CN113230277A - 一种干细胞复合制剂及其制备方法 - Google Patents
一种干细胞复合制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113230277A CN113230277A CN202110501112.5A CN202110501112A CN113230277A CN 113230277 A CN113230277 A CN 113230277A CN 202110501112 A CN202110501112 A CN 202110501112A CN 113230277 A CN113230277 A CN 113230277A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cell
- cells
- preparation
- skin
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000002676 facial rejuvenation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 13
- JGPMMRGNQUBGND-UHFFFAOYSA-N idebenone Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(CCCCCCCCCCO)=C(C)C1=O JGPMMRGNQUBGND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960004135 idebenone Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 10
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 claims description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- HWPZZUQOWRWFDB-UHFFFAOYSA-N 1-methylcytosine Chemical compound CN1C=CC(N)=NC1=O HWPZZUQOWRWFDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-ULQXZJNLSA-N 4-amino-1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-tritiopyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C([3H])=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-ULQXZJNLSA-N 0.000 claims description 2
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 claims description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 2
- 210000001216 paracrine cell Anatomy 0.000 claims description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 claims description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 abstract description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 11
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 abstract description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 abstract description 4
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 10
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 8
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 8
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 8
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 8
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 7
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 6
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 3
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 3
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 2
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 2
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000019305 fibroblast migration Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010054107 Nodule Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010033372 Pain and discomfort Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000037365 barrier function of the epidermis Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical class COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000550 effect on aging Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 1
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 231100000075 skin burn Toxicity 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004215 skin function Effects 0.000 description 1
- 231100000245 skin permeability Toxicity 0.000 description 1
- 230000005808 skin problem Effects 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000036548 skin texture Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 230000037373 wrinkle formation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0668—Mesenchymal stem cells from other natural sources
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种干细胞复合制剂及其制备方法。属于干细胞培养技术领域。包括以下原料：干细胞原液浓缩液、非交联透明质酸、水溶艾地苯醌、核苷酸、维生素。本发明通过低氧处理，提高干细胞旁分泌相关因子得率，并引入非交联透明质酸作为载体，一方面提升干细胞复合制剂使用时的即时效果，另一方面有效控释干细胞旁分泌因子向皮肤组织的扩散速度，通过添加核酸和艾地苯醌，增加皮下蛋白物质合成以及增加肌肤抗氧化能力，实现从内源性皮肤细胞微环境的调节到外源性如紫外线产生的自由基对抗，整体性达到面部年轻化的目的。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞培养技术领域，更具体的说是涉及一种干细胞复合制剂及其制备方法。
背景技术
衰老是一系列复杂的生理过程，会导致体内新陈代谢和再生功能速度的减慢。衰老对面部美学的影响在现代社会尤其受到关注。衰老对面部的影响包括：皮肤皱纹、松弛、色素变化、肤质粗糙、干燥以及拉伸强度的降低等等。和皮肤年龄相关的造成皮肤表型变化的因素主要包括：1)成纤维细胞产生的胶原纤维减少，导致在细胞基质中的皮肤细胞间联系和通讯过程被干扰，从而引起皮肤厚度变薄、弹性降低；2)皮下脂肪、肌肉组织随着年龄增加发生萎缩，导致面部组织体积减小，从而表现面部组织萎缩，皮肤松弛。
针对面部皮肤衰老的问题，各类美容技术提供了多种方法来实现面部年轻化的目标，但是大多数仅能提供短期效果，且这些效果的改善度并不尽如人意，还可能产生不良后果。比如激光换肤，根据不同激光类型，可以实现去除深层皱纹，刺激深层皮肤胶原蛋白合成，达到嫩肤目的。但常见皮肤灼伤，发红、皮疹，以及感染肿胀、色素沉着等并发症；透明质酸填充，通过注射透明质酸达到去皱目的，但是随着时间推移，透明质酸会被机体代谢，效果维持时间短；除此之外，肽类的应用目前在抗衰美容技术和护肤产品中也较为流行和推荐，肽类物质可以刺激胶原蛋白生成，促进皮肤再生，减少皱纹形成，尽管其在模型研究中具有确切效果，但仍存在皮肤渗透能力差，利用度低，并且参与皮肤细胞调节和再生的蛋白种类繁多，补充一种或几种肽类对于皮肤再生过程的作用较为有限，不能从根本上解决皮肤问题，属于“治标未治本”。
再生医学的发展为人体抗衰提供了一种现代化的新思路，其中干细胞相关产品是目前研究的热点领域。间充质干细胞是存在于人体多种组织和器官中的一类干细胞，已被广泛应用于临床研究。间充质干细胞可以分化为多种细胞类型，能够迁移至受损区域，分化成受损伤的细胞类型，重新和健康细胞一起填充受损部位继而完成组织修复再生。除此之外，间充质干细胞还可以通过复杂的旁分泌功能来发挥它们组织修复的作用。间充质干细胞能够分泌肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-6,7,8,11(IL-6,7,8,11)、血管紧张肽等，并且可通过这些蛋白或生长因子发挥调控和修复临近受损细胞的作用。近年来，间充质干细胞已被越来越多的用于皮肤功能的改善和修护中，例如面部年轻化、美白、表皮屏障修复和敏感肌修复等。
脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived stem cells,UC-MSC)是再生医学领域的理想种子细胞，它具有易于获取、免疫原性低和强大的旁分泌能力等优点。通过对老龄化皮肤补充脐带间干细胞制剂，调节细胞间信号通路，可以模拟人体自身皮肤的微环境调节，达到生理性除皱，面部年轻化的目的，并且其作用更为安全和有效。
现有技术中相关产品含有PRP(PRP全称为高浓度血小板血浆，是利用自身血液制作的含高浓度血小板的血浆)，只能应用于个体定制，无法产业化生产，且操作较为复杂，制备过程有污染风险。或者在提取成体干细胞有效物质时使用透析法进行处理，造成提取物活性成分有限，生产效能低下。
因此，基于开发可行有效的用于面部年轻化的干细胞复合制剂及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种干细胞复合制剂及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种干细胞复合制剂，包括以下原料：干细胞原液浓缩液83.3％～94.1％、非交联透明质酸5％～10％、水溶艾地苯醌0.1％～0.7％、核苷酸0.2％～3％、维生素0.3％～3％。
优选的：核苷酸：脱氧腺苷、脱氧胞苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、甲基胞嘧啶中一种或多种。
优选的：维生素：维生素A、维生素C、维生素E、肌醇B族维生素中一种或多种。
本发明还提供了一种干细胞复合制剂的制备方法，将各原料混合后，经滤膜二次过滤进行灭菌后分装即得。
优选的：干细胞原液浓缩液的制备方法包括以下步骤：
(1)人脐带间充质干细胞P1代复苏：将P1代人间充质干细胞复苏后接种；
(2)传代培养：待细胞融合度达70～80％，消化细胞并传代至P2～P4代间充质干细胞；
(3)原液收集：取P2～P4代间充质干细胞传代后更换培养基，培养，低氧刺激处理后收集得上清液和低氧处理后的细胞；
(4)细胞裂解：将低氧处理后的细胞消化后离心，重悬，液氮处理30min，解冻后，反复2～4次冻融操作，获得细胞裂解液；
(5)干细胞旁分泌细胞因子和生长因子收集：将步骤(3)收集的上清液和步骤(4)的细胞裂解液分别离心后，均匀混合得到干细胞原液；
(6)浓缩：首次超滤并更换滤膜对滤过液进行二次超滤，最终获得干细胞原液浓缩液。
进一步的：复苏的具体步骤为从液氮取出P1代人间充质干细胞后快速于37℃水浴锅中快速振荡融化，于离心机中300g～500g，5-10min条件下清洗2次，弃上清，重悬。
步骤(3)培养时间为18～24h；低氧刺激所用设备为三气培养箱；将低氧处理后的细胞按细胞数量为2～5×107/EP管分装。
步骤(4)离心条件为300g～500g，5～10min；使用生理盐水重悬，用量为1ml；使用37℃水浴锅解冻。
步骤(5)离心条件为：4℃，300g～500g，10min，有益效果为：去除细胞碎片。
步骤(6)干细胞原液浓缩液置于-80℃保存。
消化均使用含0.25％(体积比)胰酶-EDTA，购自sigma。
优选的：步骤(3)培养基为MSC Xeno-Free SFM培养基。
优选的：低氧的条件为：2.2％O2、5.5％CO2和92.3％N2；处理时间为24～48h。
优选的：步骤(5)上清液和细胞裂解液的体积比为35～50:1。
优选的：步骤(6)超滤份的条件：首次超滤采用截留分子量为50KD的滤膜；二次超滤采用截留分子量为3KD的滤膜；浓缩倍数均为10倍。
本发明还提供了一种干细胞复合制剂在制备用于面部年轻化的美容产品中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种干细胞复合制剂及其制备方法，取得的技术效果为通过低氧处理，提高干细胞旁分泌相关因子得率，并引入非交联透明质酸作为载体，一方面提升干细胞复合制剂使用时的即时效果，另一方面有效控释干细胞旁分泌因子向皮肤组织的扩散速度，通过添加核酸和艾地苯醌，增加皮下蛋白物质合成以及增加肌肤抗氧化能力，实现从内源性皮肤细胞微环境的调节到外源性如紫外线产生的自由基对抗，整体性达到面部年轻化的目的。
具体的：本发明使用无血清培养基MSC Xeno-Free SFM作为人脐带间充质干细胞培养基，该培养基为临床级别培养基，其化学成分明确，不含血清及其他任何人源以外的成分，亦不含有酚红和抗生素，这样做的益处是保证产品在进行面部微创操作或面部深层注射过程中的安全性，避免因免疫原性、病毒和抗生素引发的副作用风险。
为了刺激细胞分泌更多的旁分泌因子，(使用三气培养箱)对细胞进行低氧刺激处理，并且优化各气体组分，保证细胞活性的情况下大量分泌各类因子。
配方中使用了非交联透明质酸作为干细胞各类因子的载体，这样做的益处是一方面提升干细胞复合制剂使用时的即时效果，帮助皮肤保持水分；另一方面可有效控释干细胞旁分泌因子向皮肤组织的扩散速度。
引入核苷酸和水溶性艾地苯醌，核苷酸作用为在蛋白质合成过程中，提供DNA复制和RNA合成的原料，主要用于皮肤成纤维细胞的增殖和生理以及代谢功能的调节；水溶性艾地苯醌是辅酶Q的合成衍生物，但分子量更小，水溶性更高，于皮肤表面渗透性更强，能更容易进入皮肤发挥作用。同时艾地苯醌具有抗衰老和预防性抗衰老作用，特别是对氧化应激引发的衰老，如轻/中度光老化有确切效果。通过下调自由基，保护线粒体膜发挥作用。
综上，本发明为皮肤补充干细胞生理调节过程中所需原料、各种蛋白因子以及抗氧化成分。内源性调节细胞间信号通路，模拟人体自身皮肤的微环境调节，达到生理性除皱，面部年轻化的目的。同时引入非交联透明质酸，提升面部年轻化应用的即时使用效果，控释干细胞因子的扩散速度，更长期的作用皮肤。核苷酸可外源性补充成纤维细胞生长增殖所需的原料物质，同时水溶性艾地苯醌巩固皮肤抵御能力，对抗光老化带来的负面作用，从外至内协同皮肤的修复，减少皱纹形成，改变皮肤质地和紧致程度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的传代后P2人脐带间充质干细胞图。
图2附图为本发明提供的脐带间充质干细胞表面标记物流式检测结果示意图，可见细胞表达间充质干细胞标记物CD90、CD73及CD105；上皮细胞标记CD31为阴性。
图3附图为本发明提供的经低氧处理后细胞VEGF-A、bFGF及IGF的mRNA表达情况柱状图。
图4附图为本发明提供的通过划痕实验检测干细胞原液对成纤维细胞迁移情况的影响柱状图。
图5附图为本发明提供的进行水光面部年轻化体验的志愿者应用效果图，A-D图分别为使用前正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照；E-H图分别为使用16w后正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照。
图6附图为本发明提供的进行水光面部年轻化体验的志愿者应用效果图，A-D图分别为使用前正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照；E-H图分别为使用16w后正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种干细胞复合制剂及其制备方法。
实施例涉及的P1代间充质干细胞为市售渠道获得(ATCC,BFN60808923)。
实施例1
一种干细胞复合制剂，包括以下原料：干细胞原液浓缩液83.3％、非交联透明质酸10％、水溶艾地苯醌0.7％、核苷酸3％、维生素3％。
实施例2
一种干细胞复合制剂，包括以下原料：干细胞原液浓缩液90％、非交联透明质酸7.5％、水溶艾地苯醌0.5％、核苷酸0.5％、维生素1.5％。
实施例3
一种干细胞复合制剂，包括以下原料：干细胞原液浓缩液88％、非交联透明质酸8％、水溶艾地苯醌0.7％、核苷酸1.3％、维生素2％。
实施例4
人脐带间充质干细胞P1代复苏：将P1代人间充质干细胞复苏后(从液氮取出P1代人间充质干细胞后快速于37℃水浴锅中快速振荡融化，于离心机中300g～500g，5-10min条件下清洗2次，弃上清，重悬)接种；
传代培养：细胞融合度到达70-80％时，用含0.25％胰酶-EDTA(sigma，0.25％胰酶-EDTA溶液59428C-500ML)消化细胞并传代。
实验结果：图1为传代后P2人脐带间充质干细胞，细胞贴壁生长，呈长梭或多角状，散在可见点状细胞集落。
实施例5
人脐带间充质干细胞表面标记物流式检测：
取P4代脐带间充质干细胞，PBS清洗2遍后胰酶消化制备成单细胞悬液，离心清洗后调整细胞浓度为3×105/ml，细胞分别和CD90、CD73、CD105、CD31于4℃避光情况下进行流式抗体孵育，时间30min，孵育结束后PBS清洗2～3遍，细胞上机检测。
实验结果：图2为脐带间充质干细胞表面标记物流式检测结果，可见细胞表达间充质干细胞表达基质细胞标记物CD90、CD73及CD105；上皮细胞标记CD31为阴性，说明所得细胞具有典型间充质干细胞表型。
人脐带间充质干细胞低氧刺激处理：
取P2-P4代间充质干细胞，细胞传代后更换为MSC Xeno-Free SFM(CorningCat.No 88-600-CV)培养基，培养24小时后，于三气培养箱中低氧刺激处理，培养气体条件为：2.2％O2、5.5％CO2、以及92.3％N2，刺激24～48h后收集上清。
人脐带间充质干细胞裂解：
低氧处理后细胞用含0.25％(体积比)胰酶-EDTA消化后离心(300g～500g，5～10min)，计数后以细胞数2～5×107/管分装于EP管，1ml生理盐水重悬，液氮处理30min，37℃水浴锅解冻，反复3次冻融操作，最终获得细胞裂解液。
低氧处理人脐带间充质干细胞VEGF-A、bFGF及IGF的mRNA表达水平检测：
实时定量PCR法分别检测常氧条件和经低氧处理后细胞VEGF-A、bFGF及IGF的mRNA表达情况。
实验结果：图3为经低氧处理后细胞VEGF-A、bFGF及IGF的mRNA表达情况。表明，经低氧处理，细胞VEGF-A(2.84倍)、bFGF(4.99倍)、IGF(2.30倍)的mRNA水平上调，即低氧刺激了旁分泌因子VEGF-A、bFGF及IGF的mRNA的表达。
脐带间充质干细胞分泌原液收集：
将收集的培养上清和细胞裂解液分别以4℃，300g～500g，10min离心条件以去除细胞碎片。离心后，将培养上清和细胞裂解液以体积比50:1均匀混合，即为干细胞旁分泌原液。
划痕实验检测干细胞原液对成纤维细胞(HDFs)迁移能力的影响：
调整HDFs细胞浓度为5×105/ml，接种于6孔板中，细胞融合至80％后，用记号笔在6孔板后均匀画宽度2mm的横线，每隔1cm划1条直线，每孔3条线，划痕过程中用10μL枪头沿标记线笔直划下，用PBS洗去漂浮细胞，对照组加入不含血清的DF12培养基孵育,实验组加入干细胞分泌原液孵育。0h、24h、48h后分别计算对照组和实验组细胞迁移率。
实验结果：图4为通过划痕实验检测干细胞原液对成纤维细胞迁移情况的影响。表明，在24h时干细胞原液组HDFs迁移率(58.13％±1.43％)显著高于对照组(17.37％±2.32％)，P＜0.001，差异有统计学意义；在48h时干细胞原液组HDFs迁移率(85.02％±2.72％)显著高于对照组(57.67％±1.43％)，P＜0.001，差异有统计学意义，即干细胞原液能够有效促进成纤维细胞的迁移和愈合。
脐带间充质干细胞原液浓缩：
采用超滤的方式进行干细胞有效因子浓缩。截留分子量为50KD的滤膜进行首次超滤，随后更换截留分子量为3KD的滤膜对滤过液进行二次超滤，浓缩倍数为10倍(v/v)，最终获得干细胞浓缩液，置于-80℃保存。
干细胞复合制剂制备：
干细胞复合制剂参见表1，混合后经滤膜二次过滤进行灭菌后分装，并于4℃保存。
表1
实施例6
干细胞复合制剂的面部年轻化应用和效果观察：
实验方案：选择21例年龄35-50岁健康女性，根据肤质、面部大小情况使用德玛莎水光注射仪面部注射5～10ml实施例制备的干细胞复合制剂。每4周注射一次，共注射4次，分别于注射前、4周、8周、12周和16周后拍照和随访，并全程记录不良反应。
疗效判定：根据面部整体美容程度改善(global aesthetic improvement scale，GAIS)的分级标准综合进行临床疗效评价，GAIS分级：完全改善、明显改善、部分改善、无改善和恶化。
应用过程：所有志愿者治疗前先进行面部皮肤清洁消毒，外敷复方利多卡因乳膏后，根据肤质、面部大小情况使用水光注射仪面部注射5～10ml干细胞复合制剂，注射结束后使用医用冷敷贴敷面。
实验结果：参见表2：
表2
结果显示，志愿者使用16周后，面部明显改善比例达到62％，完全改善比例达到28％。治疗过程中个别志愿者出现轻度疼痛不适，但可忍受，分析和个体耐受疼痛度相关；水光针后出现短暂红斑水肿，2d后消失，观察期间未出现色素沉着、结节、脓肿及疤痕等不良反应。证明本发明干细胞复合制剂临床应用安全有效。
图5和图6为采用本发明进行水光面部年轻化体验的志愿者应用实例，A-D图分别为使用前正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照；E-H图分别为使用16w后正面整体照、侧面照、额头照以及鼻周和口周照。
可以明显看到连续使用16w后，志愿者面部皮肤弹性、光泽度和细腻度明显改善，眼角、额头、口周和鼻周的皱纹明显减少。说明本发明干细胞复合制剂通过水光针注射能够达到面部年轻化目的，并且使用过程安全有效，无不良反应产生，可进行应用推广。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种干细胞复合制剂，其特征在于，包括以下原料：干细胞原液浓缩液83.3％～94.1％、非交联透明质酸5％～10％、水溶艾地苯醌0.1％～0.7％、核苷酸0.2％～3％、维生素0.3％～3％。
2.如权利1所述的一种干细胞复合制剂，其特征在于，所述核苷酸：脱氧腺苷、脱氧胞苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、甲基胞嘧啶中一种或多种。
3.如权利1所述的一种干细胞复合制剂，其特征在于，所述维生素：维生素A、维生素C、维生素E、肌醇B族维生素中一种或多种。
4.权利要求1～3任一所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，将各原料混合后，经滤膜二次过滤进行灭菌后分装即得。
5.如权利要求4所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，所述干细胞原液浓缩液的制备方法包括以下步骤：
(1)人脐带间充质干细胞P1代复苏：将P1代人间充质干细胞复苏后接种；
(2)传代培养：待细胞融合度达70～80％，消化细胞并传代至P2～P4代间充质干细胞；
(3)原液收集：取P2～P4代间充质干细胞传代后更换培养基，培养，低氧刺激处理后收集得上清液和低氧处理后的细胞；
(4)细胞裂解：将低氧处理后的细胞消化后离心，重悬，液氮处理30min，解冻后，反复2～4次冻融操作，获得细胞裂解液；
(5)干细胞旁分泌细胞因子和生长因子收集：将步骤(3)收集的上清液和步骤(4)的细胞裂解液分别离心后，均匀混合得到干细胞原液；
(6)浓缩：首次超滤并更换滤膜对滤过液进行二次超滤，最终获得干细胞原液浓缩液。
6.如权利要求5所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述培养基为MSC Xeno-Free SFM培养基。
7.如权利要求5所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，所述低氧的条件为：2.2％O2、5.5％CO2和92.3％N2；处理时间为24～48h。
8.如权利要求5所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述上清液和细胞裂解液的体积比为35～50:1。
9.如权利要求5所述的一种干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，步骤(6)所述超滤份的条件：首次超滤采用截留分子量为50KD的滤膜；二次超滤采用截留分子量为3KD的滤膜；浓缩倍数均为10倍。
10.一种干细胞复合制剂在制备用于面部年轻化的美容产品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110501112.5A CN113230277A (zh) | 2021-05-08 | 2021-05-08 | 一种干细胞复合制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110501112.5A CN113230277A (zh) | 2021-05-08 | 2021-05-08 | 一种干细胞复合制剂及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113230277A true CN113230277A (zh) | 2021-08-10 |
Family
ID=77132711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110501112.5A Pending CN113230277A (zh) | 2021-05-08 | 2021-05-08 | 一种干细胞复合制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113230277A (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150010497A1 (en) * | 2011-12-30 | 2015-01-08 | Bionest Ltd. | Combination of growth factors, cytokines, antibacterial/antiviral factors, stem cell stimulating factors, complement proteins c3a/c4a, and chemotactic factors |
| WO2018023830A1 (zh) * | 2016-08-01 | 2018-02-08 | 北京世纪劲得生物技术有限公司 | 一种用于脂肪骨髓采集用套装 |
| US20180163177A1 (en) * | 2016-12-11 | 2018-06-14 | Healthbanks Biotech Co. Ltd. | Serum-free culture medium and method for expanding hematopoietic stem cells |
| CN108186548A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-06-22 | 上海莱馥生命科学技术有限公司 | 一种具有抗衰老效果的干细胞因子精华液的制备方法 |
| CN108309822A (zh) * | 2018-02-26 | 2018-07-24 | 福建省银丰干细胞工程有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞旁分泌因子冻干粉的制备方法 |
| CN110292556A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-10-01 | 深圳市艾一生命科技有限公司 | 间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用 |
| CN112353819A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-02-12 | 上海复佑医疗科技有限公司 | 一种促进毛发生长的制剂及其制备方法 |
-
2021
- 2021-05-08 CN CN202110501112.5A patent/CN113230277A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150010497A1 (en) * | 2011-12-30 | 2015-01-08 | Bionest Ltd. | Combination of growth factors, cytokines, antibacterial/antiviral factors, stem cell stimulating factors, complement proteins c3a/c4a, and chemotactic factors |
| WO2018023830A1 (zh) * | 2016-08-01 | 2018-02-08 | 北京世纪劲得生物技术有限公司 | 一种用于脂肪骨髓采集用套装 |
| US20180163177A1 (en) * | 2016-12-11 | 2018-06-14 | Healthbanks Biotech Co. Ltd. | Serum-free culture medium and method for expanding hematopoietic stem cells |
| CN108309822A (zh) * | 2018-02-26 | 2018-07-24 | 福建省银丰干细胞工程有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞旁分泌因子冻干粉的制备方法 |
| CN108186548A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-06-22 | 上海莱馥生命科学技术有限公司 | 一种具有抗衰老效果的干细胞因子精华液的制备方法 |
| CN110292556A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-10-01 | 深圳市艾一生命科技有限公司 | 间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用 |
| CN112353819A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-02-12 | 上海复佑医疗科技有限公司 | 一种促进毛发生长的制剂及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111773173B (zh) | 用于成脂分化诱导、脂肪组织再生、皮肤美白或改善皱纹的包含干细胞来源外泌体的组合物 | |
| JP5981947B2 (ja) | スキンクリーム | |
| CN108721200A (zh) | 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用 | |
| KR101793899B1 (ko) | 성체 줄기세포와 분화된 세포의 혼합 배양액 및 이의 용도 | |
| EP2977446B1 (en) | Method for inducing pluripotent stem cells and pluripotent stem cells prepared by said method | |
| CN110129265A (zh) | 一种脐带间充质干细胞外泌体、制备方法及在化妆品中的应用 | |
| CN103830383A (zh) | 经代谢的经调节的生长培养基和使用方法 | |
| KR101542849B1 (ko) | 중간엽 줄기세포로부터 유도된 만능 줄기세포를 이용하여 간세포로 분화시키는 방법 | |
| CN102732586B (zh) | 一种间充质干细胞分泌素的制备方法 | |
| KR101542846B1 (ko) | 중간엽 줄기세포로부터 유도된 만능 줄기세포를 이용하여 연골세포로 분화시키는 방법 | |
| KR20170093283A (ko) | Gdf11을 포함하는 조성물 및 그의 용도 | |
| CN113144221B (zh) | 外泌体制剂及其制备方法和应用 | |
| CN113171332A (zh) | 一种外泌体冻干粉、其制备方法及护肤品 | |
| CN113230277A (zh) | 一种干细胞复合制剂及其制备方法 | |
| CN113957040A (zh) | 一种脂肪干细胞生长因子提取物及其制备方法和应用 | |
| KR102178778B1 (ko) | 피부줄기세포 배양액을 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물 및 이의 용도 | |
| KR101542848B1 (ko) | 중간엽 줄기세포로부터 유도된 만능 줄기세포를 이용하여 골아세포로 분화시키는 방법 | |
| CN115651901A (zh) | 一种脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法、制备的外泌体及应用 | |
| CN113332313A (zh) | 一种治疗脂溢性脱发的干细胞制剂 | |
| CN102793653A (zh) | 一种胎盘素美容液 | |
| KR101893339B1 (ko) | Gdf11을 포함하는 조성물 및 그의 용도 | |
| EP4227403A1 (en) | Exosome and preparation process and use thereof | |
| JP2020164473A (ja) | 歯髄幹細胞培養上清と毛乳頭幹細胞培養上清とを含む育毛剤およびその製造方法 | |
| CN108066276A (zh) | 一种含复合干细胞因子眼啫喱的制备方法 | |
| CN110475534A (zh) | 一种基于多能干细胞分化再生的延缓机体衰老的美容制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |