CN113215098B - 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法 - Google Patents

一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113215098B
CN113215098B CN202110625566.3A CN202110625566A CN113215098B CN 113215098 B CN113215098 B CN 113215098B CN 202110625566 A CN202110625566 A CN 202110625566A CN 113215098 B CN113215098 B CN 113215098B
Authority
CN
China
Prior art keywords
spleen
culture
cells
nutrient solution
cost
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110625566.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113215098A (zh
Inventor
李家斌
李嘉嘉
刘艳艳
魏艳艳
胡立芬
伍婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Anhui Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Priority to CN202110625566.3A priority Critical patent/CN113215098B/zh
Publication of CN113215098A publication Critical patent/CN113215098A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113215098B publication Critical patent/CN113215098B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0648—Splenocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于原代细胞分离培养技术领域，尤其是一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，解决了现有技术中FRCs细胞分离成本非常高，分离技术十分复杂，分离技术门槛高，而且培养周期长，稳定性差等问题，所述低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，包括以下步骤：采用胶原酶P一步消化小鼠脾脏碎块，消化、分离得到混合细胞；对混合细胞进行体外培养，使用含有EDTA的胰蛋白酶消化；分多次逐步纯化小鼠脾脏网状成纤维细胞，纯化至分析鉴定终纯度可以达到98％以上即得。本发明操作简单方便，成本低，对设备要求低，不需要磁珠分选和流式细胞仪分选平台。

Description

一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养 方法
技术领域
本发明涉及原代细胞分离培养技术领域，尤其涉及一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法。
背景技术
网状成纤维细胞(Fibroblastic reticular cells,FRCs)是有重要免疫调节作用的细胞，其在免疫应答、免疫耐受等过程中起到了非常重要的作用；脾脏的FRCs同样是埃博拉病毒、拉沙热病毒和马尔堡病毒感染的靶细胞，其还是出血热病毒体内感染的主要靶细胞，且原代FRCs细胞更能反应体内感染的机制和病理过程。小鼠原代FRCs细胞在脾脏含量极低，不高于千分之三。现有技术中，分离小鼠脾脏FRCs细胞，多采用Dispase、CollagenaseP及DNase I三种酶消化使用三个15分钟时间段的分布消化方案；再运用磁珠分选富集和流式细胞仪精确分选逐级分选得到纯化的FRCs细胞。磁珠分选和流式细胞仪实验要求门槛和成本都很高。因此，现有的小鼠原代FRCs细胞的分离普遍存在分离成本非常高，分离技术十分复杂，分离技术门槛高，而且培养周期长，稳定性差等问题。基于上述陈述，本发明提出了一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中FRCs细胞分离成本非常高，分离技术十分复杂，分离技术门槛高，而且培养周期长，稳定性差等问题，而提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法。
一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，包括以下步骤：
S1、采用胶原酶P一步消化小鼠脾脏碎块，消化30-50分钟，得消化产物I；
S2、将消化产物I用5ml吸头吹打1分钟后静置1分钟，吸取上清消化产物(弃去较大的没有消化完全的组织碎片)，按照比例1:1，加入4℃预冷的营养液(含10％FBS、1％双抗的DMEM，下同)，设置离心温度为4℃，离心转速为300g，离心5分钟后弃去上清液，获得细胞沉淀物，将细胞沉淀物用营养液悬浮，然后接种于25cm2培养瓶I中，37℃，5％CO2贴壁12小时后(过夜)，弃去培养液，贴壁细胞使用DMEM洗两遍后，加入6ml营养液37℃，5％CO2培养，培养过程中每3-7天换一次营养液，且每次换液前用DMEM洗贴壁细胞两次；
S3、待步骤S2中的培养瓶I中长满细胞后(培养2-3周后)，使用无钙、镁离子的PBS洗两遍，再加入0.05％胰蛋白酶消化30-120秒，弃去培养瓶I和没有消化下来的细胞，得消化产物II，将消化产物II转入新的25cm2培养瓶II中，37℃，5％CO2培养3-9小时后，弃去培养基和没有贴壁的细胞，往培养瓶II中加入6ml营养液，37℃，5％CO2培养；
S4、待步骤S3中的培养瓶II中长满细胞后，重复步骤S3中的操作，重复4次以上，逐步纯化小鼠脾脏网状成纤维细胞，直至流式鉴定细胞纯度达到98％以上，即得所需的原代小鼠脾脏网状成纤维细胞。
优选的，所述步骤S1的具体操作如下：(1)选取4周龄小鼠，颈椎脱臼致死，75％乙醇浸泡消毒10分钟，从背部取脾脏；(2)4℃无菌PBS洗涤脾脏两次后，使用灭菌眼科剪在灭菌青霉素瓶中将脾脏剪碎至1mm3的小块，再次用4℃无菌PBS洗两遍，加入0.2mg/ml胶原酶P的消化液5-10ml，37℃消化30-50分钟，期间每十分钟混匀消化液和脾脏碎片一次，消化完成得消化产物I。
优选的，所述分离和培养方法中所用营养液均为含10％FBS和1％双抗的DMEM。
本发明提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，具有以下有益效果：
1、本发明巧妙利用成纤维细胞的贴壁特性，避免了现有分离方法中磁珠分选和流式细胞仪这两个实验平台的使用；发明人通过实验摸索，逐步简化实验步骤，增加了分离步骤的可操作性，并降低了对实验器材的依赖性；同时大幅减少了分离和培养过程中酶的使用种类和成本。
2、本发明采用多种细胞共培养的原代细胞培养方式，细胞增值快，多种细胞相互营养扶持，减少了原代细胞的生长时间，弥补了后续步骤中多次纯化培养造成的时间消耗，本发明分离培养得到的原代小鼠脾脏网状成纤维细胞稳定性好，可以有效应用于该领域的科学研究，也是潜在的免疫治疗的靶点。
3、本发明提供的原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，操作简单方便，成本低，本发明的技术方案与现有技术方案分离周期相近，分离纯度相近(达到98％以上)，但成本却较现有技术降低90％以上，对设备要求低，不需要磁珠分选和流式细胞仪分选平台。
附图说明
图1为本发明提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法中分离得到的原代FRCs流式鉴定图；
图中：上左：FS VS SS细胞群图；上右：特异抗体podoplanin-PE抗体同型对照和表达图，阳性率为99.9％；下左：Percp-Cy5.5和BB515同型对照图；下右：CD45-Percp-Cy5.5和CD31-BB515均为阴性。
图2为本发明提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法中分离得到的原代FRCs激光共聚焦鉴定图；
图中：从左到右：Dapi(蓝色)、anti-Fibroblast(绿色)、podoplanin(红色)、三种颜色合并，纯化分离的细胞符合FRCs表型。
图3为本发明提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法中分离得到的原代FRCs相差显微镜形态图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例一
本发明提出的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，包括以下步骤：
S1、选取4周龄小鼠，颈椎脱臼致死，75％乙醇浸泡消毒10分钟，从背部取脾脏；用4℃无菌PBS洗涤脾脏两次后，使用灭菌眼科剪在灭菌青霉素瓶中将脾脏剪碎至1mm3的小块，再次用4℃无菌PBS洗两遍，加入0.2mg/ml胶原酶P的消化液5-10ml，37℃消化30-50分钟，期间每十分钟混匀消化液和脾脏碎片一次，消化完成得消化产物I；
S2、将消化产物I用5ml吸头吹打1分钟后静置1分钟，吸取上清消化产物(弃去较大的没有消化完全的组织碎片)，按照比例1:1，加入4℃预冷的营养液(含10％FBS、1％双抗的DMEM，下同)，设置离心温度为4℃，离心转速为300g，离心5分钟后弃去上清液，获得细胞沉淀物，将细胞沉淀物用营养液悬浮，然后接种于25cm2培养瓶I中，37℃，5％CO2贴壁12小时后(过夜)，弃去培养液，贴壁细胞使用DMEM洗两遍后，加入6ml营养液37℃，5％CO2培养，培养过程中每3-7天换一次营养液，且每次换液前用DMEM洗贴壁细胞两次；
S3、待步骤S2中的培养瓶I中长满细胞后(培养2-3周后)，使用无钙、镁离子的PBS洗两遍，再加入0.05％胰蛋白酶消化30-120秒，弃去培养瓶I和没有消化下来的细胞，得消化产物II，将消化产物II转入新的25cm2培养瓶II中，37℃，5％CO2培养3-9小时后，弃去培养基和没有贴壁的细胞，往培养瓶II中加入6ml营养液，37℃，5％CO2培养；
S4、待步骤S3中的培养瓶II中长满细胞后，重复步骤S3中的操作，重复4次以上，逐步纯化小鼠脾脏网状成纤维细胞，直至流式鉴定细胞纯度达到98％以上，即得所需的原代小鼠脾脏网状成纤维细胞。
本发明步骤S1的脾脏消化液中主要含有白细胞和红细胞等血细胞、FRCs和内皮细胞等基质细胞，其中FRCs和内皮细胞易于贴壁培养，而血细胞无法贴壁培养，所以培养步骤S2、S3和S4中，通过反复洗贴壁细胞可以有效清除不贴壁的细胞；
FRCs属于成纤维细胞，一般短时间使用0.05％胰蛋白酶消化即可分离，而内皮细胞比较难以消化，一般需要0.25％的胰蛋白酶消化5-10分钟才能消化下来，同时成纤维细胞比较容易贴壁，加上发明人多年来分离培养FRCs的经验总结和实践的检验，证实快速消化和短时间贴壁可以有效纯化FRCs；
细胞表型和纯度鉴定是分离培养的把控环节，需要用定量、快速的流式细胞仪来快速、有效的实时监控细胞纯度。
本发明的技术方案与现有技术方案分离周期相近，分离纯度相近(达到98％以上)，但成本却较现有技术降低90％以上，对设备要求低，不需要磁珠分选和流式细胞仪分选平台，具体分析如下：
1、本发明对实验平台要求低：
分析的流式细胞仪和细胞培养室是目前绝大部分实验室都具备的仪器和实验条件，简单的实验步骤，降低了实验难度；而磁珠分选、流式细胞仪分选需要较高平台的实验室，对操作员技术要求也很高，实验环节多，失败率很高。
2、极大降低了实验成本：
发明人通过多年的实验经验，简化了绝大部分高成本、高要求的实验环节，如磁珠抗体和分选柱(约1万元人民币，合计单次实验成本500-1000元)，流式细胞仪分选(一般开机费600元，以后每小时约300元，合计单次实验消耗1200-1500元)，单次实验成本降低了90％以上。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、采用胶原酶P一步消化小鼠脾脏碎块，消化30-50分钟，得消化产物I；
S2、将消化产物I用5ml吸头吹打1分钟后静置1分钟，吸取上清消化产物，按照比例1:1，加入4℃预冷的营养液，设置离心温度为4℃，离心转速为300g，离心5分钟后弃去上清液，获得细胞沉淀物，将细胞沉淀物用营养液悬浮，然后接种于25cm2培养瓶I中，37℃，5％CO2贴壁12小时后，弃去培养液，贴壁细胞使用DMEM洗两遍后，加入6ml营养液37℃，5％CO2培养，培养过程中每3-7天换一次营养液，且每次换液前用DMEM洗贴壁细胞两次；
S3、待步骤S2中的培养瓶I中长满细胞后，使用无钙、镁离子的PBS洗两遍，再加入0.05％胰蛋白酶消化30-120秒，得消化产物II，将消化产物II转入新的25cm2培养瓶II中，37℃，5％CO2培养3-9小时后，弃去培养基和没有贴壁的细胞，往培养瓶II中加入6ml营养液，37℃，5％CO2培养；
S4、待步骤S3中的培养瓶II中长满细胞后，重复步骤S3中的操作，重复4次以上，逐步纯化小鼠脾脏网状成纤维细胞，直至流式鉴定细胞纯度达到98％以上，即得所需的原代小鼠脾脏网状成纤维细胞。
2.根据权利要求1所述的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作如下：(1)选取4周龄小鼠，颈椎脱臼致死，75％乙醇浸泡消毒10分钟，从背部取脾脏；(2)4℃无菌PBS洗涤脾脏两次后，使用灭菌眼科剪在灭菌青霉素瓶中将脾脏剪碎至1mm3的小块，再次用4℃无菌PBS洗两遍，加入0.2mg/ml胶原酶P的消化液5-10ml，37℃消化30-50分钟，期间每十分钟混匀消化液和脾脏碎片一次，消化完成得消化产物I。
3.根据权利要求1所述的一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法，其特征在于，所述分离和培养方法中所用营养液均为含10％FBS和1％双抗的DMEM。
CN202110625566.3A 2021-06-04 2021-06-04 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法 Active CN113215098B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110625566.3A CN113215098B (zh) 2021-06-04 2021-06-04 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110625566.3A CN113215098B (zh) 2021-06-04 2021-06-04 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113215098A CN113215098A (zh) 2021-08-06
CN113215098B true CN113215098B (zh) 2023-02-24

Family

ID=77082891

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110625566.3A Active CN113215098B (zh) 2021-06-04 2021-06-04 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113215098B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000009739A1 (fr) * 1998-08-10 2000-02-24 Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Anticorps monoclonal agissant contre la trypsine canine
CN101285050A (zh) * 2007-04-10 2008-10-15 上海国睿生命科技有限公司 利用差速消化实现细胞高度富集的方法
CN101531996A (zh) * 2009-04-01 2009-09-16 浙江大学 源于成形组织的间充质干细胞的分离和纯化方法
CN103525752A (zh) * 2013-09-21 2014-01-22 山东农业大学 一种山羊乳腺上皮细胞的分离和纯化方法
CN104195100A (zh) * 2014-08-29 2014-12-10 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一种乳腺上皮细胞的体外培养方法
CN105543164A (zh) * 2016-02-29 2016-05-04 西北农林科技大学 一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法
CN111164223A (zh) * 2017-09-28 2020-05-15 欧莱雅 真皮成纤维细胞的三个亚群的分子标签和包括这些亚群之一的真皮等同物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000009739A1 (fr) * 1998-08-10 2000-02-24 Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha Anticorps monoclonal agissant contre la trypsine canine
CN101285050A (zh) * 2007-04-10 2008-10-15 上海国睿生命科技有限公司 利用差速消化实现细胞高度富集的方法
CN101531996A (zh) * 2009-04-01 2009-09-16 浙江大学 源于成形组织的间充质干细胞的分离和纯化方法
CN103525752A (zh) * 2013-09-21 2014-01-22 山东农业大学 一种山羊乳腺上皮细胞的分离和纯化方法
CN104195100A (zh) * 2014-08-29 2014-12-10 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一种乳腺上皮细胞的体外培养方法
CN105543164A (zh) * 2016-02-29 2016-05-04 西北农林科技大学 一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法
CN111164223A (zh) * 2017-09-28 2020-05-15 欧莱雅 真皮成纤维细胞的三个亚群的分子标签和包括这些亚群之一的真皮等同物

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Characterization of human fibroblastic reticular cells as potential immunotherapeutic tools;JARIS VALENCIA et al.;《Cytotherapy》;20171231;第19卷(第5期);第1-14页 *
Fibroblastic reticular cells of the lymphoid tissues modulate T cell activation threshold during homeostasis via hyperactive cyclooxygenase-2/prostaglandin E2 axis;Miao Yu et al.;《Sci Rep》;20170613;第7卷(第1期);第1-15页 *
SFTSV感染靶细胞系的建立及转录组测序分析;李嘉嘉;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士） 医药卫生科技辑》;20190115(第12期);第2.2.3-2.2.6节 *
小鼠脾脏成纤维网状细胞的分离培养及鉴定;刘丽娜 等;《免疫学杂志》;20150228;第31卷(第2期);第147-150页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113215098A (zh) 2021-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11339372B2 (en) Serum-free medium inducing differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cell into insulin-secretion-like cell and preparation method and use thereof
WO2010040262A1 (zh) 分离动物胚胎间质性干细胞并提取其分泌物的方法
CN112048470B (zh) 一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法
CN107385517A (zh) 间充质干细胞库的构建方法
CN111826348A (zh) 一种人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞体外高效制备方法和应用
CN115322964B (zh) 一种3d培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法
CN107603952A (zh) 一种大鼠嗅鞘细胞的分离及培养方法
WO2023016029A1 (zh) 一种分离来源于人类诱导多能干细胞的成纤维细胞的方法及其应用
CN113215098B (zh) 一种低成本原代小鼠脾脏网状成纤维细胞体外分离和培养方法
WO2023217128A1 (zh) 胃粘膜上皮前体样细胞及其制备方法和应用
CN113073077A (zh) 一种使用封闭式系统培养临床级脐带血间充质干细胞的方法
CN114752590B (zh) 一种高效且经济的猪肌肉干细胞的分离方法及其应用
CN116836934A (zh) 骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法
CN112941015B (zh) 一种基于多能干细胞分化制备角质细胞的添加剂及方法
CN108048395B (zh) 一种脐带组织复苏后分离和扩增干细胞的方法及其培养基
CN108034634B (zh) 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法
CN112680410B (zh) 诱导多能干细胞分化培养心脏成纤维细胞的方法及其培养液
CN113046300B (zh) 一种基于多能干细胞分化制备角质细胞的培养方法
CN115232788A (zh) 一种定型内胚层细胞来源的间充质干细胞及其分化方法和应用
CN114703126A (zh) 肌肉干细胞分离提取及新型水解物培养体系及其应用
CN110592007B (zh) 一种间充质干细胞及其制备方法和应用
CN109837241B (zh) 脂肪干细胞的分离与培养方法
CN112458039A (zh) 一种肺泡类器官增殖和分化用的培养基及方法
CN111394301A (zh) 白皮杉醇在增加多能干细胞分泌外泌体数量及生物活性中的应用
CN112980775B (zh) 一种基于多能干细胞分化制备角质细胞的培养液

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant