CN113004359A - 一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括以下步骤：氨解，包括加氨解试剂，微波加热灯具体操作；纯化，包括乙腈清洗抽滤和超纯水离心洗脱。该方法纯化引物为简单的脱盐纯化，该方法可在1h以内快速的获得可用于常规PCR和测序的寡核苷酸引物，该方法纯化引物为简单的脱盐纯化，通过将合成后的载体与含有铵根离子的试剂充分接触，再在含有氨的环境玻璃饭盒微环境中经微波炉微波加热，使密闭的微环境中的离子经高速运动摩擦而快速加热到高温环境，从而达到对载体上的寡核苷酸的保护基团进行快速氨解脱保护的目的；本发明的优点在于，装置简单易得、操作简单、经济适用；对于大规模基因合成企业具有很大的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物工程用氨解方法技术领域，具体的，涉及一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法。
背景技术
目前国内绝大多数引物氨解主要运用氨水氨解或氨气氨解的方法，这两种方法能够较为彻底的进行寡核苷酸的脱保护工作，但是这两种氨解方法都较为耗时，对于规模化操作的企业来说，研发一种短时高效的方法，是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法。
本发明需要解决的技术问题为：
现有技术中，寡核苷酸的脱保护氨解方法较为耗时，对于规模化操作的企业来说，影响生产效率和经济效益。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括氨解和纯化，具体步骤如下：
第一步、准备以下器材：微波炉、氨解盒、合成板、第一试管、第二试管；
第二步、将合成板离心清洗去除残留试剂，将合成载体平铺于合成板上，然后将第一试管中的氨解试剂倒入合成板中，使氨解试剂与合成载体充分接触；
第三步、将第二试管中的氨解试剂加入氨解盒内部，然后将合成板倒置于支架上，盖上氨解盒盖用橡皮筋加固密封，然后放入微波炉中，启动调档旋钮至最高火位置，加热8-10min后，打开微波炉的箱门，冷却1-3min，再次关闭箱门将微波炉调至最高火，加热2-3min将合成板中的合成载体上的水分蒸干；
第四步、将干燥后的合成板上产物进行纯化、清洗，先将冷却好的合成板放在抽滤槽上，在合成板中加入无水乙腈试剂后打开抽滤开关抽滤；然后将合成板置于新收集板上，加入超纯水后进行离心操作，离心下来的洗脱液即为纯化后的寡核苷酸引物。
进一步地，所述第一试管A中的氨解试剂为正丁胺和3-丁氧基丙胺按照体积比2:1混合而成。
进一步地，所述第二试管B中的氨解试剂为质量分数40％的氨水溶液。
本发明的有益效果：
本发明的整个氨解纯化过程可控制在1小时以内，较之现有的流程，氨解过程就需要花费1小时以上的时间大大提高了生产效率，该发明必将成为基因合成相关企业进行引物合成过程的首选方法，该方法纯化引物为简单的脱盐纯化，该方法可在1h以内快速的获得可用于常规PCR和测序的寡核苷酸引物。对于大规模基因合成企业具有很大的应用价值，通过将合成后的载体与含有铵根离子的试剂充分接触，再在含有氨的环境玻璃饭盒微环境中经微波炉微波加热，使密闭的微环境中的离子经高速运动摩擦而快速加热到高温环境，从而达到对载体上的寡核苷酸的保护基团进行快速氨解脱保护的目的；本发明的优点在于，装置简单易得、操作简单、经济适用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明中微波炉平面图；
图2为本发明中氨解盒直视图；
图3为本发明中合成板示意图；
图4为本发明中第一试管和第二试管的示意图。
附图中，各标号代表如下：
1、微波炉；11、调档旋钮；2、氨解盒；21、氨解盒盖；22、支架；3、合成板；31、合成载体；A、第一试管；B、第二试管。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
请参阅图1-4所示，一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括以下步骤：
第一步、准备以下器材：微波炉1、氨解盒2、合成板3、第一试管A、第二试管B；
第二步、将合成板3离心清洗去除残留试剂，将合成载体31平铺于合成板3上，然后将第一试管A中的氨解试剂倒入合成板3中，使氨解试剂与合成载体31充分接触；
第三步、将第二试管B中的氨解试剂加入氨解盒2内部，然后将合成板3倒置于支架22上，盖上氨解盒盖21用橡皮筋加固密封，然后放入微波炉1中，启动调档旋钮11至最高火位置，加热8min后，打开微波炉1的箱门，冷却1min，再次关闭箱门将微波炉1调至最高火，加热2min将合成板3中的合成载体31上的水分蒸干；
第四步、将干燥后的合成板3上产物进行纯化、清洗，先将冷却好的合成板3放在抽滤槽上，在合成板中加入无水乙腈试剂后打开抽滤开关抽滤；然后将合成板置于新收集板上，加入超纯水后进行离心操作，离心下来的洗脱液即为纯化后的寡核苷酸引物。
其中，所述第一试管A中的氨解试剂为正丁胺和3-丁氧基丙胺按照体积比2:1混合而成。
其中，所述第二试管B中的氨解试剂为质量分数40％的氨水溶液。
实施例2
一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括以下步骤：
第一步、准备以下器材：微波炉1、氨解盒2、合成板3、第一试管A、第二试管B；
第二步、将合成板3离心清洗去除残留试剂，将合成载体31平铺于合成板3上，然后将第一试管A中的氨解试剂倒入合成板3中，使氨解试剂与合成载体31充分接触；
第三步、将第二试管B中的氨解试剂加入氨解盒2内部，然后将合成板3倒置于支架22上，盖上氨解盒盖21用橡皮筋加固密封，然后放入微波炉1中，启动调档旋钮11至最高火位置，加热9min后，打开微波炉1的箱门，冷却2min，再次关闭箱门将微波炉1调至最高火，加热2.5min将合成板3中的合成载体31上的水分蒸干；
第四步、将干燥后的合成板3上产物进行纯化、清洗，先将冷却好的合成板3放在抽滤槽上，在合成板中加入无水乙腈试剂后打开抽滤开关抽滤；然后将合成板置于新收集板上，加入超纯水后进行离心操作，离心下来的洗脱液即为纯化后的寡核苷酸引物。
其中，所述第一试管A中的氨解试剂为正丁胺和3-丁氧基丙胺按照体积比2:1混合而成。
其中，所述第二试管B中的氨解试剂为质量分数40％的氨水溶液。
实施例3
一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括以下步骤：
第一步、准备以下器材：微波炉1、氨解盒2、合成板3、第一试管A、第二试管B；
第二步、将合成板3离心清洗去除残留试剂，将合成载体31平铺于合成板3上，然后将第一试管A中的氨解试剂倒入合成板3中，使氨解试剂与合成载体31充分接触；
第三步、将第二试管B中的氨解试剂加入氨解盒2内部，然后将合成板3倒置于支架22上，盖上氨解盒盖21用橡皮筋加固密封，然后放入微波炉1中，启动调档旋钮11至最高火位置，加热10min后，打开微波炉1的箱门，冷却3min，再次关闭箱门将微波炉1调至最高火，加热3min将合成板3中的合成载体31上的水分蒸干；
第四步、将干燥后的合成板3上产物进行纯化、清洗，先将冷却好的合成板3放在抽滤槽上，在合成板中加入无水乙腈试剂后打开抽滤开关抽滤；然后将合成板置于新收集板上，加入超纯水后进行离心操作，离心下来的洗脱液即为纯化后的寡核苷酸引物。
其中，所述第一试管A中的氨解试剂为正丁胺和3-丁氧基丙胺按照体积比2:1混合而成。
其中，所述第二试管B中的氨解试剂为质量分数40％的氨水溶液。
以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，包括氨解和纯化，其特征在于，具体步骤如下：
第一步、准备以下器材：微波炉(1)、氨解盒(2)、合成板(3)、第一试管(A)、第二试管(B)；
第二步、将合成板(3)离心清洗去除残留试剂，将合成载体(31)平铺于合成板(3)上，然后将第一试管(A)中的氨解试剂倒入合成板(3)中，使氨解试剂与合成载体(31)充分接触；
第三步、将第二试管(B)中的氨解试剂加入氨解盒(2)内部，然后将合成板(3)倒置于支架(22)上，盖上氨解盒盖(21)用橡皮筋加固密封，然后放入微波炉(1)中，启动调档旋钮(11)至最高火位置，加热8-10min后，打开微波炉(1)的箱门，冷却1-3min，再次关闭箱门将微波炉(1)调至最高火，加热2-3min将合成板(3)中的合成载体(31)上的水分蒸干；
第四步、将干燥后的合成板(3)上产物进行纯化、清洗。
2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，其特征在于，第四步中纯化清洗步骤如下：
先将冷却好的合成板(3)放在抽滤槽上，在合成板(3)中加入无水乙腈试剂后打开抽滤开关抽滤；然后将合成板置于新收集板上，加入超纯水后进行离心操作，离心下来的洗脱液即为纯化后的寡核苷酸引物。
3.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，其特征在于，所述第一试管A中的氨解试剂为正丁胺和3-丁氧基丙胺按照体积比2:1混合而成。
4.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法，其特征在于，所述第二试管B中的氨解试剂为质量分数40％的氨水溶液。
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