggcggcatc agagcagccg attgtctgtt gtgcccagtc atagccgaat 10920
agcctctcca cccaagcggc cggagaacct gcgtgcaatc catcttgttc aatcatgcga 10980
aacgatcctc atcctgtctc ttgatcgatc tttgcaaaag cctaggcctc caaaaaagcc 11040
tcctcactac ttctggaata gctcagaggc cgaggcggcc tcggcctctg cataaataaa 11100
aaaaattagt cagccatggg gcggagaatg ggcggaactg ggcggagtta ggggcgggat 11160
gggcggagtt aggggcggga ctatggttgc tgactaattg agatgcatgc tttgcatact 11220
tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acacctggtt gctgactaat tgagatgcat 11280
gctttgcata cttctgcctg ctggggagcc tggggacttt ccacacccta actgacacac 11340
attccacagc tggttctttc cgcctcagga ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt 11400
tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa 11460
ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccaccta aattgtaagc gttaatattt 11520
tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa 11580
tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt gttgttccag 11640
tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg 11700
tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga 11760
ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg 11820
gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg 11880
cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc 11940
cgctacaggg cgcgatggat cc 11962
<210> 138
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人ACTB RT-F
<400> 138
caccattggc aatgagcggt tc 22
<210> 139
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人ACTB RT-R
<400> 139
aggtctttgc ggatgtccac gt 22
<210> 140
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人 TNF-a RT-F
<400> 140
ctcttctgcc tgctgcactt tg 22
<210> 141
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人TNF-a RT-R
<400> 141
atgggctaca ggcttgtcac tc 22
<210> 142
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFN-gamma RT-F
<400> 142
gagtgtggag accatcaagg aag 23
<210> 143
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFN-gamma RT-R
<400> 143
tgctttgcgt tggacattca agtc 24
<210> 144
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人NLRP3 RT-F
<400> 144
ggactgaagc acctgttgtg ca 22
<210> 145
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人NLRP3 RT-R
<400> 145
tcctgagtct cccaaggcat tc 22
<210> 146
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠ACTB RT-F
<400> 146
cattgctgac aggatgcaga agg 23
<210> 147
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠 ACTB RT-R
<400> 147
tgctggaagg tggacagtga gg 22
<210> 148
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠TNF-a RT-F
<400> 148
ggtgcctatg tctcagcctc tt 22
<210> 149
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠TNF-a RT-R
<400> 149
gccatagaac tgatgagagg gag 23
<210> 150
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠IFN-gamma RT-F
<400> 150
cagcaacagc aaggcgaaaa agg 23
<210> 151
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠IFN-gamma RT-R
<400> 151
tttccgcttc ctgaggctgg at 22
<210> 152
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠NLRP3 RT-F
<400> 152
tcacaactcg cccaaggagg aa 22
<210> 153
<211> 22
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠NLRP3 RT-R
<400> 153
aagagaccac ggcagaagct ag 22
<210> 154
<211> 21
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ITR-F
<400> 154
ggaaccccta gtgatggagt t 21
<210> 155
<211> 16
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ITR-R
<400> 155
cggcctcagt gagcga 16

Claims (77)

1.CYP4V2和RdCVF在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中所述CYP4V2为人CYP4V2。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述CYP4V2包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述RdCVF为人RdCVF。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的用途，其中所述RdCVF包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其中所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ IDNO:69-75中任一项所示的核酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其中所述药物包含编码所述CYP4V2的多核苷酸以及编码所述RdCVF的多核苷酸。
10.根据权利要求1-9所述的用途，其中所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于不同的载体上。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述编码CYP4V2的多核苷酸和所述编码RdCVF的多核苷酸位于同一载体上。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的用途，其中所述载体包括病毒载体。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的用途，其中所述载体为病毒载体，其所述病毒载体包括AAV载体。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的用途，其中所述载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的用途，其中所述载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
16.根据权利要求14-15中任一项所述的用途，其中所述启动子包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的用途，其中所述载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
18.根据权利要求10-16中任一项所述的用途，其中所述载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的用途，其中所述载体还包含编码自我剪切肽的多核苷酸，所述编码自我剪切肽的多核苷酸位于所述编码CYP4V2的多核苷酸与所述编码RdCVF的多核苷酸之间。
20.根据权利要求19中任一项所述的用途，其中所述自我剪切肽包含P2A。
21.根据权利要求19-20中任一项所述的用途，其中所述编码自我剪切肽的多核苷酸包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核苷酸序列。
22.根据权利要求10-21中任一项所述的用途，其中所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸和所述多聚腺苷酸信号位点。
23.根据权利要求10-18中任一项所述的用途，其中所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点；或者，所述载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
24.根据权利要求10-23中任一项所述的用途，其中所述载体还包含内含子。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
26.根据权利要求24-25中任一项所述的用途，其中所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
27.根据权利要求24-25中任一项所述的用途，其中所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的用途，其中所述载体包含SEQ ID NO:90-116中任一项所示的核苷酸序列。
29.用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症的载体组合，其包括第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码CYP4V2的多核苷酸，所述第二载体包含编码RdCVF的多核苷酸。
30.根据权利要求29所述的载体组合，其中所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
31.根据权利要求29-30中任一项所述的载体组合，其中所述CYP4V2为人CYP4V2。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的载体组合，其中所述CYP4V2包含SEQ ID NO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的载体组合，其中所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQ ID NO:62-69中任一项所示的核酸序列。
34.根据权利要求29-33中任一项所述的载体组合，其中所述RdCVF为人RdCVF。
35.根据权利要求29-34中任一项所述的载体组合，其中所述RdCVF包含SEQ ID NO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
36.根据权利要求29-35中任一项所述的载体组合，其中所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
37.根据权利要求29-36中任一项所述的载体组合，其中所述载体包括病毒载体。
38.根据权利要求29-37中任一项所述的载体组合，其中所述载体为病毒载体，其所述病毒载体包括AAV载体。
39.根据权利要求29-38中任一项所述的载体组合，其中所述第一载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
40.根据权利要求29-39中任一项所述的载体组合，其中所述第二载体还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
41.根据权利要求39-40中任一项所述的载体组合，其中所述启动子包含SEQ ID NO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
42.根据权利要求29-41中任一项所述的载体组合，其中所述第一载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
43.根据权利要求29-42中任一项所述的载体组合，其中所述第二载体还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
44.根据权利要求29-43中任一项所述的载体组合，其中所述第一载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点；和/或，所述第二载体以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码RdCVF的多核苷酸、所述多聚腺苷酸信号位点。
45.根据权利要求29-44中任一项所述的载体组合，其中所述第一载体和/或所述第二载体还包含内含子。
46.根据权利要求45所述的载体组合，其中所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
47.根据权利要求29-46中任一项所述的载体组合，其中所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
48.根据权利要求29-47中任一项所述的载体组合，其中所述内含子位于所述编码RdCVF的多核苷酸中，或者，位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端。
49.根据权利要求29-48中任一项所述的载体组合，其中所述第一载体包含SEQ ID NO:90-95中任一项所示的核苷酸序列；和/或，所述第二载体包含SEQ ID NO:96-100中任一项所示的核苷酸序列。
50.分离的一种或多种核酸分子，其包含a)编码CYP4V2的多核苷酸以及b)编码RdCVF的多核苷酸。
51.根据权利要求50所述的分离的核酸分子，其中所述CYP4V2为人CYP4V2。
52.根据权利要求50-51中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述CYP4V2包含SEQ IDNO:76-82中任一项所示的氨基酸序列。
53.根据权利要求50-52中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述编码CYP4V2的多核苷酸包含SEQ ID NO:62-68中任一项所示的核酸序列。
54.根据权利要求50-53中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述RdCVF为人RdCVF。
55.根据权利要求50-54中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述RdCVF包含SEQ IDNO:83-89中任一项所示的氨基酸序列。
56.根据权利要求50-55中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述编码RdCVF的多核苷酸包含SEQ ID NO:69-75中任一项所示的核酸序列。
57.根据权利要求50-56中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含启动子，所述启动子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端且与所述编码CYP4V2的多核苷酸可操作连接。
58.根据权利要求50-57中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含启动子，所述启动子位于所述编码RdCVF的多核苷酸的5’端且与所述编码RdCVF的多核苷酸可操作连接。
59.根据权利要求57-58中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述启动子包含SEQ IDNO:1-12中任一项所示的核苷酸序列。
60.根据权利要求50-59中任一项所述的分离的核酸分子，其包含编码CYP4V2的多核苷酸和编码RdCVF的多核苷酸。
61.根据权利要求50-60所述的分离的核酸分子，其还包含编码自我剪切肽的多核苷酸，所述编码自我剪切肽的多核苷酸位于所述编码CYP4V2的多核苷酸与所述编码RdCVF的多核苷酸之间。
62.根据权利要求61所述的分离的核酸分子，其中所述自我剪切肽包含P2A。
63.根据权利要求61-62中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述编码自我剪切肽的多核苷酸包含SEQ ID NO:22-25中任一项所示的核苷酸序列。
64.根据权利要求50-63中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的3’端。
65.根据权利要求50-64中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含多聚腺苷酸信号位点，所述多聚腺苷酸信号位点位于所述编码RdCVF的多核苷酸的3’端。
66.根据权利要求50-65中任一项所述的分离的核酸分子，其以5’至3’方向依次包含：所述启动子、所述编码CYP4V2的多核苷酸、所述编码自我剪切肽的多核苷酸、所述编码RdCVF的多核苷酸和所述多聚腺苷酸信号位点。
67.根据权利要求50-66中任一项所述的分离的核酸分子，其还包含内含子。
68.根据权利要求67所述的分离的核酸分子，其中所述内含子包含SEQ ID NO:13-16中任一项所示的核苷酸序列。
69.根据权利要求67-68中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述内含子位于所述编码CYP4V2的多核苷酸中，或者，位于所述编码CYP4V2的多核苷酸的5’端。
70.根据权利要求50-69中任一项所述的分离的核酸分子，其包含SEQ ID NO:101-115中任一项所示的核苷酸序列。
71.载体，其包含权利要求50-70中任一项所述的分离的核酸分子。
72.根据权利要求71所述的载体，其为病毒载体。
73.根据权利要求71-72中任一项所述的载体，其为病毒载体，且所述病毒载体包括AAV载体。
74.细胞，其包含根据权利要求50-70中任一项所述的分离的核酸分子或根据权利要求29-49中任一项所述的载体组合。
75.药物组合物，其包含权利要求50-70中任一项所述的分离的核酸分子，权利要求29-49中任一项所述的载体组合，或权利要求74所述的细胞。
76.权利要求50-70中任一项所述的分离的核酸分子，权利要求29-49中任一项所述的载体组合，或权利要求74所述的细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗、缓解和/或预防与视网膜色素上皮(RPE)萎缩相关的疾病或病症。
77.根据权利要求76所述的用途，其中所述疾病或病症包括结晶样视网膜变性。
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