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Abstract

本发明涉及一种卡博替尼在制备预防和/或治疗NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。卡博替尼可以有效地抑制NLRP3炎症小体活化，抑制炎症细胞因子IL‑1β和Caspase‑1的成熟和分泌，这对于NLRP3炎症小体相关疾病的药物开发具有很大的价值。

Description

卡博替尼在制备防治NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的 应用
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是涉及卡博替尼在制备防治NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。
背景技术
NLRP3炎症小体是一种模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)，是Caspase-1的炎症性激活平台。它能够识别外源性的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecμlar pattern，PAMP)如脂多糖LPS、病毒RNA或内源性的损伤相关分子模式(damage-associated molecμlar pattern，DAMP)如DNA、内毒素、尿酸、ATP、Aβ和细胞碎片等。这些物质异常的出现在细胞外或细胞内的某个部位，使组织的稳态受到刺激而激活NLRP3炎症小体，抵抗外源性或内源性因素对机体的损害，但过度激活的NLRP3炎症小体会导致多种疾病发生发展，例如痛风、2型糖尿病以及神经退行性疾病等。尽管在基础研究中许多抑制剂对NLRP3炎症小体相关的疾病都有一定的缓解作用，但目前临床上，仍缺乏抑制NLRP3炎症小体活化的药物。
卡博替尼(Cabozantinib)的结构式为
Figure BDA0003099543990000011
其分子式为C32H30FN3O10，分子量为635.60，CAS号为1140909-48-3。卡博替尼主要以与前列腺癌增长与扩散有关的MET和VEGFR2酪氨酸激酶为靶点，抑制肿瘤的转移和血管生成。
发明内容
基于此，本发明的目的是提供一种卡博替尼在制备防治NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。
具体技术方案如下：
卡博替尼在制备预防和/或治疗NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述NLRP3炎症小体相关疾病为痛风。
在其中一些实施例中，所述NLRP3炎症小体相关疾病为腹膜炎。
在其中一些实施例中，所述NLRP3炎症小体相关疾病为银屑病、肠炎、肝炎、硅肺、石棉肺、矽肺、白塞病、紫外线所诱导的皮肤晒伤、接触性超敏反应、帕金森病、抑郁症、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病、酒精性肝病、肾病、家族性冷自发炎症综合征、Mμckle-Wells综合征、慢性婴儿神经皮肤和关节综合征、新生儿发作多系统炎性疾病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化、哮喘或急性呼吸窘迫综合征。
在其中一些实施例中，所述NLRP3炎症小体相关疾病为痛风性关节炎、腹膜炎、银屑病、肠炎、肝炎、硅肺、石棉肺、矽肺、白塞病、紫外线所诱导的皮肤晒伤、接触性超敏反应、帕金森病、抑郁症、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病、酒精性肝病、肾病、家族性冷自发炎症综合征、Mμckle-Wells综合征、慢性婴儿神经皮肤和关节综合征、新生儿发作多系统炎性疾病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化、哮喘或急性呼吸窘迫综合征。
本发明的另一目的是提供一种卡博替尼在制备抑制NLRP3炎症小体活化的药物中的应用。
本发明的另一目的是提供一种卡博替尼在制备抑制Caspase-1成熟或分泌的药物中的应用。
本发明的另一目的是提供一种卡博替尼在制备抑制IL-1β成熟或分泌的药物中的应用。
本发明的另一目的是提供一种预防和/或治疗NLRP3炎症小体相关疾病的药物，包括卡博替尼以及药学上可接受的辅料。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、乳液、溶液、悬浮液或酊剂。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为口服溶液。
在其中一些实施例中，所述药物的给药方式为口服。
在其中一些实施例中，所述药物用于非人哺乳动物或人。
在其中一些实施例中，所述辅料为赋形剂、填料、增容剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、缓溶剂、吸收加速剂、吸附剂、稀释剂、增溶剂、乳化剂、润滑剂、润湿剂、悬浮剂、矫味剂和香料中的至少一种。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的发明人发现，卡博替尼可以有效地抑制NLRP3炎症小体活化，抑制炎症细胞因子IL-1β和Caspase-1的成熟和分泌，这对于NLRP3炎症小体相关疾病的药物开发具有很大的价值，尤其是对于腹膜炎和痛风性关节炎等NLRP3炎症小体相关疾病的临床药物开发，具有重要的参考意义。
附图说明
图1为卡博替尼可以浓度依赖性的抑制LPS和Nigericin刺激诱导IL-1β的分泌的效果图；
图2为卡博替尼可以浓度梯度依赖的抑制LPS和Nigericin刺激诱导IL-1β释放的抑制百分率图；
图3为卡博替尼可以浓度依赖性的抑制LPS和Nigericin刺激诱导的NLRP3炎症小体活化的免疫印迹图。
具体实施方式
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本发明的药物中的辅料包括赋形剂、填料、增容剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、缓溶剂、吸收加速剂、吸附剂、稀释剂、增溶剂、乳化剂、润滑剂、润湿剂、悬浮剂、矫味剂或香料。
具体地，所述辅料可选自以下组分中的至少一种：
(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；
(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；
(c)保湿剂，例如，甘油；
(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；
(e)缓溶剂，例如石蜡；
(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；
(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；
(h)吸附剂，例如，高岭土；
(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
本发明所述药物，除了活性成分卡博替尼外，液体剂型的辅料可包含惰性稀释剂，如水或其它溶剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，药物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
本发明所述药物，除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
本发明所述药物，用于肠胃外注射的注射剂可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。可包含适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂，例如水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
Cabozantinib(卡博替尼)购自aladdin公司。
LPS购自Sigma公司。
Nigericin(尼日利亚菌素)购自Invitrogen公司。
抗鼠IL-1β抗体(AF-401-NA)购自R&D公司。
ELISA试剂盒(IL-1β)购自InvivoGen。
J774A.1细胞购自jennio-bio。
实施例1酶联免疫吸附测定卡博替尼抑制NLRP3炎症小体活化的IL-1β的释放
1、第一天，将J774A.1细胞分到96孔板上，每个孔5×105个细胞；
2、种板过夜，弃上清，每孔加入100μL含细菌脂多糖(LPS)(1μg/ml)的含10％血清的DMEM培养基，然后加入不同浓度的(0μM、0.25μM、0.5μM、1μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM)卡博替尼处理1小时，再加入尼日利亚菌素(Nigericin，10μM)处理1小时；
3、步骤2处理后，收集细胞上清液，采用Mouse IL-1βELISA试剂盒测定IL-1β含量，其操作步骤按照试剂盒说明书进行，并计算其抑制IL-1β释放的抑制百分率，结果见图1和图2。
图1和图2结果显示，在LPS预处理和第二信号Nigericin的共同作用下，NLRP3炎症小体活化，IL-1β成熟并分泌到上清之中。随着不同浓度的卡博替尼加入，有效地抑制IL-1β成熟和分泌，并且，这种抑制效果是剂量依赖的。
实施例2免疫印迹测定卡博替尼抑制NLRP3炎症小体的活化
(1)第一天，将J774A.1细胞接种到35mm直径的细胞培养皿中，每个皿内5×106个细胞；
(2)细胞培养皿内细胞生长增殖12小时后，弃上清，每皿加入1ml含细菌脂多糖(1ug/ml)的含10％血清的DMEM培养基处理5小时，然后加入不同浓度的卡博替尼处理1小时，再加入尼日利亚菌素(Nigericin，10uM)处理1小时；
(3)步骤(2)处理后，收集细胞上清液和细胞裂解液，上清液和裂解液按常规方
法提取上清蛋白和细胞裂解蛋白，用抗IL-1β抗体、抗Caspase-1抗体、抗NLRP3抗体和抗ASC抗体进行Western blotting分析，结果见图3。
图3结果显示，在LPS预处理和第二信号Nigericin的共同作用下，NLRP3炎症小体活化，Caspase-1和IL-1β成熟并分泌到上清中，随着不同浓度的卡博替尼的加入，能有效的抑制Caspase-1和IL-1β成熟和分泌，并且，这种抑制效果呈现剂量依赖性。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.卡博替尼在制备预防和/或治疗NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NLRP3炎症小体相关疾病为痛风。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NLRP3炎症小体相关疾病为腹膜炎。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NLRP3炎症小体相关疾病为银屑病、肠炎、肝炎、硅肺、石棉肺、矽肺、白塞病、紫外线所诱导的皮肤晒伤、接触性超敏反应、帕金森病、抑郁症、II型糖尿病、非酒精性脂肪肝病、酒精性肝病、肾病、家族性冷自发炎症综合征、Mμckle-Wells综合征、慢性婴儿神经皮肤和关节综合征、新生儿发作多系统炎性疾病、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化、哮喘或急性呼吸窘迫综合征。
5.卡博替尼在制备抑制NLRP3炎症小体活化的药物中的应用。
6.卡博替尼在制备抑制Caspase-1成熟或分泌的药物中的应用。
7.卡博替尼在制备抑制IL-1β成熟或分泌的药物中的应用。
8.一种预防和/或治疗NLRP3炎症小体相关疾病的药物，其特征在于，包括卡博替尼以及药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、乳液、溶液、悬浮液或酊剂。
10.根据权利要求8或9所述的药物，其特征在于，所述辅料为赋形剂、填料、增容剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、缓溶剂、吸收加速剂、吸附剂、稀释剂、增溶剂、乳化剂、润滑剂、润湿剂、悬浮剂、矫味剂和香料中的至少一种。
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