CN113151536B - 一种油用亚麻常规品种真实性的ssr分子标记检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法。本发明的23个SSR标记及对应的引物组合用于油用亚麻品种真实性鉴定，每个SSR位点的等位变异的丰富度较高，23个SSR标记在我国86个审定油用亚麻品种中共检出124个等位变异，平均每个位点检测到5.39个等位变异，每个标记的平均PIC值为0.42，对油用亚麻品种具有较高的分辨率。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法。
背景技术
随着新品种选育方法和技术的改进，新品种层出不穷。市场上制售假劣种子及套牌侵权等违法行为时有发生，严重地扰乱了种子市场的秩序。这些问题归根结底都是品种真实性的鉴定问题。由于缺乏胡麻品种真实性分子快速鉴定技术规范，质量监管无法出具科学的鉴定结果，不法商贩得不到应有的惩罚，育种家和农民的权益得不到保护，品种打假工作难见成效。因此，迫切需要研制出准确可靠、快速简便的胡麻品种真实性的分子鉴定技术标准。
目前胡麻品种真实性和种子真实性的鉴定仅依靠形态鉴定或田间小区种植鉴定，费时费工，稳定性差，易受环境和人为因素的影响，难以区别表型相近的品种或个体。特别是随着育种技术的进步，品种间差异越来越小，这些方法已完全不能满足准确、快速鉴定的需要。
近年来的实践证明，SSR标记具有共显性遗传、稳定性好、结果准确、速度快、易于自动化等优点，是解决种子质量鉴定的有效手段，能够为种子市场监管提供有效的技术支撑，保障种子监管工作依法顺利开展。而且SSR标记技术已经过20余年的发展，目前技术已经较为成熟，具备普遍推行的条件。但是，SSR标记数量巨大其中，从国内外公开发表论文1015对，通过EST序列和亚麻基因组序列设计311对，共计1326对，加之新育成的品种由于过度使用部分骨干亲本，同质化严重，大部分SSR标记在品种中没有多态性。
发明内容
本发明的目的在于提供用于油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法。
本发明的另一目的在于提供SSR标记引物在油用亚麻常规品种真实性检测中的应用。
根据本发明的用于油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法，所述方法包括使用以下油用亚麻SSR分子标记进行真实性鉴定的步骤，
P8为3bp基序，在86份已知品种中有3个等位变异，PIC值为0.68；
P14为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.22；
P159为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.47；
P140为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.41；
W55为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.68；
P19为3bp基序，在86份已知品种中有13个等位变异，PIC值为0.70；
P86为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.53；
W5为2bp基序，在86份已知品种中有11个等位变异，PIC值为0.61；
P158为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.19；
P4为4bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.42；
W39为2bp基序，在86份已知品种中有10个等位变异，PIC值为0.22；
P24为3bp基序，在86份已知品种中有6个等位变异，PIC值为0.54；
W60为2bp基序，在86份已知品种中有9个等位变异，PIC值为0.68；
P95为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.0.22；
P23为3bp基序，在86份已知品种中有7个等位变异，PIC值为0.48；
W51为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.23；
W57为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.25；
W59为2bp基序，在86份已知品种中有7个等位变异，PIC值为0.64；
M-10为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.43；
P50为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.18；
P57为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.42；
P151为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.49；
W58为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.31。
根据本发明的用于油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法包括使用所述油用亚麻SSR分子标记的以下SSR引物进行PCR扩增的步骤：
引物P8:
F:5’-GCCTGCAGTTTAGTCGTTGG-3’，R:5’-CGGAAAGAACAATTCCAGCTC-3’；
引物P14：
F:5’-TCCCAGCGAGTTTGGTGAG-3’，R:5’-TGGAGGAACTAATTGTGGCAAG-3’；
引物P159：
F:5’-CCTCCTAAAACCGGTCAACA-3’，R:5’-AAACCCTTCTGACGCTCATC-3’；
引物P140：
F:5’-TGGAGCTTCTTCATCTGCTTTG-3’R:5’-GGATTCAACCGACTTGGGATAA-3’；
引物W55：
F:5’-TGGAGCTTCTTCATCTGCTTTG-3，R:5’-GGATTCAACCGACTTGGGATAA-3’；
引物P19：
F:5’-TCCCGTAATATTCTATGTTCTTCC，R:5’-TGAGTTGGACCTTACAAGACTCA；
引物P86：
F:5’-CAGATCGATGAACTCCTCCTCA-’，R:5’-GCTGCTTTTGTTGTTGTTGGAG-3’；
引物W5：
F:5’-CATGAATTAGCTCGGGTTCG，R:5’-ACCCCATGATGATTGGTGAG；
引物P158：
F:5’-CCATTGCTGTTCTGGCTACC-3’，R:GGATTTGACGCTGGGTGTAG-3’；
引物P4：
F:5’-GACCTTGATCGGTGGTCAAC-3’，R:5’-AAAGAAGAACCAGCCACAGC-3’；
引物W39：
F:5’-TTGCACCCGATACATATTCC-3’，R:5’-CTAGCCTTTCTTGGTTGAAGG-3’；
引物P24：
F:5’-AGAGGCGGAGGGCATTAC-3’，R:5’-TTGGAGAGTTGGAATCGAGA-3’；
引物W60：
F:5’-CTTCATGCAGTCCGTTTTTACA-3’，R:5’-CAGTTCGTAGTTTACTTGGTGCAG-3’；
引物P95：
F：5’-TTGAGGTGCAGCTTAACAGAGC-3’,R：5’-AATGGGTTTCAGCAGCTTCTTC-3’；
引物P23：
F：5’-TGGACGACGATGAAGATGAA-3’，R：5’-CCGCCGGGTACACTACTACT-3’；
引物W51：
F：5’-ACACATTGGAGTGTAGCTCAAG-3’，R：5’-TCACATCACACTGTTTAGTAGATGG-3’；
引物W57：
F：5’-TTTGGGCTTCTACTTTCTCCTG-3’，R：5’-AACCAAGAGGCTTCATACGG-3’；
引物W59：
F：5’-TTCACCATCACACCTTCACC-3’，R：5’-TTTGTTTGATGTTCTGGACCTG-3’；
引物M-10：
F：5’-GGGATGCTGATGAGGAAG-3’，R：5’-GGAGGAGACAGAGGTGGA-3’；
引物P50：
F：5’-ACGTCGAGGAGAAGGGAGAT-3’；R：5’-AATGTCCGTCTCCCACAAAC-3’；
引物P57：
F：5’-TCTCGTAGCTAGGGAGATGG-3’，R：5’-AAAGCCGTCGTACTCACCAC-3’；
引物P86：
F:5’-AAACTCAGTGAATCACCGCTAA-3’，R:5’-TTCCCATGAAGAGTGATGGA-3’；
引物W58：
F：5’-AGCCTCTGCGTTTCTTTCAG-3’，R：5’-GGCAGACTCTCGCTGGTTAG-3’。
根据本发明具体实施方式，标记荧光颜色相同的引物需要同时标记同一种荧光染料，标记的染料颜色可以根据所用毛细管电泳系统型号的发射和吸收波长选择。
根据本发明具体实施方式的油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法，所述方法包括以下步骤：
(1)提取待测油用亚麻品种的个体DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板、上述23对SSR引物对进行PCR扩增；
(3)毛细管电泳检测；
(4)根据步骤(3)的电泳结果，判断待测油用亚麻品种的真实性。
根据本发明具体实施方式的油用亚麻常规品种纯度的SSR分子标记检测方法，步骤(4)中，首先判断变异位点是否为非纯合的SSR分子标记位点，首先将非纯合SSR分子标记位点排除，然后若某一待测油用亚麻个体中存在至少2个不同于其他多数待测个体的SSR分子标记位点，则判定所述待测油用亚麻个体为杂株。
根据本发明具体实施方式的油用亚麻常规品种纯度的SSR分子标记检测方法，步骤(4)中，当不同的待测油用亚麻个体的同一个位点上携带两种等位变异或两种等位变异的杂合子，且随机分布在不同待测油用亚麻个体中时，则判断所述位点为非纯合SSR分子标记位点。
本发明的有益效果：
本发明的23个SSR标记及对应的引物组合在育成油用亚麻品种真实性鉴定中具有如下特点：
1、每个SSR位点的等位变异的丰富度较高，23个SSR标记在我国86个审定油用亚麻品种中共检出124个等位变异，平均每个位点检测到5.39个等位变异，每个标记的平均PIC值为0.42，对油用亚麻品种具有较高的分辨率；
2、在育成油用亚麻品种中每个位点的等位变异分布频率相对均匀；
3、具有定位信息且单位点、单拷贝；
4、23个SSR标记及其引物组合均能特异性扩增且带型简单易于毛细管峰值读取；
5、筛选SSR标记位点的基序在2bp以上；
6、一次性电泳的23个SSR标记，标记同一荧光染料引物扩增的所有等位变异的片段选区间没有跨叠区，且相差15bp以上；
7、筛选的23个SSR标记是将我国所有目前已知品种进行基因分型后才最终确定；
8、23个SSR标记具备很好的稳定性、重复性，便于推广应用；
9、23个SSR标记之间无连锁关系；
10、应用本发明的SSR标记及引物组合在室内实验室3天即可完成品种真实性的鉴定，大幅度节约人力、物力、财力、时间和土地资源成本。
附图说明
图1显示非纯合位点的分布特征，其中，1-4泳道是定亚25号的4个体编号，1和2号个体为纯合位点个体，3号和4号个体为非纯合位点个体。
图2显示杂株的峰型特征，其中，使用引物为P4，1-4号为定亚25号的4个个体，4号个体为杂株；
图3显示部分SSR引物电泳结果，从左到右、从上到下依次为P151电泳峰值图、P19电泳峰值图、W5电泳峰值图、P86电泳峰值图、P14电泳峰值图、P140电泳峰值图、W55电泳峰值图、P8电泳峰值图、P159电泳峰值图。
图4为86个胡麻品种聚类图。
具体实施方式
实施例1
1.确定本发明的分子标记
本发明最终确定的常规油用亚麻品种真实性鉴定的SSR分子标记如表1所示。
表1品种真实性鉴定的SSR引物多态性信息
本发明筛选的SSR分子标记：
P8为3bp基序，在86份已知品种中有3个等位变异，PIC值为0.68；
P14为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.22；
P159为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.47；
P140为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.41；
W55为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.68；
P19为3bp基序，在86份已知品种中有13个等位变异，PIC值为0.70；
P86为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.53；
W5为2bp基序，在86份已知品种中有11个等位变异，PIC值为0.61；
P158为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.19；
P4为4bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.42；
W39为2bp基序，在86份已知品种中有10个等位变异，PIC值为0.22；
P24为3bp基序，在86份已知品种中有6个等位变异，PIC值为0.54；
W60为2bp基序，在86份已知品种中有9个等位变异，PIC值为0.68；
P95为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.0.22；
P23为3bp基序，在86份已知品种中有7个等位变异，PIC值为0.48；
W51为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.23；
W57为2bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.25；
W59为2bp基序，在86份已知品种中有7个等位变异，PIC值为0.64；
M-10为3bp基序，在86份已知品种中有5个等位变异，PIC值为0.43；
P50为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.18；
P57为3bp基序，在86份已知品种中有2个等位变异，PIC值为0.42；
P151为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.49；
W58为3bp基序，在86份已知品种中有4个等位变异，PIC值为0.31。
用于常规油用亚麻品种真实性鉴定的23对SSR引物组合的引物名称、SSR分子标记等位变异扩增区间、引物序列及标记分组见表2：
表2品种真实性鉴定的SSR引物组合
2.非典型株(杂株)和非纯合SSR位点的正确区分
表3显示非纯合位点的分布特征，其中，1-20泳道是定亚25号样品的个体编号；非纯合SSR位点的特点是不同个体的同一个位点分别携带两种等位变异或两种等位变异的杂合子，且其在不同个体的分布是随机的，图1显示非纯合位点的分布特征。杂株基因型的特点是同一个个体在2个以上不同的位点上携带的等位变异与正常个体不同，以通过国家非主要农作物品种登记的品种定亚25号的96个个体为例，如表4所示，1号个体在P4、P8、P151、W5位点上的基因型与其它个体的基因型均不同，因此1号个体为杂株。图2显示杂株峰型特征。
表3非纯合位点的分布特征(W55)
表4杂株位点区分
通过将23对引物的上游引物的5’端标记不同颜色的荧光染料(表5)，由于标记同一种染料的几个位点的等位变异扩增片断大小区间相差15bp以上，因此能够将这23对SSR引物组合在一起电泳。不同引物毛细管电泳峰值图结果如图3所示。
表5引物荧光标记及分组
实施例2 86个育成品种聚类分析
利用本发明的23对引物将86个国内胡麻育成品种在遗传相似系数0.75处聚为7类(图4)，第Ⅰ类1个品种：晋亚1号，第Ⅱ类4个品种：坝亚6号，内亚5号，伊亚3号，宁亚14号；第Ⅲ类1个品种：定亚3号；第Ⅳ类2个品种：定亚13号，宁亚13号；第Ⅴ类1个品种：定亚5号；第Ⅵ类75个品，有分为两个亚类；第Ⅶ类2个品种：定亚1号，定亚2号。说明胡麻育成品种间亲缘关系比较近，遗传基础狭窄。采用23对SSR引物进行品种间基因型的比对，并根据差异位点数进行统计，其中差异位点数小于3的有8对品种(表6)，其余品种差异位点数都大于3。在聚类图上也显示这8对品种聚在一起，其中定亚17号和定亚22号亲缘关系最近，遗传相似系数为0.99。
实施例3与主要农艺性状鉴定相比的准确性
为了进一步判断23对引物对86个品种的聚类结果的准确性，对等位基因位点数不同差异品种进行了田间表型鉴定。鉴定的不同品种在田间相邻种植，每个品种种5行。记录每个品种的生育时期、叶片(叶色、叶表面、叶序)、茎(茎型、)花(花冠形状、花瓣形状、花瓣纵向折叠、花瓣色、花柱长、)、果实性状(果实形状、果实封闭性)，成熟后进行株高、工艺长度、分茎数、主茎分枝数、单株果数、千粒重等性状调查。验证结果如表6所示：在田间小区种植鉴定中性状差异不大的胡麻品种中，SSR标记法均在多个位点上检测到了差异。如第2，9，15对品种，表型上差异的性状很少，而SSR标记法有至少8-20个位点存在差异。相比于田间鉴定，SSR标记法是更为准确和灵敏的品种真实性检测技术。
表6田间表型鉴定
| 序号 | 甲品种 | 乙品种 | 差异位点 | 差异显著表型性状 |
| 1 | 晋亚8号 | 内压5号 | 21 | 叶色、花柱长、果实形状、株高、工艺长度、每果粒数、千粒重 |
| 2 | 陇亚6号 | 坝亚12号 | 20 | 叶表面、分茎数、分枝数、 |
| 3 | 坝亚4号 | 晋亚1号 | 19 | 生育类型、叶色、叶表面、分枝数、分茎数 |
| 4 | 陇亚10号 | 内亚5号 | 19 | 叶色、叶表面、果实封闭性、花柱长、工艺长度、每果粒数、 |
| 5 | 宁亚14号 | 伊亚4号 | 18 | 花柱长、果实封闭性、工艺长度、每果粒数 |
| 6 | 张亚2号 | 天亚6号 | 17 | 花冠形状、花瓣色、果实封闭性、株高、工艺长度、分枝数、千粒重 |
| 7 | 定亚3号 | 内亚6号 | 16 | 花冠形状、花瓣色、花柱长、果实封闭性、工艺长度、千粒重 |
| 8 | 晋亚5号 | 雁杂10号 | 15 | 株高、分茎数、分枝数、每果粒数、千粒重 |
| 9 | 晋亚1号 | 伊亚3号 | 14 | 生育类型、花柱长、千粒重 |
| 10 | 晋亚9号 | 坝亚11号 | 13 | 株高、分茎数、分枝数、 |
| 11 | 内压7号 | 宁亚19号 | 12 | 生育类型、花柱长、花丝色、果实色、株高、工艺长度、千粒重 |
| 12 | 陇亚10号 | 张亚2号 | 11 | 生育类型、叶色、叶表面、花冠形状、花瓣色、株高、分枝数 |
| 13 | 晋亚11号 | 坝选3号 | 10 | 株高、工艺长度 |
| 14 | 定亚22号 | 宁亚17号 | 9 | 花柱长、果实封闭性、每果粒数 |
| 15 | 陇亚8号 | 轮选3号 | 8 | 果实封闭性、工艺长度 |
| 16 | 定亚17号 | 陇亚5号 | 6 | 叶表面、花柱长、果实封闭性、株高、工艺长度、 |
| 17 | 天亚8号 | 轮选2号 | 5 | 叶表面、花柱长、果实形状、工艺长度、每果粒数、 |
| 18 | 宁亚10号 | 雁农1号 | 3 | 生育类型、叶色，株高、工艺长度、千粒重 |
序列表
<110> 甘肃省农业科学院作物研究所
<120> 一种油用亚麻常规品种真实性的SSR分子标记检测方法
<160> 46
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
accccatgat gattggtgag 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ccattgctgt tctggctacc 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
ggatttgacg ctgggtgtag 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gaccttgatc ggtggtcaac 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
aaagaagaac cagccacagc 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ttgcacccga tacatattcc 20
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
ctagcctttc ttggttgaag g 21
<210> 23
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
agaggcggag ggcattac 18
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
ttggagagtt ggaatcgaga 20
<210> 25
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
cttcatgcag tccgttttta ca 22
<210> 26
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
cagttcgtag tttacttggt gcag 24
<210> 27
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
ttgaggtgca gcttaacaga gc 22
<210> 28
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
aatgggtttc agcagcttct tc 22
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
tggacgacga tgaagatgaa 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
ccgccgggta cactactact 20
<210> 31
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
acacattgga gtgtagctca ag 22
<210> 32
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
tcacatcaca ctgtttagta gatgg 25
<210> 33
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
tttgggcttc tactttctcc tg 22
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
aaccaagagg cttcatacgg 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
ttcaccatca caccttcacc 20
<210> 36
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
tttgtttgat gttctggacc tg 22
<210> 37
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
gggatgctga tgaggaag 18
<210> 38
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggaggagaca gaggtgga 18
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
acgtcgagga gaagggagat 20
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aatgtccgtc tcccacaaac 20
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<212> DNA
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tctcgtagct agggagatgg 20
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<211> 20
<212> DNA
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aaagccgtcg tactcaccac 20
<210> 43
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
ttcccatgaa gagtgatgga 20
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
agcctctgcg tttctttcag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
ggcagactct cgctggttag 20
Claims (5)
1.一种油用亚麻常规品种杂株的SSR分子标记检测方法，其特征在于，所述方法包括使用油用亚麻SSR分子标记的特异性SSR引物扩增待测品种的步骤，其中，所述油用亚麻SSR分子标记包括：
SSR分子标记P8、SSR分子标记P14、SSR分子标记P159、SSR分子标记P140、SSR分子标记W55、SSR分子标记P19、SSR分子标记P86、SSR分子标记W5、SSR分子标记P158、SSR分子标记P4、SSR分子标记W39、SSR分子标记P24、SSR分子标记W60、SSR分子标记P95、SSR分子标记P23、SSR分子标记W51、SSR分子标记W57、SSR分子标记W59、SSR分子标记M-10、SSR分子标记P50、SSR分子标记P57、SSR分子标记P151、以及SSR分子标记W58；
所述特异性SSR引物包括：
引物P8:
F:5’-GCCTGCAGTTTAGTCGTTGG-3’，R:5’-CGGAAAGAACAATTCCAGCTC-3’；
引物P14：
F:5’-TCCCAGCGAGTTTGGTGAG-3’，R:5’-TGGAGGAACTAATTGTGGCAAG-3’；
引物P159：
F:5’-CCTCCTAAAACCGGTCAACA-3’，R:5’-AAACCCTTCTGACGCTCATC-3’；
引物P140：
F:5’-TGGAGCTTCTTCATCTGCTTTG-3’R:5’-GGATTCAACCGACTTGGGATAA-3’；
引物W55：
F:5’-TTGTCCAAACCAACCAAGTG-3，R:5’-GACCACCGATTCTAACTCGAAC-3’；
引物P19：
F:5’-TCCCGTAATATTCTATGTTCTTCC，R:5’-TGAGTTGGACCTTACAAGACTCA-3’；
引物P86：
F:5’-CAGATCGATGAACTCCTCCTCA-3’，R:5’-GCTGCTTTTGTTGTTGTTGGAG-3’；
引物W5：
F:5’-CATGAATTAGCTCGGGTTCG-3’，R:5’-ACCCCATGATGATTGGTGAG-3’；
引物P158：
F:5’-CCATTGCTGTTCTGGCTACC-3’，R:5’-GGATTTGACGCTGGGTGTAG-3’；
引物P4：
F:5’-GACCTTGATCGGTGGTCAAC-3’，R:5’-AAAGAAGAACCAGCCACAGC-3’；
引物W39：
F:5’-TTGCACCCGATACATATTCC-3’，R:5’-CTAGCCTTTCTTGGTTGAAGG-3’；
引物P24：
F:5’-AGAGGCGGAGGGCATTAC-3’，R:5’-TTGGAGAGTTGGAATCGAGA-3’；
引物W60：
F:5’-CTTCATGCAGTCCGTTTTTACA-3’，R:
5’-CAGTTCGTAGTTTACTTGGTGCAG-3’；
引物P95：
F：5’-TTGAGGTGCAGCTTAACAGAGC-3’,R：
5’-AATGGGTTTCAGCAGCTTCTTC-3’；
引物P23：
F：5’-TGGACGACGATGAAGATGAA-3’，R：5’-CCGCCGGGTACACTACTACT-3’；
引物W51：
F：5’-ACACATTGGAGTGTAGCTCAAG-3’，R：
5’-TCACATCACACTGTTTAGTAGATGG-3’；
引物W57：
F：5’-TTTGGGCTTCTACTTTCTCCTG-3’，R：5’-AACCAAGAGGCTTCATACGG-3’；
引物W59：
F：5’-TTCACCATCACACCTTCACC-3’，R：5’-TTTGTTTGATGTTCTGGACCTG-3’；
引物M-10：
F：5’-GGGATGCTGATGAGGAAG-3’，R：5’-GGAGGAGACAGAGGTGGA-3’；
引物P50：
F：5’-ACGTCGAGGAGAAGGGAGAT-3’；R：5’-AATGTCCGTCTCCCACAAAC-3’；
引物P57：
F：5’-TCTCGTAGCTAGGGAGATGG-3’，R：5’-AAAGCCGTCGTACTCACCAC-3’；
引物P151：
F:5’-AAACTCAGTGAATCACCGCTAA-3’，R:5’-TTCCCATGAAGAGTGATGGA-3’；
引物W58：
F：5’-AGCCTCTGCGTTTCTTTCAG-3’，R：5’-GGCAGACTCTCGCTGGTTAG-3’。
2.根据权利要求1所述的油用亚麻常规品种杂株的SSR分子标记检测方法，其特征在于，将上 述23对SSR引物的上游引物的5’端标记不同颜色的荧光染料，其中SSR引物与荧光染料的对应关系如下所示：
3.根据权利要求1所述的油用亚麻常规品种杂株的SSR分子标记检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提取待测油用亚麻品种的个体DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，利用上 述23对SSR引物对进行PCR扩增；
(3)毛细管电泳检测；
(4)根据步骤(3)的电泳结果，判断待测油用亚麻品种的杂株。
4.根据权利要求3所述的油用亚麻常规品种杂株的SSR分子标记检测方法，其特征在于，步骤(4)中，首先判断变异位点是否为非纯合的SSR分子标记位点，将非纯合SSR分子标记位点排除，然后若某一待测油用亚麻个体中存在至少2个不同于其他多数待测个体的SSR分子标记位点，则判定所述待测油用亚麻个体为杂株。
5.根据权利要求3所述的油用亚麻常规品种杂株的SSR分子标记检测方法，其特征在于，步骤(4)中，当不同的待测油用亚麻个体的同一个位点上携带两种等位变异或两种等位变异的杂合子，且随机分布在不同待测油用亚麻个体中时，则判断所述位点为非纯合SSR分子标记位点。
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| CN101760537A (zh) * | 2008-12-19 | 2010-06-30 | 李祥 | Ssr和est-ssr标记在小麦中的应用 |
| CN107586879A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-01-16 | 中国农业科学院麻类研究所 | 一种用于检测亚麻ssr分子标记的引物对组、试剂盒、方法及应用 |
| CN109517925A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-03-26 | 中国农业科学院麻类研究所 | 亚麻ssr分子标记及其应用 |
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| 亚麻韧皮部特异启动子克隆与26份种质DNA指纹图谱构建;于文静;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20110115(第01期);D047-361 * |
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