CN113025508A - 一种布拉迪酵母及其在降解呕吐毒素方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物领域，具体涉及一种布拉迪酵母及其在降解呕吐毒素方面的应用。本发明的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6，保藏编号为CGMCC NO.18938，其可以高效降解霉菌毒素，对呕吐毒素的降解率可达95.002％，同时，其在促进营养物质消化吸收，降低腹泻率，提高饲料转化效率，促进生长等方面也有积极作用。此外，布拉迪酵母MA.Y6还具有耐高温、耐酸、耐胆盐等特性，可作为益生菌而广泛应用于饲料、食品、药品及相关添加剂中。

Description

一种布拉迪酵母及其在降解呕吐毒素方面的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一种布拉迪酵母及其在降解呕吐毒素方面的应用。
背景技术
酵母菌作为应用时间较长的益生菌具有稳定的繁殖性能，用于生产发酵饲料及酵母源生物饲料都具有很好的应用前景。酵母菌是单细胞真菌，具有典型的真核细胞结构，在自然界广泛存在。酵母细胞中蛋白质占细胞干重的32％～75％，糖类物质占细胞干重的27％～63％。酵母细胞中还富含维生素、多种消化酶和未知的生长因子。饲料酵母含有动物生长发育所必需的各种营养物质，其中蛋白质含有20多种氨基酸，含有8种生命必需氨基酸，含量与鱼粉很接近；同时含有极为丰富的B族维生素，含量比鱼粉、肉粉高，因此饲料酵母可作为优质蛋白质源部分或全部替代饲料中的鱼粉。利用酵母菌制作的发酵饲料，含有更多的活性益生菌菌体、各种酶、各级代谢产物、维生素、活性小肽、氨基酸、抑菌物质等，改善了动物饲料的品质和适口性，消化吸收率明显提高，具有维持动物肠道菌群平衡、促进动物生长、提高动物免疫力等作用。
呕吐毒素，又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇，是一种主要由禾谷镰刀菌、粉红镰刀菌和拟枝镰刀菌等镰刀菌产生的真菌毒素。呕吐毒素在污染的小麦、玉米、大豆等粮食中广泛存在，是食品和饲料中较常见的真菌毒素之一。该毒素能通过影响免疫细胞增殖和免疫细胞因子生成从而降低机体的免疫力；还可抑制mRNA翻译和调节蛋白激酶活性，从而加速细胞凋亡，严重危害人和畜禽健康。呕吐毒素被国际癌症研究机构列为3类致癌物。因此，采取有效措去除小麦、玉米等粮食和饲料中的呕吐毒素，保障食品和饲料安全，对人和畜禽健康具有重要意义。
目前降解饲料中霉菌毒素的方法主要包括3种，物理方法、化学方法和生物方法，物理方法主要是紫外线处理、浸泡以及吸附等，该方法存在大规模应用困难、降解效率低等问题，化学方法主要是使用酸、碱、氧化剂等化学试剂去除霉菌毒素，该方法会破坏饲料本身的营养物质结构，生物方法主要是使用微生物来实现脱毒的目标，目前市场上的菌种针对呕吐毒素的降解效率均较低，降解效率达到90％以上的菌种极为少见。
发明内容
本发明的目的是提供一种耐高温、耐酸、耐胆盐且具有降解霉菌毒素作用的饲用布拉迪酵母及其应用。
为了实现本发明的目的，本发明进行了大量的采样、筛选和试验，从北京市某肉牛实验基地的肉牛瘤胃液中筛选得到一种布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)，命名为MA.Y6。经18S RNA基因序列分析，该菌株MA.Y6为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)。该菌株已于2019年11月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)，保藏号为CGMCC No.18938。
布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6的微生物学特性为：细胞形态为椭圆形，长度约15-20μm，宽度约2-4μm；单菌落大小为6-7mm，颜色呈乳白色，不透明，菌落表面平滑，湿润，边缘规则。菌体在60℃处理20min后存活率可达55％以上，80℃处理20min后存活率仍达40％以上，可在pH值2.0以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强。且具极强的降解霉菌毒素的能力，其对呕吐毒素的降解率达到95.02％。
基于上述发现，第一方面，本发明首先提供了布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)MA.Y6，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18938。
本发明进一步提供了一种菌剂，其含有所述的布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)MA.Y6。
本发明进一步提供一种霉菌毒素抑制剂，其含有所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6的发酵物或发酵萃取物。
第二方面，本发明提供了所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或所述的菌剂或所述的霉菌毒素抑制剂在降解霉菌毒素中的应用。
优选地，所述霉菌毒素为呕吐毒素。
比如，在一些优选的实施方式中，本发明中的布拉迪酵母MA.Y6在生产、保存或运输等环节中降低食品或饲料中的霉菌毒素污染。
本发明具体实施方式部分验证了布拉迪酵母MA.Y6对呕吐毒素的降解率可达95.002％。本领域技术人员能够基于本发明提供的布拉迪酵母MA.Y6，用于验证其对其他霉菌毒素的降解效果，这不超出本领域技术人员的基本能力范围。
第三方面，本发明提供了所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或所述的菌剂或所述的霉菌毒素抑制剂在制备饲料添加剂、动物饲料、食品添加剂、食品或药物中的应用。
本发明通过体外法鉴定了布拉迪酵母MA.Y6的益生效果，结果表明，布拉迪酵母MA.Y6能够耐酸、酸胆盐，能抵抗胃肠道的内环境，具备益生菌的潜力。
作为优选，所述饲料添加剂、动物饲料、食品添加剂、食品或药物用于以下至少一方面：
1)降解霉菌毒素；优选所述霉菌毒素为呕吐毒素；
2)预防或治疗腹泻。
优选地，所述饲料添加剂、动物饲料或药物用于以下至少一方面：
(1)增加动物采食量；
(2)提高饲料转化率；
(3)促进动物生长；
(4)提高动物体重。
进一步的，本发明还提供一种饲料添加剂或动物饲料，其含有所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或所述的菌剂或所述的霉菌毒素抑制剂。
作为优选方案，所述饲料添加剂中含有的布拉迪酵母MA.Y6活菌数为3×108CFU/g～3×1012CFU/g，更优选为3×109CFU/g～3×1011CFU/g。
作为优选方案，所述动物饲料中含有的布拉迪酵母MA.Y6的活菌数为3×107CFU/kg～3×1011CFU/kg，更优选为3×108CFU/kg～3×109CFU/kg。
进一步的，本发明还提供一种食品添加剂或食品，其含有所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或所述的菌剂或所述的霉菌毒素抑制剂。
进一步的，本发明还提供一种药物，其含有所述的布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)MA.Y6或所述的菌剂或所述的霉菌毒素抑制剂。
基于上述技术方案，本发明的有益效果如下：
(1)本发明所提供的布拉迪酵母MA.Y6可以高效降解霉菌毒素，对呕吐毒素的降解率可达95.002％。同时，由于其出芽生殖的方式对干燥、高温、高压、氧化等不良环境抵抗力很强，具有耐高温、耐酸、耐胆盐等特性，这种稳定性增加了其作为益生菌的潜力。
(2)本发明所提供的布拉迪酵母MA.Y6不仅可以降低腹泻率，提高饲料利用率，促进饲料中营养物质的消化吸收；而且还可以增强动物的免疫功能，增加采食量，提高日增重，降低料肉比。同时，其还具有无污染，无残留，生物环保等特点，可广泛应用于饲料、食品、药品及相关添加剂中。且布拉迪酵母本身是一种天然微生态制剂，有助于调控畜禽肠道微生物菌群结构的稳态，因此本发明提供的布拉迪酵母具有极高的生产价值。
附图说明
图1为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6 CGMCC No.18938的菌落形态图。
图2为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6 CGMCC No.18938在光学显微镜下的美蓝染色图。
图3为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6 CGMCC No.18938的生长曲线。
图4为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6 CGMCC No.18938的耐酸性检测结果。
图5为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6 CGMCC No.18938的耐胆盐检测结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中的YPD培养基的配置方法如下：蛋白胨20g，酵母提取物10g，溶解于900ml蒸馏水，葡萄糖20g，溶解于100ml蒸馏水，121℃，20min高压灭菌后混合。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6的分离与鉴定
一、菌株MA.Y6的鉴定
1.菌株的分离培养
取1ml北京市某肉牛实验基地的肉牛瘤胃液样品装入有9ml生理盐水的试管中，漩涡器震荡混匀，即为1：10稀释液，再取稀释液进行10倍递增稀释，然后选择3个适宜梯度的稀释液各1ml涂布于YPD培养基上。37℃培养48-72小时，观察并记录菌落形态，挑取长势良好的单菌落，进行划线分离纯化。
2.菌株的美蓝染色
在载玻片上滴一滴经灭菌的蒸馏水，挑取一个单菌落(菌落形态图见图1)在水中溶解，加入美蓝染液1滴，盖上盖玻片；在普通光学显微镜上观察，若菌体呈透明样则为活菌，菌体呈蓝色则判定菌体已经死亡，半小时后再次观察，结果见图2(图2中深色为蓝色)。
通过步骤1-2的分离筛选，得到一株通过出芽生殖的方式进行繁殖的菌株，将该菌株编号为MA.Y6。
二、菌株MA.Y6的鉴定
1.形态学鉴定
对处于对数生长期且菌落大小稳定的菌株Y6进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、菌落表面状态及菌落边缘状态。所得单菌落大小为6-7mm，颜色呈乳白色，不透明，菌落表面平滑，湿润，边缘规则。
其次对处于对数生长期的菌株Y6进行染色，采用光学显微镜观察菌体形态。分离并筛选到的菌株Y6，革兰氏染色呈紫色，细胞形态为椭圆形，长度约15-20μm，宽度约2-4μm。
2.18S RNA序列同源性分析
菌株总DNA的提取采用天根生化科技有限公司的基因组DNA提取试剂盒提取。提取后的样品送到上海美吉生物医药科技有限公司进行测序。将测定结果在GenBank数据库中进行BLAST同源性比对，确定菌株类别为布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)。
上述实验结果表明，该菌株为布拉迪酵母。该菌株已于2019年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)，保藏号为CGMCC No.18938。
实施例2布拉迪酵母Y6的抗逆性检测
1.耐热性检测：将布拉迪酵母Y6(CGMCC No.18938)菌液至于水浴锅内20分钟，分别用60℃、80℃、100℃处理，每个处理3个重复，处理结束后采用倾注法测定其活菌数。
布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938在60℃处理20分钟后，存活率可达55％，80℃处理20分钟后可达40％以上，100℃处理20分钟后无活菌。
2.耐酸性检测：将布拉迪酵母Y6分别接种到pH值为2.0、3.0、4.0、5.0的YPD培养基中，分别在1h、2h、3h、4h采用平板倾注法测定其活菌数。
布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938能够在pH为2的环境中正常生长，结果见图4。当pH为2、3、4、5时，在接种活菌4小时后，活菌数量与接种时相比有所上升，说明布拉迪酵母Y6具有在pH最低为2的环境下繁殖的能力，但相对pH正常的环境来说繁殖速度有略微下降，该菌种对酸性环境有一定的耐受能力。结果提示布拉迪酵母Y6可以耐受胃酸的影响。
3.耐胆盐检测：将活化好的布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938用无菌生理盐水做倍比稀释，选取合适的稀释梯度并吸取1ml稀释液放于无菌培养皿里，做6个重复，然后用含不同浓度牛胆酸钠(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％)的YPD培养基倾注平板，37℃培养4小时，每隔1小时菌落计数，同时用不含牛胆酸钠的YPD培养基倾注平板，37℃培养48小时，菌落计数，作为对照组，见图5，结果显示不同胆盐浓度下的活菌数随着时间的延长普遍呈下降趋势。0.2％的胆盐作用对布拉迪酵母Y6的影响比较微弱，几乎不影响其正常生长。在0.3％和0.4％的胆盐作用4小时后，活菌数平均仍然可以保持在8.0lg cfu/ml，在0.4％的胆盐作用4小时后，活菌数平均为7.38lg cfu/ml，半数以上的布拉迪酵母Y6在0.4％的胆盐下存活，说明布拉迪酵母Y6的耐胆盐能力较强。
实施例3布拉迪酵母Y6的生长曲线测定
生长曲线代表了菌株在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。将布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938按10％(v/v)的接种量，接种到YPD培养基中，37℃培养40小时，以不加菌液的YPD培养基作为空白对照，每隔2-6小时测定OD600值，从而计算活菌数。实验设三次重复，结果取其平均值，记录数据并绘制生长曲线。如图3所示，在0-22小时，布拉迪酵母Y6处于对数生长阶段，繁殖速率较高。在22-30小时布拉迪酵母Y6数目趋于稳定。30小时以后进入生长率下降阶段。
实施例4布拉迪酵母Y6对霉菌毒素的降解效果实验
取发霉饲料若干，粉碎混匀，并用无霉饲料与其混合将其呕吐毒素的浓度调制1000μg/mg，将活化好的布拉迪酵母菌液离心，弃上清取活菌体并用无菌蒸馏水将其浓度调制1012CFU/ml。取呕吐毒素浓度为1000μg/mg的饲料100g，按5％比例将5ml 1012CFU/ml布拉迪酵母均匀喷洒于饲料上，置于37℃恒温箱，72h后测定其呕吐毒素的浓度为49.98μg/mg，即布拉迪酵母Y6对呕吐毒素的降解率为95.002％。降解率的计算方式为(霉菌毒素添加量-霉菌毒素残留量)/霉菌毒素添加量×100％。
实施例5布拉迪酵母Y6制剂的制备
1.发酵培养基配方：甘蔗糖蜜15％、硫酸铵1％、无水氯化钙0.008％、磷酸二氢钾0.15％、酵母膏0.16％、硫酸镁0.15％、消泡剂0.05％，加水充分溶解，控制pH在6.8制成发酵培养基。
2.121℃高温蒸汽消毒30min。
3.待发酵培养基降温至37℃时，接种菌龄24小时的菌液5％(v/v)。
4.在37℃条件下，保持转速200-650rpm搅拌，控制溶氧DO不低于20，发酵培养,30小时，放罐，得到布拉迪酵母的活菌数大于3.0×1010cfu/ml，出芽率达95％以上。
5.将菌泥放入高压均质机进行细胞壁破碎，然后放入低温真空干燥箱内干燥，过筛，收集产品，得到布拉迪酵母制剂。
实施例6布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938制剂的安全性评价
本实施例以小鼠作为实验动物，采用灌胃试验的方法，评价布拉迪酵母的安全性，具体方法如下：
1.实施例5方法制得的布拉迪酵母Y6菌剂的冻干粉，经平板计数测定，其布拉迪酵母Y6菌数为3×109cfu/g。
2.选取6周龄左右的小鼠72只，随机分为4组(A组为对照组灌服无菌生理盐水，B组为高剂量组按照3×109cfu/只的量灌服菌液，C组为中剂量组按照3×108cfu/只的量灌服菌液，D组为低剂量组按照3×107cfu/只的量灌服菌液)，每组3个重复，每个重复6只鼠。
3.每天上午九点灌胃一次，连续灌服21天。实验鼠房控制温度湿度恒定，自然光照，小鼠自由采食、饮水，每7天清扫鼠笼一次。实验过程中，每天观察并记录小鼠的状态，存活情况，有无临床异常症状等。检测指标如下：
1.于实验结束当天采用心脏取血的方式，取得实验小鼠血液样品，经静止离心后获得血清，用于检测血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等血液生化指标。
2.取完整的心、肝、脾、肾(双侧)称湿重，分别计算心脏指数＝(心脏湿重/体重)×100％、肝脏指数＝(肝脏湿重/体重)×100％、脾脏指数＝(脾脏湿重/体重)×100％、肾脏指数＝(肾脏湿重/体重)×100％。
3.取各组实验鼠的空肠、回肠、结肠、肝脏、脾脏、肺组织于4％的多聚甲醛中固定，经脱水、包埋等步骤制成切片，通过苏木精伊红染色的方法观察形态的变化。
结果见下表1-2。
表1不同处理组小鼠存活情况
A组 B组 C组 D组
7天 存活 存活 存活 存活
14天 存活 存活 存活 存活
21天 存活 存活 存活 存活
从表1可以看出，使用布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938给小鼠灌胃21天后，实验各处理组小鼠均存活，说明上述布拉迪酵母对动物安全。
表2不同处理组小鼠的脏器系数
A组 B组 C组 D组
心脏 0.52 0.57 0.54 0.59
肝脏 5.18 5.20 5.34 5.26
脾脏 0.39 0.41 0.45 0.43
肾脏 1.28 1.27 1.32 1.29
从表2可以看出，处理组小鼠的脏器指数与对照组相比没有明显变化，说明上述布拉迪酵母没有造成小鼠各脏器异常。
利用生化分析仪检测小鼠血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等，结果均显示正常，说明本发明实施例5提供的布拉迪酵母制剂对小鼠的生理指标不构成影响。经组织切片显示的组织形态正常，说明本发明实施例5提供的布拉迪姆酵母制剂对小鼠的内脏组织无影响。
实施例7布拉迪酵母Y6 CGMCC No.18938制剂的应用
本实验选取28日龄杜长大三元杂交断奶仔猪72头，实验期14天，按照随机区组设计分为2个组，每组6个重复，每个重复6头猪。A组为对照组(基础日粮组)，B组为处理组(基础日粮中添加500g/t的实施例5制得的布拉迪酵母制剂)。
试验期间仔猪饲养在全封闭式保育猪舍内，温度控制在25-27℃，自由采食、饮水。基础日粮中不含任何抗生素，仔猪免疫按照常规免疫程序进行。
测定指标：各处理组断奶仔猪的生产性能，具体包括以下指标：
1.每天记录仔猪的采食量，试验结束后计算平均日采食量；
2.在试验开始和结束的当天记录仔猪体重，计算平均日增重；
3.通过a、b的试验结果计算料肉比，其计算方式为平均日采食量/平均日增重。
4.试验期间每天早上10:00观察并记录仔猪的粪便状况，计算断奶仔猪腹泻率，腹泻率(％)＝(腹泻头数×腹泻天数)/(猪只数×试验天数)×100％。
结果见下表3。
表3
平均日采食量(kg) 平均日增重(kg) 料肉比 腹泻率(％)
A组 0.523 0.299 1.76 11.64
B组 0.572 0.364 1.56 9.67
从表3可以看出，处理组仔猪平均日采食量和平均日增重都显著高于对照组(P<0.05)，料肉比显著低于对照组(P<0.05)，说明添加布拉迪酵母制剂的饲料效益更好。饲料中添加布拉迪酵母制剂的仔猪腹泻率显著降低(P<0.05)，说明本发明的菌剂具有降低断奶仔猪腹泻率的作用。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18938。
2.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)MA.Y6。
3.一种霉菌毒素抑制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6的发酵物或发酵萃取物。
4.权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的霉菌毒素抑制剂在降解霉菌毒素中的应用；优选所述霉菌毒素为呕吐毒素。
5.权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的霉菌毒素抑制剂在制备饲料添加剂、动物饲料、食品添加剂、食品或药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述饲料添加剂、动物饲料、食品添加剂、食品或药物用于以下至少一方面：
1)降解霉菌毒素；优选所述霉菌毒素为呕吐毒素；
2)预防或治疗腹泻。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述饲料添加剂、动物饲料或药物用于以下至少一方面：
(1)增加动物采食量；
(2)提高饲料转化率；
(3)促进动物生长；
(4)提高动物体重。
8.一种饲料添加剂或动物饲料，其特征在于，含有权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的霉菌毒素抑制剂。
9.一种食品添加剂或食品，其特征在于，含有权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)MA.Y6或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的霉菌毒素抑制剂。
10.一种药物，其特征在于，含有权利要求1所述的布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)MA.Y6或权利要求2所述的菌剂或权利要求3所述的霉菌毒素抑制剂。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104388325A (zh) * 2014-12-08 2015-03-04 华中农业大学 一株饲用布拉氏酵母及其应用
CN104431375A (zh) * 2014-12-31 2015-03-25 湖北泱盛生物科技有限公司 霉菌毒素吸附剂及制备方法
CN104774776A (zh) * 2015-04-23 2015-07-15 魏永刚 一株耐高温高湿的布拉迪酵母菌及其应用
CN107988089A (zh) * 2017-11-09 2018-05-04 广东海纳川生物科技股份有限公司 一种布拉迪酵母制剂的制备方法及布拉迪酵母制剂
CN108893416A (zh) * 2018-06-01 2018-11-27 河南广安生物科技股份有限公司 一种降解呕吐毒素的酵母菌及其应用
KR20190076691A (ko) * 2017-12-22 2019-07-02 건국대학교 산학협력단 사카라미세스 보울라디 (Saccharomyces boulardii)를 포함하는 고온 스트레스를 저감하기 위한 사료 첨가제
US20210015879A1 (en) * 2019-07-19 2021-01-21 National Kaohsiung University Of Science And Technology Method for preserving probiotic composition and use thereof

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104388325A (zh) * 2014-12-08 2015-03-04 华中农业大学 一株饲用布拉氏酵母及其应用
CN104431375A (zh) * 2014-12-31 2015-03-25 湖北泱盛生物科技有限公司 霉菌毒素吸附剂及制备方法
CN104774776A (zh) * 2015-04-23 2015-07-15 魏永刚 一株耐高温高湿的布拉迪酵母菌及其应用
CN107988089A (zh) * 2017-11-09 2018-05-04 广东海纳川生物科技股份有限公司 一种布拉迪酵母制剂的制备方法及布拉迪酵母制剂
KR20190076691A (ko) * 2017-12-22 2019-07-02 건국대학교 산학협력단 사카라미세스 보울라디 (Saccharomyces boulardii)를 포함하는 고온 스트레스를 저감하기 위한 사료 첨가제
CN108893416A (zh) * 2018-06-01 2018-11-27 河南广安生物科技股份有限公司 一种降解呕吐毒素的酵母菌及其应用
US20210015879A1 (en) * 2019-07-19 2021-01-21 National Kaohsiung University Of Science And Technology Method for preserving probiotic composition and use thereof

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
卢奇成等: "布拉迪酵母菌的生物学功能、作用机制及其应用", 《中国畜牧兽医》 *
孙红梅等: "三种潜在饲料益生菌耐受性及拮抗病原菌研究", 《生物技术通报》 *
楚杰等: "布拉酵母菌的生物学作用及防治疾病应用研究进展", 《药物生物技术》 *
聂琴等: "酵母源生物饲料的菌种与功能", 《中国饲料》 *
肖永友等: "布拉氏酵母菌特性及培养条件的研究", 《饲料研究》 *
胡小媛等: "布拉酵母抗腹泻作用机制研究进展", 《中国饲料》 *

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