CN113163729B - 大豆栽培种scel-1的种子、植物体和植物体的一部分，以及从所述种子提取的提取物 - Google Patents
大豆栽培种scel-1的种子、植物体和植物体的一部分，以及从所述种子提取的提取物 Download PDFInfo
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Abstract
本公开提供一种新型大豆栽培种SCEL‑1的种子、所述种子的植物体或其一部分，以及从所述种子获得的提取物。
Description
技术领域
1、相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年06月29日在韩国知识产权局提交的第10-2018-0075957号韩国专利申请的权益，该韩国专利申请的公开内容通过引用全部包含于此。
2、领域
一个或更多实施例涉及大豆Glycine max(L.)Merrill栽培种SCEL-1的种子、所述种子的植物体或所述植物体的一部分、生产所述植物体或所述植物体的所述一部分的产物的方法以及用于抗氧化、保护肝细胞或减少总胆固醇、高密度脂蛋白(HDL，high-densitylipoprotein)、低密度脂蛋白(LDL，low-density lipoprotein)，以及甘油三酯(TG，triglyceride)含量的组合物，该组合物包括通过使用水、C1-C6酒精或其混合物对大豆栽培种的种子执行提取(extraction，或萃取)工艺而获得的提取物作为有效成分。
背景技术
大豆是具有丰富的植物性蛋白质的源泉作物，其不仅包括蛋白，还包括诸如不饱和脂肪酸、氨基酸、异黄酮，以及酚酸的功能性优异的各种物质。因此，大豆使用为代替动物性蛋白的蛋白资源。
研究人员车培天等人(韩国生药学会，第27(3)期：第190-195页(1996年版))发现，与其它大豆(Glycine max(L.)Merrill.)的乙醇提取物不同，通过使用乙醇对属于野生型大豆的野大豆(Glycine soja Siebolt et Zucc.)执行提取工艺来获得的提取物(下文中称为乙醇提取物)包括(-)-表儿茶素。并且，本研究人员还发现所述野大豆的乙醇提取物具有抗氧化活性。然而，车培天等人并没有披露大豆包括(-)-表儿茶素。
因此，需要具有比现有的大豆更优异的抗氧化性和/或其它生理功能的新型的大豆栽培种。
发明内容
技术问题
一个或更多实施例提供一种大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子、所述种子的植物体和所述植物体的一部分，以及所述植物体的子孙，其中，所述种子包括花青素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)、原花青素B2(Procyanidin B2)，以及表儿茶素(epicatechin)，其中，原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷的含量，并且所述大豆栽培种的种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所(KACC)。
一个或更多实施例包括通过转化所述种子的植物体或所述植物体的一部分而获得的大豆植物体、获得所述大豆植物体的种子，以及所述大豆植物体的子孙。
一个或更多实施例包括一种生产种子的植物体或所述植物体的一部分的产物的方法，其包括：获得大豆栽培种的种子的植物体或所述植物体的一部分；以及从所述植物体或其一部分生产产物，其中，所述大豆栽培种的种子是大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子(seed)，其包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素，并且原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷的含量，其中，所述大豆栽培种种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所(Korean AgriculturalCulture Collection；KACC)。
一个或更多实施例包括一种用于抗氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯含量的组合物，该组合物包括通过使用水、C1-C6酒精，或其混合物对大豆栽培种的种子执行提取工艺而获得的提取物作为有效成分，其中，所述大豆栽培种的种子是大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子(seed)，其包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素，并且原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷的含量，其中，所述大豆栽培种的种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所。
一个或更多实施例包括一种用于抗氧化或保护肝细胞的组合物，该组合物包括花青素-3-O-葡萄糖苷或其生理学上可接受的盐、原花青素B2或其生理学上可接受的盐，以及表儿茶素或其生理学上可接受的盐作为有效成分，其中，基于重量，花青素-3-O-葡萄糖苷或其生理学上可接受的盐、原花青素B2或其生理学上可接受的盐，以及表儿茶素或其生理学上可接受的盐的含量比分别为1：2.0至2.1：0.43至0.46。
技术方案
在下文中，通过实施例更加详细地描述一个或更多实施例，其中，类似的参照符号指示类似的元素。然而，这些实施例用于示例性地描述一个或更多具体的例子，本发明的范围并不限于这些实施例。因此，在下文中仅参照附图描述所述实施例以解释本说明书的各方面。
本公开的第一方面提供一种大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子(seed)，所述种子的植物体和所述植物体的一部分，以及所述植物体的子孙，其中，所述种子包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素，其中，原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷，并且所述大豆栽培种的种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所(Korean Agricultural Culture Collection；KACC)。
在本说明书中使用的术语“含量”可以基于通过粉碎种子并使用70(v/v)％乙醇水溶液将所述粉碎的种子在约25℃至约55℃的范围内培养6小时而获得的提取物计算。在此使用的术语“含量”是示例性地记载的，应理解为可以根据用于培养获得种子的植物体的土壤、气候条件，以及个别种子等可以具有偏差。
在本公开的种子中，基于重量，可以以等于或大于1：2.0、1：2.0至1：5.0、1：2.0至1：3.0、1：2.0至1：2.5或1：2.0至1：2.1的含量比含有花青素-3-O-葡萄糖苷和原花青素B2。
在本公开的种子中，基于重量，原花青素B2和表儿茶素的总含量高于名为原黑(Wonheug)的栽培种的含量2倍或更多、2.5倍或更多，例如，2.6倍至5.1倍。
在本公开的种子中，基于重量，原花青素B2和表儿茶素的总含量可以在约0.20％至约0.36％的范围内。
在本公开的种子中，基于提取物的总重量，原花青素B2和表儿茶素的含量可以在约1.31％至约2.4％的范围内。
在本公开的种子中，基于提取物的总重量，花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素的总含量可以在约2.1％至约3.4％的范围内。
在本公开的种子中，基于重量，可以以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素。
当本公开的种子发芽并形成植物体时，这种植物体可以具有在表1中列举的特性。除非在本说明书中另有提及，否则大豆栽培种的特性可以根据“为审查新品种所需要的各种作物特性的调查指南：“大豆(Soybean Glycine max(L.)Merrill)(农林畜产食品部韩国种子和品种服务中心，2014：http://www.seed.go.kr)”测量和验证，所述指南确定为说明根据植物新品种保护法第三十条以及该法施行命令第三十三条的种子管理纲要第二条的附表1的每种作物的品种的特性而所需的事项和为根据该法实施规则第四十七条的栽培审查所需的资格测试的方向。并且，除非另有其它记载，否则在大豆栽培种的特性中，数量性状显示平均值。
本公开的第二方面提供从所述种子获得的植物体和所述植物体的一部分。所述植物体的一部分可以是花粉(pollen)、根(root)、种皮(seed coat)、细胞、叶(leaf)、茎(stem)、花药(anther)、胚珠(ovule)、豆芽、豆荚皮，或其提取物。
本公开的第三方面提供所述植物体的子孙。
本公开的第四方面提供通过转化所述种子的植物体或所述植物体的一部分而获得的大豆植物体，获得所述大豆栽培种的种子，以及所述大豆植物体的子孙。
本公开的第五方面提供一种生产种子的植物体或所述植物体的一部分的产物，所述方法包括：获得大豆栽培种的种子的植物体或所述植物体的一部分的步骤：以及从所述植物体或其一部分生产产物的步骤，其中，所述大豆栽培种的种子是大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子(seed)，其包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素，其中，原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷的含量，并且所述大豆栽培种的种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所。
在一实施例中，在所述获得所述大豆栽培种的种子的植物体或所述植物体的一部分的步骤中的所述大豆栽培种的种子如上所述。所述获得所述大豆栽培种的种子的植物体或所述植物体的一部分的步骤包括使所述大豆栽培种的种子发芽或生长。所述生长不仅包括土壤栽培还包括无土栽培。所述获得植物体或所述植物体的一部分的步骤可以包括切断或粉碎所述植物体或其一部分。当所述植物体的一部分为种子时，可以对所述种子进行粉碎或剥皮。
生产所述植物体或其一部分的产物的步骤可以根据所选择的产物变化。当所述产物为提取物时，所述生产可以包括对所述植物体或其一部分执行提取工艺。当所述产物为油时，可以包括诸如压榨的挤出油的过程。所述产物包括蛋白浓缩物(proteinconcentrate)、蛋白分离物(protein isolate)、大豆皮(soybean hull)、食物(meal)、粉末(flour)、油、提取物，或豆芽。
本公开的第六方面提供一种用于抗氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯含量的组合物，该组合物包括通过使用水、C1-C6酒精，或其混合物对大豆栽培种的种子执行提取工艺而获得的提取物作为有效成分，其中，所述大豆栽培种的种子是大豆(Glycine max(L.)Merrill)栽培种SCEL-1的种子(seed)，该种子包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2、表儿茶素或其生理学上可接受的盐，其中，原花青素B2的含量大于花青素-3-O-葡萄糖苷的含量，并且所述大豆栽培种的种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所。
在本公开的组合物中，基于重量，在所述提取物中的所述原花青素B2和表儿茶素的总含量可以在约1.31％至约2.40％的范围内。
在本公开的组合物中，基于重量，花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2和表儿茶素可以以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括在所述提取物中。并且，在本公开的提取物中，基于重量，花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2以及表儿茶素的含量可以在约2.1％至约3.4％的范围内。
在本公开的组合物中，基于所述组合物的总重量，所述提取物的含量可以在约0.001％至约99.9％、约0.01％至约80.0％、约0.01％至约60.0％、约0.01％至约50.0％、约0.01％至约30.0％、约0.01％至约20.0％、约0.01％至约15.0％、约0.01％至约10.0％、约0.01％至约5.0％、约0.1％至约99.9％、约1.0％至约80.0％、约5.0％至约60.0％、约5.0％至约50.0％、约5.0％至约30.0％、约30.0％至约50.0％、约40.0％至约80.0％、约15.0％至约70.0％，或约50.0％至约90.0％的范围内。
本公开的第七方面提供一种用于抗氧化或保护肝细胞的组合物，该组合物包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素，或其生理学上可接受的盐作为有效成分，其中，基于重量，花青素-3-O-葡萄糖苷或其生理学上可接受的盐、原花青素B2或其生理学上可接受的盐，以及表儿茶素或其生理学上可接受的盐可以以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括在所述组合物中。
在本公开的组合物中，基于所述组合物的总重量，花青素-3-O-葡萄糖苷或其生理学上可接受的盐、原花青素B2或其生理学上可接受的盐，以及表儿茶素或其生理学上可接受的盐可以分别在约0.001％至约99.9％、约0.005％至约95％、约0.01％至约80.0％、约0.01％至约60.0％、约0.01％至约50.0％、约0.01％至约30.0％、约0.01％至约20.0％、约0.01％至约15.0％、约0.01％至约10.0％、约0.01％至约5.0％、约0.05至约85％、约0.1％至约99.9％、约0.1％至约80％、约0.5％至约75％、约1.0％至约80.0％、约1％至约70％、约1％至约50％、约1％至约30％、约1％至约15％、约3％至约15％、约5％至约15％、约5％至约65％、约5.0％至约60.0％、约5.0％至约50.0％、约5.0％至约30.0％、约10％至约60％、约15％至约55％、约20％至约50％、约25％至约45％或约30％至约40％、约30.0％至约50.0％、约40.0％至约80.0％、约15.0％至约70.0％，或约50.0％至约90.0％的范围内。
根据本公开的第六方面和第七方面的组合物可以是食品、化妆品，或药物组合物。
在本公开的第六方面和第七方面，表达“生理学上可接受的盐”可以包括“药学上可接受的盐”。所述表达“药学上可接受的盐”是指在以常规的药物剂量施用时避免相当高的毒性作用，因此可以使用于动物，更具体地，可以使用于人。所述表达例如包括可以收到或已收到政府或等同于其的制约机构的承认，或被列举在药典中或认知为其它一般的药典。
在本公开的第六方面和第七方面，“药学上可接受的盐”是指药学上可接受且具有母化合物的优选的药理活性的、根据本发明的一实施例的盐。所述盐可以包括：
(1)酸加成盐(acid addition salt)，其由诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸，或磷酸等的无机酸形成；或由诸如醋酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲基磺酸、乙基磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟乙基磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基联环[2,2,2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡萄糖酸、聚谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、己二烯二酸等的有机酸形成；或者
(2)当母体化合物中存在的酸性质子被取代时形成的盐。
在本公开的第六方面和第七方面，所述术语“有效成分”是指单独显示所需的活性或能够与没有独立的活性的载体一起显示活性的成分。
在本公开的第六方面和第七方面，表达“保护肝细胞”是指通过避免肝细胞死亡或使肝细胞免受氧化应激来保护健康的肝或损伤的肝的所有保护。
对作为本公开的一方面的用于保护肝细胞的组合物而言，所述组合物可以用于预防或治疗肝疾病的组合物。其中，所述肝疾病可以包括由酒精或其混合物引起的酒精性肝疾病。本公开的组合物可以预防或治疗关于肝的疾病或在肝内发生的疾病。具体地，所述“预防或治疗肝疾病”可以是指避免肝细胞由于叔丁基过氧化氢(tert-butylhydroperoxide)引起的死亡或恢复起因于活性氧(reactive oxygen species；ROS)的肝损伤。在本文中使用的术语“由酒精或其混合物引起的酒精性肝疾病”包括由于酒精或其混合物引起的肝损伤而导致的疾病。
在本公开的第六方面和第七方面，所述用于抗氧化的组合物的用途可以包括保护皮肤免受氧化应激的影响。
在本公开的第六方面和第七方面，所述用于减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯的含量的组合物的用途包括在血中减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯的水平。所述用于减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯含量的组合物的用途可以源自组织，其中，所述组织可以是肝组织或脂肪组织。因此，所述组合物可以用于预防或治疗伴随血中总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯含量增加的症状的疾病。所述疾病可以是肥胖或糖尿病。
在本公开的第七方面，所述组合物可以包括对以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所的大豆栽培种的种子使用水、C1-C6酒精，或其混合物执行提取工艺而获得的提取物作为有效成分。
在一个实施例中，所述组合物可以是对肝疾病有效的药物组合物，具体地，可以是对由于氧化应激而引起的肝疾病有效的药物组合物。
当将根据本公开的组合物应用于药物时，可以通过添加包括所述组合物作为有效成分的常规的有机或无机载体，将所述组合物制成用于经口施用或肠胃外施用的固体、半固体，或液相形式的药物。
所述用于经口施用的制剂的例子可以包括片剂、药丸(pill)、颗粒剂、胶囊剂、散剂、细粒剂、乳浊剂、糖浆剂、丸剂(pellet)等。并且，所述肠胃外施用的制剂的例子可以包括注射剂、滴注剂、软膏、乳液、喷雾剂(spray)、悬浮剂、乳剂、栓剂等。为了制剂化本公开的有效成分，可以根据常规的方法将所述有效成分容易地进行制剂化，并且可以适当使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、保存剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂、其它常用的辅助剂。
根据本公开的所述组合物可以通过口服、肠胃外、直肠、局部、经皮、静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下等施用。
并且，所述有效成分的施用量可以根据治疗对象的年龄、性别、体重、需要治疗的特定疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重度、施用途径以及配方人的判断变化。基于这些因素的对施用量的确定在本领域的普通技术人员的水平内，并且，施用量为0.001mg/kg/天至2000mg/kg/天，更具体为0.5mg/kg/天至1500mg/kg/天。
对根据本公开一方面的用于保护肝的组合物而言，所述组合物包括健康食品组合物。
在一个实施例中，所述组合物可以被加工成包括其的饮料、发酵奶、奶酪、酸奶、果汁、生菌制剂以及保健食品等，还可以使用为各种食品添加物形式。
在一个或更多实施例中，所述组合物可以包括在不损伤本公开所需的主要效果的范围内给主要效果带来上升效果的其它成分等。例如，为了改善物性，所述组合物可以进一步包括诸如香料、色素、杀菌剂、抗氧化剂、保存剂、保湿剂、增粘剂、无机盐类、乳化剂以及合成高分子物质等的添加剂。此外，所述组合物可以进一步包括诸如水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖或海草提取物等的辅助成分。所述成分是根据剂型或使用目的由普通技术人员没有困难地选择并配合的，并且可以在不损伤本发明的目的和效果的范围内选择所述成分的量。
根据本公开的组合物的剂型可以是诸如溶液、乳化物、粘性混合物、片剂、粉末等各种形式，其可以通过单纯饮用、注射施用、喷雾剂(spray)方式或压榨方式等的各种方法施用。
所述组合物包括化妆品组合物，并且所述组合物可以被制成肠胃外施用剂型。肠胃外施用剂型可以是注射剂或皮肤外用剂，并且所述皮肤外用剂可以包括霜、凝胶、软膏、皮肤乳化剂、皮肤悬浮液、经皮传递性贴片、含有药物的绷带、乳液，或其组合。
在所述皮肤外用剂中，可以根据需要适当混合诸如通常用于皮肤外用剂的化妆品或药物等的的成分，例如，水性成分、油性成分、粉末成分、酒精组合物、保湿剂、增稠剂、紫外线吸收剂、美白剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、香料、着色剂、各种皮肤营养剂或其组合等。
在所述皮肤外用剂中，可以适当混合乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多聚磷酸钠、偏磷酸钠、葡萄糖酸等的金属螯合剂、咖啡因、单宁、戊脉安、甘草提取物、光甘草定、大蓟果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸、氨甲环酸及其衍生物或其盐等药剂、维生素C、抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸、葡萄糖、果糖、海藻糖等的糖类。
在本公开的组合物中，所述提取物可以通过使所述种子与水、C1-C6的酒精，或其混合物接触来获得。所述接触可以包括培养通过混合所述种子与水、C1-C6的酒精，或其混合物而获得的混合物。所述培养可以在加温或加压下执行所述培养。并且，还可以在搅拌下执行所述培养，可以在室温至回流温度，例如在室温至约100℃、室温至约80℃、室温至约70℃、约50℃至约70℃、约40至约100℃、约40至约80℃、约40至约60℃，或在约50℃的温度下执行所述培养。还可以在微波照射下执行所述培养。在此使用的所述酒精可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇或其组合。在此使用的所述酒精可以是在约30体积％至约100体积％、约30体积％至约90体积％、约30体积％至约80体积％、约40体积％至约80体积％、约50体积％至约100体积％、约50体积％至约90体积％、约50体积％至约80体积％、或约60体积％至约100体积％范围内的水溶液。
在所述提取工艺中使用的溶剂的体积可以是大豆的约2倍至约15倍、约3倍至约15倍、约4倍至约15倍、约5倍至15倍、或约10倍。所述提取工艺可以包括加热提取、冷提取、回流冷却提取，或超声波提取等，只要是对本领域的技术人员显而易见的提取方法就不受限制。可以在约2小时至约8小时、约4小时至约8小时、约5小时至约7小时、约5.5小时至约6.5小时或约6小时的范围内执行所述提取工艺。温度可以根据包括提取工艺中所使用的溶剂的条件变化。为了获得更多活性成分，可以进行一次或更多所述提取工艺，例如可以使用通过组合从一次到五次、一次到四次，或连续三次的提取工艺获得的所有组合物来获得的提取物。
本公开的大豆栽培种SCEL-1提取物可以包括大豆栽培种SCEL-1的粗提取物，并且包括为作为通过对所述粗提取物进行的附加提取工艺而获得的有机溶剂的水溶性分馏物。
所述有机溶剂可以包括正己烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇。根据本公开的方法，所述提取物或该提取物的水溶性分馏物可以直接使用。在一个实施例中，可以以通过浓缩获得的浓缩物使用所述提取物，并且，在一个或更多实施例中，可以以通过浓缩然后冷冻干燥获得的冷冻干燥物的形式使用所述提取物。
本公开的第八方面提供一种用于预防或减少个体内的氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯中至少一个的水平的方法，其包括将根据本公开的第六或第七方面的组合物施用于个体。
所述施用可以是经口施用或肠胃外施用。本公开的所述方法可以用于增加个体内的肝细胞存活率，或预防或治疗酒精性肝疾病。并且，本公开的方法可以减少血中总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯中一个或多个的水平。并且，本公开的方法可以用于预防或治疗肥胖或糖尿病。
本公开的方法可以包括将所述组合物涂抹在个体的皮肤上。在此，所述施用可以是涂抹或应用在皮肤上。本公开的方法可以被视为化妆的方法，且可以预防皮肤中的活性氧(ROS,reactive oxygen species)的产生或减轻其水平。所述活性氧可以是在紫外线照射到皮肤上时产生的。
所述个体可以包括哺乳动物，例如，牛、猪、猫、狗或羊。换言之，所述个体可以是非人类的哺乳动物。
附图说明
通过参照附图对实施例进行描述，这些和/或其它方面会变得明显且更容易理解。
图1示出根据本公开的大豆栽培种的示意的培育系统树图。
图2示出新选择的大豆栽培种的提取物在具有由酒精或其混合物引起的酒精性肝损伤的动物模型中对血中脂肪成分的水平的影响。
图3示出新选择的大豆栽培种的提取物在具有由酒精或其混合物引起的酒精性肝损伤的动物模型中对肝组织的影响。
图4为所选择的大豆栽培种SCEL-1的种子的照片。
具体实施方式
在下文中，通过实施例更加详细地描述一个或更多实施例。然而，这些实施例用于示例性地描述一个或更多具体的例子，本发明的范围并不限于这些实施例。
实施例1：新型栽培种的培育和特性
1、栽培种的培育
准备了从韩国京畿道龙仁市二东邑收集的黑色小粒且具有扁形的大豆种子20粒作为遗传资源。根据栽培所述大豆种子的结果，在花的性状和颜色上发生分离，因此确认所述大豆种子的特质没有固定。例如，花的颜色相互独立地显示出白色或粉色。在这方面，该大豆种子的特质没有固定而不具有稳定性和均匀性，因此未被认定为种。
因此，本公开的发明人根据纯系选择方法通过使用所述大豆种子来培育栽培种。从2013年到2017年进行纯系选择，具体地，从2013年到2014年在位于韩国水源市的农村发展管理局(Rural Development Administration；RDA)国立食量科学研究所(NationalInstitute of Crop Science；NICS)的全作物试验田进行，然后，从2015年到2017年之间，在位于韩国完州郡伊西面的田进行。
从所述收集的大豆遗传资源进行纯系选择的过程如下：具体地，于从2013年到2016年之间的每年的6月上旬将所述20个大豆种子分别在农村发展管理局附属试验田中播种，并在11月下旬为提高纯度选择一个种子，并收获其作为下一年的播种种子。在此后的四年之间经过纯系选择过程，并选择最终一个固定的纯系。
为了确认均匀性，每年调查诸如胚轴颜色、花的颜色、毛状体的颜色、豆荚的颜色、叶形、生长类型、开花期、成熟期等特质。在所述收集的遗传资源的纯系分离过程中，在2013年的情况下观察到胚轴的颜色和花色的分离，在其它特质没有观察到分离。并且，发现在2013年选择的子孙在从2014年以后到2017年之间调查的特质中维持均匀性。标准栽培种(命名为原黑)与对照栽培种(命名为青瓷3号)之间的区别的性质在如表1所示的生长类型、开花时天数、胚轴的颜色、100粒大豆的重量以及叶形的特质方面显而易见。表1表示最终纯系选择的系统的特性。在表1中，将所最终选择的系统(栽培种)命名为SCEL-1。
图4为所述最终选择的栽培种SCEL-1的种子的照片。
[表1]
2、鉴定相比于对照栽培种的栽培种特性
为了将最终纯系选择的栽培种SCEL-1与现有栽培种的农业功能进行比较，于2017年夏季在国立食量科学研究所附属的田中通过使用原黑豆作为标准栽培种并使用青瓷3号作为对照栽培种并通过三次反复随机分组设计来确认各栽培种的功能。每个栽培种的农业特质是通过于2017年06月08日在包括四个株(长度为4m)的试验小区(60cm×15cm)内的每株播种两个种子并栽培所述种子来调查的。原黑豆(栽培种申请公开号：2010-341)为由国立食量科学研究所于2009年开发的具有黑色种皮的小果槐豆栽培种，且为目前在农家中栽培得最多的栽培种。所述原黑豆类似于所选择的栽培种SCEL-1，因此可以用作用于比较的标准栽培种。用作对照品种的青瓷三号(栽培种申请公开号：2005-176)是由国立食量科学研究所于2004年开发的，且为具有黑色种皮，其尺寸大，且用作与饭一起烹调。可以从韩国种子和品种服务中心商购获得所述原黑豆和青瓷三号。
主要在诸如茎长、节数、分枝数等产量构成性状的方面调查农业性状和为功能检查调查的特质。为了调查这些产量构成特质，在成熟期调查了具有反复节的10株的茎长、节数、分枝数、荚数、100粒种子的重量、每株的产量、每区的产量、每个10a的产量。
表2和表3表示选择的大豆栽培种、标准栽培种以及对照栽培种的特性。
[表2]
[表3]
根据表2和表3，与标准栽培种的原黑相比，所选择的栽培种的茎长大26cm，节数多一个。并且，调查结果确认，分枝数为类似于标准栽培种的6.4个，并且，对每个荚的粒数而言，一粒荚、2粒荚、3粒荚的组成比例类似于标准栽培种。表示产量构成性状的总荚数、粒数、每株的产量、每区的产量分别为184个、397粒、23.1g、4.6g，低于标准栽培种。100粒种子的重量为9.4g，小于标准栽培种。当基于上述的结果计算每10a的产量时，所述产量仅为413kg/10a即作为标准栽培种的原黑的约70％水平，但在干重量粉末中，作为功能性物质的原花青素B2和表儿茶素的含量分别高约301％、217％。具体地，原花青素B2的含量在选择栽培种SCEL-1、原黑、青瓷三号中分别为149.4ug/mg、49.5ug/mg，以及34.3ug/100mg，表儿茶素含量在选择栽培种SCEL-1、原黑、青瓷三号分别为46.9ug/100mg、21.6ug/100mg，以及20.1ug/100mg。在此，根据下文中实施例2的第一节的方法的提取工艺确认原花青素B2的含量和表儿茶素的含量。
根据所述实验，发现栽培种SCEL-1具有高度的均匀性且通过比较区别于标准栽培种和对照栽培种，并且，在农业性状和丰产性以及功能性物质含量方面可以被认知为具有区别特征的独立栽培种。
将这样选择的黑色小粒偏椭圆豆的新栽培种命名为SCEL-1并将其以登录号KACC88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所(KACC)。
图1示出本公开的大豆栽培种的培育系统树图。
实施例2：通过使用水、酒精，或其混合物对新选择的大豆种子进行提取工艺而获得的提取物以及所述提取物的用途
在本示例中，从在实施例1中选择的大豆新型栽培种SCEL-1的种子(seed)制备提取物并确认其效果。
1.提取物的制备
在分析所选择的栽培种的种子之前，通过使用高速粉碎机(Wonder Blender，820W，30000RPM，三博特法人)粉碎所述种子来制造种子粉末。将如此获得的大豆粉末1g与100ml的70(v/v)％乙醇水溶液在玻璃管内混合，并在50℃下使用磁棒(magnetic bar)将其搅拌6小时。然后，通过使用过滤纸(filter paper)过滤提取物(Garde No.131定性滤纸，Advantec)。
然后，将所述乙醇层使用氮气干燥器(hurricane-Eagle，清敏技术)干燥1小时后，冷冻干燥一天来完全除去水分。结果，获得大豆提取物0.135g(标准偏差(standarddeviation；DV)：±0.015)。在以下的实验中，为了所述大豆提取物的使用，将所述提取物以30mg/ml浓度溶解于50％v/v水溶性乙醇中。
2.提取物的抗氧化功能
分析了在第一节获得的提取物在细胞中对2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl:DPPH)自由基清除功能的影响，即抗氧化活性。
对DPPH自由基清除活性而言，将大豆提取物添加到0.8ml的99.9％的乙醇水溶液中的0.2mM的DPPH溶液以使最终浓度分别为0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL以及2.0mg/mL，并将所获得的溶液在暗房放置三十分钟。然后，通过使用酶标仪(分子器件，森尼韦尔，加利福尼亚州，美国)在517nm处测量吸光度并评价抗氧化活性。在此，使用具有类似的栽培种特性的原黑提取物作为对照组。
结果，所述新选择的大豆栽培种和原黑的提取物分别显示0.19mg/ml和0.33mg/ml的DPPH自由基清除功能IC50的值。即确认，相比于使用所述原黑提取物，所述新选择的大豆栽培种的提取物显示更高的抗氧化活性。在此，根据以下的式计算DPPH自由基清除功能。
DPPH自由基清除功能＝[1-As/Abk]×100(在此，As、Abk分别指试料和空白(blank)的吸光度。)
然后，基于IC50值，在上文中所使用的0.0625mg/ml、0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml以及2.0mg/ml浓度设置校准曲线来计算并表示最大清除功能值的50％的浓度。
3、确认大豆提取物对酒精性肝疾病的预防或治疗功能
调查所述大豆提取物在具有肝损伤的大鼠模型中的酒精性肝疾病的功能，其中，所述大豆提取物由酒精或其混合物产生。
具体地，使五周龄的大鼠(Sprague-Dawley rats；斯巴格-道利大鼠)(雄性，获得时：18.84g～21.17g，开始施用时：21.73g～24.23g，Orient bio)自由取食一个星期后，如下文喂养大鼠包括酒精或所新选择的大豆栽培种提取物的液体食物21天，然后比较肝损伤程度。为了比较肝损伤的程度，通过使用TG胆固醇测定试剂盒(TG assay kit/胆固醇测定试剂盒Abcam)来测量血中脂质、胆固醇、高密度脂蛋白(high density lipoprotein；HDL)，以及低密度脂蛋白(low density lipoprotein；LDL)。在此，以2,580xg的速度离心分离血液10分钟，并仅将上清使用于测量。并且，在牺牲大鼠后从其采取肝组织，并使用苏木素-伊红和油红染色该肝组织以测量在肝实质中肝脂肪变形区(hepatic steatosis region)的比例和平均肝细胞直径(diameter of hepatocyte)。具体地，在解剖日摘除肝组织并将其固定在10％的中性缓冲甲醛溶液后将所固定的组织再次固定在10％中性缓冲甲醛溶液中24小时，然后制备石蜡块(paraffin block)。将厚度设置为约3μm，并在制备薄片后进行组织染色。
①组1：对照组，仅摄取液体食物
②组2：摄取乙醇的组
③组3：施用乙醇+25mg/kg/天所选择的新大豆栽培种SCEL-1提取物
④组4：施用乙醇+100mg/kg/天所选择的新大豆栽培种SCEL-1提取物
⑤组5：施用乙醇+100mg/kg/天水飞蓟提取物(Sigma Aldrich，水飞蓟苏黄酮，从水飞蓟果实获得的抗肝毒性黄酮木脂素混合物)
图2图示的新选择的大豆栽培种的提取物在酒精性肝损伤动物模型中对血中脂肪成分的水平的影响。如图2所示，新选择的栽培种大豆的提取物显著地减少了总胆固醇、甘油三酯(triglyceride；TG)、高密度脂蛋白，以及低密度脂蛋白。在图2中，TCHO表示总胆固醇，TG表示甘油三酯，HDL表示高密度脂蛋白(high density lipoprotein)，LDL表示低密度脂蛋白(low density lipoprotein)。
图3示出所述新选择的大豆栽培种的提取物在酒精性肝损伤的动物模型中对肝组织的影响。在图3中，苏木素-伊红(hematoxylin-eosin)表示使用苏木素-伊红染色的肝组织，油红(Oil red)表示使用油红染色的肝组织。在图3中，A、B、C、D，以及E分别表示组1、2、3、4以及5，CT、PT分别表示中央静脉(central vein；CV)、三元体区域(portal triad area；PT)。
如图3中所示，在酒精诱导组的肝组织中，观察到相比于正常组的肝组织发生巨大脂肪的分布和组织学的变化。在以25mg/kg/天施用SCEL-1提取物的组中仍然观察到这样的组织学变化或脂肪的分布。然而，在以100mg/kg/天施用所述SCEL-1提取物的组(图3D)或以100mg/kg/天施用水飞蓟提取物的组(图3E)中观察到脂肪肝病变部位的减少和有效地防止在肝中发生的组织学变化的结果。如在以下的表4所示，脂肪肝病变部位和随着脂肪的积累的肝细胞直径的尺寸均在以100mg/kg/天施用SCEL-1提取物的组和以100mg/kg/天施用水飞蓟提取物的组中显示统计上显著地减少的结果。
[表4]
利用根据麦角酸二乙胺(LSD：Lysergic acid diethylamide)测试法统计地分析的平均±标准偏离显示表4中的数据。
##：G1和G1之间有显著的区别，P<0.01
**：显著地不同于G2，P<0.01
G1：正常对照组(1％的羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose；CMC)
中的1％的吐温80(Tween80))，n＝8
G2：空白对照组(1％的羧甲基纤维素中的1％的吐温80)，n＝8
G3：测试组(25mg/kg/天)，n＝8
G4：测试组(100mg/kg/天)，n＝8
G5：标准对照组(水飞蓟100mg/kg/天)，n＝8
4.大豆提取物的成分分析
对大豆提取物执行质谱法(mass spectrometry)来分析活性成分。
具体地，通过使用Agilent 1260 HPLC系统和Bruker MicrOTOF-QⅡ质谱仪来执行大豆提取物的成分分析。在此，为了柱分析，使用Prevail C18柱(250mm×4.6mm，5um)、由95％的水和5％的乙腈组成的移动相溶剂A，以及由95％的乙腈/5％的水(0.1％的乙酸)组成的移动相溶剂B。将溶剂的流速设置为0.7ml/min。为成分分离使用的溶剂的浓度梯度如表5所示。
[表5]
在此，柱的温度维持为35℃，并注入10μL的试料。在ESI(+)模式、质量范围50至800m/z、8L/m的雾化气体(nebulization gas)、气源(source gas)温度180℃、毛细血管(capillary)电压+4500V、锥电压35V条件下使用质谱仪分析大豆提取物中的成分。
结果，包括在所选择的栽培种SCEL-1中的表儿茶素(epicatechin)含量和原花青素B2含量分别为0.32至0.46％、1.0至2.0％，显著高于原黑的0.14至0.15％、0.33至0.35％。
在基于花青苷抗氧化物质的代表物质即花青素-3-O-葡萄糖苷选择的SCEL-1栽培种中，以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素。相反，在原黑中，以1：0.43至0.70：0.19至0.25的含量比包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2，以及表儿茶素。
根据一个或更多实施例，大豆栽培种SCEL-1的种子、从所述种子获得的植物体或所述植物体的一部分，以及所述植物体的子孙可以使用于制备产物。
根据一个或更多实施例，通过转化所述种子的植物体或所述植物体的一部分而获得的大豆植物体、获得所述大豆植物体的种子，以及所述大豆植物体的子孙可以使用于制备产物。
根据一个或更多实施例，可以根据从所述植物体或其一部分生产产物的方法有效地制备产物。
根据一个或更多实施例，用于减少抗氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，或甘油三酯的组合物可以使用为抗氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯的含量的用途。
应理解在此使用的实施例仅是示例性而不用于限制本公开。对在各实施例中的各属性或方面的描述应理解为可用于其它实施例中的其他类似属性或方面。
尽管参照附图描述了一个或更多实施例，本领域的普通技术人员将理解的是，在不脱离由权利要求限定的本公开的精神和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种变更。
Claims (9)
1.一种生产产物的方法，其包括：获得大豆栽培种的种子的植物体或所述植物体的一部分，其中，所述大豆栽培种的种子为大豆Glycine max(L.)Merrill栽培种SCEL-1的种子，基于重量，所述种子以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2以及表儿茶素，并且，所述种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所；以及
从所述植物体或其一部分生产产物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述产物包括蛋白质浓缩物、蛋白分离物、大豆皮、食物、粉末、油、提取物，或豆芽。
3.一种用于抗氧化、保护肝细胞，或减少总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白，以及甘油三酯含量的组合物，其包括通过使用水、C1-C6醇或其混合物对大豆栽培种的种子执行提取工艺而获得的提取物作为有效成分，其中，所述大豆栽培种的种子为大豆栽培种SCEL-1的种子，其包括花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2、以及表儿茶素，并且，所述种子的代表性试料以登录号KACC 88002BP于2018年11月08日保藏在作为根据布达佩斯条约的以专利程序为目的的国际承认微生物保藏机构的国立农业科学研究所，
其中，基于重量，花青素-3-O-葡萄糖苷、原花青素B2以及表儿茶素以1：2.0至2.1：0.43至0.48的含量比包括在所述组合物中。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，基于整个提取物重量，在所述提取物中，所述原花青素B2和表儿茶素的总含量在1.3％至2.4％的范围内。
5.根据权利要求3所述的组合物，其中，基于所述组合物的总重量，所述提取物的含量在0.005％至99.9％的范围内。
6.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述组合物为化妆品组合物，或药物组合物。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述药物组合物用于保护肝细胞免受氧化应激。
8.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述化妆品组合物用于保护皮肤免受氧化应激。
9.根据权利要求6所述的组合物，其中，所述药物组合物用于预防或治疗由酒精或其混合物引起的酒精性肝疾病。
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