CN110292556A - 间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用 - Google Patents

间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物医药领域，本发明公开了一种间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用。其中间充质干细胞外泌组组合制剂按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：80‑90份，中小分子量透明质酸钠：2‑5份，黄芪提取物：3‑5份、蕲艾提取物：1‑5份，所述外泌组培养介质来源于人的脐带或脂肪；所述黄芪提取物的有效组分为：黄芪苷I、黄芪苷II、黄芪苷IV、黄芪多糖I、黄芪多糖II和黄芪多糖III；所述蕲艾提取物的有效组分为：桉油精、崖柏酮、樟脑、冰片、4‑萜烯醇、1‑石竹烯、4‑甲基苄醇、黄酮、鞣酸和绿原酸。本发明的外用制剂能有效的利用干细胞外泌组生物活性成分，具有解决皮肤炎症、修复与抗衰老功效。

Description

间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体地说是涉及一种间充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用。
背景技术
本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。
间充质干细胞是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，可取自骨髓、脐带、脐血、脂肪等组织来源丰富，具有免疫原性低等优点，在再生医学领域具有广泛应用。分泌组是指细胞通过旁分泌和自分泌释放到细胞外空间的复杂因子混合物，包括多种细胞因子、生长因子、外泌体囊泡等，统称分泌组，具有通过控制炎症以及诱导选择性蛋白质激活和转录来改变微环境，以及传递局部信息的作用。大量研究证明间充质干细胞MSCs通过旁分泌和自分泌释放多种细胞因子和生长因子(分泌组)，能够抑制炎症，加速皮肤细胞迁移和增殖，抑制纤维化和凋亡，控制伤口瘢痕形成，改善血管生成，参与组织修复再生，甚至改善皮肤衰老的迹象。但间充质干细胞的分泌组具有成分、含量、活性呈现动态变化的特点，如何将其有效分离、保存活性、提升效果已成为该领域需要解决的问题。
皮肤由表皮、真皮、皮下组织组成，包括胶原纤维、弹力纤维、基质、血管、神经、皮脂腺、汗腺、毛囊等复杂成分。紫外线损伤、年龄老化和各种皮肤炎症是影响皮肤健康的三大主要问题，细胞外基质胶原蛋白和弹性蛋白储藏含量是皮肤外观年轻化的重要指标，是预防皮肤脱水以及坚固和弹性保存的关键。分泌组虽然可以整体调整皮肤的微环境和细胞功能，但其如何渗透进入皮肤屏障并发挥作用，皮肤的状态、湿度、温度等微环境因素非常重要。
发明内容
本发明实施例的目的是提供一种充质干细胞外泌组组合制剂及制备方法和应用，通过该方法制备的皮肤护理制剂能有效的利用干细胞外泌组生物活性成分，具有解决皮肤炎症、修复与抗衰老功效。
本发明第一方面的实施例提供了一种间充质干细胞外泌组组合制剂，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：80-90份，中小分子量透明质酸钠：2-5份，黄芪提取物：3-5份、蕲艾提取物：1-5份，所述外泌组培养介质来源于人的脐带或脂肪；
所述黄芪提取物的有效组分为：黄芪苷I、黄芪苷II、黄芪苷IV、黄芪多糖I、黄芪多糖II和黄芪多糖III；
所述蕲艾提取物的有效组分为：桉油精、崖柏酮、樟脑、冰片、4-萜烯醇、1-石竹烯、4-甲基苄醇、黄酮、鞣酸和绿原酸。
进一步的，所述的黄芪提取物是采用如下方法制备的：取黄芪加水煎煮煎液，滤过，滤液浓缩，加乙醇静置，取上清液回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得所述的黄芪提取物。
进一步的，所述蕲艾提取物是采用如下方法制备的：取艾叶，加入所述艾叶重量10-20％的醋，于170-270℃下炒20-30min后，干燥粉碎，所得粉碎料中加入质量浓度30-50％的乙醇溶液，所述粉碎料与乙醇溶液的料液比为1g∶10-30mL，回流条件下萃取1-5h，过滤，滤液浓缩，得所述蕲艾提取物。
进一步的，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：90份，中小分子量透明质酸钠：0.5份，黄芪提取物：5份、蕲艾提取物：4.5份，所述人间充质干细胞来源于人的脐带或脂肪。
进一步的，所述的中小分子量透明质酸钠分子量为200kda-400kda。
进一步的，所述人间充质干细胞外泌组培养介质是通过以下方法制备的：
(1)间充质干细胞分离培养：在4℃条件下将脐带装于50mL离心管，经第一PBS保护液清洗3遍，所述的第一PBS保护液中庆大霉素终浓度为25ug/mL，再用第二PBS保护液清洗2遍，去除两端各0.5cm长的脐带，将其余脐带剪成2cm长小段，装于50mL离心管中，添加所述的第二PBS保护液，清洗至上清无血色；
所述的第一PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，庆大霉素：25ug/mL，PH值为7.2；
所述的第二PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，PH值为7.2；
沿静脉内腔纵向剪开清洗后的脐带，剥离静脉内膜，继而将覆盖动脉的华通氏胶表面略微撕开，而后抽出两根动脉，将华通氏胶撕下，去除脐带外皮；用手术剪或手术刀将华通氏胶剪切成边长3-5mm左右的小块，并加入100mm皿中，超净台内静置15分钟，组织块贴壁后，添加完全培养基，使得皿中含有10mL培养基，轻轻摇晃均匀，盖上盖子放入培养箱；每隔3天换液，7-14天陆续有间充质干细胞爬出；
(2)收集间充质干细胞：PBS漂洗爬出间充质干细胞1遍，采用消化酶消化细胞1-2分钟，加入4倍消化酶体积培养基终止消化，800g离心5分钟，吸弃上清，用培养基重悬细胞，收集细胞种到细胞瓶中；细胞计数，细胞种植密度：8000个/平方厘米；细胞传代培养，3天传代一次；
(3)外泌组培养介质收集：选取细胞状态较好的2-5代间充质干细胞培养48h后，富集培养上清于50ml离心管中，1000g离心10分钟，去除细胞碎片及杂蛋白，弃掉沉淀，将上清液置于4度冰箱备用；所述的消化酶包括胶原酶、透明质酸酶和胰酶。
进一步的，所述的完全培养基包括如下组分：
无水氯化钙116.6mg/L，L-亮氨酸59.05mg/L，亚油酸0.042mg/L，五水硫酸铜0.0013mg/L，L-赖氨酸盐酸盐91.25mg/L，硫辛酸0.105mg/L，九水硝酸铁0.05mg/L，L-蛋氨酸17.24mg/L，酚红8.1mg/L，七水硫酸亚铁0.417mg/L，L-苯丙氨酸35.48mg/L，1，4-丁二胺二盐酸盐0.081mg/L，氯化钾311.8mg/L，L-丝氨酸26.25mg/L，丙酮酸钠55mg/L，氯化镁28.64mg/L，L-苏氨酸53.45mg/L，维生素H0.0035mg/L，无水硫酸镁48.84mg/L，L-丙氨酸4.45mg/L，D-泛酸钙2.24mg/L，氯化钠6999.5mg/L，L-天门冬酰胺7.5mg/L，氯化胆碱8.98mg/L，无水磷酸二氢钠54.35mg/L，L-天门冬氨酸6.65mg/L，叶酸2.65mg/L，磷酸氢二钠71.02mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐17.56mg/L，i-肌醇12.6mg/L，七水硫酸锌0.432mg/L，L-谷氨酸7.35mg/L，烟酰胺2.02mg/L，L-精氨酸盐酸盐147.5mg/L，L-脯氨酸17.25mg/L，盐酸吡哆醛2mg/L，L-胱氨酸盐酸盐31.29mg/L，L-色氨酸9.02mg/L，盐酸吡哆醇0.031mg/L，L-谷氨酰胺365mg/L，L-酪氨酸38.4mg/L，核黄素0.219mg/L，甘氨酸18.75mg/L，L-缬氨酸52.85mg/L，盐酸硫胺2.17mg/L，L-组氨酸盐酸盐31.48mg/L，D-葡萄糖3151mg/L，胸苷0.365mg/L，L-异亮氨酸54.47mg/L，次黄嘌呤2mg/L，维生素B120.68mg/L。
本发明第二方面的实施例提供了一种间充质干细胞外泌组组合制剂的制备方法，包括如下步骤：按重量份数取人间充质干细胞外泌组、透明质酸钠、黄芪提取物、蕲艾提取物，混合搅拌均匀后，滤膜过滤，分装后得到所述人间充质干细胞外泌组外用制剂，冷冻储存。
本发明第三方面的实施例提供了一种间充质干细胞外泌组组合制剂的使用方法，所述的间充质干细胞外泌组组合制剂为上述的间充质干细胞外泌组组合制剂或上述的制备方法制备的间充质干细胞外泌组组合制剂；
采用外敷将间充质干细胞外泌组组合制剂敷在表皮层，或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将间充质干细胞外泌组组合制剂导入表皮深层和真皮层，或制作成化妆品。
与现有技术相比，本发明的效果在于：
(1)本发明的人间充质干细胞来源的外泌体制剂能有效的利用皮肤外泌活性因子的作用，同时组合植物有效物质达到改善局部微循环、促进因子有效吸收，从而改善皮肤炎症，促进细胞修复，并有效抵抗衰老。
(2)本发明制剂配方中结合了干细胞外泌组活性成分、中低分子量透明质酸、黄芪提取物、蕲艾提取物，中低分子量透明质酸具有保湿作用，有效结合水分子并能协助细胞因子透皮吸收。黄芪为临床常用的经典补气中药，不仅可以保护角质形成细胞，改善皮肤局部微环境，而且能够有效促进皮干细胞活性。蕲艾具有理气血、逐寒湿、温经的作用，以上组合物的配伍，能够提升干细胞外泌组外用制剂的活性，并能促进局部血液供应，促进皮肤疾病的康复，并可作为皮肤养护用品的核心原料。
附图说明
图1为本发明中使用本发明制剂之前的面部照片；
图2为使用本发明一实施例中组合制剂后的面部照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本申请进行进一步的介绍。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。不同实施例之间可以替换或者合并组合，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。
本发明第一方面的实施例提供了一种间充质干细胞外泌组组合制剂，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：80-90份，中小分子量透明质酸钠：2-5份，黄芪提取物：3-5份、蕲艾提取物：1-5份，所述外泌组培养介质来源于人的脐带或脂肪；
所述黄芪提取物的有效组分为：黄芪苷I、黄芪苷II、黄芪苷IV、黄芪多糖I、黄芪多糖II和黄芪多糖III；
所述蕲艾提取物的有效组分为：桉油精、崖柏酮、樟脑、冰片、4-萜烯醇、1-石竹烯、4-甲基苄醇、黄酮、鞣酸和绿原酸。
在本发明的一些实施例中，所述的黄芪提取物是采用如下方法制备的：取黄芪加水煎煮煎液，滤过，滤液浓缩，加乙醇静置，取上清液回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得所述的黄芪提取物。
在本发明的一些实施例中，所述蕲艾提取物是采用如下方法制备的：取艾叶，加入所述艾叶重量10-20％的醋，于170-270℃下炒20-30min后，干燥粉碎，所得粉碎料中加入质量浓度30-50％的乙醇溶液，所述粉碎料与乙醇溶液的料液比为1g∶10-30mL，回流条件下萃取1-5h，过滤，滤液浓缩，得所述蕲艾提取物。
在本发明的一些实施例中，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：90份，中小分子量透明质酸钠：0.5份，黄芪提取物：5份、蕲艾提取物：4.5份，所述人间充质干细胞来源于人的脐带或脂肪。
在本发明的一些实施例中，所述的中小分子量透明质酸钠分子量为200kda-400kda。
在本发明的一些实施例中，所述人间充质干细胞外泌组培养介质是通过以下方法制备的：
(1)间充质干细胞分离培养：在4℃条件下将脐带装于50mL离心管，经第一PBS保护液清洗3遍，所述的第一PBS保护液中庆大霉素终浓度为25ug/mL，再用第二PBS保护液清洗2遍，去除两端各0.5cm长的脐带，将其余脐带剪成2cm长小段，装于50mL离心管中，添加所述的第二PBS保护液，清洗至上清无血色；
所述的第一PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，庆大霉素：25ug/mL，PH值为7.2；
所述的第二PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，PH值为7.2；
沿静脉内腔纵向剪开清洗后的脐带，剥离静脉内膜，继而将覆盖动脉的华通氏胶表面略微撕开，而后抽出两根动脉，将华通氏胶撕下，去除脐带外皮；用手术剪或手术刀将华通氏胶剪切成边长3-5mm左右的小块，并加入100mm皿中，超净台内静置15分钟，组织块贴壁后，添加完全培养基，使得皿中含有10mL培养基，轻轻摇晃均匀，盖上盖子放入培养箱；每隔3天换液，7-14天陆续有间充质干细胞爬出；
(2)收集间充质干细胞：PBS漂洗爬出间充质干细胞1遍，采用消化酶消化细胞1-2分钟，加入4倍消化酶体积培养基终止消化，800g离心5分钟，吸弃上清，用培养基重悬细胞，收集细胞种到细胞瓶中；细胞计数，细胞种植密度：8000个/平方厘米；细胞传代培养，3天传代一次；
(3)外泌组培养介质收集：选取细胞状态较好的2-5代间充质干细胞培养48h后，富集培养上清于50ml离心管中，1000g离心10分钟，去除细胞碎片及杂蛋白，弃掉沉淀，将上清液置于4度冰箱备用；所述的消化酶包括胶原酶、透明质酸酶和胰酶。
在本发明的一些实施例中，所述的完全培养基包括如下组分：
无水氯化钙116.6mg/L，L-亮氨酸59.05mg/L，亚油酸0.042mg/L，五水硫酸铜0.0013mg/L，L-赖氨酸盐酸盐91.25mg/L，硫辛酸0.105mg/L，九水硝酸铁0.05mg/L，L-蛋氨酸17.24mg/L，酚红8.1mg/L，七水硫酸亚铁0.417mg/L，L-苯丙氨酸35.48mg/L，1，4-丁二胺二盐酸盐0.081mg/L，氯化钾311.8mg/L，L-丝氨酸26.25mg/L，丙酮酸钠55mg/L，氯化镁28.64mg/L，L-苏氨酸53.45mg/L，维生素H0.0035mg/L，无水硫酸镁48.84mg/L，L-丙氨酸4.45mg/L，D-泛酸钙2.24mg/L，氯化钠6999.5mg/L，L-天门冬酰胺7.5mg/L，氯化胆碱8.98mg/L，无水磷酸二氢钠54.35mg/L，L-天门冬氨酸6.65mg/L，叶酸2.65mg/L，磷酸氢二钠71.02mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐17.56mg/L，i-肌醇12.6mg/L，七水硫酸锌0.432mg/L，L-谷氨酸7.35mg/L，烟酰胺2.02mg/L，L-精氨酸盐酸盐147.5mg/L，L-脯氨酸17.25mg/L，盐酸吡哆醛2mg/L，L-胱氨酸盐酸盐31.29mg/L，L-色氨酸9.02mg/L，盐酸吡哆醇0.031mg/L，L-谷氨酰胺365mg/L，L-酪氨酸38.4mg/L，核黄素0.219mg/L，甘氨酸18.75mg/L，L-缬氨酸52.85mg/L，盐酸硫胺2.17mg/L，L-组氨酸盐酸盐31.48mg/L，D-葡萄糖3151mg/L，胸苷0.365mg/L，L-异亮氨酸54.47mg/L，次黄嘌呤2mg/L，维生素B120.68mg/L。
一种间充质干细胞外泌组组合制剂的制备方法，包括如下步骤：按重量份数取人间充质干细胞外泌组、透明质酸钠、黄芪提取物、蕲艾提取物，混合搅拌均匀后，滤膜过滤，分装后得到所述人间充质干细胞外泌组外用制剂，冷冻储存。
(1)本发明的人间充质干细胞来源的外泌体制剂能有效的利用皮肤外泌活性因子的作用，同时组合植物有效物质达到改善局部微循环、促进因子有效吸收，从而改善皮肤炎症，促进细胞修复，并有效抵抗衰老。
(2)本发明制剂配方中结合了干细胞外泌组活性成分、中低分子量透明质酸、黄芪提取物、蕲艾提取物，中低分子量透明质酸具有保湿作用，有效结合水分子并能协助细胞因子透皮吸收。黄芪为临床常用的经典补气中药，不仅可以保护角质形成细胞，改善皮肤局部微环境，而且能够有效促进皮干细胞活性。蕲艾具有理气血、逐寒湿、温经的作用，以上组合物的配伍，能够提升干细胞外泌组外用制剂的活性，并能促进局部血液供应，促进皮肤疾病的康复，并可作为皮肤养护用品的核心原料。
一种间充质干细胞外泌组组合制剂的使用方法，所述的间充质干细胞外泌组组合制剂为上述的间充质干细胞外泌组组合制剂或上述的制备方法制备的间充质干细胞外泌组组合制剂；
采用外敷将间充质干细胞外泌组组合制剂敷在表皮层，或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将间充质干细胞外泌组组合制剂导入表皮深层和真皮层，或制作成化妆品。
将上述的组合制剂用于治疗面部痤疮的效果如图1和图2所示，其中，图1为使用上述组合制剂之前的面部效果图，图2为使用上述组合制剂之后的面部效果图，由图1和图2可见，上述制剂治疗面部痤疮效果明显。
应当说明的是，上述实施例均可根据需要自由组合。以上介绍仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：80-90份，中小分子量透明质酸钠：2-5份，黄芪提取物：3-5份、蕲艾提取物：1-5份，所述外泌组培养介质来源于人的脐带或脂肪；
所述黄芪提取物的有效组分为：黄芪苷I、黄芪苷II、黄芪苷IV、黄芪多糖I、黄芪多糖II和黄芪多糖III；
所述蕲艾提取物的有效组分为：桉油精、崖柏酮、樟脑、冰片、4-萜烯醇、1-石竹烯、4-甲基苄醇、黄酮、鞣酸和绿原酸。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，
所述的黄芪提取物是采用如下方法制备的：取黄芪加水煎煮煎液，滤过，滤液浓缩，加乙醇静置，取上清液回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得所述的黄芪提取物。
3.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，
所述蕲艾提取物是采用如下方法制备的：取艾叶，加入所述艾叶重量10-20％的醋，于170-270℃下炒20-30min后，干燥粉碎，所得粉碎料中加入质量浓度30-50％的乙醇溶液，所述粉碎料与乙醇溶液的料液比为1g∶10-30mL，回流条件下萃取1-5h，过滤，滤液浓缩，得所述蕲艾提取物。
4.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，按重量份数计，包括：人间充质干细胞外泌组培养介质：90份，中小分子量透明质酸钠：0.5份，黄芪提取物：5份、蕲艾提取物：4.5份，所述人间充质干细胞来源于人的脐带或脂肪。
5.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，所述的中小分子量透明质酸钠分子量为200kda-400kda。
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，
所述人间充质干细胞外泌组培养介质是通过以下方法制备的：
(1)间充质干细胞分离培养：在4℃条件下将脐带装于50mL离心管，经第一PBS保护液清洗3遍，所述的第一PBS保护液中庆大霉素终浓度为25ug/mL，再用第二PBS保护液清洗2遍，去除两端各0.5em长的脐带，将其余脐带剪成2cm长小段，装于50mL离心管中，添加所述的第二PBS保护液，清洗至上清无血色；
所述的第一PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，庆大霉素：25ug/mL，PH值为7.2；
所述的第二PBSPBS保护液包括如下组分：
NaCl：8.0mg/mL，KCl：200ug/mL，Na2HPO4·H2O：1.56mg/mL，KH2PO4：200ug/mL，PH值为7.2；
沿静脉内腔纵向剪开清洗后的脐带，剥离静脉内膜，继而将覆盖动脉的华通氏胶表面略微撕开，而后抽出两根动脉，将华通氏胶撕下，去除脐带外皮；用手术剪或手术刀将华通氏胶剪切成边长3-5mm左右的小块，并加入100mm皿中，超净台内静置15分钟，组织块贴壁后，添加完全培养基，使得皿中含有10mL培养基，轻轻摇晃均匀，盖上盖子放入培养箱；每隔3天换液，7-14天陆续有间充质干细胞爬出；
(2)收集间充质干细胞：PBS漂洗爬出间充质干细胞1遍，采用消化酶消化细胞1-2分钟，加入4倍消化酶体积培养基终止消化，800g离心5分钟，吸弃上清，用培养基重悬细胞，收集细胞种到细胞瓶中；细胞计数，细胞种植密度：8000个/平方厘米；细胞传代培养，3天传代一次；
(3)外泌组培养介质收集：选取细胞状态较好的2-5代间充质干细胞培养48h后，富集培养上清于50ml离心管中，1000g离心10分钟，去除细胞碎片及杂蛋白，弃掉沉淀，将上清液置于4度冰箱备用；所述的消化酶包括胶原酶、透明质酸酶和胰酶。
7.根据权利要求6所述的间充质干细胞外泌组组合制剂，其特征在于，所述的完全培养基包括如下组分：
无水氯化钙116.6mg/L，L-亮氨酸59.05mg/L，亚油酸0.042mg/L，五水硫酸铜0.0013mg/L，L-赖氨酸盐酸盐91.25mg/L，硫辛酸0.105mg/L，九水硝酸铁0.05mg/L，L-蛋氨酸17.24mg/L，酚红8.1mg/L，七水硫酸亚铁0.417mg/L，L-苯丙氨酸35.48mg/L，1，4-丁二胺二盐酸盐0.081mg/L，氯化钾311.8mg/L，L-丝氨酸26.25mg/L，丙酮酸钠55mg/L，氯化镁28.64mg/L，L-苏氨酸53.45mg/L，维生素H0.0035mg/L，无水硫酸镁48.84mg/L，L-丙氨酸4.45mg/L，D-泛酸钙2.24mg/L，氯化钠6999.5mg/L，L-天门冬酰胺7.5mg/L，氯化胆碱8.98mg/L，无水磷酸二氢钠54.35mg/L，L-天门冬氨酸6.65mg/L，叶酸2.65mg/L，磷酸氢二钠71.02mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐17.56mg/L，i-肌醇12.6mg/L，七水硫酸锌0.432mg/L，L-谷氨酸7.35mg/L，烟酰胺2.02mg/L，L-精氨酸盐酸盐147.5mg/L，L-脯氨酸17.25mg/L，盐酸吡哆醛2mg/L，L-胱氨酸盐酸盐31.29mg/L，L-色氨酸9.02mg/L，盐酸吡哆醇0.031mg/L，L-谷氨酰胺365mg/L，L-酪氨酸38.4mg/L，核黄素0.219mg/L，甘氨酸18.75mg/L，L-缬氨酸52.85mg/L，盐酸硫胺2.17mg/L，L-组氨酸盐酸盐31.48mg/L，D-葡萄糖3151mg/L，胸苷0.365mg/L，L-异亮氨酸54.47mg/L，次黄嘌呤2mg/L，维生素B120.68mg/L。
8.一种权利要求1-7任一项所述的间充质干细胞外泌组组合制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：按重量份数取人间充质干细胞外泌组、透明质酸钠、黄芪提取物、蕲艾提取物，混合搅拌均匀后，滤膜过滤，分装后得到所述人间充质干细胞外泌组外用制剂，冷冻储存。
9.一种间充质干细胞外泌组组合制剂的使用方法，其特征在于，所述的间充质干细胞外泌组组合制剂为权利要求1-6任一项所述的间充质干细胞外泌组组合制剂或权利要求7所述的制备方法制备的间充质干细胞外泌组组合制剂；
采用外敷将间充质干细胞外泌组组合制剂敷在表皮层，或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将间充质干细胞外泌组组合制剂导入表皮深层和真皮层，或制作成化妆品。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113230277A (zh) * 2021-05-08 2021-08-10 陕西鸿瑞康生物科技有限公司 一种干细胞复合制剂及其制备方法
CN114231483A (zh) * 2021-12-21 2022-03-25 广州市新甡命科技有限公司 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用
CN115192627A (zh) * 2022-07-11 2022-10-18 上海亚睿生物科技有限公司 一种加快皮肤深层修复和抗疤痕生物凝胶制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101991515A (zh) * 2009-08-10 2011-03-30 上海朗斯生物技术有限公司 一种抗油烟组合物
CN104257541A (zh) * 2014-09-11 2015-01-07 南昌智旭生物科技有限公司 艾叶提取液及其制备方法和应用
CN105395397A (zh) * 2015-11-27 2016-03-16 碌柚葉（香港）有限公司 一种抗菌护肤型中药组合物及其在日用品中的应用
CN107007541A (zh) * 2017-05-23 2017-08-04 北京希诺赛尔健康科技推广有限公司 外泌体在皮肤美白制剂中的应用
CN107158035A (zh) * 2017-05-17 2017-09-15 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有高浓度人间充质干细胞外泌体提取物的治疗褥疮外用凝胶及其制备方法
CN108721200A (zh) * 2018-06-07 2018-11-02 武汉赛云博生物科技有限公司 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101991515A (zh) * 2009-08-10 2011-03-30 上海朗斯生物技术有限公司 一种抗油烟组合物
CN104257541A (zh) * 2014-09-11 2015-01-07 南昌智旭生物科技有限公司 艾叶提取液及其制备方法和应用
CN105395397A (zh) * 2015-11-27 2016-03-16 碌柚葉（香港）有限公司 一种抗菌护肤型中药组合物及其在日用品中的应用
CN107158035A (zh) * 2017-05-17 2017-09-15 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有高浓度人间充质干细胞外泌体提取物的治疗褥疮外用凝胶及其制备方法
CN107007541A (zh) * 2017-05-23 2017-08-04 北京希诺赛尔健康科技推广有限公司 外泌体在皮肤美白制剂中的应用
CN108721200A (zh) * 2018-06-07 2018-11-02 武汉赛云博生物科技有限公司 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113230277A (zh) * 2021-05-08 2021-08-10 陕西鸿瑞康生物科技有限公司 一种干细胞复合制剂及其制备方法
CN114231483A (zh) * 2021-12-21 2022-03-25 广州市新甡命科技有限公司 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用
CN115192627A (zh) * 2022-07-11 2022-10-18 上海亚睿生物科技有限公司 一种加快皮肤深层修复和抗疤痕生物凝胶制备方法

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