CN111019858B - 一种抑制细菌生物膜形成的饲用地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抑制细菌生物膜形成的饲用地衣芽孢杆菌及其应用，本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为RM17，其保藏编号为CGMCC NO.16730。本发明的地衣芽孢杆菌RM17为革兰氏染色阳性菌，其对细菌生物膜的形成具有抑制能力，同时耐80℃的高温、可在pH值2.0(含)以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强，将地衣芽孢杆菌RM17制成菌剂后用于饲喂动物效果安全可靠，促进营养物质消化吸收，降低腹泻率，提高饲料转化效率，促进生长方面有积极作用。

Description

一种抑制细菌生物膜形成的饲用地衣芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物学领域，具体地说，涉及一种具有抑制细菌生物膜形成能力，耐高温、耐酸、耐胆盐的饲用地衣芽孢杆菌及其应用。
背景技术
近年来，随着我国养猪也规模扩大及养殖密度的增加，仔猪在断奶后，会被合群并栏到保育舍中，其在进行相互咬架的过程中，很容易导致其头部皮肤的损伤等，进而发生金黄色葡萄球菌感染，给我国养猪业造成了巨大的损失。金黄色葡萄球菌作为一种条件性致病菌，在自然界中广泛存在，但导致动物源性金黄色葡萄球菌能够再生产上造成巨大危害的相关原因之一就是细菌生物膜的形成。
细菌生物膜是指细菌黏附于物体接触表面，被其分泌的多糖、纤维蛋白、脂蛋白等包裹相互黏连，形成的有组织的大量细菌膜样物。细菌生物膜难以清除，它是细菌适应自然环境有利于生存的一种生长模式，它可以帮助其抵抗恶劣环境，如抗生素的合成、过碱或过酸环境、被宿主免疫细胞吞噬等。能形成细菌生物膜的细菌无论在形态结构、生理生化特性、致病性以及对环境因子的敏感性等方面都与浮游细菌有明显区别，尤其对抗生素和宿主免疫系统具有很强抵抗力，据报道其对抗生素的抵抗能力是浮游细菌的数百倍甚至上千倍。生物膜状态下的细菌对不利条件如干燥、极端温度、抗菌药物、消毒剂以及宿主免疫的抵抗力均明显增强。在细菌感染的治疗受到限制的情况下，寻找新的抗病原微生物方法迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制细菌生物膜形成能力，耐高温、耐酸、耐胆盐的饲用地衣芽孢杆菌及其应用。
为了实现本发明的目的，本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是从奶牛瘤胃液中筛选并经过紫外光诱变得到，命名为RM 17。经16S RNA基因序列分析，该菌株RM17为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。该菌株已于2018年11月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，保藏号为CGMCC No.16730。
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17的微生物学特性为：革兰氏阳性菌，细胞形态为杆状，直径不超过1μm，具有芽孢且芽孢不膨大；单菌落大小为12-14mm，颜色呈乳白色，不透明，菌落表面褶皱，边缘不规则。菌体在80℃处理20min后存活率可达60％以上，可在pH值2.0(含)以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强。
地衣芽孢杆菌RM17的发酵产物也属于本发明的保护范围。
本发明提供含有该地衣芽孢杆菌RM17的菌剂。
本发明还提供一种含有该地衣芽孢杆菌RM17的动物饲料添加剂。该饲料添加剂含有的地衣芽孢杆菌RM17活菌数为1×108CFU/g～1×1012CFU/g；优选地，含有的地衣芽孢杆菌RM17饲料添加剂的活菌数为1×109CFU/g～1×1010CFU/g。
本发明还提供一种含有该地衣芽孢杆菌RM17的动物饲料。其中，所述动物饲料中地衣芽孢杆菌RM17的活菌数为1×107CFU/kg～1×109CFU/kg，优选1×107CFU/kg～1×108CFU/kg。
本发明通过体外法鉴定了地衣芽孢杆菌RM17的益生效果，结果表明，地衣芽孢杆菌RM17能够耐酸、酸胆盐，能抵抗胃肠道的内环境，具备益生菌的潜力。
本发明还发现地衣芽孢杆菌RM17具有抑制细菌生物膜形成的能力，因此本发明提供了含有地衣芽孢杆菌RM17的抑制金黄色葡萄球菌及大肠杆菌K88生物膜形成的药物，以及提供了地衣芽孢杆菌RM17在抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88生物膜形成中的应用。本发明实施例中，验证了地衣芽孢杆菌RM17对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88生物膜形成的抑制能力，地衣芽孢杆菌RM17能够使金黄色葡萄球菌和大肠杆菌K88生物膜的粘附特性从中等粘附性变成弱粘附性从而抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌K88生物膜的形成。本领域技术人员能够基于本发明提供的地衣芽孢杆菌RM17，用于验证其对细菌生物膜的降解效果，这不超出本领域技术人员的基本能力范围，因此地衣芽孢杆菌RM17具有抑制细菌生物膜形成并用于制备抑菌药物、以及在降低食品或饲料中细菌污染中的应用均属于本发明的保护范围。
本发明提供了含有所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17的抗菌药物。
本发明提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备抗金黄色葡萄球菌、或大肠杆菌K88黏附的药物中的应用。
本发明进一步提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在抑制细菌生物膜形成中的应用。优选地，所述的细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88。
本发明提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备饲料添加剂中的应用。
本发明提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在提高饲料转化率中的应用。
本发明提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在促进动物生长或提高动物体重方面的应用。
本发明涉及的饲用地衣芽孢杆菌RM17对细菌生物膜的形成具有抑制能力，能抑制包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88在内的常见致病菌；同时耐80℃的高温、可在pH值2.0(含)以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强，由于本发明菌株对干燥、高温、高压、氧化等不良环境抵抗力很强，这种稳定性增加了它作为益生菌的潜力。本发明进一步验证了地衣芽孢杆菌RM17在断奶仔猪饲料添加中的应用效果，发现该菌株具有提高断奶仔猪饲料转化率的作用。表明地衣芽孢杆菌RM17可作为一种新型的益生菌添加剂，广泛应用于饲料中。本发明筛选得到的地衣芽孢杆菌RM17具有提高饲料利用率，促进饲料中营养物质的消化吸收；抑制肠道病原菌生物膜形成，增强动物的免疫功能，提高日增重，降低料肉比；无污染，无残留，生物环保等特点，在促进动物生长和提高动物体重方面具有显著的效果。
附图说明
图1为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCC No.16730的菌落形态图。
图2为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCC No.16730的革兰氏染色图。
图3为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCC No.16730的耐酸性检测结果。
图4为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCC No.16730的耐胆盐检测结果。
图5为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCC No.16730的生长曲线。
图6微孔板结晶紫染色法证明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17CGMCC No.16730抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成实验的结果图。
图7分光光度计法统计地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCCNo.16730抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的效率。
图8微孔板结晶紫染色法证明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17CGMCC No.16730抑制大肠杆菌K88生物膜形成实验的结果图。
图9分光光度计法统计地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17 CGMCCNo.16730抑制大肠杆菌K88生物膜形成的效率。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中所使用的材料、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所使用的培养基如无特殊说明配方如下：LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，用蒸馏水定容至1L，用5mol/L的氢氧化钠将pH调至7.0。
实施例1地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17的分离与鉴定
1.菌株的分离培养
取10ml奶牛瘤胃液样品，过滤，取滤液1ml装入有9ml生理盐水的试管中，漩涡器震荡混匀，即为1：10稀释液，再取稀释液进行10倍递增稀释，然后选择3个适宜梯度的稀释液各1ml涂布于LB培养基上。37℃培养48-72小时，观察并记录菌落形态，挑取长势良好的单菌落，进行划线分离纯化。
2.菌株的紫外诱变与筛选
将灭菌后的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后取步骤1所得的菌悬液涂布于平板上，每个培养皿控制菌落在50个左右，培养12小时后，距离紫外灯20cm，诱变30s。
挑取诱变后的菌株，接种于LB液体培养基中，37℃培养24小时，然后取适量的菌悬液涂布于LB平板上，在37℃恒温培养箱中培养至24小时，选取长势良好的菌落，进行下一步革兰氏染色。
3.菌株的革兰氏染色
在载玻片上滴一滴经灭菌的蒸馏水，挑取一个长势良好的单菌落(菌落形态图见图1)在水中溶解，经刮片后，在酒精灯上烘干固定。滴加结晶紫染色液，染2min，水洗，自然晾干；滴加碘液媒染2min，水洗，自然晾干；滴加碱性品红乙醇溶液50S，水洗，自然晾干；在普通光学显微镜上观察，若菌体呈紫色为阳性，菌体呈红色为阴性，结果见图2。选取革兰氏阳性杆菌进行下一步实验。
4.菌株的芽孢染色
在载玻片上滴一滴经灭菌的蒸馏水，挑取一个单菌落在水中溶解，经刮片后，在酒精灯上烘干固定。滴加5％孔雀石绿溶液3-5滴，在酒精灯上加热3-5min，注意不能使液体沸腾或者干枯，水洗，自然晾干；滴加蕃红溶液染色2min，水洗，自然晾干；在普通光学显微镜下观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
通过步骤1-4的分离筛选，最终获得一株革兰氏染色阳性，具有芽孢且芽孢不膨大的菌株。将该菌株编号为RM17。
二、菌株RM17的鉴定
1.形态学鉴定
对处于对数生长期且菌落大小稳定的菌株RM17进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、菌落表面状态及菌落边缘状态。所得单菌落大小为12-14mm，颜色呈乳白色，不透明，菌落表面褶皱，边缘不规则。
其次对处于对数生长期的菌株RM17进行染色，采用光学显微镜观察菌体形态。分离并筛选到的菌株RM17，革兰氏染色呈阳性，细胞形态为杆状，直径不超过1μm，有芽孢生成且芽孢不膨大。
2.16S RNA序列同源性分析
细菌总DNA的提取采用天根生化科技有限公司的细菌基因组DNA提取试剂盒提取。提取后的样品送到上海美吉生物医药科技有限公司进行测序。将测定结果在GenBank数据库中进行BLAST同源性比对，确定菌种类别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。
上述实验结果表明，该菌为地衣芽孢杆菌。该菌株已于2018年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)，保藏号为CGMCC No.16730。
实施例2地衣芽孢杆菌RM17的抗逆性检测
1.耐热性检测
将地衣芽孢杆菌RM17(CGMCC No.16730)菌液分别于60℃、80℃、100℃水浴锅内处理20min，每个处理3个重复，处理结束后采用倾注法测定其活菌数。
地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730在60℃处理20min后存活率可达80％，80℃处理20min后存活率仍高于60％。活菌数均>106CFU/ml。
2.耐酸性检测
将地衣芽孢杆菌RM17分别接种到pH值为2.0、3.0、4.0的LB培养基中，分别在0h、1h、2h、3h、4h采用平板倾注法测定其活菌数。
地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730在前两个小时内可以在pH2-4的培养基中正常生长。结果见图3，当pH为3和4时，在接种活菌4小时后，活菌数量与接种时基本保持一致。当pH为2时，活菌数在接种后的4小时内一直稳步上升。结果提示地衣芽孢杆菌RM17可以耐受胃酸的影响。
3.耐胆盐检测
将活化好的地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730用无菌生理盐水做倍比稀释，选取合适的稀释梯度并吸取1ml稀释液放于无菌培养皿里，做6个重复，然后用含不同浓度牛胆酸钠(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％，％表示g/ml)的LB培养基倾注平板，37℃培养4小时，每隔1小时菌落计数，见图4，结果显示不同胆盐浓度下的活菌数随着时间的延长普遍呈下降趋势。0.1％的胆盐作用对地衣芽孢杆菌RM17生长的影响几乎可以忽略不计。在0.2％、0.3％、0.4％的胆盐作用3小时后，活菌数仍然可以保持上升，说明地衣芽孢杆菌RM17的耐胆盐能力较强。
实施例3地衣芽孢杆菌RM17的生长曲线测定
生长曲线代表了细菌在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。将地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730按1％(v/v)的接种量，接种到LB培养基中，37℃培养24小时，以不加菌液的LB培养基作为空白对照，每隔2小时测定OD600值。实验设三次重复，结果取其平均值，记录数据并绘制生长曲线。如图5所示，在2-14小时，地衣芽孢杆菌RM17处于对数生长阶段，繁殖速率较高。在14-24小时地衣芽孢杆菌RM17生长进入静止期，活菌数量趋于稳定。
实施例4地衣芽孢杆菌制剂的制备
1.发酵培养基配方：红糖40g/L、豆粕35g/L、氯化钠4g/L、磷酸二氢钾0.8g/L、硫酸锰0.3g/L、硫酸镁0.03g/L、消泡剂0.05％(v/v)加水充分溶解，控制pH在6.4-6.8的范围内制成发酵培养基。
2.121℃高温蒸汽消毒30min。
3.待发酵培养基降温至30℃时，接种菌龄24小时的RM17菌液8％(v/v)。
4.在37℃条件下，保持转速250rpm搅拌，发酵培养15小时，放罐，得到地衣芽孢杆菌的活菌数大于1.0×1011cfu/ml，芽孢率达95％以上。
5.将菌泥放入低温真空干燥箱内干燥，过筛，收集产品，得到地衣芽孢杆菌制剂。
实施例5地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730抑制细菌生物膜形成
将存于-80℃的地衣芽孢杆菌(RM17)和金黄色葡萄球菌CVCC1882、大肠杆菌K88CVCC1527菌株解冻，37℃琼脂平板上涂布培养24h以复苏菌株，挑去单菌落转移至含有5mlLB液体培养基的50ml离心管中，37℃培养箱中220r/min震荡培养24h。转移10ml LB菌体悬液于100ml锥形瓶中，37℃培养箱中220r/min震荡培养，每小时测量A600并制备各细菌的标准生长曲线。选择对数生长期的细菌作为实验对象。
在96孔微量培养板中，对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制实验设置四个处理组：A:每孔200ul LB液体培养基；B:每孔加入200ul稀释后的金黄色葡萄球菌CVCC1882悬液；C:每孔200ul稀释后的地衣芽孢杆菌菌悬液；D每孔100ul金黄色葡萄球菌CVCC1882悬液+100ul稀释后的地衣芽孢杆菌菌悬液每个处理六个平行，将96微孔板至于37℃温育48h，以只有LB液体培养基的A组作为空白对照。对大肠杆菌K88生物膜形成的抑制实验设置四个处理组：A:每孔200ul LB液体培养基；B:每孔加入200ul稀释后的大肠杆菌K88悬液；C:每孔200ul稀释后的地衣芽孢杆菌菌悬液；D每孔100ul大肠杆菌K88悬液+100ul稀释后的地衣芽孢杆菌菌悬液每个处理六个平行，将96微孔板至于37℃温育48h，以只有LB液体培养基的A组作为空白对照。将培养好的96孔板从恒温箱中取出，吸弃菌液；每孔250ul 1x PBS缓冲液轻洗96孔板，重复2次，弃洗液，晾干；加甲醇至96孔板中，每孔200uL，固定15min，倒出并晾干；将0.1g/ml结晶紫溶液以每孔200ul入96孔板中，边加边晃动，染色5min，自来水冲洗，拍干；将0.1％的脱氧胆酸钠加至96孔板中，每孔200ul，待细菌生物膜完全溶解后，用酶标仪测定A600，结果见图7、图9。如图6、图8所示地衣芽孢杆菌RM17能够使金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生物膜的粘附特性从中等粘附性变成弱粘附性从而抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成。
实施例6地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730制剂的安全性评价
本实施例以小鼠作为实验动物，采用灌胃试验的方法，评价地衣芽孢杆菌的安全性，具体方法如下：
1.实施例4方法制得的地衣芽孢杆菌菌剂的冻干粉，经平板计数测定，其地衣芽孢杆菌RM17活菌数为4.0×1010cfu/g。
2.选取8周龄左右的小鼠72只，随机分为4组(A组为对照组灌服无菌生理盐水，B组为高剂量组按照4.0×1010cfu/只的量灌服菌液，C组为中剂量组按照4.0×109cfu/只的量灌服菌液，D组为低剂量组按照4.0×108cfu/只的量灌服菌液)，每组3个重复，每个重复6只鼠。
3.每天下午三点灌胃一次，连续灌服21天。
实验鼠房控制温度湿度恒定，自然光照，小鼠自由采食、饮水，每7天清扫鼠笼一次。实验过程中，每天观察并记录小鼠的状态，存活情况，有无临床异常症状等。
检测指标：
(1)实验结束当天，解剖小鼠，收集小鼠空肠、回肠、结肠食糜，装在1.5ml离心管中，放入-80℃冰箱保存，用于肠道菌群结构的分析。
(2)于实验结束当天采用心脏取血的方式，取得实验小鼠血液样品，经静止离心后获得血清，用于检测血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等血液生化指标。
(3)取完整的心、肝、脾、肾(双侧)称湿重，分别计算心脏指数＝(心脏湿重/体重)×100％、肝脏指数＝(肝脏湿重/体重)×100％、脾脏指数＝(脾脏湿重/体重)×100％、肾脏指数＝(肾脏湿重/体重)×100％。
表1不同处理组小鼠存活情况
A组 B组 C组 D组
7天 存活 存活 存活 存活
14天 存活 存活 存活 存活
21天 存活 存活 存活 存活
从表1可以看出，使用地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730给小鼠灌胃21天后，实验各处理组小鼠均存活，说明上述地衣芽孢杆菌对动物安全。
表2不同处理组小鼠的脏器系数
A组 B组 C组 D组
心脏 0.62 0.61 0.65 0.63
肝脏 5.70 5.62 5.46 5.55
脾脏 0.44 0.41 0.43 0.44
肾脏 1.29 1.35 1.33 1.37
从表2可以看出，处理组小鼠的脏器指数与对照组相比没有明显变化，说明上述地衣芽孢杆菌没有造成小鼠各脏器异常。
利用生化分析仪检测小鼠血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等，结果均显示正常，说明本发明提供的地衣芽孢杆菌制剂对小鼠的生理指标不构成影响。
实施例7地衣芽孢杆菌RM17 CGMCC No.16730制剂的应用
本实验选取28日龄杜长大三元杂交断奶仔猪72头，实验期45天，按照随机区组设计分为2个组，每组6个重复，每个重复6头猪。A组为对照组(基础日粮组)，B组为处理组(基础日粮中添加180g/t的实施例4制得的地衣芽孢杆菌制剂，有效活菌数为4.0×1010cfu/g)。
试验期间仔猪饲养在全封闭式保育猪舍内，温度控制在25-27℃，自由采食、饮水。基础日粮中不含任何抗生素，仔猪免疫按照常规免疫程序进行。
测定指标：
各处理组断奶仔猪的生产性能，具体包括以下指标：
1.每天记录仔猪的采食量，试验结束后计算平均日采食量；
2.在试验开始和结束的当天记录仔猪体重，计算平均日增重；
3.通过a、b的试验结果计算料肉比，其计算方式为平均日采食量/平均日增重。
4.试验期间每天早上10:00观察并记录仔猪的粪便状况，计算断奶仔猪腹泻率。
表3基础日粮中添加地衣芽孢杆菌制剂对断奶仔猪生产性能及腹泻率的影响
平均日采食量(kg) 平均日增重(kg) 料肉比 腹泻率(％)
A组 0.344 0.252 1.365 7.8
B组 0.379 0.286 1.325 2.2
从表3可以看出，处理组仔猪平均日采食量和平均日增重都显著高于对照组(P<0.05)，料肉比低于对照组，说明添加地衣芽孢杆菌制剂的饲料效益更好。饲料中添加地衣芽孢杆菌制剂的仔猪腹泻率显著降低(P<0.05)，说明本发明的菌剂具有降低断奶仔猪腹泻率的作用。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17，保藏编号为CGMCC NO.16730。
2.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)RM17。
3.含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17的饲料添加剂或动物饲料。
4.含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17的抗菌药物。
5.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备抵抗金黄色葡萄球菌、或大肠杆菌K88黏附的药物中的应用。
6.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备抑制细菌生物膜形成的制剂中的应用。
7.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备饲料添加剂中的应用。
8.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备提高饲料转化率的制剂中的应用。
9.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)RM17在制备促进动物生长或提高动物体重制剂中的应用。
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