CN113018224B - 一种抗刺激组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种组合物及其应用，所述组合物包括桃胶提取物和仙人掌提取物。本发明的组合物具有显著的拮抗表面活性剂刺激性的作用。功效评价实验证实，本发明的组合物对表面活性剂引起的红细胞溶血具有明显抑制作用，对表面活性剂致鸡胚绒毛尿囊膜刺激性显著降低，可有效改善表面活性剂引起的皮肤纹理的破坏，显著改善表面活性剂造成的皮肤脂质排列紊乱，显著降低不同表面活性剂对人皮肤不良反应。

Description

一种抗刺激组合物及其应用

技术领域

本发明涉及日用化妆品领域，具体涉及一种抗刺激组合物及其应用。

背景技术

表面活性剂具有分散、去污、增溶和渗透等多种功能，广泛用于各种洗涤剂和清洗组合物中以赋予它们清洁特性，是化妆品的重要组成部分。根据分子组成特点和极性基团的解离性质，可将表面活性剂分为离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。

表面活性剂对皮肤或粘膜的刺激性或致敏性主要体现在三个方面：(1)溶出性：表面活性剂对皮肤自身的保湿成分、细胞间脂质及角质层中游离氨基酸和脂肪的溶出程度。表面活性剂会对皮肤本身的保湿成分(如保湿因子、细胞间脂质等)的溶出程度产生影响，这些成分的过分溶出使得皮肤油脂和表层受到破坏，皮肤保水能力下降，引起细胞或皮屑脱落，从而造成皮肤紧绷、刺痛或者干燥感；(2)渗入性：表面活性剂经皮渗透的能力，被认为是引发皮肤各种炎症的原因之一。表面活性剂渗入皮肤后，改变了皮肤的原始结构状态和相邻分子间的相容性，会引发皮肤炎症，出现红斑和水肿等现象；(3)反应性：指表面活性剂与皮肤角质层如角蛋白非特异性结合，导致其α-螺旋结构变性，二级和三级结构的损坏，暴露水分子结合位点，使蛋白质发生溶胀和过度水合，导致蛋白质变性^[8]。表面活性剂会导致细胞膜蛋白变性，改变细胞膜结构，增加细胞通透性，使得表面活性物渗入到细胞内部，发生一系列炎症反应，造成细胞炎症损伤。

随着人们对洗护产品的安全性的关注度越来越高，降低表面活性剂刺激性的研究非常必要。

现有技术多通过将多种表面活性剂复配或者降低表面活性剂的用量来达到降低表面活性剂对皮肤刺激性的效果。然而，上述方法不能同时保障表面活性剂的功能发挥及使用安全性。

发明内容

在第一个方面，本发明提供了一种具有拮抗表面活性刺激性的组合物。

该抗刺激组合物包括桃胶提取物和仙人掌提取物。

根据本发明的一些实施方式，以质量计，所述桃胶提取物中包含30％以上的桃胶多糖。

根据本发明的优选实施方式，以质量计，所述桃胶提取物中包含50％以上的桃胶多糖。

根据本发明的优选实施方式，以质量计，所述桃胶提取物中包含70％以上的桃胶多糖。

根据本发明的一些实施方式，所述组合物中包含的桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为100-500wDa。

根据本发明的优选实施方式，所述组合物中包含的桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为200-300wDa。

根据本发明的进一步优选实施方式，所述组合物中包含的桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为240-280wDa。

根据本发明的一些实施方式，所述抗刺激组合物还包括组分3)，所述组分3)选自糊精、环糊精、甲基环糊精、羟丙基环糊精、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素中的一种或几种。

根据本发明的一些实施方式，所述抗刺激组合物的制备方法包括如下步骤：

(1)将桃胶和仙人掌用水进行提取，得到初提液；

(2)将初提液进行离心，得到上清液；

(3)将所述上清液进行微滤，得到微滤液。

根据本发明的一些实施方式，所述制备方法还包括以下步骤：

(4)将微滤液与所述组分3)进行混合，产生固体物；

(5)将步骤(4)混合后产生的固体物进行干燥。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤(1)中，桃胶和仙人掌的重量比为1:5-15:1。

根据本发明的优选实施方式，所述步骤(1)中，桃胶和仙人掌的重量比为1:10-10:1。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤(1)中所述提取条件包括：桃胶和仙人掌的总重量与水的重量比为1：10-1：50。

根据本发明的一些实施方式，步骤(1)中，所述桃胶和仙人掌的总重量与水的重量比(料液比)可以是1：10(m/m)、1：11(m/m)、1：12(m/m)、1：13(m/m)、1：14(m/m)、1：15(m/m)、1：16(m/m)、1：17(m/m)、1：18(m/m)、1：20(m/m)、1：25(m/m)、1：27(m/m)、1：30(m/m)、1：32(m/m)、1：35(m/m)、1：36(m/m)、1：39(m/m)、1：40(m/m)、1：41(m/m)、1：42(m/m)、1：45(m/m)、1：48(m/m)、1：50(m/m)。

根据本发明的优选的实施方式，步骤(1)中，桃胶和仙人掌的总重量与水的重量比可以使1:20(m/m)、1:25(m/m)、1:27(m/m)、1:30(m/m)、1:32(m/m)、1:35(m/m)、1：36(m/m)、1：39(m/m)、1：40(m/m)。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤(1)中所述提取条件包括：提取温度为50-90℃，提取时间为0.5-5h。

根据本发明的一些实施方式，步骤(1)中，所述提取温度可以是50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、65℃、68℃、69℃、70℃、75℃、78℃、80℃、85℃、88℃、90℃。

根据本发明的优选的实施方式，步骤(1)中，所述提取温度可以是60℃、61℃、62℃、65℃、68℃、69℃、70℃、75℃。

根据本发明的优选的实施方式，步骤(1)中，所述提取时间可以是0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4.5h、5h。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤(2)中，所述离心的条件包括：离4000-8000rpm，离心5-30min。

根据本发明的一些实施方式，所述微滤通过微滤膜组件进行。

根据本发明的优选实施方式，所述微滤膜组件选自陶瓷微滤膜组件或卷式微滤膜组件。

根据本发明的优选实施方式，所述微滤膜组件的孔径为50-200nm。

根据本发明的优选实施方式，所述微滤膜组件的孔径为100nm。

根据本发明的一些实施方式，步骤(3)中，所述微滤的目的在于除去上清液中分子量在50wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液。

根据本发明的一些实施方式，所述微滤液与组分3)的重量比为1:1-1:20。

根据本发明的优选实施方式，所述微滤液与组分3)的重量比为1:5-1:15。

根据本发明的一些实施方式，步骤(4)中，所述混合的时间为0.5-50h。

根据本发明的优选实施方式，步骤(4)中，所述混合的时间为10-24h。

根据本发明的一些实施方式，步骤(5)中，所述干燥为冷冻干燥、喷雾干燥或烘干。

根据本发明的优选实施方式，步骤(5)中，所述冷冻干燥的条件包括：温度为-80至-10℃，时间为8-32h。

根据本发明的优选实施方式，步骤(5)中，所述喷雾干燥的条件包括：进风温度100-170℃喷雾干燥，控制物料流速为5-50mL/min。

根据本发明的优选实施方式，步骤(5)中，所述烘干的条件包括：90-150℃烘干12-50h。

根据本发明的一些实施方式，步骤(5)中，将干燥后的固体物粉碎过筛后进行灭菌。

根据本发明的优选实施方式，所述灭菌采用钴60灭菌1-8h或者采用100-700W微波，灭菌0.5-30min或者90-150℃干热灭菌0.5-5h。

在第二个方面，本发明提供了上述的抗刺激组合物在制备用于拮抗表面活性剂刺激性的产品中的应用。

根据本发明的一些实施方式，所述表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、硬脂酸钾、月桂酰肌氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠和月桂醇聚醚硫酸酯钠中的一种或几种。

根据本发明的一些实施方式，所述阳离子表面活性剂为十六烷基三甲基氯化铵。

根据本发明的一些实施方式，所述两性离子表面活性剂为椰油酰胺丙基甜菜碱。

根据本发明的一些实施方式，所述非离子表面活性剂为癸基葡糖苷或椰油酰胺DEA。

根据本发明的一些实施方式，所述产品为护肤品、洗漱用品或发用产品。

根据本发明的一些实施方式，所述产品为面膜、膏霜、乳液、护肤水、洗面奶、洗发水、护发素或沐浴露。

本发明的有益效果：

本发明的抗刺激组合物具有显著的拮抗表面活性剂刺激性的作用。功效评价实验证实，本发明的抗刺激组合物对表面活性剂引起的红细胞溶血抑制率具有明显抑制作用，对表面活性剂致鸡胚绒毛尿囊膜刺激性显著降低。本发明的抗刺激组合物可有效拮抗不同表面活性剂对细胞膜、血管的刺激性，显著降低不同表面活性剂对人皮肤不良反应。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例共同用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1显示了不同的大分子化合物和提取物对SDS致红细胞溶血抑制率的影响。

图2显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物(植物提取物(大分子量))对SDS致红细胞溶血抑制率的影响。

图3显示了根据本发明实施例6-9制备的组合物对SDS致红细胞溶血抑制率的影响。

图4显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对月桂酰肌氨酸钠致红细胞溶血抑制率的影响。

图5显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对月桂醇聚醚硫酸酯钠致红细胞溶血抑制率的影响。

图6显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对十六烷基三甲基氯化铵致红细胞溶血抑制率的影响。

图7显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对椰油酰胺丙基甜菜碱致红细胞溶血抑制率的影响。

图8显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对癸基葡糖苷致红细胞溶血抑制率的影响。

图9显示了根据本发明实施例6-9制备的组合物对SDS致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响。

图10显示了不同浓度的根据本发明实施例6制备的组合物对SDS致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响。

图11显示了根据本发明实施例6制备的组合物对月桂酰谷氨酸钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响。

图12显示了根据本发明实施例6制备的组合物对月桂酰肌氨酸钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响。

图13显示了根据本发明实施例6制备的组合物对月桂醇聚醚硫酸酯钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响。

图14显示了根据本发明实施例6制备的组合物在贴敷皮肤前后对于皮肤纹理结构的影响。

图15显示了根据本发明实施例6制备的组合物对SDS致人体皮肤脂质有序性变化的影响。

具体实施方式：

以下结合附图和实施例对本发明进行详细说明，但本发明并不受下述实施例限定。

本发明使用原料的来源见表1，如无特殊说明本发明所使用原料及仪器均为常规原料或仪器。

本发明所用的微滤膜组件设备为厦门福美科技有限公司的CeraMem-0025微滤膜组件设备。

实施例1、抗表面活性剂刺激原料筛选

本发明筛选了多种宣称具有抗刺激的原料以及化合物进行提取，并通过红细胞溶血凝血试验，考察各提取物对SDS引起的红细胞刺激性的拮抗效果。

本发明还考察了不同的阴离子多糖和三种市场竞品对SDS引起的红细胞刺激性的拮抗效果。

表1使用原料来源

原料名称	标准中文名称	购买厂家
			桃胶	/	襄阳天马众合商贸有限公司
仙人掌	/	郑州格贝进出口贸易有限公司
			燕麦麸皮	/	张家口北燕燕麦食品开发有限公司
银耳	/	北京同仁堂
			马齿苋	/	北京同仁堂
洋甘菊	/	桐州市海泰菊业有限公司
			五味子	/	北京同仁堂
地黄	/	北京同仁堂
			银杏叶	/	毫州市寿安堂药业有限公司
麦冬	/	北京同仁堂
			大黄	/	北京同仁堂
丹参	/	北京同仁堂
			当归	/	北京同仁堂
黄芪	/	北京同仁堂
			绿豆	/	四川合众养道食品有限公司
苦参	/	北京同仁堂
			聚谷氨酸	聚谷氨酸	山东福瑞达生物科技有限公司
透明质酸	透明质酸	华熙福瑞达生物医药有限公司
			普鲁兰多糖	出芽短梗酶多糖	山东康纳馨生物科技有限公司
海藻酸钠	藻酸硫酸酯钠	青岛明月海藻集团有限公司
			卡拉胶	皱波角叉菜	绿新(福建)食品有限公司
阿拉伯胶	阿拉伯胶树(AcaciaSenegal)胶	河北百味生物科技有限公司
			SDS	十二烷基硫酸钠	西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司
95％乙醇	95％乙醇	国药集团化学试剂有限公司
			糊精	糊精	河北百优生物科技有限公司
环糊精	环糊精	孟州市华兴生物化工有限责任公司
			甲基环糊精	甲基环糊精	武汉拉那白医药化工有限公司
羟丙基环糊精	羟丙基环糊精	山东滨州智源生物科技有限公司
			海藻糖	海藻糖	德州汇洋生物科技有限公司
聚乙烯吡咯烷酮	聚乙烯吡咯烷酮	广东粤美化工有限公司

甲基纤维素	甲基纤维素	泰安瑞泰纤维素有限公司
			甲基羟乙基纤维素	甲基羟乙基纤维素	泰安瑞泰纤维素有限公司
羟丙基甲基纤维素	羟丙基甲基纤维素	泰安瑞泰纤维素有限公司
			羟乙基纤维素	羟乙基纤维素	泰安瑞泰纤维素有限公司
羟丙基纤维素	羟丙基纤维素	泰安瑞泰纤维素有限公司
			十二酸	月桂酸	科宁化工(中国)有限公司
十四酸	肉豆蔻酸	科宁化工(中国)有限公司
			十六酸	棕榈酸	科宁化工(中国)有限公司
+八酸	硬脂酸	科宁化工(中国)有限公司
			单甘酯	甘油硬脂酸酯	沈阳科瑞化工有限公司
尼丙	羟苯丙酯	北京桑普生物化学技术有限公司
			甘油	甘油	宝洁(中国)有限公司
EDTA-2Na	EDTA二钠	阿克苏诺贝尔中国有限公司
			KoH	氢氧化钾	国药集团化学试剂有限公司
尼甲	羟苯甲酯	北京桑普生物化学技术有限公司
			SF-1	丙烯酸(酯)类共聚物	路博润特种化工制造(上海)有限公司
十二烷基硫酸钠	月桂醇硫酸酯钠	SIGMA
			月桂酰肌氨酸钠	月桂酰肌氨酸钠	广州花之王化工有限公司
月桂酰谷氨酸钠	月桂酰谷氨酸钠	广州朋远化工有限公司
			月桂醇聚醚硫酸酯钠	月桂醇聚醚硫酸酯钠	广州花之王化工有限公司
十六烷基三甲基氯化铵	西曲氯铵	广州花之王化工有限公司
			椰油酰胺丙基甜菜碱	椰油酰胺丙基甜菜碱	广州花之王化工有限公司
癸基葡糖苷	癸基葡糖苷	巴斯夫
			椰油酰胺DEA	椰油酰胺DEA	南通润丰石油化工有限公司

市场竞品1成分：丁二醇，水，积雪草(CentellaAsiatica)提取物，虎杖(PolygonumCuspidatum)根提取物，黄芩(ScutellariaBaicalensis)根提取物，茶(CamelliaSinensis)叶提取物，光果甘草(GlycyrrhizaGlabra)根提取物，母菊(ChamomillaRecutita)花提取物，迷迭香(RosmarinusOfficinalis)叶提取物。

市场竞品2成分：水，小球藻(ChlorellaVulgaris)提取物，甘油。

市场竞品3成分：丙二醇，水，龙胆(GentianaScabra)根提取物。

1、提取物制备：

共筛选了16种植物，有燕麦、银耳、桃胶、马齿苋、洋甘菊、五味子、地黄、银杏、麦冬、大黄、丹参、当归、黄芪、绿豆、仙人掌、苦参。

将上述植物粉碎，过10目筛，取筛下部分备用。取筛下部分，按照∶水＝1∶20(m/m)，水提，60℃提取1h，过滤，得提取物备用。

其中桃胶提取物有两个制备方法：

①按照桃胶∶水＝1∶20(m/m)纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心10min，取上清液，采用50nm的微滤组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在50wDa以上的物质，保留流出液，得到微滤液；得桃胶提取物(小分子)。

②按照桃胶：水＝1：20(m/m)，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心10min，取上清液；采用50nm的微滤组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在50wDa以下的物质，保留流出液，得桃胶提取物(大分子)。所述桃胶提取物(大分子)中桃胶多糖的平均分子量为100-500wDa，所述桃胶提取物的粘度≥5mPa·s，电导率≥1500μS/cm。

其中，粘度测定方法为：

(1)准备被测液体(桃胶提取物)，置于直径不小于70mm的烧杯或直筒形容器皿，

准确地控制被测液体温度；

(2)将保护架装在仪器上；

(3)将选配好的转子旋入连接螺杆，旋转升降旋钮，使仪器缓慢地下降，转子逐渐浸入被测液体中，直至转子液面标志和液面相平为止，调正仪器水平，按下指针控制杆，调正仪器水平。按下指针控制杆，开启电机开关，转动变速旋钮，使把需转速数向上，对准速度指示点，放松指针控制杆，使转子在液体中旋转，经过多次旋转待指针趋于稳定，按下指针控制杆使读数固定下来，再关闭电机，使指针停在读数窗内，读取读数。

电导率的测定方法为：

(1)将测试样品放入烧杯中，调节至25℃或接近值，待用；

(2)测定样品时，先用去离子水冲洗电极并用滤纸吸干后，再用待测你个屁冲洗电极，然后将电极浸入待测液中，小心摇动或进行搅拌使其均匀，静置，待读数稳定时记下电导率值。

2、拮抗SDS引起的红细胞溶血抑制率效果评价

采用红细胞溶血凝血试验，考察0.2％聚谷氨酸(分子量≥70wDa)、0.2％透明质酸(分子量≥130wDa)、2％普鲁兰多糖(≥5万Da)、1％海藻酸钠(≥10万Da)、1％卡拉胶(≥50wDa)、1％燕麦提取物、2％银耳提取物、2％桃胶提取物(小分子)、2％桃胶提取物(大分子)、2％马齿苋提取物、2％洋甘菊提取物、2％五味子提取物、2％地黄提取物、2％银杏提取物、2％麦冬提取物、2％大黄提取物、2％丹参提取物、2％当归提取物、2％黄芪提取物、2％绿豆提取物、2％仙人掌提取物、2％苦参提取物、5％市场竞品1、5％市场竞品2、5％市场竞品3对SDS引起的红细胞溶血抑制率的拮抗效果。

试验方法：

①红细胞悬液处理：

室温下，调整红细胞悬液中红细胞密度，在530nm波长下测定其吸光值，控制全溶血时红细胞OD值在1.3000-1.7000。

②红细胞耐受性

分别用体系浓度为20mg/L、30mg/L、40mg/L的SDS水溶液作为样品，检测红细胞溶血抑制率，并计算H50(溶血率为50％时，SDS的体系浓度)。要求H50在25.7-33.1mg/L范围内。

③检测受试物

A.取离心管，按照表3所示，依次加入受试物(2％桃胶提取物)、PBS、RBC悬液、SDS，并混合均匀，样品体系终浓度即为测试浓度；

B.置于摇床，孵育10min后离心；

C.观察现象，并取上清液，测定OD530；

D.计算溶血抑制率。

表2反应体系(μL)

红细胞溶血抑制率的计算公式为：

红细胞溶血抑制率(％)＝(OD_阴性对照组-OD_样品组)/OD_阴性对照组×100。

结果如图1和表3所示。结果表明，2％桃胶提取物(大分子)+0.0035％SDS的混合物的红细胞溶血抑制率为79％，2％桃胶提取物(小分子)+0.0035％SDS的混合物的红细胞溶血抑制率为46％，其次为2％仙人掌提取物+0.0035％SDS的混合物，红细胞溶血抑制率为71％。如图1/表3所示。

表3各提取物对SDS致红细胞溶血抑制率的影响

实施例2

桃胶3份，仙人掌1份，加入纯水50份，纯水提，70℃提取2h；5000rpm离心10min，取上清液；采用50nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在50wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液。

实施例3

桃胶10份，仙人掌5份，加入纯水100份，纯水提，80℃提取0.5h；4000rpm离心30min，取上清液；采用50nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在50wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液。

实施例4

桃胶15份，仙人掌3份，加入纯水150份，纯水提，50℃提取3h；8000rpm离心5min，取上清液；采用50nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在50wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液。

实施例5多糖分子量测定实验：

试验方法：

①凝胶色谱条件：

流动相：0.1mol/LNaNO3溶液；流速：0.8mL/min；柱温：60℃；示差折光检测器(RID)温度：50℃；进样体积：100μL。

②标准曲线绘制：取38.4mg燕麦β-葡聚糖标准品(平均分子量5×105Da，纯度97％)，定容至10mL，得到3.72mg/mL的燕麦β-葡聚糖标准溶液，取标准液依次梯度稀释2倍，分别得到1.86、0.930、0.465、0.233mg/mL的燕麦β-葡聚糖标准溶液，以质量浓度-峰面积进行线性回归，绘制标准曲线。

③样品测定：取待测样品(实施例2-4制备)，以1∶9(m/v)加入95％乙醇进行醇沉处理，4℃放置24h，5000rpm离心20min，弃去上清，沉淀以流动相复溶并定容于25mL容量瓶，待凝胶色谱仪分析。

采用渗透色谱(GPC)法检测实施例2-4制备样品的多糖分子量，经过上述制备方法所得提取物平均多糖分子量为100-500wDa。

实施例6

桃胶1份，仙人掌1份，加入纯水50份，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心20min，取上清液；采用100nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在100wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液；按照微滤液∶羟丙基环糊精＝1∶5(m/m)复配；复配后物质-80

℃冷冻干燥12h；粉碎过80目筛，取筛下部分；钴60灭菌3h，得组合物。

实施例7

桃胶1份，仙人掌1份，加入纯水50份，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心20min，取上清液；采用100nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在100wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液；按照微滤液∶羟丙基环糊精＝1∶10(m/m)复配；复配后物质-80℃冷冻干燥12h；粉碎过80目筛，取筛下部分；钴60灭菌3h，得组合物。

实施例8

桃胶3份，仙人掌1份，加入纯水150份，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心20min，取上清液；采用100nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在100wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液；按照微滤液：羟丙基环糊精＝1：5(m/m)复配；复配后物质-80℃冷冻干燥12h；粉碎过80目筛，取筛下部分；钴60灭菌3h，得组合物。

实施例9

桃胶1份，仙人掌3份，加入纯水150份，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心20min，取上清液；采用100nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，除去上清液中分子量在100wDa以下的物质，保留流出液，得到微滤液；按照微滤液：羟丙基环糊精＝1：5(m/m)复配；复配后物质-80℃冷冻干燥12h；粉碎过80目筛，取筛下部分；钴60灭菌3h，得组合物。

实施例10

功效检测：采用红细胞溶血凝血试验(试验方法如前所述)，检测样品对SDS引起红细胞溶血抑制率的影响。

实验组：实施例6制备样品

对照组：植物提取物(小分子量)制备方法：桃胶1份，仙人掌1份，加入纯水50份，纯水提，80℃提取2h；5000rpm离心20min，取上清液；采用100nm的微滤膜组件进行微滤并浓缩，保留上清液中分子量在100wDa以下的物质，得到微滤液；按照微滤液：羟丙基环糊精＝1：5(m/m)复配；复配后物质-80℃冷冻干燥12h；粉碎过80目筛，取筛下部分；钴60灭菌3h，得植物组合物(小分子)。

结论：详见表4、图2。

以上实验说明大分子量提取物具有较佳的拮抗SDS刺激效果。

表4不同浓度植物提取物对SDS致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.005％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	26
样品2	0.010％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	46
			样品3	0.015％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	59
样品4	0.020％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	74
			样品5	0.025％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	86
样品6	0.030％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	94
			样品7	0.040％植物提取物(大分子量)+0.0035％SDS	100
样品8	0.01％植物提取物(小分子量)+0.0035％SDS	14

实施例11拮抗不同表面活性剂致红细胞刺激

表面活性剂对红细胞膜会产生一定的损伤并导致细胞膜渗透性的改变，测定产品与表面活性剂混合10min后对红细胞中血红蛋白漏出量，评估产品抗刺激效果。利用分光光度法检测红细胞悬液的吸光度，计算溶血率。红细胞溶血抑制率越小，表明产品对表面活性剂引起红细胞刺激性越小。

共筛选了多种类型表面活性剂：

阴离子型表面活性剂：SDS、月桂酰肌氨酸钠、月桂醇聚醚硫酸酯钠

阳离子表面活性剂：十六烷基三甲基氯化铵

两性离子表面活性剂：椰油酰胺丙基甜菜碱

非离子表面活性剂：癸基葡糖苷

结果：详见表5-10，图3-8。

表5不同实施例样品对SDS致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.01％实施例6+0.0035％SDS	46
样品2	0.01％实施例7+0.0035％SDS	45
			样品3	0.01％实施例8+0.0035％SDS	43
样品4	0.01％实施例9+0.0035％SDS	40

表6样品对月桂酰肌氨酸钠致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.5％实施例6+0.258％月桂酰肌氨酸钠	100
样品2	1％实施例6+0.258％月桂酰肌氨酸钠	100
			样品3	2％实施例6+0.258％月桂酰肌氨酸钠	100

表7样品对月桂醇聚醚硫酸酯钠致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.5％实施例6+0.01％月桂醇聚醚硫酸酯钠	100
样品2	1％实施例6+0.01％月桂醇聚醚硫酸酯钠	100
			样品3	2％实施例6+0.01％月桂醇聚醚硫酸酯钠	100

表8样品对十六烷基三甲基氯化铵致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.5％实施例6+0.0222％十六烷基三甲基氯化铵	100
样品2	1％实施例6+0.0222％十六烷基三甲基氯化铵	100
			样品3	2％实施例6+0.0222％十六烷基三甲基氯化铵	100

表9样品对椰油酰胺丙基甜菜碱致红细胞溶血抑制率的影响

表10样品对癸基葡糖苷致红细胞溶血抑制率的影响

样品编号	样品组成	红细胞溶血抑制率(％)
			样品1	0.5％实施例6+0.0333％癸基葡糖苷	100
样品2	1％实施例6+0.0333％癸基葡糖苷	100
			样品3	2％实施例6+0.0333％癸基葡糖苷碱	100

结论：通过不同表面活性剂致红细胞刺激试验可知，该植物组合物对不同类型(阴离子型、阳离子型、两性离子型、非离子型)表面活性剂引起的红细胞刺激具有良好的拮抗效果。

实施例12拮抗不同表面活性剂致鸡胚绒毛尿囊膜刺激

鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAMTest)是欧洲替代方法认证中心(ECVAM)认证的测试产品刺激性的试验方法，是目前化妆品及化学品眼刺激性体外试验的主要研究方法之一，可用来评价多种物质的刺激性。

试验方法：

①鸡蛋选择：选用SPF级白莱杭鸡受精鸡蛋(北京梅利亚试验动物有限公司购买)。鸡蛋质量符合相关标准的要求，供应商应具有农业部门认可的《兽药生产、检验用SPF鸡(蛋)定点生产企业》资格。鸡蛋应新鲜、干净、完好，质量50g-60g。孵化至4日龄时，应照蛋检查，弃去未受精的鸡胚，破壳或薄壳鸡胚也不能使用。

②孵化条件：孵化温度37.530.5℃，相对湿度55-70％，转盘频率3-6次/h，翻蛋孵化3天，第4天开窗后，停止翻蛋。

③CAM制备：在鸡胚孵化4天时，用电磨机在鸡蛋小头端打孔，用10mL注射器抽取2-3mL蛋清，再用电磨机在鸡蛋中部略微靠近大头段开一个1cm×1cm小窗，暴露CAM，小心用镊子去除蛋壳和蛋壳膜，保证鸡胚尿囊膜不受损。此时应观察血管系统的结构和鸡胚的生长情况。用透明胶带封住小头端的孔和中部的小窗后，放入孵化箱继续培养。每天需检查鸡胚的生长情况，及时弃去死胚。10日龄鸡胚用于试验。撕去封住小窗的透明胶带，用镊子扩大小窗面积，增大观察视野，应小心操作不破坏蛋膜完整性。此时应再次观察血管系统的结构，并对其完整性和是否适宜用于试验做出判断。将特氟龙环放在CAM上准备添加样品。

④样品测试：每个受试物为一组，每组试验6只鸡胚，取40μl的受试物直接作用于特氟龙环内CAM表面。37℃作用30min后，观察绒毛尿囊膜毒性效应指标(如：出血、血管溶解和凝血等)的变化，并进行组合计算终点评分(ES)。受试物处理组终点评分与阴性对照的终点评分进行比较，样品的终点评分越低，提示供试品抗刺激效果越强。

受试样品：2％实施例6-9制备的组合物。

共筛选了多种类型表面活性剂：

阴离子型表面活性剂：SDS、月桂酰肌氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠、月桂醇聚醚硫酸酯钠

结果：详见表11-15，及图9-13。

表11不同实施例样品对SDS致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响

样品编号	样品组成	鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数(ES)	刺激强度
				阴性对照	0.1％SDS	26	强刺激
样品1	0.35％实施例6+0.1％SDS	9	轻度刺激
				样品2	0.35％实施例7+0.1％SDS	12	中度刺激
样品3	0.35％实施例8+0.1％SDS	11	轻度刺激
				样品4	0.35％实施例9+0.1％SDS	10	轻度刺激
溶剂对照	生理盐水	0	无刺激

注：“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”

表12不同浓度样品对SDS致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响

样品编号	样品组成	鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数(ES)	刺激强度
				阴性对照	0.1％SDS	26	强刺激
样品1	0.20％实施例6+0.1％SDS	15	中度刺激
				样品2	0.35％实施例6+0.1％SDS	9	轻度刺激
样品3	0.50％实施例6+0.1％SDS	3	无刺激
				溶剂对照	生理盐水	0	无刺激

注：“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”

表13样品对月桂酰谷氨酸钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响

样品编号	样品名称	鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数(ES)	刺激强度
				阴性对照	0.149％月桂酰肌氨酸钠	17	强刺激
样品1	0.149％月桂酰肌氨酸钠+0.35％实施例6	8	轻度刺激
				溶剂对照	生理盐水	0	无刺激

注：“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”

表14样品对月桂酰肌氨酸钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响

注：“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”

表15样品对月桂醇聚醚硫酸酯钠致鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数的影响

样品编号	样品名称	鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数(ES)	刺激强度
				阴性对照	0.348％月桂醇聚醚硫酸酯钠	19	强刺激
样品1	0.348％月桂醇聚醚硫酸酯钠+0.35％实施例6	12	轻度刺激
				溶剂对照	生理盐水	0	无刺激

注：“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”

结论：通过不同表面活性剂致鸡胚绒毛尿囊膜刺激试验可知，该植物组合物对表面活性剂引起的鸡胚绒毛尿囊膜刺激具有良好的拮抗效果。

实施例13拮抗表面活性剂致人体皮肤损伤

测试样品：洗面奶(不包含本发明组合物)、含有0.5％本发明实施例6制备的组合物的洗面奶

表16洗面奶配方

制备方法：

1、将A相原料加热至80-85℃，搅拌均匀，保温，备用；

2、将B相原料加热至80-85℃；

3、在搅拌条件下(低于100rad/min)，将B相缓慢加入A相中，保温搅拌1h以上；

4、降温至50-60℃，加入预先备好的C相，继续搅拌。

5、降温至室温后，加入预先溶解好的D相，搅拌均匀，出料。

测试人数：每个样品40-60名志愿者试用

进行30天的人群试用，无仪器测试项目，仅要求受试者在使用的第0、14、28天，主观填写样品使用调查问卷，反馈产品使用感觉和效果。

结论：95％志愿者在第14d、28d时反馈使用含有0.5％本发明的组合物的洗面奶无刺激，而40％志愿者在第14d、28d时反馈使用不含本发明的组合物的洗面奶对皮肤有轻微刺激性，且出现皮肤干燥、脱屑、红肿等不良反应。

实施例14拮抗表面活性剂(SDS)致人体皮肤脂质排列紊乱及皮肤纹理破坏

测试方法：

(1)制备受试样品：制备2％SDS水溶液，和2％SDS与0.5％实施例6混合物水溶液；

(2)志愿者准备：志愿者用清水清洗手臂后，在湿度4532％、温度2332℃的环境中静坐20min；

(3)数据采集：测试区域为前臂屈侧，两个测试区域分别平行采集三次皮肤拉曼光谱数据，同时采集VC98数据；

(4)测试区域一：使用SDS水溶液斑贴刺激皮肤3h造模，即将30μL2％SDS溶液滴在斑试器小室滤纸片上并贴敷在测试部位，分别在贴敷前和贴敷3h后采集数据。

(5)测试区域二：将30μL2％SDS与0.5％实施例6混合物水溶液滴在斑试器小室滤纸片上并贴敷在测试部位，分别在贴敷前和贴敷3h后采集数据。

由图14可知，SDS贴敷皮肤后可破坏皮肤纹理结构，而组合物贴敷皮肤可有效抵御SDS造成的纹理结构改变的情况；由图15可知，SDS显著破坏皮肤脂质有序性(p<0.05)，影响深度达到皮下12μm；与SDS模型组相比，组合物的干预显著降低了SDS对脂质有序性的破坏作用(p<0.05)，SDS对皮肤屏障功能的负面影响缩小至皮下0-6μm范围内。

以上实验说明，通过本发明制备工艺所得植物提取物可有效拮抗不同表面活性剂对细胞膜、血管的刺激性，改善表面活性剂引起的皮肤纹理的破坏，显著改善表面活性剂造成的皮肤脂质排列紊乱，显著降低不同表面活性剂对人皮肤不良反应。

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (20)

1.一种抗刺激组合物，其包括桃胶提取物和仙人掌提取物；

以质量％计，所述桃胶提取物中包含30％以上的桃胶多糖；

所述组合物中桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为100-500wDa。

2.根据权利要求1所述的抗刺激组合物，以质量％计，所述桃胶提取物中包含50％以上的桃胶多糖；所述组合物中桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为200-300wDa。

3.根据权利要求1或2所述的抗刺激组合物，以质量％计，所述桃胶提取物中包含70％以上的桃胶多糖；所述组合物中桃胶多糖和仙人掌多糖的平均分子量为240-280wDa。

4.根据权利要求1或2所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述抗刺激组合物还包括组分3)，所述组分3)选自糊精、环糊精、甲基环糊精、羟丙基环糊精、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述抗刺激组合物的制备方法包括如下步骤：

(1)将桃胶和仙人掌用水进行提取，得到初提液；

(2)将初提液进行离心，得到上清液；

(3)将所述上清液进行微滤，得到微滤液。

6.根据权利要求5所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述制备方法步骤(1)中桃胶和仙人掌的重量比为1:5-15:1。

7.根据权利要求5所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述制备方法步骤(1)中桃胶和仙人掌的重量比为1:10-10:1。

8.根据权利要求5-7任一项所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：

(4)将微滤液与所述组分3)进行混合，产生固体物；

(5)将步骤(4)混合后产生的固体物进行干燥。

9.根据权利要求5-7任一项所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述步骤(1)中所述提取条件包括：桃胶和仙人掌的总重量与水的重量比为1：10-1：50，提取温度为50-90℃，提取时间为0.5-5h。

10.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤通过微滤膜组件进行。

11.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤膜组件选自陶瓷微滤膜组件或卷式微滤膜组件。

12.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤膜组件的孔径为50-200nm。

13.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤膜组件的孔径为100nm。

14.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤液与组分3)的重量比为1:1-1:20。

15.根据权利要求8所述的抗刺激组合物，其特征在于，所述微滤液与组分3)的重量比为1:5-1:15。

16.根据权利要求1-15任一项所述的抗刺激组合物在制备用于拮抗表面活性剂刺激性的化妆品中的应用。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种。

18.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、硬脂酸钾、月桂酰肌氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠和月桂醇聚醚硫酸酯钠中的一种或几种；所述阳离子表面活性剂为十六烷基三甲基氯化铵；所述两性离子表面活性剂为椰油酰胺丙基甜菜碱；所述非离子表面活性剂为癸基葡糖苷或椰油酰胺DEA。

19.根据权利要求16-18任一项所述的应用，其特征在于，所述化妆品为护肤品、洗漱用品或发用产品。

20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述化妆品为面膜、膏霜、乳液、护肤水、洗面奶、洗发水、护发素或沐浴露。

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