CN113125580A - 测定复杂组分中生物素的高效液相色谱分析方法 - Google Patents

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黄小梅
于多
田敏卿
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Abstract

本发明提供一种高效测定复杂组分中生物素的液相色谱分析方法，是以0.1M磷酸二氢钾、0.01M磷酸氢二钾混合溶液‑乙腈为流动相进行梯度洗脱，可避免其他组分的干扰，在30分钟内准确灵敏地检测出生物素的含量。该方法专属性强、精密度高、稳定性较好、准确度高，操作简单，试剂与耗材价廉易得。本发明提供的方法适用于含多种维生素矿物质组合物的片剂、粉末、胶囊等剂型中测定生物素，可有效地节约检测成本和时间。

Description

测定复杂组分中生物素的高效液相色谱分析方法
技术领域
本发明涉及一种高效快速测定复杂组分中生物素含量的液相色谱分析方法。具体通过对样品前处理和色谱条件的优化，使得实验简单，方便且准确快速检测出复杂组分中生物素的含量。
背景技术
生物素(分子式为C10H16N2O3S)是一种水溶性维生素，又叫维生素H或者维生素B7，是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。
生物素能维持上皮组织结构的完整和健全、增强机体免疫反应和抵抗力、也是维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。
生物素可改善胰岛素调节血糖，亦有助于体内进行更有效的新陈代谢帮助减肥。
生物素的结构如下：
Figure RE-GDA0002394896230000011
目前检测生物素的方法中，色谱方法较为常用，但存在色谱条件复杂、洗脱时间长或采用繁琐梯度等问题。另外，由于多种维生素矿物质片中含有多种成分，生物素含量比较低，样本前处理过程中，其他成分以及辅料对生物素的检测含量会有很大影响，且其他成分可能会对生物素造成降解，影响检测准确性。因此，有必要研究一种高效准确快速测定复杂组分中生物素的液相色谱方法。
发明内容
为克服上述问题，本发明提供一种提取率高、稳定性好、准确度高、重复性好的生物素专属高效液相色谱方法，本发明的具体技术方案：
一种用于高效测定复杂组合物中生物素含量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，供试品的提取溶剂为超纯水，提取方式选自水浴超声、水浴振荡或磁力搅拌中的一种，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，流动相A与流动相B的混合比例为95～55:5～45，梯度洗脱，流速：0.8～1.2ml/min；紫外检测波长设定为 200nm～210nm。
在本发明中，所述提取方法方式为水浴超声，水浴超声的时间选自10-20min，优选15min。
在本发明中，作为流动相A的磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾，磷酸二氢铵中的一种或两种，优选磷酸二氢钾与磷酸氢二钾混合溶液。
在本发明中，用于高效液相色谱法中柱温为30～35℃。
在本发明中，用于高效液相色谱法中的样品盘温度为30℃。
在本发明中，流动相A与流动相B的混合溶液的pH值选自3.00～4.20，优选 3.90～4.20，更加优选4.00。
在一个实施方案中，进行上述色谱分析的色谱仪器及条件为：
检测仪器：高效液相色谱仪(Thermo Fisher，U3000)，配备紫外检测器；
色谱条件：
色谱柱：Agilent-Polaris 5 C18 Ether，150mm*4.6mm，5μm；检测波长： 200～210nm；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：30～35℃，最佳柱温：35℃；运行时间： 30min。流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈；洗脱方式：梯度洗脱如表1；
表1洗脱梯度
时间(min) A(％)(磷酸盐缓冲液) B(％)(乙腈)
0.00 93 7
20.00 93 7
20.01 60 40
25.00 60 40
25.01 93 7
30.00 93 7
本发明中，采用高效液相色谱对多种维生素矿物质片溶液中的生物素进行定量检测，需要对该方法进行专属性、准确度等多方面的确认，具体为：
专属性：配制多种维生素矿物质片溶液和不含生物素的空白辅料溶液，分别进样，结果表明空白溶剂、空白辅料对供试品溶液的主峰出峰无干扰，且能与相邻峰有效的分离，说明本发明提供的方法能够准确测定多种维生素矿物质片中生物素的含量。
准确度：采用本发明的高效液相色谱法对多种维生素矿物质片溶液中的生物素进行检测，结果表明其回收率在合格标准范围，准确度良好。
线性：采用本发明的高效液相色谱法对多种维生素矿物质片中的生物素对照品溶液进行检测，在线性范围40％～160％内，结果显示生物素线性相关系数不小于0.9998，表明检测结果与生物素的浓度具有良好的线性关系。
本发明中，采用高效液相色谱法对不同规格样品配制成的样品溶液中的生物素进行定量检测，实施例会说明。
本发明中，采用高效液相色谱法对不同组分片剂样品配制成的样品溶液中的生物素进行定量检测，实施例会说明。
本发明中，采用高效液相色谱法对胶囊样品配制成的样品溶液中的生物素进行定量检测，实施例会说明。
附图说明
图1示供试品溶液的HPLC检测的色谱图；
图2、3、4示实施例1的色谱条件下HPLC检测的色谱图；
图5示实施例2的色谱条件下HPLC检测的色谱图；
图6示实施例3的色谱条件下HPLC检测的色谱图；
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细的说明，分别以片剂、片剂不同规格、胶囊为例。
试剂：乙腈(SINENCE，批号180/A0683)，磷酸二氢钾、磷酸氢二钾(天津市大茂化学试剂厂，AR)，磷酸(天津市富宇精细化工有限公司，AR)，氨水(国药集团化学试剂有限公司，25～30％，AR)，生物素对照品(中国食品药品检定研究院)，样品(深圳芙莱特营养与健康有限公司提供)
实施例1：
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产的A1111、A2313、A3333号牌多种维生素矿物质片(含有维生素A、维生素E、维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素 B6、生物素、维生素C、维生素D、叶酸、维生素B12、铁、锌、硒、镁、铜、钙、铬、钾等20种成分)样品中生物素含量的测定。实施例1的具体步骤如下：
第一步：对照品溶液的配制，取生物素对照品，精密称定，加入0.5％氨水适量，超声15min使溶解，冷却至室温，加超纯水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
第二步：样品溶液配制，取本品各10片，研细，精密称取细粉适量，置于100ml 棕色锥形瓶中，精密量取水50ml，振荡至分散均匀，30℃超声15min并时时振摇，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液即得。A1111、A2313、A3333牌号多种维生素矿物质片各配制两份。
第三步：液相色谱条件的具体内容如下：
色谱柱：Agilent-Polaris 5 C18 Ether，150mm*4.6mm，5μm
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
检测波长：200nm
流速1.0ml/min
柱温：35℃
进样盘温度：30℃
进样体积：100μl
运行时间：30min
检测色谱图如2、3、4图，检测结果如表2
表2检测结果
Figure RE-GDA0002394896230000041
实施例2：
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产的B83号牌B族维生素片(含有维生素B1、维生素B2、烟酸、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12等8种成分)样品中生物素含量的测定。具体步骤：
第一步：对照品溶液的配制，取生物素对照品，精密称定，加入0.5％氨水适量，超声15min使溶解，冷却至室温，加超纯水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
第二步：样品溶液配制，取本品10片，研细，精密称取细粉适量，置于100ml棕色锥形瓶中，精密量取水50ml，振荡至分散均匀，30℃超声15min并时时振摇，用 0.22μm滤膜滤过，取续滤液即得。B83号牌B族维生素片平行配制两份样品溶液。
第三步：液相色谱条件的具体内容如下：
色谱柱：Agilent-Polaris 5C18 Ether，150mm*4.6mm，5μm
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
检测波长：200nm
流速1.0ml/min
柱温：35℃
进样盘温度：30℃
进样体积：100μl
运行时间：30min
检测色谱图如5图，检测结果如表3
表3检测结果
牌号类型 物质名称 保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 含量％
B83(20190901) 生物素 17.133 9972 1.15 99.7
实施例3：
深圳芙莱特营养与健康有限公司生产的多种维生素胶囊样品中生物素含量的测定。具体步骤：
第一步：对照品溶液的配制，取生物素对照品，精密称定，加入0.5％氨水适量，超声15min使溶解，冷却至室温，加超纯水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；稀释到需要浓度的对照品溶液，即可。
第二步：样品溶液配制，本品胶囊20粒，除去胶囊壳倒出内容物，精密称取内容物适量，置于100ml棕色锥形瓶中，精密量取水50ml，振荡至分散均匀，30℃超声15min 并时时振摇，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液即得。
第三步：液相色谱条件的具体内容如下：
色谱柱：Agilent-Polaris 5C18 Ether，150mm*4.6mm，5μm
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈(梯度洗脱如表1)
检测波长：200nm
流速1.0ml/min
柱温：35℃
进样盘温度：30℃
进样体积：100μl
运行时间：30min
检测色谱图如6图，检测结果如表4
表4检测结果
Figure RE-GDA0002394896230000061
实施例1～3显示，本发明对含有多种维生素矿物质片、部分维生素B族片、多种维生素矿物质胶囊样品进行检测，超纯水作为提取溶剂，可以使得多维矿物质组合物溶液中的生物素保持稳定且不易分解；该高效液相分析方法可以使生物素出峰的峰型好，与其他成分分离度大，且在不同规格的样品条件下，生物素都可以准确灵敏地被检测出来，符合样品检测要求。
以上所述的具体实施例，对本发明的解决的技术问题、技术方案以及有益效果作了一系列的详细说明。但该说明仅仅是针对本发明的具体实施例而已，凡没有脱离本发明技术基础、原则而做的等效实施例或变更，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种测定生物素含量的液相色谱分析方法，其特征在于，供试品的提取溶剂为超纯水，提取方式为水浴超声、水浴振荡或磁力搅拌的一种，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，流动相A与流动相B的混合比例为95～55:5～45，梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min；紫外检测波长设定为200nm～210nm。
2.根据权利要求1所述的液相色谱分析方法，其特征在于，所述提取方式是水浴超声。
3.根据权利要求2所述的液相色谱分析方法，其特征在于，水浴超声的时间是10-20min，优选15min。
4.根据权利要求1所述的液相色谱分析方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和磷酸二氢铵中的一种或两种，优选磷酸二氢钾与磷酸氢二钾混合溶液。
5.根据权利要求1所述的液相色谱分析方法，其特征在于，高效液相色谱法的柱温为30～35℃。
6.根据权利要求1所述的液相色谱分析方法，其特征在于，高效液相色谱法中的样品盘温度为30℃。
7.根据权利要求1所述的液相色谱分析方法，其特征在于，所述流动相A与流动相B的混合溶液pH值是3.00～4.20，优选3.90～4.20，更加优选4.00。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101504393A (zh) * 2008-11-14 2009-08-12 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 d-生物素及其杂质含量的HPLC测定方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101504393A (zh) * 2008-11-14 2009-08-12 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 d-生物素及其杂质含量的HPLC测定方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
任丹丹等: "高效液相色谱法同时测定食品中9种水溶性维生素", 《食品安全质量检测学报》 *
宋金春等: "HPLC测定注射用13种复合维生素中维生素H、叶酸及维生素B12含量", 《中国药学杂志》 *
徐硕等: "HPLC法测定复合维生素B片中的微量叶酸、维生素B_(12)和生物素", 《药物分析杂志》 *
杜碧莹等: "注射用水溶性维生素中生物素含量测定方法改进", 《临床合理用药杂志》 *

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