CN113080187A - 用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法 - Google Patents

用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法 Download PDF

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Abstract

用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法。本申请公开了一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物包括醇类、醇醚类以及表面活性剂，其中醇类为50‑90wt％，优选为60‑80wt％，醇醚类为5‑40wt％，优选为10‑20wt％，表面活性剂为0.1‑5wt％，优选为1‑3wt％。本申请还提供一种去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法。采用本申请所述的组合物处理生物组织，处理后的生物组织具有优异的抗钙化效果。

Description

用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和 细胞碎片的方法
技术领域
本申请涉及生物组织领域，且更为具体地涉及一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法。
背景技术
生物瓣膜是用于心脏疾病治疗的生物材料。当前生物瓣膜阀门主要原材料是心包，而限制生物心脏瓣膜耐久性的主要原因是心包易钙化造成阀门失效。心包钙化主要是因为心包磷脂、细胞及细胞碎屑残留、心包分子结构中暴露的氨基、羧基以及醛基等易于钙离子反应的钙化位点。另外阀门在多次的开关过程中出现损伤，导致官能团暴露，亦会造成钙化，但是目前对于去除心包的磷脂、细胞及细胞碎屑残留没有一种很好的方法。
发明内容
本申请目的是提供一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物及去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法，采用本申请所述的组合物处理生物组织，处理后的生物组织具有优异的抗钙化效果。
为实现上述目的，本申请采用如下技术方案。
1、一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，其特征在于，包括醇类、醇醚类以及表面活性剂，其中醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，醇醚类为5-40wt％，优选为10-20wt％，表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％。
2、根据项1所述组合物，其特征在于，由醇类、醇醚类、表面活性剂以及缓冲液组成，其中醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，醇醚类为 5-40wt％，优选为10-20wt％，表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％，缓冲液为余量。
3、根据项1或2所述的组合物，其特征在于，所述醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、二乙二醇或二丙二醇酯中的一种或两种以上，优选为乙醇或异丙醇。
4、根据项1或2所述的组合物，其特征在于，所述醇醚类选自乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚、乙二醇丁醚、二乙二醇甲醚、二乙二醇乙醚、二乙二醇丙醚、二乙二醇二乙醚、二乙二醇丁醚、丙二醇甲醚、丙二醇乙醚、二丙二醇甲醚、二丙二醇乙醚、二丙二醇丙醚或二丙二醇丁醚中的一种或两种以上，优选为丙二醇甲醚或乙二醇乙醚。
5、根据项1或2所述的组合物，其特征在于，所述表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基硫酸钠、脱氧胆汁酸钠、 EDTA、Triton X-100或聚山梨醇酯中的一种或两种以上，优选为脱氧胆汁酸钠或聚山梨醇酯。
6、根据项2所述的组合物，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液或 HEPES缓冲液。
7、一种去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将生物组织放入项1-6任一项所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理，得到经粗处理的生物组织；
将经粗处理的生物组织放入固定液中进行固定处理，得到固定后的生物组织；
将固定后的生物组织放入灭菌溶液中进行灭菌处理，得到去除磷脂和细胞碎片的生物组织。
8、根据项7所述的方法，其特征在于，将生物组织放入所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中浸泡并振荡处理，并且每平方厘米生物组织需要不低于10ml的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物进行处理。
9、根据项7所述的方法，其特征在于，所述生物组织为心包材料。
10、根据项7所述的方法，其特征在于，所述生物组织在用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理时的温度为20-50℃，优选为25-35℃，处理时间为1-48h，优选为18-36h。
11、根据项7所述的方法，其特征在于，所述经粗处理的生物组织在固定液中进行固定处理时的温度为20-50℃，优选为40-50℃，处理时间为1-14d，优选为2-6d。
12、根据项7所述的方法，其特征在于，所述固定液为碳化二亚胺或戊二醛，所述固定液的浓度为0.1-1wt％。
13、根据项7所述的方法，其特征在于，所述灭菌处理时的温度为 20-50℃，优选为35-45℃处理时间为1-48h，优选为18-36h。
14、根据项7所述的方法，其特征在于，所述灭菌溶液包含0.5-10wt％醛类，10-30wt％醇；
所述醛为甲醛或戊二醛一种或两种，所述的醇为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇以及丙三醇酯中的一种或两种以上。
15、根据项7所述的方法，其特征在于，所述去除磷脂和细胞碎片的生物组织放入封装溶液中进行存储，所述封装溶液包含0.1-1wt％戊二醛。
根据本申请所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，通过醇、醇醚以及表面活性剂相互配合，醇、醇醚和表面活性剂的目的均是用来增加该组合物对不同极性磷脂及细胞碎片的溶解性，从而将所述生物组织上的更多的易引起钙化的物质去除。磷脂由于包含非极性的烷基链和极性的磷酸基团，因此具有双亲性，由于烷基链长短和其中的基团不同，磷脂的双亲性存在显著差异。常见的磷脂酰胆碱具有很好的双亲性，可溶于甲醇和乙醇等醇类溶剂，然而神经鞘磷脂和卵磷脂的非极性较强，在醇类溶剂中的溶解性较差，因此需选择非极性更强的试剂进行溶解。此外磷脂作为细胞膜重要的组成部分，当溶液对磷脂有较好的溶解性时，可有助于实现细胞和细胞碎片的去除，因此在特定的比例下得到所述组合物具有良好的去除磷脂和细胞碎片的作用，使得所述生物组织具有良好的抗钙化作用。
具体实施方式
以下将对本申请做以详细说明。
本申请提供一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，包括醇类、醇醚类以及表面活性剂，其中醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，醇醚类为 5-40wt％，优选为10-20wt％，表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％。
本申请提供一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，由醇类、醇醚类、表面活性剂以及缓冲液组成，其中醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，醇醚类为5-40wt％，优选为10-20wt％，表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％，缓冲液为余量。
本申请所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，通过醇、醇醚以及表面活性剂的相互配合，醇、醇醚和表面活性剂的目的均是用来增加该组合物对不同极性磷脂及细胞碎片的溶解性，从而将所述生物组织上的更多的易引起钙化的物质去除。磷脂由于包含非极性的烷基链和极性的磷酸基团，因此具有双亲性，由于烷基链长短和其中的基团不同，磷脂的双亲性存在显著差异。常见的磷脂酰胆碱具有很好的双亲性，可溶于甲醇和乙醇等醇类溶剂，然而神经鞘磷脂和卵磷脂的非极性较强，在醇类溶剂中的溶解性较差，因此需选择非极性更强的试剂进行溶解。此外磷脂作为细胞膜重要的组成部分，当溶液对磷脂有较好的溶解性时，可有助于实现细胞和细胞碎片的去除，因此在特定的比例下得到所述组合物具有良好的去除磷脂和细胞碎片的作用，使得所述生物组织具有良好的抗钙化作用。
在本申请中，所述醇类的含量可以为50wt％、51wt％、52wt％、53wt％、 54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、60wt％、61wt％、62wt％、 63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、69wt％、70wt％、71wt％、 72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、78wt％、79wt％、80wt％、 81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、87wt％、88wt％以及89wt％、 90wt％中的一种。
所述醇醚类的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、 11wt％、12wt％、13wt％、14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、 20wt％、21wt％、22wt％、23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、 29wt％、30wt％、31wt％、32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、 38wt％、39wt％以及40wt％中的一种。
所述表面活性剂的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、 0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、 1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、 2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％、3.1wt％、 3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、3.9wt％、 4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、4.8wt％、 4.9wt％以及5wt％中的一种。
所述缓冲液为常规缓冲液，优选为PBS缓冲液或HEPES缓冲液。
在本申请中，所述醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、二乙二醇或二丙二醇酯中的一种或两种以上，优选为乙醇或异丙醇。
在本申请中，所述醇醚类选自乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚、乙二醇丁醚、二乙二醇甲醚、二乙二醇乙醚、二乙二醇丙醚、二乙二醇二乙醚、二乙二醇丁醚、丙二醇甲醚、丙二醇乙醚、二丙二醇甲醚、二丙二醇乙醚、二丙二醇丙醚或二丙二醇丁醚中的一种或两种以上，优选为丙二醇甲醚或乙二醇乙醚。
在本申请中，所述表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基硫酸钠、脱氧胆汁酸钠、EDTA、TritonX-100或聚山梨醇酯中的一种或两种以上，优选脱氧胆汁酸钠或聚山梨醇酯。
在本申请所述的组合物中，当醇类为乙醇时，所述醇醚为丙二醇甲醚，所述表面活性剂可以为脱氧胆汁酸钠，且所述乙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述丙二醇甲醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述脱氧胆汁酸钠的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、 0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、 1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、 2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、 3wt％、3.1wt％、3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、 3.9wt％、4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、 4.8wt％、4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为异丙醇时，所述醇醚为丙二醇甲醚，所述表面活性剂可以为脱氧胆汁酸钠，且所述异丙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述丙二醇甲醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述脱氧胆汁酸钠的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、 0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、 1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、 2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、 3wt％、3.1wt％、3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、 3.9wt％、4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、 4.8wt％、4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为乙醇时，所述醇醚为丙二醇甲醚，所述表面活性剂可以为脱氧胆汁酸钠，且所述乙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述丙二醇甲醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述脱氧胆汁酸钠的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、 0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、 1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、 3wt％、3.1wt％、3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、 3.9wt％、4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、 4.8wt％、4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为乙醇时，所述醇醚为丙二醇甲醚，所述表面活性剂可以为聚山梨醇酯，且所述乙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述丙二醇甲醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述聚山梨醇酯的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、 0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、 1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、 2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％、3.1wt％、 3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、3.9wt％、 4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、4.8wt％、 4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为乙醇时，所述醇醚为乙二醇乙醚，所述表面活性剂可以为聚山梨醇酯，且所述乙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述乙二醇乙醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述聚山梨醇酯的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、 0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、 1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、 2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％、3.1wt％、 3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、3.9wt％、 4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、4.8wt％、 4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为聚丙醇时，所述醇醚为乙二醇乙醚，所述表面活性剂可以为聚山梨醇酯，且所述聚丙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述乙二醇乙醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述聚山梨醇酯的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、 0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、 1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、 2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％、3.1wt％、 3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、3.9wt％、 4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、4.8wt％、 4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为聚丙醇时，所述醇醚为乙二醇乙醚，所述表面活性剂可以为脱氧胆汁酸钠，且所述聚丙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述乙二醇乙醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述脱氧胆汁酸钠的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、 0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、 1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、 2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、 3wt％、3.1wt％、3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、 3.9wt％、4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、 4.8wt％、4.9wt％以及5wt％中的一种。
在本申请所述的组合物中，当醇类为聚丙醇时，所述醇醚为丙二醇甲醚，所述表面活性剂可以为聚山梨醇酯，且所述聚丙醇的含量可以为50wt％、 51wt％、52wt％、53wt％、54wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、 60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、 69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、 78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、 87wt％、88wt％以及89wt％、90wt％中的一种，所述丙二醇甲醚的含量可以为5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、 14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、 23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、 32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％以及40wt％中的一种，所述聚山梨醇酯的含量可以为0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、 0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、 1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2wt％、2.1wt％、2.2wt％、 2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.7wt％、2.8wt％、2.9wt％、3wt％、3.1wt％、 3.2wt％、3.3wt％、3.4wt％、3.5wt％、3.6wt％、3.7wt％、3.8wt％、3.9wt％、 4wt％、4.1wt％、4.2wt％、4.3wt％、4.4wt％、4.5wt％、4.6wt％、4.7wt％、4.8wt％、4.9wt％以及5wt％中的一种。
本申请还提供一种去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法，包括如下步骤：
步骤一：将生物组织放入所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理，得到经粗处理的生物组织；
步骤二：将经粗处理的生物组织放入固定液中进行固定处理，得到固定后的生物组织；
步骤三：将固定后的生物组织放入灭菌溶液中进行灭菌处理，得到去除磷脂和细胞碎片的生物组织。
在本申请中，所述生物组织为心包材料，例如可以为猪心包、牛心包等。
在步骤一中，将生物组织放入所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中浸泡并振荡处理，并且以表面积每平方厘米生物组织需要不低于10ml的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物进行处理(由于所述生物组织的厚度通常低于0.5mm，所以可以忽略其厚度，采用表面积来进行计算处理液的含量)。所述生物组织在用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理时的温度为 20-50℃，优选为25-35℃；处理时间为1-48h，优选为18-36h。
通过所述组合物将生物组织中的磷脂和细胞碎片溶解，从而脱离所述生物组织。
在步骤二中，将经粗处理的生物组织放入所述的固定液中浸泡并振荡处理，并且每平方厘米生物组织需要不低于10ml的所述固定液进行处理。所述经粗处理的生物组织在固定液中进行固定处理时的温度为20-50℃，优选为40-50℃；处理时间为1-14d，优选为2-6d。
在所述固定液中进行固定处理时的温度可以为20℃、21℃、22℃、23℃、 24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、 35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、 46℃、47℃、48℃、49℃或50℃。
在所述固定液中进行固定处理的处理时间可以为1d、2d、3d、4d、5d、 6d、7d、8d、9d、10d、11d、12d、13d或14d。
所述固定液为碳化二亚胺或戊二醛，所述固定液浓度为0.1-1wt％，PBS 缓冲液或HEPES缓冲液为余量。
所述固定液可以增强组织的交联强度，保证力学性能。
在步骤三中，所述灭菌处理时的温度为20-50℃，优选为35-45℃，处理时间为1-48h，优选为18-36h。
将去除磷脂以及和细胞碎片的生物组织进行灭菌，以进行下一步的保存，避免所述生物组织被细菌破坏。
所述灭菌溶液包含0.5-10wt％醛类，10-30wt％醇，PBS缓冲液或HEPES 缓冲液为余量；
所述醛为甲醛或戊二醛一种或两种，所述的醇为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇以及丙三醇酯中的一种或两种以上。
在本申请中，所述去除磷脂和细胞碎片的生物组织放入封装溶液中进行存储，所述封装溶液包含0.1-1wt％戊二醛，PBS缓冲液或HEPES缓冲液为余量。
将所述生物组织进行抗钙化试验：通过本申请所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物处理生物组织，经过处理后的生物组织在大鼠皮下植入30 天，30天后测试生物组织中的钙离子含量，结果发现，当所述组合物中的醇类为60-80wt％，醇醚类为10-20wt％，表面活性剂为1-3wt％，并且固定化处理的温度为40-50℃时，所述生物组织中的钙离子含量较少，钙含量低于 1ug/mg，具有优异的抗钙化效果。
本申请的以下实施例仅用来说明实现本申请的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本申请的限制。其他的任何在未背离本申请的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本申请的保护范围之内。
实施例
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
将6*6cm猪心包放入360ml所述用于去除磷脂和细胞碎片的组合物(所述组合物为70wt％乙醇、10wt％丙二醇甲醚，2wt％聚山梨醇酯80，HEPES 缓冲液为余量)中处理，处理温度为40℃，处理时间为24h后得到经粗处理的生物组织；将经粗处理的生物组织放入40℃的360ml固定液(所述固定液为1wt％戊二醛，PBS缓冲液为余量)中固定7天，得到固定后的生物组织。将固定后的生物组织放入360ml灭菌溶液(所述灭菌溶液为2wt％戊二醛、3wt甲醛、15wt％异丙醇，PBS缓冲液为余量)中进行灭菌，灭菌温度为50℃，灭菌时间为24h，得到所述去除磷脂和细胞碎片的生物组织，将所述生物组织进行抗钙化试验(抗钙化试验具体操作步骤为：将经过处理的心包进行大鼠皮下植入30天，30天后测试心包钙离子含量，评估抗钙化性能)，具体参数如表1。
实施例2-实施例9以及对比例1-对比例2与实施例1的不同之处在于用于去除磷脂和细胞碎片的组合物的配方以及处理参数不同，详情见表1。
实施例10与实施例5的不同之处在于，醇醚的种类不同，详情见表1。
实施例11与实施例4的不同之处在于，醇的种类不同，详情见表1。
实施例12与实施例6的不同之处在于，表面活性剂的种类不同，详情见表1。
实施例13-实施例15与实施例6的不同之处在于，步骤二的处理温度不同，详情见表1。
对比例3与实施例4的不同之处在于，对比例3中没有醇类，详情见表 1。
对比例4与实施例5的不同之处在于，对比例3中没有醇醚类，详情见表1。
对比例5与实施例6的不同之处在于，对比例3中没有表面活性剂，详情见表1。
表1为各实施例以及对比例的参数
Figure BDA0003002150140000121
Figure BDA0003002150140000131
小结：相比于不加醇醚类试剂，在去除磷脂和细胞碎片溶液中加入醇醚类物质后，大鼠皮下植入30天心包整体的钙含量均较低，而且当醇、醇醚和表面活性剂的配比合适时，植入30天的钙含量低于1ug/mg，表现出优异的抗钙化效果。

Claims (10)

1.一种用于去除磷脂和细胞碎片的组合物，其特征在于，包括醇类、醇醚类以及表面活性剂，其中，
醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，
醇醚类为5-40wt％，优选为10-20wt％，
表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，由醇类、醇醚类、表面活性剂以及缓冲液组成，其中醇类为50-90wt％，优选为60-80wt％，醇醚类为5-40wt％，优选为10-20wt％，表面活性剂为0.1-5wt％，优选为1-3wt％，缓冲液为余量。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、二乙二醇或二丙二醇酯中的一种或两种以上，优选为乙醇或异丙醇。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述醇醚类选自乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚、乙二醇丁醚、二乙二醇甲醚、二乙二醇乙醚、二乙二醇丙醚、二乙二醇二乙醚、二乙二醇丁醚、丙二醇甲醚、丙二醇乙醚、二丙二醇甲醚、二丙二醇乙醚、二丙二醇丙醚或二丙二醇丁醚中的一种或两种以上，优选为丙二醇甲醚或乙二醇乙醚。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基硫酸钠、脱氧胆汁酸钠、EDTA、Triton X-100或聚山梨醇酯中的一种或两种以上，优选为脱氧胆汁酸钠或聚山梨醇酯。
6.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液或HEPES缓冲液。
7.一种去除生物组织上磷脂和细胞碎片的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将生物组织放入权利要求1-6任一项所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理，得到经粗处理的生物组织；
将经粗处理的生物组织放入固定液中进行固定处理，得到固定后的生物组织；
将固定后的生物组织放入灭菌溶液中进行灭菌处理，得到去除磷脂和细胞碎片的生物组织。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将生物组织放入所述的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中浸泡并振荡处理，并且每平方厘米生物组织需要不低于10ml的用于去除磷脂和细胞碎片的组合物进行处理。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述生物组织为心包材料。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述生物组织在用于去除磷脂和细胞碎片的组合物中进行处理时的温度为20-50℃，优选为25-35℃，处理时间为1-48h，优选为18-36h。
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