CN113249256A - 一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用 - Google Patents

一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用,属于微生物技术领域。本发明的植物乳杆菌CCFM1180可用于制备食品、功能性食品或药物,具有广泛的应用前景。植物乳杆菌CCFM1180能够抑制去卵巢小鼠的体重增长速度以及体重增量,降低去卵巢小鼠血清总胆固醇(TC),脂肪组织中的IL‑6水平有助于缓解肥胖、糖尿病及非酒精性脂肪肝炎等疾病;并能够提高去卵巢小鼠血清雌二醇(E2)、提高脂肪组织中雌激素受体ERα的表达水平,缓解因雌激素撤退引起的更年期相关症状;还能够提高小鼠粪便短链脂肪酸水平,促进去卵巢小鼠健康。具有广泛的应用前景。

Description

一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用
技术领域
本发明涉及一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用,属于微生物技术领域。
背景技术
女性更年期是指由于卵巢功能下降引起雌激素水平降低的时期,主要发生在女性45-55 岁。随着雌激素水平的降低,更年期女性会经历严重的病理生理变化,如抑郁、焦虑、睡眠障碍,燥热,盗汗等症状。此外,更年期妇女代谢异常的风险也显著增加。在更年期期间,雌二醇的撤退已被证明会导致皮下脂肪储存向内脏脂肪储存的转移和脂肪分解反应的紊乱。雌二醇可通过增强胰岛素对脂肪分解的抑制作用和抑制皮下脂肪组织中儿茶酚胺刺激的脂肪分解而具有抗脂肪分解作用。在全球范围内,尤其是在发达国家,更年期妇女的肥胖率正在不断上升。超重和肥胖不仅会造成身体和生活不便,而且会引起一系列代谢类疾病如糖尿病,心血管疾病,中风等。激素替代疗法被认为是治疗绝经后肥胖症的方法之一。但是激素疗法可能会增加子宫癌,乳腺癌等风险。大豆异黄酮是一类与雌激素有类似的化学结构的物质,因此可与雌激素受体结合,发挥类雌激素作用。但是,目前研究发现大豆异黄酮的类雌激素活性在个体之间有明显差异,通过补充大豆异黄酮来缓解雌激素分泌不足而引起的一系列症状的效果甚微。
近年来,随着对肠道菌群与人体健康关系的深入研究,大量研究证实了益生菌可通过调节肠道菌群对人体健康的改善功能。益生菌可通过对肠道微生物群的调节对绝经后肥胖妇女的减肥产生有益的作用。益生菌能通过肠道菌群的调节,对肠道菌群以及肠道菌群产物产生影响,如益生菌可促进肠道内的短链脂肪酸生成,从而维持肠道稳态和能量代谢。
益生菌具有安全、无副作用等特点,目前已有大量临床及动物实验研究表明,益生菌具有缓解肥胖、非酒精性脂肪肝、炎症性肠病等作用。随着对益生菌研究的不断深入,通过益生菌来改善更年期女性的健康状况,成为缓解更年期代谢紊乱以及肥胖发生的新手段。
发明内容
本发明的第一个目的是提供植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1180,已于2021 年4月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No:61634。
本发明的第二个目的是提供含有所述植物乳杆菌CCFM1180的组合物。
在一种实施方式中,所述植物乳杆菌CCFM1180的数量≥1×106CFU/mL或≥1×106CFU/g。
在一种实施方式中,所述植物乳杆菌CCFM1180的数量≥1×109CFU/mL或≥1×109CFU/g。
在一种实施方式中,所述组合物包括但不限于微生物制剂、功能性食品、保健品或药物。
在一种实施方式中,所述组合物中含有所述植物乳杆菌CCFM1180的活菌株、冻干菌株、菌株代谢物或灭活的菌株。
本发明的第三个目的是提供所述植物乳杆菌CCFM1180、其发酵食品及其在制备通过提高女性体内循环雌激素水平来缓解由于雌激素分泌不足而引起的代谢紊乱及肥胖的药物中的应用。
在一种实施方式中,所述应用包括但不限于如下至少一种作用:
(1)缓解哺乳动物体重增长速度,减少体重增量;
(2)降低哺乳动物血清总胆固醇水平;
(3)降低脂肪组织中的炎症水平;
(4)提高哺乳动物血清雌二醇水平;
(5)提高哺乳动物腹部脂肪中雌激素受体ERα的表达;
(6)促进哺乳动物肠道短链脂肪酸的产生。
在一种实施方式中,所述短链脂肪酸包括但不限于乙酸、丙酸。
在一种实施方式中,所述哺乳动物包括但不限于人类。
在一种实施方式中,所述药物还含有药学上可接受的载体。
在一种实施方式中,所述药学上可接受的载体包括但不限于:填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。
在一种实施方式中,所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉或糊精中的一种或多种;所述润湿剂为乙醇或甘油中的一种或多种;所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种;所述粘合剂为淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种;所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。
本发明还要求保护所述植物乳杆菌CCFM1180在制备发酵食品中的应用。
在一种实施方式中,所述应用包括但不限于将所述植物乳杆菌CCFM1180作为发酵微生物,利用食品原料进行发酵。
本发明的有益效果:所述植物乳杆菌CCFM1180能够抑制去卵巢小鼠的体重增长速度以及体重增量,降低去卵巢小鼠血清总胆固醇(TC),脂肪组织中的IL-6水平有助于缓解肥胖、糖尿病及非酒精性脂肪肝炎等疾病;所述植物乳杆菌CCFM1180能够提高去卵巢小鼠血清雌二醇(E2)、提高脂肪组织中雌激素受体ERα的表达水平,缓解更年期相关症状;所述植物乳杆菌CCFM1180能够提高小鼠粪便短链脂肪酸水平,促进小鼠健康。具有广泛的应用前景。
生物材料保藏
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1180,分类命名为Lactobacillusplantarum CCFM1180,已于2021年4月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No:61634,保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1是植物乳杆菌CCFM1180的菌落形态;
图2是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠体重变化和体重增量的影响;
图3是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠血清中雌二醇的影响;
图4是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠腹部脂肪组织中雌激素受体ERα表达的影响;
图5是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠血清总胆固醇(TC)的影响;
图6是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠腹部脂肪组织中的IL-6的影响;
图7是植物乳杆菌CCFM1180对去卵巢小鼠粪便短链脂肪酸的影响;其中,A,乙酸;B,丙酸;
其中,各组与去卵巢模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.0001。
具体实施方式
实施例1植物乳杆菌CCFM1180的筛选
(一)乳杆菌的分离筛选
(1)收集产自不同地区的蔬菜样品。涂布于含有山梨醇的MRS培养基中富集12h,然后将富集的样品梯度稀释后涂布于添加了0.02%溴甲酚紫的MRS固体平板上,置于37℃恒温培养箱中培养48h。
(2)培养后根据菌落的颜色、大小、边缘形状等,用接种环挑取菌落划线纯化。
(3)所得菌落进行革兰氏染色和过氧化氢酶分析。
(4)保留革兰氏染色阳性杆菌和过氧化氢酶阴性菌。
(二)乳杆菌的分子生物学鉴定
(1)单菌基因组抽提
(A)将步骤(一)所筛选得到的乳杆菌培养过夜;
(B)取培养过夜的菌悬液l mL于1.5mL离心管,10000r/min离心2min,弃上清得菌体;
(C)用l mL无菌水吹洗菌体后,10000r/min离心2min,弃上清得菌体;
(D)加入200μL SDS裂解液,80℃水浴30min;
(E)加入酚-氯仿溶液200μL于菌体裂解液中,其中酚-氯仿溶液的组成成分及体积比为Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1,颠倒混匀后,12000rpm离心5-10min,取上清200μL;
(F)加入400μL冰乙醇或冰异丙醇于200μL上清中,-20℃静置1h,12000rpm离心 5-10min,弃上清;
(G)加入500μL70%(体积百分数)冰乙醇重悬沉淀,12000rpm离心1-3min,弃上清;60℃烘箱烘干,或者自然晾干;
(H)50μL ddH2O重溶沉淀以备PCR。
(2)16S rDNA PCR
(A)细菌16S rDNA 50μLPCR反应体系
10×Taq buffer,5μL;dNTP,5μL;引物27F,0.5μL;引物1492R,0.5μL;Taq酶,0.5μL;模板,
0.5μL;ddH2O,38μL。
(B)PCR条件
95℃5min;95℃10s;55℃30s;72℃30s;step2-4 30×;72℃5min;12℃2min。
(C)制备1%琼脂糖凝胶,之后将PCR产物与10000×loading buffer混合,上样量2μL, 120V跑30min,然后进行凝胶成像;
(D)将得到PCR产物送专业测序公司,将得到的测序结果与使用BLAST在GenBank中进行搜索和相似性比对,将鉴定为植物乳杆菌的菌株-80℃保存。
(3)全基因组测序
将提取的全基因组送专业测序公司,利用二代测序仪对菌的全基因组进行测序,将得到的序列结果使用BLAST在GenBank中进行搜索和相似性比对,测序结果鉴定为属于植物乳杆菌。
实施例2:植物乳杆菌CCFM1180对模拟胃肠液具有良好的耐受性
将的植物乳杆菌CCFM1180接种于MRS培养基中,在温度37℃有氧条件下培养18h,再经MRS培养液传代培养2~3次后,获得菌浓度为1×109CFU/mL的细胞培养液。
取3mL植物乳杆菌CCFM1180的培养液8000×g离心2min收集菌体,与3mL pH 3.0人工模拟胃液(含3g/L胃蛋白酶、pH=3.0的生理盐水)混合,并在37℃下有氧
培养,分别在0h、2h时取样,用MRS琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数,测定活菌数并计算其存活率。
取3mL植物乳杆菌CCFM1180的培养液8000×g离心2min收集菌体,加入3mL pH 8.0人工模拟肠液(含胰蛋白酶1g/L、胆盐0.3%、pH=8.0的生理盐水)混合,于37℃中有氧培养,分别在0h、2h、4h取样,用MRS琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数,测定活菌数并计算其存活率。
存活率(%)以该培养液中在取样时的活菌数与在第0h时活菌数之比计算。实验结果如表1所示,结果表明,植物乳杆菌对人工模拟胃肠液具有较好的耐受能力。
表1植物乳杆菌CCFM1180在人工模拟胃肠液中的耐受能力
Figure BDA0003071382610000051
实施例3:植物乳杆菌CCFM1180对C57LB/6N小鼠无毒副作用
将植物乳杆菌CCFM1180菌体重悬于浓度为30g/L的蔗糖溶液中,制成浓度为 1.0×1010CFU/mL的菌悬液。取体重18-20g左右的健康雌性C57LB/6N小鼠12只,适应环境一周后,分为CCFM1180组和对照组。CCFM1180组每日给予该浓度菌悬液0.1mL灌胃一次,对照组灌胃相同量的不含植物乳杆菌CCFM1180的30g/L的蔗糖溶液,观察一周,记录死亡和体重情况。
这些试验结果列于表2中。这些结果表明,喂食浓度1×109CFU/只的植物乳杆菌CCFM1180未对小鼠造成明显影响,体重无显著变化,无死亡现象产生。小鼠外观无明显病理症状。
表2小鼠体重变化及死亡情况
Figure BDA0003071382610000052
实施例4:植物乳杆菌CCFM1180缓解去卵巢小鼠体重增长速度,减少体重增量
取体重18-20g的健康雌性C57LB/6N小鼠24只,适应性培养1周后,随机分为4组,分别为假手术组、去卵巢模型组、植物乳杆菌CCFM1180干预组(CCFM1180)和大豆异黄酮组(大豆异黄酮)。除假手术组只摘取小鼠两侧卵巢旁的少许脂肪,其他组皆摘除双侧卵巢;所有老鼠在手术后休养两周。然后,从手术后第15天开始,假手术组和去卵巢模型组给予 0.1mL0.9%生理盐水同时饲喂普通饲料(不含大豆蛋白),植物乳杆菌CCFM1180干预组给予1×109CFU/只的植物乳杆菌CCFM1180并饲喂不含大豆蛋白的普通饲料,大豆异黄酮组组给予0.1ml 0.9%生理盐水同时饲喂添加了含0.1%大豆异黄酮的饲料(即每只小鼠每日摄入的大豆异黄酮量为0.5mg)。实验分组及处理方法见表3:
表3实验动物分组情况
Figure BDA0003071382610000061
干预开始每周记录老鼠体重。实验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃。试验结束时,小鼠禁食不禁水12h,用异氟烷麻醉后,摘眼球取血并辅以颈椎脱臼法处死。血液样本3500r/min 离心15分钟,取上清,-80℃冻存,用于血液指标分析。腹部脂肪取出后迅速于预冷的生理盐水中漂洗去血,于液氮中速冻并转移于-80℃冻存,后续制成脂肪匀浆液测定相关指标。
植物乳杆菌CCFM1180对小鼠体重增长速率和体重增量的影响如图2,与去卵巢模型小鼠相比,植物乳杆菌CCFM1180使去卵巢小鼠的体重增长速率减慢并且降低体重增量(去卵巢模型组体重增量:10.83±2.025g;植物乳杆菌CCFM1180组体重增量:5.666±1.802g),而大豆异黄酮干预组(体重增量:11.380±1.884g)对去卵巢小鼠的体重减轻并没有帮助,说明植物乳杆菌CCFM1180可预防和减少由于雌激素撤退导致的体重增加。
实施例5:植物乳杆菌CCFM1180升高血清雌二醇水平
实验动物分组及处理方法同实施例4,血清雌二醇水平的测定按照试剂盒方法进行。
如图3所示,与去卵巢模型组小鼠相比,植物乳杆菌CCFM1180能够提高血清中雌二醇的水平,使去卵巢后小鼠的血清雌二醇水平恢复至与假手术组的水平相同(CCFM1180干预组:17.54±1.836ng/L;假手术组:17.23±1.079ng/L),而大豆异黄酮干预组和去卵巢模型组的水平一致,仍停留在较低的雌二醇水平(大豆异黄酮干预组:14.44±0.6897ng/L,去卵巢模型组:15.27±0.4353ng/L)。这说明植物乳杆菌CCFM1180的干预可以弥补由于卵巢功能的降低而导致雌激素水平的降低。
实施例6:植物乳杆菌CCFM1180能够促进去卵巢小鼠腹部脂肪组织中雌激素受体ERα表达
实验动物分组及处理方法同实施例4。
腹部脂肪组织ERαmRNA测定:取约20mg脂肪组织加入500μL Trizol,冰浴匀浆后采用常规方法提取脂肪组织中的RNA。按照反转录试剂盒说明书进行cDNA合成。用荧光染料SYBR Green super mix(Qiagen,Germany)混合样本,PCR体系为5μL mix、1μL cDNA、1μL 正向和反向引物,用ddH2O补至总体积为10μL。在实时荧光定量基因扩增仪器CFX96TM Real-Time System(Bio-Rad,USA)上进行检测,每个样本设立3个平行孔,并以GAPDH 为内参,所得结果用2-ΔΔCq的方法进行分析;所用的引物序列见表4。
表4qPCR引物序列
Figure BDA0003071382610000071
结果显示(图4),植物乳杆菌CCFM1180能够显著提高去卵巢小鼠的腹部脂肪组织中ERα的mRNA水平,相对于去卵巢组提高至3.524±1.121,优于大豆异黄酮组的1.507±0.1771。 ERα表达水平的上升意味着受到雌激素水平上升的影响从而ERα被激活。此外雌激素抵抗肥胖需要ERα的激活。植物乳杆菌CCFM1180能够通过提高腹部脂肪组织中ERα表达从而对由于雌激素撤退导致的代谢紊乱产生有效的抗肥胖作用。
实施例7:植物乳杆菌CCFM1180降低血清总胆固醇(TC)水平
实验动物分组及处理方法同实施例4,血清总胆固醇(TC)水平的测定按照试剂盒方法进行。
如图5所示,与去卵巢模型组小鼠相比,植物乳杆菌CCFM1180能够使小鼠血清中的TC 水平相对于去卵巢组降低12.57%,其降低血清总胆固醇的能力与大豆异黄酮接近,从而使小鼠体内总胆固醇含量减少,有利于雌激素撤退后代谢紊乱和肥胖发生的预防和治疗。
实施例8:植物乳杆菌CCFM1180降低去卵巢小鼠腹部脂肪组织中的IL-6水平
实验动物分组及处理方法同实施例4,腹部脂肪中IL-6水平的测定按照试剂盒方法进行。
如图6所示,去卵巢后,小鼠腹部脂肪组织的IL-6水平显著升高可达1228±353.4pg/ml,而植物乳杆菌CCFM1180和大豆异黄酮的干预能够显著降低IL-6水平,分别降低68.53%和 70.78%,使得去卵巢小鼠脂肪组织中IL-6的水平与假手术组相当。说明,植物乳杆菌 CCFM1180具有与大豆异黄酮相当的降低雌激素撤退后引起体内炎症的作用。
实施例9植物乳杆菌CCFM1180促进小鼠肠道短链脂肪酸的产生
实验动物分组及处理方法同实施例4。实验末期收集小鼠粪便用于短链脂肪酸分析。粪便短链脂肪酸的分析方法如下:
称取50mg粪便样品冻干;加入500μL饱和NaCl溶液,均质至无明显块状物;均质后,加入40μL 10%硫酸酸化;加入1mL的乙醚用以萃取短链脂肪酸;振荡后以12000r/min15min 4℃的条件离心;离心后取上清,将上清液加入到装有0.25g的无水硫酸钠离心管中,静置,再次以同样条件离心;离心后将液体加入气相小瓶,上机分析。
采用Rtx-Wax柱对各短链脂肪酸进行分离,采用全扫模式(质荷比扫描范围33-110)检测各短链脂肪酸(乙酸、丙酸),选取各分析物标准品的特征离子进行定量分析。
结果显示(图7),去卵巢小鼠的粪便短链脂肪酸(包括乙酸、丙酸)水平较假手术组小鼠低,这说明雌激素的撤退使得小鼠肠道微生物代谢物发生变化,肠道微生物产短链脂肪酸减少,而植物乳杆菌CCFM1180能够逆转这种变化,并促进肠道短链脂肪酸产生,使乙酸恢复至2.055±0.3947mg/g粪便,与假手术组含量无显著差异(2.273±0.6345mg/g粪便),而大豆异黄酮则与去卵巢组含量相当,分别为1.044±0.3914mg/g粪便和1.240±0.2720mg/g粪便;同时,CCFM1180使丙酸含量恢复至0.7094±0.2165mg/g粪便,与假手术组的含量(0.6370 ±0.1833mg/g粪便)相当,而大豆异黄酮这种作用并不大,其含量仅为0.3140±0.1055mg/g 粪便,与去卵巢(0.3724±0.1144mg/g粪便)相当。
实施例10植物乳杆菌CCFM1180制备药物
将植物乳杆菌CCFM1180接种于MRS培养基中,于37℃培养至菌浓为1×109CFU/mL,离心收集菌体细胞,洗涤并重悬于PBS溶液中,制备获得含植物乳杆菌CCFM1180的液体制剂。
可选地,将植物乳杆菌CCFM1180菌体细胞重悬于细胞保护剂中,冷冻干燥获得含植物乳杆菌CCFM1180的菌粉。
可选地,将植物乳杆菌CCFM1180的液体或固体制剂与药学上常用的载体配伍,制备不同剂型的药物。
实施例11植物乳杆菌CCFM1180制备发酵食品
将植物乳杆菌CCFM1180接种于种子培养基,例如MRS培养基,于37℃培养至菌浓大于1×106CFU/mL,作为发酵种子液。
以乳原料(例如牛乳、豆乳)、果蔬汁为原料,接种植物乳杆菌CCFM1190的种子液,在一定的温度下(例如30~37℃)发酵一定时间,制备发酵乳饮料或发酵果蔬制品。
以乳原料(例如牛乳、豆乳)、含碳水化合物或蛋白质的食品为原料,接种植物乳杆菌 CCFM1190的种子液,在一定的温度下(例如30~37℃)发酵一定时间,制备发酵食品。
对比例1
具体实施方式同实施例5和6,区别在于将植物乳杆菌CCFM1180替换为植物乳杆菌W19(记载于:俞赟霞,《产细菌素乳酸菌对小鼠肠道微生态的影响》,江南大学,2018),测定去卵巢小鼠的血清雌二醇指标,结果显示植物乳杆菌W19组小鼠血清雌二醇值为15.04±0.9264ng/L,相比于去卵巢模型组(15.27±0.4353ng/L),去卵巢小鼠雌二醇水平未发生明显变化;去卵巢模型组ERαmRNA表达量为0.8279±0.0757,而植物乳杆菌W19组小鼠腹部脂肪组织中ERαmRNA表达量为1.013±0.2811,表达水平未出现明显变化。
对比例2
具体实施方式同实施例9,区别在于将植物乳杆菌CCFM1180替换为植物乳杆菌W19,测定去卵巢小鼠的粪便中短链脂肪酸的水平,结果显示植物乳杆菌W19组小鼠粪便中乙酸水平为1.276±0.4188mg/g粪便,与去卵巢组1.240±0.2720mg/g粪便无显著差别;植物乳杆菌 W19组小鼠粪便中丙酸水平为0.4009±0.1098mg/g粪便,与去卵巢组0.3724±0.1144mg/g粪便无显著差别。
对比例3
具体实施方式同实施例5,区别在于,将植物乳杆菌CCFM1180替换为长双歧杆菌15M1,测定去卵巢小鼠的血清雌二醇指标,结果显示长双歧乳杆菌15M1组小鼠血清雌二醇值为 14.58±0.8868ng/L,相比于去卵巢模型组(15.27±0.4353ng/L),去卵巢小鼠雌二醇水平未发生明显变化。
对比例4
具体实施方式同实施例6,区别在于将植物乳杆菌CCFM1180替换为长双歧杆菌15M1,测定小鼠的腹部脂肪组织中的ERα表达水平,结果显示,相比于去卵巢模型组ERαmRNA表达量为0.8279±0.0757,长双歧杆菌15M1组小鼠腹部脂肪组织中ERαmRNA表达量为1.163±0.5307,表达水平未出现明显变化。
对比例5
具体实施方式同实施例9,区别在于将植物乳杆菌CCFM1180替换为长双歧15M1,测定去卵巢小鼠的粪便中短链脂肪酸的水平,结果显示长双歧杆菌15M1组小鼠粪便中乙酸水平为1.022±0.1613mg/g粪便,与去卵巢组1.240±0.2720mg/g粪便无显著差别;长双歧15M1 组小鼠粪便中丙酸水平为0.2735±0.05772mg/g粪便,与去卵巢组0.3724±0.1144mg/g粪便无显著差别。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一株缓解雌激素相关代谢紊乱及肥胖的植物乳杆菌及应用
<130> BAA210639A
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aggtcggtgt gaacggattt g 21
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tgtagaccat gtagttgagg tca 23
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ccgtcttact gtctcagccc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
cgagttacag actggctccc 20

Claims (10)

1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1180,已于2021年4月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No:61634。
2.含有权利要求1所述植物乳杆菌CCFM1180的组合物。
3.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于,所述植物乳杆菌CCFM1180的数量≥1×106CFU/mL或≥1×106CFU/g。
4.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于,所述组合物中含有权利要求1所述植物乳杆菌CCFM1180的活菌株、菌株代谢物或灭活的菌株。
5.根据权利要求2~4任一所述的组合物,其特征在于,所述组合物包括但不限于微生物制剂、功能性食品、保健品或药物。
6.一种药物,其特征在于,含有权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM1180和药学上可接受的载体。
7.权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM1180或其发酵制品在制备缓解雌激素相关的代谢紊乱和/或肥胖的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,包括但不限于如下至少一种作用:
(1)缓解哺乳动物体重增长速度,减少体重增量;
(2)降低哺乳动物血清总胆固醇水平;
(3)降低脂肪组织中的炎症水平;
(4)提高哺乳动物血清雌二醇水平;
(5)提高哺乳动物腹部脂肪中雌激素受体ERα的表达;
(6)促进哺乳动物肠道短链脂肪酸的产生。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述哺乳动物包括但不限于人类。
10.权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM1180或权利要求2~4任一所述的组合物在制备发酵食品中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023176849A1 (ja) * 2022-03-17 2023-09-21 株式会社カネカ グルクロニダーゼ活性剤、医薬組成物、食用組成物、及び経口用組成物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2421607A1 (es) * 2012-02-02 2013-09-04 Consejo Superior Investigacion Bacterias acido-lácticas que se desarrollan en leche de soja y activan las isoflavonas, producto que las contiene y sus aplicaciones
CN106798755A (zh) * 2017-03-10 2017-06-06 泰安大凡神农制药有限公司 一种具有调理乳腺增生功能的益生菌组合物及其应用
CN110870878A (zh) * 2018-08-31 2020-03-10 生物节律有限公司 用于防止或缓解女性更年期症状的乳杆菌益生菌制剂
CN111254089A (zh) * 2019-12-30 2020-06-09 杭州娃哈哈科技有限公司 一株具有减肥功能的植物乳杆菌及其应用
CN111909869A (zh) * 2020-07-23 2020-11-10 大连工业大学 植物乳杆菌y44及其在制备缓解肥胖或抗高血脂症药物或保健品中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2421607A1 (es) * 2012-02-02 2013-09-04 Consejo Superior Investigacion Bacterias acido-lácticas que se desarrollan en leche de soja y activan las isoflavonas, producto que las contiene y sus aplicaciones
CN106798755A (zh) * 2017-03-10 2017-06-06 泰安大凡神农制药有限公司 一种具有调理乳腺增生功能的益生菌组合物及其应用
CN110870878A (zh) * 2018-08-31 2020-03-10 生物节律有限公司 用于防止或缓解女性更年期症状的乳杆菌益生菌制剂
CN111254089A (zh) * 2019-12-30 2020-06-09 杭州娃哈哈科技有限公司 一株具有减肥功能的植物乳杆菌及其应用
CN111909869A (zh) * 2020-07-23 2020-11-10 大连工业大学 植物乳杆菌y44及其在制备缓解肥胖或抗高血脂症药物或保健品中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHIANG, SS 等: "Antiosteoporotic Effects of Lactobacillus-Fermented Soy Skim Milk on Bone Mineral Density and the Microstructure of Femoral Bone in Ovariectomized Mice", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
彭江 等: "植物乳杆菌CCFM8610对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用", 《食品与发酵工业》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023176849A1 (ja) * 2022-03-17 2023-09-21 株式会社カネカ グルクロニダーゼ活性剤、医薬組成物、食用組成物、及び経口用組成物

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