CN113170727A - 一种不飞絮柳属植物的繁育方法 - Google Patents

一种不飞絮柳属植物的繁育方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种不飞絮柳属植物的繁育方法，包括以下步骤：步骤（1）、柳树种子的灭菌及萌动处理；步骤（2）、在25℃下用诱变秋水仙碱培养基处理萌动的柳树种子，获得染色体加倍的柳树苗；步骤（3）、将步骤（2）得到的染色体加倍的柳树苗转移到改良MS培养基上紫外线诱变驯化培养，直到幼苗逐渐生根完成后进行移栽，移栽后培养5‑6年得到进入生殖成熟期的柳树；步骤（4）、将步骤（3）得到的进入生殖成熟期的柳树与普通二倍体柳树杂交，获得三倍体柳树苗，即不飞絮柳属植物。本发明通过培育不结果实的三倍体柳树品种，解决柳树飞絮的问题。

Description

一种不飞絮柳属植物的繁育方法
技术领域
本发明属于植物育种技术领域，涉及柳属植物的繁育，具体涉及一种不飞絮柳属植物的繁育方法。
背景技术
柳属植物具有治水、固沙、改碱等作用，是重要的造林绿化、用材树种，具有较高的生态和经济价值。由于柳属为菓荑花序，雌雄异株，花和幼叶共存期短且易杂交等特点，具有丰富的生态和遗传多样性，我国杨柳属植物资源丰富。其中的垂柳，旱柳等几个品种为优良的园林观赏树种，由于其树枝垂落，姿态优美而具有很高的欣赏价值。但是其较长周期的养分积累导致生长速度比较慢。对于处于壮年期并且进入生殖成熟期的柳属植物来说，每年的 5、6 月份是杨柳树雌株种子成熟的季节，这就造成大街小巷笼罩在漫天飞舞的杨柳絮之中，过量的飞絮不仅给城市的环境造成严重的污染，也给人们的出行带来很大不便，对人们的呼吸道健康带来伤害。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种不飞絮柳属植物的繁育方法，通过培育不结果实的三倍体柳树品种，解决柳树飞絮的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种不飞絮柳属植物的繁育方法，包括以下步骤：
步骤（1）、柳树种子的灭菌及萌动处理；
步骤（2）、在25℃下用诱变秋水仙碱培养基处理萌动的柳树种子，获得染色体加倍的柳树苗；
步骤（3）、将步骤（2）得到的染色体加倍的柳树苗转移到改良MS培养基上紫外线诱变驯化培养，直到幼苗逐渐生根完成后进行移栽，移栽后培养5-6年得到进入生殖成熟期的柳树；
步骤（4）、将步骤（3）得到的进入生殖成熟期的柳树与普通二倍体柳树杂交，获得三倍体柳树苗，即不飞絮柳属植物。
秋水仙碱是一种生物碱，它能够抑制有丝分裂，秋水仙碱处理后的细胞，其染色体虽然纵裂，但细胞并不分裂，不能形成两个细胞，因此可以使细胞染色体加倍，秋水仙碱经常被用来作为植物多倍体诱导的物质，但因植物种类不同，针对不同的植物，其用秋水仙碱处理的条件显著不同，需要研究者进行多次实验和分析。
本发明的进一步改进方案为：
所述步骤（1）柳树种子的灭菌及萌动处理具体包括以下步骤：
步骤1.1、在超净工作台中将其柳树种子置于无菌三角瓶中；首先加入体积浓度为75％的酒精，进行快速润洗，随后迅速将酒精倒出，并立即用无菌水冲洗6次；再将柳树种子浸泡于过氧化氢中，浸泡期间摇床震荡20分钟后用体积浓度为75％的酒精消毒；最后，用无菌水反复冲洗柳树种子5-6次；
步骤1.2、将上述处理后的柳树种子加入细胞分裂素的无菌水溶液中， 用透气的封口膜封口后，置于恒温培养箱内避光培养，然后用无菌水清洗种子3次以上；随后，用恒温震荡器震荡1小时后加入无菌水，继续在恒温培养箱内避光培养，直至种子子叶萌发。
进一步的，所述步骤1.1中酒精的用量与柳树种子的用量比例为8:100-20:100ml/粒，酒精的润洗时间不超过40秒；过氧化氢的体积浓度为10％，过氧化氢的用量与柳树种子的用量比例为20:100-30:100ml/粒，过氧化氢的浸泡时间为20-25分钟。
进一步的，所述步骤1.2中的细胞分裂素的质量浓度为0.6％，细胞分裂素的用量与步骤1.1处理后的的柳树种子的用量的比例为8: 100-20:100ml/粒，添加细胞分裂素的培养时间为10-15小时，添加细胞分裂素的培养温度20-26℃；无菌水的用量为8:100-20:100ml/粒柳树种子，无菌水的培养温度为20-26℃，添加无菌水的培养时间为20-26小时。
进一步的，所述步骤（2）具体包括以下步骤：将步骤（1）处理好的柳树种子在无菌操作台中，转移到装有诱变秋水仙碱培养基的三角瓶中摇床震荡培养处理48小时后，用锡箔纸将三角瓶瓶身完全遮盖后，将溶液去除，将柳树种子用无菌水取出反复冲洗6-7次，并在筛选培养基中进行光照培养12-15天，直到柳树幼苗表现为子叶膨大，且略出现绿色；期间淘汰出现的弱苗和快速伸长的徒长柳苗。
进一步的，所述诱变秋水仙碱培养基的组成如下：秋水仙碱素0.6g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。
进一步的，所述筛选培养基的组成如下：KCl 为1g，琼脂10g，秋水仙素5g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。
进一步的，所述步骤（3）中改良MS培养基配制的时候，母液Ⅰ中KH2PO4 的浓度为3500mg/L，母液Ⅱ中KI的浓度为176mg/L，母液Ⅳ中甘氨酸的浓度为600mg/L。
进一步的，所述柳树种子选自旱柳、垂柳或者钻天柳。
本发明的有益效果为：
本发明繁育的柳树为三倍体植物，不结果实，不飞絮，作为园林绿化用的树木，可以有效解决飞絮的问题。
本发明繁育的柳树木质部生长迅速、树枝柔软，其显微特点为韧皮细胞比普通二倍体柳树的韧皮细胞大且排列紧密，肉眼观察6年生本发明的柳树木质部比普通柳树厚到5厘米。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进一步具体描述。本发明的设计思想或同类物质的简单替代属于本发明的保护范围。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规的方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料。
实施例：不飞絮柳属植物的繁育
步骤（1）、垂柳salix babylonica种子的灭菌及萌动处理；
具体步骤为：
步骤1.1、在超净工作台中将其垂柳salix babylonica种子置于无菌三角瓶中；首先加入体积浓度为75％的酒精，进行快速润洗，随后迅速将酒精倒出，并立即用无菌水冲洗6次；再将垂柳salix babylonica种子浸泡于过氧化氢中，浸泡期间摇床震荡20分钟后用体积浓度为75％的酒精消毒；最后，用无菌水反复冲洗柳树种子5-6次；
其中，酒精的用量与垂柳salix babylonica种子的用量比例为8:100-20:100ml/粒，酒精的润洗时间不超过40秒；过氧化氢的体积浓度为10％，过氧化氢的用量与垂柳salix babylonica种子的用量比例为20:100-30:100ml/粒，过氧化氢的浸泡时间为20-25分钟。
步骤1.2、将上述处理后的垂柳salix babylonica种子加入细胞分裂素的无菌水溶液中， 用透气的封口膜封口后，置于恒温培养箱内避光培养，然后用无菌水清洗种子3次以上；随后，用恒温震荡器震荡1小时后加入无菌水，继续在恒温培养箱内避光培养，直至种子子叶萌发。
其中，细胞分裂素的质量浓度为0.6％，细胞分裂素的用量与步骤1.1处理后的的柳树种子的用量的比例为8: 100-20:100ml/粒，添加细胞分裂素的培养时间为10-15小时，添加细胞分裂素的培养温度20-26℃；无菌水的用量为8:100-20:100ml/粒柳树种子，无菌水的培养温度为20-26℃，添加无菌水的培养时间为20-26小时。
步骤（2）、在25℃下用诱变秋水仙碱培养基处理萌动的垂柳salix babylonica种子，获得染色体加倍的柳树苗（4X=76）；
具体步骤为：
将步骤（1）处理好的垂柳salix babylonica种子在无菌操作台中，转移到装有诱变秋水仙碱培养基的三角瓶中摇床震荡培养处理48小时后，用锡箔纸将三角瓶瓶身完全遮盖后，将溶液去除，将柳树种子用无菌水取出反复冲洗6-7次，并在筛选培养基中进行光照培养12-15天，直到柳树幼苗表现为子叶膨大，且略出现绿色；期间淘汰出现的弱苗和快速伸长的徒长柳苗。
其中诱变秋水仙碱培养基的组成如下：秋水仙碱素0.6g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。筛选培养基的组成如下：KCl 为1g，琼脂10g，秋水仙素5g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。
步骤（3）、将步骤（2）得到的染色体加倍的柳树苗（4X=76）转移到改良MS培养基上紫外线诱变驯化培养，直到幼苗逐渐生根完成后进行移栽，移栽后培养5-6年得到进入生殖成熟期的柳树；
本实施例所用的改良MS培养基配制的时候，母液Ⅰ中KH2PO4 的浓度为3500mg/L，母液Ⅱ中KI的浓度为176mg/L，母液Ⅳ中甘氨酸的浓度为600mg/L。其他组成和配制方法与现有的MS培养基相同。
步骤（4）、将步骤（3）得到的进入生殖成熟期的柳树（4X=76）与普通二倍体垂柳（2X＝38）杂交，获得三倍体柳树苗（3X=57），即不飞絮垂柳。运用本发明的方法不断繁育不飞絮垂柳进入园林绿化，推广与城市街道绿化，可解决城市飞絮问题。

Claims (9)

1.一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤（1）、柳树种子的灭菌及萌动处理；
步骤（2）、在25℃下用诱变秋水仙碱培养基处理萌动的柳树种子，获得染色体加倍的柳树苗；
步骤（3）、将步骤（2）得到的染色体加倍的柳树苗转移到改良MS培养基上紫外线诱变驯化培养，直到幼苗逐渐生根完成后进行移栽，移栽后培养5-6年得到进入生殖成熟期的柳树；
步骤（4）、 将步骤（3）得到的进入生殖成熟期的柳树与普通二倍体柳树杂交，获得三倍体柳树苗，即不飞絮柳属植物。
2.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤（1）柳树种子的灭菌及萌动处理具体包括以下步骤：
步骤1.1、在超净工作台中将其柳树种子置于无菌三角瓶中；首先加入体积浓度为75％的酒精，进行快速润洗，随后迅速将酒精倒出，并立即用无菌水冲洗6次；再将柳树种子浸泡于过氧化氢中，浸泡期间摇床震荡20分钟后用体积浓度为75％的酒精消毒；最后，用无菌水反复冲洗柳树种子5-6次；
步骤1.2、将上述处理后的柳树种子加入细胞分裂素的无菌水溶液中， 用透气的封口膜封口后，置于恒温培养箱内避光培养，然后用无菌水清洗种子3次以上；随后，用恒温震荡器震荡1小时后加入无菌水，继续在恒温培养箱内避光培养，直至种子子叶萌发。
3.根据权利要求2所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤1.1中酒精的用量与柳树种子的用量比例为8:100-20:100ml/粒，酒精的润洗时间不超过40秒；过氧化氢的体积浓度为10％，过氧化氢的用量与柳树种子的用量比例为20:100-30:100ml/粒，过氧化氢的浸泡时间为20-25分钟。
4.根据权利要求2所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤1.2中的细胞分裂素的质量浓度为0.6％，细胞分裂素的用量与步骤1.1处理后的的柳树种子的用量的比例为8: 100-20:100ml/粒，添加细胞分裂素的培养时间为10-15小时，添加细胞分裂素的培养温度20-26℃；无菌水的用量为8:100-20:100ml/粒柳树种子，无菌水的培养温度为20-26℃，添加无菌水的培养时间为20-26小时。
5.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤（2）具体包括以下步骤：将步骤（1）处理好的柳树种子在无菌操作台中，转移到装有诱变秋水仙碱培养基的三角瓶中摇床震荡培养处理48小时后，用锡箔纸将三角瓶瓶身完全遮盖后，将溶液去除，将柳树种子用无菌水取出反复冲洗6-7次，并在筛选培养基中进行光照培养12-15天，直到柳树幼苗表现为子叶膨大，且略出现绿色；期间淘汰出现的弱苗和快速伸长的徒长柳苗。
6.根据权利要求5所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述诱变秋水仙碱培养基的组成如下：秋水仙碱素0.6g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。
7.根据权利要求5所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述筛选培养基的组成如下：KCl 为1g，琼脂10g，秋水仙素5g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L。
8.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤（3）中改良MS培养基配制的时候，母液Ⅰ中KH2PO4 的浓度为3500mg/L，母液Ⅱ中KI的浓度为176mg/L，母液Ⅳ中甘氨酸的浓度为600mg/L。
9.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述柳树种子选自旱柳、垂柳或者钻天柳。
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