CN112996566A

CN112996566A - 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的苯并二氢吡喃-4-酮衍生物

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Publication number: CN112996566A
Application number: CN201980074184.7A
Authority: CN
Inventors: 陈冬冬; 冯松; 刘永福; 谭雪菲; 郑嘉旻
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2018-12-14
Filing date: 2019-12-12
Publication date: 2021-06-18
Anticipated expiration: 2039-12-12
Also published as: JP2022514470A; EP3894004A1; WO2020120642A1; CN112996566B; US20220388972A1

Abstract

本发明提供具有通式(I)的化合物，其中R¹至R¹⁰、G₁、G₂、X和m如本文所述，本发明还提供包含所述化合物的组合物以及使用所述化合物治疗乙型肝炎的方法。

Description

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的苯并二氢吡喃-4-酮衍生物

本发明涉及用于治疗和/或预防哺乳动物的HBV感染的有机化合物，特别地涉及用于治疗HBV感染的cccDNA(共价闭合环状DNA)抑制剂。

技术领域

本发明涉及具有药物活性的苯并二氢吡喃-4-酮衍生物、所述衍生物的制备、包含所述衍生物的药物组合物以及所述衍生物作为药物的潜在用途。

本发明涉及式(I)化合物，

其中R¹至R¹⁰、G₁、G₂、X和m如下文所述，或其药用盐。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染是最流行的病毒感染之一，并且是导致慢性肝炎的主要原因。据估计，全世界约有20亿人既往或现在有HBV感染的表现。目前有超过2.5亿人发生HBV慢性感染，因此，发展为肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的风险很高。有数据表明每年约有80万例死亡与HBV感染直接相关(Lozano,R.等人，Lancet(2012),380(9859),2095-2128；Goldstein,S.T.等人，Int J Epidemiol(2005),34(6),1329-1339)。

在世界上许多国家，公民从出生或幼儿期就开始接种乙型肝炎疫苗，在过去的几十年中，这大大降低了乙型肝炎在大多数流行区的发病率和流行率。但是，对于该疫苗广泛普及之前受到感染且发展为终末期肝病或HCC的人，该疫苗没有作用(Chen,D.S.,JHepatol(2009),50(4),805-816)。HBV阳性母亲所生的新生儿在出生时接种疫苗，通常不足以保护新生儿幸免于垂直传播，并且需要结合使用乙型肝炎免疫球蛋白(Li,X.M.等人，World J Gastroenterol(2003),9(7),1501-1503)。

目前，FDA批准的慢性乙型肝炎治疗方法包括两种I型干扰素(IFN)，分别是IFNalfa-2b和聚乙二醇化的IFN alfa-2a，还包括六种核苷(核苷酸)类似物(NA)，分别是拉米夫定(3TC)、富马酸替诺福韦酯(TDF)、阿德福韦(ADV)、替比夫定(LdT)，恩替卡韦(ETV)和vemlidy(替诺福韦艾拉酚胺(TAF))。IFN治疗是有限的，但已知有严重的副作用，只有一小部分患者表现出了持续病毒学应答，以乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的消失来衡量。NA为HBV反转录酶的抑制剂，其显著降低绝大多数所治疗患者的病毒载量，并且改善肝功能且降低肝脏衰竭和肝细胞癌的发病率。然而，NA治疗是无限的(Ahmed,M.等人，Drug Discov Today(2015),20(5),548-561；Zoulim,F.和Locarnini,S.，Gastroenterology(2009),137(5),1593-1608e1591-1592)。

HBV慢性感染是由共价闭合环状(ccc)DNA持续存在而引起的，共价闭合环状(ccc)DNA以游离型存在于肝细胞核中。cccDNA用作病毒性RNA转录和随后的病毒性DNA生成的模板。每个肝细胞只有少量的cccDNA拷贝可以建立或重新启动病毒复制。因此，要完全治愈慢性乙型肝炎，就需要消除cccDNA或使cccDNA永久地沉默。然而，cccDNA本质上非常稳定，当前可用的治疗方法无法消除cccDNA或使cccDNA永久地沉默(Nassal,M.,Gut(2015),64(12),1972-1984；Gish,R.G.等人，Antiviral Res(2015),121,47-58；Levrero,M.等人，JHepatol(2009),51(3),581-592.)。目前的SoC无法消除受感染细胞中已经存在的cccDNA。迫切需要发现和开发新的抗HBV试剂，以消除cccDNA或使其永久地沉默，cccDNA是慢性病的元凶(Ahmed,M.等人，Drug Discov Today(2015),20(5),548-561；Nassal,M.,Gut(2015),64(12),1972-1984)。

发明内容

本发明的目的是式(I)化合物、所述化合物的制备、基于根据本发明化合物的药物及其生产，以及式(I)的化合物作为cccDNA抑制剂的用途和用于HBV感染的治疗或预防的用途。式(I)化合物显示出优异的抗HBV活性。另外，式(I)化合物也显示出良好的PK曲线。

本发明涉及式(I)化合物，

其中

R¹为卤素；

R²选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R³选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁴选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁵选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁶选自OH、羧基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基羰基、羧基羰基氨基和C_1-6烷氧基羰基羰基氨基；

R⁷选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁸选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷氧基和卤代C_1-6烷氧基；

R⁹选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成杂环基环；

R¹⁰选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

G₁选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；其中C_1-6烷基未被取代或被C_1-6烷基磺酰基氨基、C_3-7环烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基氨基或C_1-6烷基氨基磺酰基氨基取代；

X选自O和S；

G₂选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

具体实施方式

定义

如本文所用，术语“C_1-6烷基”，单独或组合地，表示含有1至6个，特别地1至4个碳原子的饱和、直链或支链的烷基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。特别地，“C_1-6烷基”基团为甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和叔丁基。最特别地，“C_1-6烷基”基团为甲基。

术语“C_1-6烷氧基”，单独或组合地，表示基团C_1-6烷基-O-，其中“C_1-6烷基”如上文所定义；例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。特别地，“C_1-6烷氧基”基团为甲氧基和乙氧基。

术语“C_3-7环烷基”表示含有3至7个碳原子，特别地3至6个碳原子的饱和碳环，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。特别地，“C_3-7环烷基”基团为环丁基。

术语“卤素”和“卤代”在本文可以互换使用，表示氟、氯、溴或碘。

术语“卤代C_1-6烷基”表示一种烷基基团，其中该烷基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤素原子取代，特别地是氟原子。卤代C_1-6烷基的实例包括一氯-、二氟-或三氟-甲基、-乙基或-丙基，例如二氟甲基或三氟甲基。

术语“卤代C_1-6烷氧基”表示C_1-6烷氧基基团，其中该C_1-6烷氧基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤素原子取代，特别地是氟原子。卤代C_1-6烷氧基的实例包括一氟-、二氟-或三氟-甲氧基、-乙氧基或-丙氧基，例如三氟甲氧基。

“杂环基”是指具有3至20个环原子的任何单环系、双环系、三环系或螺环系，饱和或不饱和的环系、芳族(杂芳基)或非芳族(例如杂环烷基)环系，其中环原子是碳，并且该环或环系中的至少一个原子是选自氮、硫或氧的杂原子。如果环系统中的任何环原子为杂原子，则无论该环系统与分子其余部分的连接点如何，该系统均为杂环基。在一个实例中，杂环基包括3-11个环原子(“元”)并且包括单环系、双环系，三环系和螺环系，其中环原子是碳，其中该环或环系中的至少一个原子是选自氮、硫或氧的杂原子。在一个实例中，杂环基包括具有1、2、3或4个选自氮、硫或氧的杂原子的3元至7元单环。在另一实例中，杂环基包括具有1、2、3或4个选自氮、硫或氧的杂原子的4元、5元或6元单环。在一个实例中，杂环基包括具有1、2、3、4、5或6个选自氮、硫或氧的杂原子的8元至12元双环。在另一实例中，杂环基包括具有1、2、3、4、5或6个选自氮、硫或氧的杂原子的9元或10元双环。示例性的杂环基是1,3-间二氧杂环戊烯和1,3-二氧戊环呋喃基。

术语“羰基”单独或组合地指的是-C(O)-基团。

术语“磺酰基”单独或组合地指的是-S(O)₂-基团。

根据本发明的化合物可以其药学上可接受的盐的形式存在。术语“药用盐”是指常规的酸加成盐或碱加成盐，其保留式(I)化合物的生物学有效性和特性，并且由合适的无毒有机或无机酸或有机或无机碱形成。酸加成盐包括例如衍生自无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸，以及衍生自有机酸者，诸如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、反丁烯二酸等。碱加成盐包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物者，诸如像是四甲基氢氧化铵。将药物化合物化学修饰成盐是药物化学家熟知的技术，以获得化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性改善。例如，描述于Bastin R.J.,等人.,Organic Process Research&Development 2000,4,427-435。特别是式(I)化合物的钠盐。

含有一个或若干个手性中心的通式(I)化合物可以外消旋体、非对映异构体的混合物或光学活性单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。特别地，可通过结晶分离的非对映体盐是通过与光学活性酸诸如D-酒石酸或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物中形成的。

HBV cccDNA抑制剂

本发明提供(I)具有通式(I)的化合物：

其中

R¹为卤素；

R²选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R³选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁴选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁵选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁷选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁹选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成杂环基环；

X选自O和S；

G₂选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

本发明的进一步实施例是(ii)，其是根据(I)的式(I)化合物，其中

R¹为卤素；

R²选自H、卤素和C_1-6烷氧基；

R³选自H、卤素和C_1-6烷氧基；

R⁴选自H和OH；

R⁵为H；

R⁷选自H；

R⁸选自卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷氧基和卤代C_1-6烷氧基；

R⁹选自H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成5元杂环基环；

R¹⁰为H；

G₁选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；其中C_1-6烷基未被取代或被C_1-6烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基氨基或C_1-6烷基氨基磺酰基氨基取代；

X为O；

G₂选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

本发明的进一步实施例是(iii)，其是根据(I)的式(I)化合物，其中

R¹为Cl；

R²选自H、F和甲氧基；

R³选自H、F和甲氧基；

R⁴选自H和OH；

R⁵为H；

R⁶选自OH、羧基、甲氧基、甲氧基羰基、羧基羰基氨基和乙氧基羰基羰基氨基；

R⁷选自H；

R⁸选自Cl、Br、甲基、CF₃、甲氧基和三氟甲氧基；

R⁹选自H、Br、甲基和甲氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成5元杂环基环；

R¹⁰为H；

G₁选自甲基、乙基、丙基、异丁基和环丁基；其中乙基未被取代或被乙基磺酰基氨基、氨基磺酰基氨基或乙基氨基磺酰基氨基取代；

X为O；

G₂选自甲基和环丁基；

m选自0和1；

或其药用盐。

本发明的进一步实施例是(iv)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中R⁶为羧基。

本发明的进一步实施例是(v)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中R⁸选自卤代C_1-6烷基和卤代C_1-6烷氧基。

本发明的进一步实施例是(vi)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中R⁸选自CF₃和三氟甲氧基。

本发明的进一步实施例是(vii)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中R⁹选自H和C_1-6烷氧基。

本发明的进一步实施例是(viii)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中R⁹选自H和甲氧基。

本发明的进一步实施例是(ix)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中G₁为C_1-6烷基。

本发明的进一步实施例是(x)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中G₁选自乙基和丙基。

本发明的进一步实施例是(xi)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中G₂为C_3-7环烷基；m选自0和1。

本发明的进一步实施例是(xii)，根据(I)的式(I)化合物或其药用盐，其中G₂为环丁基；m选自0和1。

本发明的进一步实施例是(xiii)，根据(I)的式(II)化合物或其药用盐，

其中

R¹为卤素；

R²选自H和卤素；

R³选自H和卤素；

R⁸选自卤代C_1-6烷基和卤代C_1-6烷氧基；

R⁹选自H和C_1-6烷氧基；

G₁为C_1-6烷基；

G₂为C_3-7环烷基；

m选自0和1。

本发明的进一步实施例是(xiv)，根据(I)的式(II)化合物或其药用盐，其中

R¹为Cl；

R²选自H和F；

R³选自H和F；

R⁸选自CF₃和三氟甲氧基；

R⁹选自H和甲氧基；

G₁选自乙基和丙基；

G₂为环丁基；

m选自0和1。

在本发明的另一实施例(xv)中，本发明的特定化合物选自：

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-6-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-7-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-6-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-5-羟基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲氧基-4-甲基-苯氧基]丙酸；

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸；

3-[[6-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基]氧基]丙酸；

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲氧基)苯氧基]丙酸；

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸；

3-[4-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲氧基)苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸；

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]环丁烷甲酸；

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸；

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2,2-二甲基-丙酸；

3-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]环丁烷甲酸；

2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]乙酸；

2-[3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲基-苯氧基]丙氧基]乙酸；

2-[3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙氧基]乙酸；

2-[3-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙氧基]乙酸；

4-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丁酸；

2-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙酸；

(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯；

(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸；

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸；

(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸；

(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸；

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸；

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸；

(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸；

8-氯-7-氟-2-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮；

8-氯-7-氟-2-[2-(3-羟基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮；

8-氯-7-氟-2-[2-(2-羟基乙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮；

2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸乙酯；

2-[2-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸；和

顺式-3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]环丁烷甲酸；

或其药用盐。

在本发明的另一实施例(xvi)中，本发明的特定化合物选自：

3-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]环丁烷甲酸；和

或其药用盐。

合成

本发明的化合物可以通过任何常规方法制备。在以下方案和实施例中提供了合成这些化合物及其原料的合适方法。除非另有说明，否则所有取代基，特别地，R¹至R¹⁰、G₁、G₂、X和m均如上文所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号均具有有机化学领域普通技术人员熟知的含义。

方案1

在合适的溶剂(诸如DMF)中，在合适的碱(诸如NaH)存在下，用氧杂环丁烷-2-酮取代醛衍生物IV，得到式V化合物。在合适的溶剂(诸如乙醇)中，在碱(诸如KOH)存在下，将式V化合物用芳基酮VI进行缩合，得到α,β-不饱和羰基中间体VII。在合适的溶剂(诸如水)中，在合适的碱(诸如哌啶)存在下，环化α,β-不饱和羰基中间体VII，得到式I-1化合物。

方案2

其中Q为卤素、OTs、OTf或OMs；R¹¹为C_1-6烷基。

在合适的溶剂(诸如DMF)中，在合适的碱(诸如K₂CO₃)存在下，用式VIII化合物取代醛衍生物IV，得到式IX化合物。在合适的溶剂(诸如乙醇)中，在碱(诸如KOH)存在下，用芳基酮VI与式IX化合物进行缩合，得到α,β-不饱和羰基中间体X。在合适的溶剂(诸如水)中，在合适的碱(诸如哌啶)存在下，环化α,β-不饱和羰基中间体X，得到式I-2化合物。

方案3

其中Q为卤素、OTs、OTf或Oms。

在合适的溶剂(诸如DMF)中，在合适的碱(诸如K₂CO₃)存在下，用式XI化合物取代醛衍生物IV，得到式XII。在合适的溶剂(诸如乙醇)中，在碱(诸如KOH)存在下，用酮VI与式XII化合物进行缩合，得到α,β-不饱和羰基中间体XIII。在合适的溶剂(诸如水)中，在合适的碱(诸如哌啶)存在下，环化α,β-不饱和羰基中间体XIII，得到式I-3化合物。

方案4

其中PG为三苯基甲基；R¹²为C_1-6烷基磺酰基、氨基磺酰基或C_1-6烷基氨基磺酰基。

在合适的溶剂(诸如THF)中，在合适的碱(诸如NaH)存在下，用溴(甲氧基)甲烷保护式IV化合物的羟基基团，得到式XIV化合物。在合适的溶剂(诸如乙醇)中，在合适的碱(诸如KOH)存在下，用式VI化合物与式XIV化合物进行缩合，得到α,β-不饱和羰基中间体XV。在合适的溶剂(诸如MeOH)中，在合适的碱(诸如哌啶)存在下，环化α,β-不饱和羰基中间体XV，得到式XVI化合物。在合适的溶剂(诸如DCM)中，用合适的酸(诸如TFA)对式XVI化合物进行脱保护，得到式XVII化合物。在Mitsunobu反应条件下，用中间体XX与式XVII化合物进行缩合，得到式XVIII化合物。在合适的溶剂(诸如DCM)中，用合适的酸(诸如TFA)对式XVIII化合物进行脱保护，得到式XIX化合物。在合适的溶剂(诸如DCM)中，在合适的碱(诸如TEA)存在下，用式XXI化合物处理式XIX化合物，得到式I-4化合物。在合适的溶剂(诸如DCE)中，用合适的碱(诸如三甲基锡醇(trimethylstannanol))水解式I-4化合物，得到式I-5化合物。

本发明还涉及用于制备式(I)化合物的方法，该方法包括以下步骤中的至少一个：

(a)将α,β-不饱和羰基中间体(XIII)，

在碱的存在下环化；

(b)将式(XIX)化合物，

用式(XXI)化合物，

在碱的存在下进行处理；

(c)将式(I-4)化合物，

在碱的存在下水解；

其中R¹至R¹⁰、G₁、G₂和m如上文所定义；R¹²为C_1-6烷基磺酰基、氨基磺酰基或C_1-6烷基氨基磺酰基。

步骤(a)中的碱可以是例如哌啶；

步骤(b)中的碱可以是例如TEA；

步骤(c)中的碱可以是例如三甲基锡醇(trimethylstannanol)。

根据上述方法制备的式(I)或式(II)化合物也是本发明的目的。

本发明的化合物还显示出良好的安全性和PK曲线。

药物组合物和施用

本发明还涉及用作治疗活性物质的式(I)或式(II)化合物。另一实施例提供含有本发明的化合物和治疗惰性载体、稀释剂或赋形剂，还提供使用本发明的化合物制备此类组合物和药物的方法。在一个实例中，式(I)或式(II)化合物可通过在环境温度下，以适当的pH值和期望的纯度，与生理学上可接受的载体(即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的载体)混合而配制为盖伦制剂(galenical)施用形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但是优选在约3至约8的范围内。在一个实例中，将本发明的式(I)或式(II)化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中进行配制。在另一实施例中，式(I)或式(II)化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。

以与良好医学实践一致的方式配制、计量和施用组合物。在这种情况下需要考虑的因素包括正在治疗的特定病症、正在治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病况、病症的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。所要施用的化合物的“有效量”将取决于此类考虑因素，并且是抑制HBV患者体内的cccDNA所需的最小量，因此可导致血清中HBsAg和HBeAg(HBV e抗原)减少。例如，该量可以低于对正常细胞或哺乳动物整体有毒的量。

在一个实例中，肠胃外施用的本发明化合物的每剂药学有效量将在约0.1至100mg/kg的范围内，替代地每天约0.1至50mg/kg患者体重，使用的化合物的典型初始范围是0.3至15mg/kg/天。在另一个实施例中，口服单位剂型诸如片和胶囊优选含有约25至约1000mg的本发明化合物。

本发明的化合物可通过任何适宜的方式施用，包括口服、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道、经皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外和鼻内，以及(如果需要用于局部治疗)病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。

本发明化合物可以任何方便的施用形式施用，例如，片剂、粉剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等。此类组合物可以包含药物制剂中常规的组分，例如，稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。

通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂来制备典型的制剂。适合的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的，并且在例如Ansel,Howard C.等人，Ansel’sPharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams和Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人Remington:The Science and Practice ofPharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；以及Rowe,RaymondC.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中有详细描述。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、加香剂、调味剂、稀释剂和其他已知的添加剂，以提供美观的药物(例如，本发明的化合物或其药物组合物)展示或有助于药物产品(例如，药物)的制备。

合适的口服制剂的实例是含有以下成分的片剂：约25至500mg本发明的化合物，加上约90至30mg无水乳糖、约5至40mg交联羧甲基纤维素钠、约5至30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1至10mg硬脂酸镁。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP溶液混合。所得组合物可使用传统设备干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并压制成片形式。气雾剂制剂的一个实例可通过如下方法来制备：将本发明的化合物(例如5至400mg)溶解在合适的缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲液)中，如果需要的话，添加张度剂(tonicifier)(例如诸如氯化钠的盐)。可以例如使用0.2微米的过滤器过滤溶液，以除去杂质和污染物。

因此，一个实施例包括药物组合物，该药物组合物包含：式(I)或式(II)化合物、或其药用盐、或对映异构体、或非对映异构体。

在进一步的实施例中，包括药物组合物，该药物组合物包含：式(I)或式(II)化合物、或其药用盐、或对映异构体、或非对映异构体，以及药用载体或赋形剂。

另一实施例包括用于治疗HBV感染的药物组合物，该药物组合物包含：式(I)或式(II)化合物、或其药用盐、或对映异构体、或非对映异构体。

适应症和治疗方法

本发明的化合物可以抑制cccDNA并具有抗HBV活性。因此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。

本发明涉及式(I)或式(II)化合物用于抑制cccDNA的用途。

本发明还涉及式(I)或式(II)化合物用于抑制HBeAg的用途。

本发明进一步涉及式(I)或式(II)化合物用于抑制HBsAg的用途。

本发明涉及式(I)或式(II)化合物用于抑制HBVDNA的用途。

本发明涉及式(I)或式(II)化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。

式(I)或式(II)化合物用于制备治疗或预防与HBV相关的疾病的药物的用途，是本发明的一个目的。

本发明特别地涉及式(I)或式(II)化合物用于制备治疗或预防HBV感染的药物的用途。

另一实施例包括用于治疗或预防HBV感染的方法，其中，该方法包括施用有效量的式(I)或式(II)化合物、或其对映异构体、非对映异构体、前药或药用盐。

实例

参照以下实例将更充分地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。

本文使用的缩写如下：

ACN：乙腈

BBr3：三溴化硼

DMAP： 4-二甲基氨基吡啶

DMF： N,N-二甲基甲酰胺

IC50：抑制剂的摩尔浓度，该摩尔浓度对该抑制剂产生50％的最大可能应答。

FBS：胎牛血清

HPLC：高效液相色谱法

MS(ESI)：质谱法(电喷雾电离)

Ms：甲基磺酰基

obsd.：观察到的

PE：石油醚

EtOAc：乙酸乙酯

AcOH：乙酸

THF：四氢呋喃

TFA：三氟乙酸

DIPEA： N,N-二异丙基乙胺

DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯

Ts：对甲苯磺酰基

δ：化学位移

一般实验条件

使用以下一种仪器，通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge模块，ii)硅胶combi-flash色谱仪采用柱色谱法。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL

粒径：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒径：47-60微米硅胶；iii)ZCX来自Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd，孔：200-300或300-400。

用X Bridge^TM Perp C₁₈(5μm，OBD^TM 30×100mm)柱或SunFire^TM Perp C₁₈(5μm，OBD^TM 30×100mm)柱，在反相柱上通过制备型HPLC纯化中间体和最终化合物。

用Waters UPLC-SQD Mass获得LC/MS光谱。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：

酸性条件：A：0.1％甲酸和1％乙腈的水溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；碱性条件：A：0.05％NH₃·H₂O的水溶液；B：乙腈。

质谱(MS)：通常仅报告表示母体质量的离子，并且除非另有说明，否则所引用的质量离子为正质量离子(M+H)⁺。

使用Bruker Avance 400MHz获得NMR谱。

所有涉及对空气敏感的试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，否则试剂按从商业供应商获得的原样使用，未经进一步纯化。

制备实例

实例1

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

向NaOH(315mg，7.9mmol)在水(10mL)中的溶液中添加3-溴丙酸(1.27g，7.9mmol)，然后在室温下，将混合物搅拌30分钟。在100℃，将所得混合物逐滴地添加到2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛(1500mg，7.9mmol)与NaOH(315mg，7.9mmol)在水(10mL)中的溶液的混合物中；然后在100℃，将混合物再搅拌30分钟。反应完成后，将混合物用水(30mL)稀释，并通过添加1N盐酸将混合物的pH调节至约为2。将所得溶液用EtOAc(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤两次，经Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝3:1洗脱剂进行洗脱)，以得到白色固体状的3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(600mg，产率29％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：263.1。

步骤2：制备3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

向3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(200.0mg，0.76mmol)和1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮(130.0mg，0.76mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中添加KOH(428.0mg，7.6mmol)。在35℃，将该混合物搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物用水(50mL)稀释，并通过添加1N盐酸将反应混合物的pH调节至约为1.0。将所得悬浮液过滤。收集滤饼并在真空中干燥，以得到3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸的黄色固体状粗产物(210.0mg，63.7％产率)，其直接用于下一步。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：415.0。

步骤3：制备3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

向3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(120.0mg，0.290mmol)在水(3mL)中的溶液中，添加氢氧化钾(32.47mg，0.580mmol)和哌啶(0.74mg，0.010mmol)。然后，将混合物在25℃搅拌2小时。反应完成后，将混合物用水(30mL)稀释，并通过添加1N盐酸将混合物的pH调节至约为2。然后，将所得混合物用EtOAc(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，然后在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到黄色固体状的3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(33.8mg，产率28.11％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δppm12.39(s,1H)，7.75–7.85(m,3H)，7.48(d,J＝7.9Hz,1H)，7.44(s,1H)，7.14(t,J＝7.8Hz,1H)，5.93(d,J＝10.8Hz,1H)，4.34(dtd,J＝15.3,9.9,5.8Hz,2H)，3.19(dd,J＝16.9,13.3Hz,1H)，2.89(dd,J＝16.9,2.7Hz,1H)，2.73(t,J＝5.7Hz,2H)。MS观察值(ESI+)[(M+H)+]：415.1。

实例2

3-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备(2-氯-3-氟-苯基)乙酸酯

在0℃，向2-氯-3-氟-苯酚(10.0g，68.9mmol)与TEA(7.6g，75.06mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液的混合物中添加乙酰氯(5.36g，68.24mmol)；然后，将混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，将混合物倒入水(30mL)中，并且用二氯甲烷(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。然后，通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝50:1～20:1洗脱剂进行洗脱)，以得到无色油状的(2-氯-3-氟-苯基)乙酸酯(10.0g，产率77.2％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：188.1。

步骤2：制备1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮

将(2-氯-3-氟-苯基)乙酸酯(10.0g，53.1mmol)与AlCl₃(7.07g，53.03mmol)的混合物在150℃搅拌5小时。反应完成后，将混合物倒入水(100mL)中，并且用EtOAc(250mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。然后，通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝50:1～20:1洗脱剂进行洗脱)，以得到白色固体状的1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮(3.0g，产率30.0％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：188.2。

步骤3：制备3-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

实例2的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤2中，用1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.43(s,1H)，7.76–7.90(m,2H)，7.48(d,J＝8.1Hz,1H)，7.45(s,1H)，7.22(t,J＝8.8Hz,1H)，6.00(dd,J＝13.2,2.7Hz,1H)，4.19–4.46(m,2H)，3.20(dd,J＝16.9,13.2Hz,1H)，2.89(dd,J＝16.9,2.9Hz,1H)，2.72(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：433.0。

实例3

3-[2-(8-氯-6-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备1-(3-氯-5-氟-2-羟基-苯基)乙酮

化合物3a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物2b的程序，但在步骤1中，用2-氯-4-氟-苯酚代替2-氯-3-氟-苯酚作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：188.1。

步骤2：制备3-[2-(8-氯-6-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

实例3的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤2中，用1-(3-氯-5-氟-2-羟基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.47(s,1H)，7.72-7.98(m,2H)，7.34-7.58(m,3H)，5.94(dd,J＝13.3,2.6Hz,1H)，4.26-4.41(m,2H)，3.20(dd,J＝17.0,13.4Hz,1H)，2.92(dd,J＝17.0,2.9Hz,1H)，2.72(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：433.0。

实例4

3-[2-(8-氯-7-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备1-(3-氯-2-羟基-4-甲氧基-苯基)乙酮

化合物4a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物2b的程序，但在步骤1中，用2-氯-3-甲氧基-苯酚代替2-氯-3-氟-苯酚作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：200.2。

步骤2：制备3-[2-(8-氯-7-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

实例4的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤2中，用1-(3-氯-2-羟基-4-甲氧基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.44(s,1H)，7.80(d,J＝8.9Hz,1H)，7.47(d,J＝8.2Hz,2H)，7.43(s,1H)，7.00(d,J＝9.0Hz,1H)，5.88(dd,J＝12.8,2.8Hz,1H)，4.17–4.49(m,2H)，3.95(s,3H)，3.08(dd,J＝16.9,12.9Hz,1H)，2.84(dd,J＝16.9,3.0Hz,1H)，2.72(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：445.0。

实例5

3-[2-(8-氯-6-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备1-(3-氯-2-羟基-5-甲氧基-苯基)乙酮

化合物5a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物2b的程序，但在步骤1中，用2-氯-4-甲氧基-苯酚代替2-氯-3-氟-苯酚作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：200.2。

步骤2：制备3-[2-(8-氯-6-甲氧基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

实例5的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤2中，用1-(3-氯-2-羟基-5-甲氧基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.43(s,1H)，7.80(d,J＝8.0Hz,1H)，7.45–7.49(m,2H)，7.43(s,1H)，7.23(d,J＝3.1Hz,1H)，5.84(dd,J＝13.2,2.6Hz,1H)，4.26–4.41(m,2H)，3.80(s,3H)，3.14(dd,J＝17.0,13.2Hz,1H)，2.89(dd,J＝17.0,2.9Hz,1H)，2.72(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：445.1。

实例6

3-[2-(8-氯-5-羟基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备1-(3-氯-2,6-二羟基-苯基)乙酮

将1-(2,6-二羟基苯基)乙-1-酮(5.0g，32.9mmol)、1-氯吡咯烷-2,5-二酮(5.27g，39.4mmol)在乙酸(25mL)中的溶液的混合物在50℃搅拌2小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，将残余物用EtOAc(15mL)研制，然后过滤悬浮液。在真空中浓缩滤液，通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝100:1至3:1的洗脱剂进行洗脱)，以得到黄色固体状的1-(3-氯-2,6-二羟基-苯基)乙酮(5.0g，产率81.5％)。

步骤2：制备1-[3-氯-6-羟基-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙烯酮

向1-(3-氯-2,6-二羟基-苯基)乙酮(920.0mg，4.93mmol)在DMF(15mL)中的溶液中，添加4-甲氧基氯化苄(0.67mL，4.93mmol)和K₂CO₃(681.46mg，4.93mmol)。将反应混合物在20℃搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到淡黄色固体状的1-[3-氯-6-羟基-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙酮(720mg，产率47.61％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：329.0。

步骤3：制备1-[3-氯-6-(甲氧基甲氧基)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙烯酮

向1-[3-氯-6-羟基-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙酮(700.0mg，2.28mmol)在THF(10mL)中的溶液中，添加NaH(82.15mg，3.42mmol)和溴甲基甲醚(427.7mg，3.42mmol)。将反应混合物在0℃搅拌0.5小时。将混合物倒入水(10mL)中，然后，用EtOAc(20mL)将所得混合物萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到无色油状的1-[3-氯-6-(甲氧基甲氧基)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙酮(700mg，产率87.44％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：373.1。

步骤4：制备1-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]乙烯酮

向1-[3-氯-6-(甲氧基甲氧基)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]苯基]乙酮(500.0mg，1.43mmol)在DCM(15mL)和水(1.5mL)中的溶液中，添加4,5-二氯-3,6-二羟基-邻苯二甲腈(685.51mg，2.99mmol)。将反应物在25℃搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过制备型HPLC纯化残余物，以得到黄色固体状的1-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酮(322mg，产率97.95％)。

步骤5：制备3-[2-[(E)-3-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

向3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(242.85mg，0.930mmol)和1-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]乙酮(235.0mg，1.02mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中，添加NaOH(370.51mg，9.26mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。反应完成后，通过添加1N盐酸，将反应混合物的pH调节至约为6。将所得悬浮液过滤，收集固体并在真空中干燥，以得到黄色固体状的3-[2-[(E)-3-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(160mg，0.340mmol)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)^+]：497.1。

步骤6：制备3-[2-[8-氯-5-(甲氧基甲氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

在90℃，将3-[2-[(E)-3-[3-氯-2-羟基-6-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(100.0mg，0.210mmol)和吡啶(10.0mL，123.64mmol)在甲醇(10mL)与水(10mL)的混合溶剂中的溶液搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩反应混合物，以得到3-[2-[8-氯-5-(甲氧基甲氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸的黄色固体状粗产物(80mg，产率80％)，其不经进一步纯化直接用于下一步。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：497.0。

步骤7：制备3-[2-(8-氯-5-羟基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

向3-[2-[8-氯-5-(甲氧基甲氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(50.0mg，0.110mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL，25.96mmol)，然后在室温下，将混合物搅拌3小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到白色固体状的3-[2-(8-氯-5-羟基-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸(12mg，产率25.93％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δppm 12.48(s,1H)，11.68(s,1H)，7.79(d,J＝8.1Hz,1H)，7.62–7.69(m,1H)，7.42–7.51(m,2H)，6.61(d,J＝8.9Hz,1H)，5.96(dd,J＝13.2,2.7Hz,1H)，4.22–4.47(m,2H)，3.28(s,1H),2.94(dd,J＝17.2,3.0Hz,1H)，2.74(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：431.0。

实例7

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸

步骤1：制备4-溴-2-羟基-5-甲基-苯甲醛

向3-溴-4-甲基-苯酚(10.0g，53.4mmol)在ACN(200mL)中的溶液中，添加甲醛(8.42g，280.54mmol)、TEA(39.1mL，280.5mmol)和氯化镁(27.0mL，210.4mmol)，然后在80℃，将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物用1M盐酸(500mL)淬灭，并且用EtOAc(150mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩，以得到4-溴-2-羟基-5-甲基-苯甲醛的棕色油状粗产物(10.3g，产率87.9％)，其不经进一步纯化直接用于下一步。

步骤2：制备3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸

实例7的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用4-溴-2-羟基-5-甲基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.38(s,1H)，7.77(ddd,J＝7.7,5.7,1.6Hz,2H)，7.56(s,1H)，7.36(s,1H)，7.12(t,J＝7.8Hz,1H)，5.80(dd,J＝13.6,2.6Hz,1H)，4.16-4.29(m,2H)，3.23(dd,J＝16.9,13.5Hz,1H)，2.78(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，2.66(t,J＝6.0Hz,2H)，2.31(s,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：439.0。

实例8

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸

步骤1：制备4-溴-2-羟基-5-甲氧基-苯甲醛

化合物8a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用3-溴-4-甲氧基-苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸

实例8的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用4-溴-2-羟基-5-甲氧基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz):δppm 12.36(s,1H)，7.78(ddd,J＝7.8,5.9,1.6Hz,2H)，7.41(s,1H)，7.36(s,1H)，7.13(t,J＝7.8Hz,1H)，5.86(dd,J＝13.6,2.6Hz,1H)，4.13-4.25(m,2H)，3.83(s,3H)，3.36(d,J＝13.6Hz,1H)，2.79(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，2.65(t,J＝5.9Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：455.0。

实例9

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲氧基-4-甲基-苯氧基]丙酸

步骤1：制备2-羟基-4-甲氧基-5-甲基-苯甲醛

化合物9a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用3-甲氧基-4-甲基-苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲氧基-4-甲基-苯氧基]丙酸

实例9的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用2-羟基-4-甲氧基-5-甲基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.76(d,J＝7.8Hz,2H)，7.32(s,1H)，7.10(t,J＝7.8Hz,1H)，6.69-6.75(m,1H)，5.72-5.83(m,1H)，4.19-4.30(m,2H)，3.85(s,3H)，2.61-2.75(m,4H)，2.11(s,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：391.0。

实例10

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸

步骤1：制备4-氯-2-羟基-5-甲氧基-苯甲醛

化合物10a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用3-溴-4-甲氧基-苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-苯氧基]丙酸

实例10的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用4-氯-2-羟基-5-甲氧基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.37(s,1H)，7.78(ddd,J＝7.7,5.8,1.6Hz,2H)，7.39(s,1H)，7.29(s,1H)，7.13(t,J＝7.8Hz,1H)，5.87(dd,J＝13.6,2.7Hz,1H)，4.05–4.31(m,2H)，3.84(s,3H),3.34(s,1H),2.79(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，2.66(d,J＝5.9Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：411.0。

实例11

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备2-羟基-5-甲氧基-4-(三氟甲基)苯甲醛

化合物11a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲氧基-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸

实例11的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用2-羟基-5-甲氧基-4-(三氟甲基)苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.37(s,1H)，7.68-7.85(m,2H)，7.56(s,1H)，7.36(s,1H)，7.18-7.10(m,1H)，5.77-5.86(m,1H)，4.17-4.33(m,2H)，3.23(dd,J＝16.9,13.5Hz,1H)，2.78(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，2.60-2.72(m,2H)，2.33(s,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：445.0。

实例12

3-[[6-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基]氧基]丙酸

实例12的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用6-羟基-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.47(s,1H)，7.76(d,J＝7.7Hz,2H)，7.15(s,1H)，7.11(t,J＝7.8Hz,1H)，6.92(s,1H)，6.03(d,J＝4.8Hz,2H)，5.82(dd,J＝13.7,2.4Hz,1H)，4.16(dd,J＝11.7,6.0Hz,2H)，3.27(s,1H)，2.69(dd,J＝16.8,2.5Hz,1H)，2.62(t,J＝5.9Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：391.0。

实例13

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲氧基)苯氧基]丙酸

实例13的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用2-羟基-4-(三氟甲氧基)苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.45(s,1H)，7.78(dd,J＝7.4,6.1Hz,2H)，7.70(d,J＝8.5Hz,1H)，7.08-7.19(m,3H)，5.86(dd,J＝13.3,2.5Hz,1H)，4.27(ddd,J＝15.4,9.7,3.8Hz,2H)，3.18-3.24(m,1H)，2.85(dd,J＝16.9,2.7Hz,1H)，2.70(t,J＝5.8Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：431.0。

实例14

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸

步骤1：制备4-氯-2-羟基-5-甲基-苯甲醛

化合物14a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用3-氯-4-甲基-苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]丙酸

实例14的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用4-氯-2-羟基-5-甲基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.76-7.79(m,2H)，7.55(s,1H)，7.22(s,1H)，7.12(t,J＝7.8Hz,1H)，5.81(dd,J＝13.5,2.3Hz,1H)，4.17-4.28(m,2H)，3.20-3.27(m,1H)，2.78(dd,J＝16.9,2.6Hz,1H)，2.67(t,J＝5.8Hz,2H)，2.31(s,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：395.0。

实例15

3-[4-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲氧基)苯氧基]丙酸

步骤1：制备5-溴-2-羟基-4-(三氟甲氧基)苯甲醛

化合物15a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物7a的程序，但使用4-溴-3-(三氟甲氧基)苯酚代替3-溴-4-甲基-苯酚作为起始物质。

步骤2：制备3-[4-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲氧基)苯氧基]丙酸

实例15的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的方法，但在步骤1中，用5-溴-2-羟基-4-(三氟甲氧基)苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.45(s,1H)，7.73-7.86(m,2H)，7.69(s,1H)，7.60(s,1H)，7.14(t,J＝7.8Hz,1H)，5.86(dd,J＝13.2,2.4Hz,1H)，4.22-4.38(m,2H)，3.14-3.24(m,1H)，2.88(dd,J＝16.9,2.7Hz,1H)，2.71(t,J＝5.7Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：509.0。

实例16

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]丙酸

实例16的制备方法类似于所描述的用于制备实例1的程序，但在步骤1中，用4-溴-2-羟基-苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：425.0。

实例16-A和实例16-B

3-[5-溴-2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸和3-[5-溴-2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸

将3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]丙酸(250.0mg，0.590mmol)通过手性制备型-HPLC(仪器：Waters Acquity UPCC；色谱柱：DaicelCHIRALPAK IG_3，3.0*150mm，3um；流动相：CO₂/ETOH＝85/15；流速：2.0ml/min；柱温：37度)进行纯化，以得到具有(+)和(-)构型的3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]丙酸的2个对映异构体，其为白色固体。(+)构型表征为实例16-A(80mg，产率32.1％)，并且(-)构型表征为实例16-B(84mg，产率33.6％)。

实例16-A：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.36(s,1H)，7.77(td,J＝7.9,1.6Hz,2H)，7.52(d,J＝8.2Hz,1H)，7.35(d,J＝1.8Hz,1H)，7.30(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H)，7.12(t,J＝7.8Hz,1H)，5.82(dd,J＝13.2,2.7Hz,1H)，4.19-4.34(m,2H)，3.19(dd,J＝16.9,13.2Hz,1H)，2.83(dd,J＝16.9,2.9Hz,1H)，2.66-2.74(m,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：424.9。

实例16-B：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.36(s,1H)，7.77(td,J＝7.8,1.6Hz,2H)，7.52(d,J＝8.2Hz,1H)，7.24-7.41(m,2H)，7.12(t,J＝7.8Hz,1H)，5.82(dd,J＝13.2,2.7Hz,1H)，4.19-4.34(m,2H)，3.19(dd,J＝16.9,13.2Hz,1H)，2.83(dd,J＝16.9,2.9Hz,1H)，2.70(t,J＝5.9Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：424.9。

实例17

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸

步骤1：制备3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸甲酯

向2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛(4.5g，23.7mmol)与3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯(5.28g，35.5mmol)在DMF(10mL)中的溶液的混合物中，添加Cs₂CO₃(15.4g，47.3mmol)，然后，将混合物在90℃搅拌过夜。反应完成后，用水(30mL)稀释混合物，然后，用EtOAc(50mL)将所得混合物萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到黄色固体状的3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸甲酯(5.0g，产率69.9％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：303.1。

步骤2：制备3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸

将KOH(6.57g，99.3mmol)、3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸甲酯(5g，16.5mmol)和1-(3-氯-2-羟基苯基)乙-1-酮(2.81g，16.5mmol)在EtOH(30mL)中的溶液的混合物在80℃搅拌过夜。反应完成后，将反应混合物用水(20mL)稀释，并通过添加1N盐酸将混合物的pH调节至约为2。将所得悬浮液用EtOAc(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝10:1至2:1的洗脱剂进行洗脱)，以得到黄色油状的3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸(2g，产率27.4％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：441.1。

步骤3：制备3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸

向3-[2-[(E)-3-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-氧代-丙-1-烯基]-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸(1.5g，3.4mmol)在MeOH(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加吡啶(10mL)，然后，将混合物在100℃搅拌13小时。反应完成后，将混合物用水(30mL)稀释，并通过添加1N盐酸将混合物的pH调节至约为2。将所得混合物用EtOAc(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。然后，通过制备型HPLC纯化残余物，以得到淡黄色固体状的3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸(400mg，产率25.3％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm7.73-7.88(m,3H)，7.41-7.52(m,1H)，7.07-7.24(m,2H)，5.96-6.12(m,1H)，4.83-5.12(m,1H)，3.18-3.30(m,1H)，3.05-3.15(m,1H)，2.85-2.99(m,1H)，2.58-2.80(m,2H)，2.28-2.44(m,1H)，2.12-2.28(m,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：441.1。

实例18

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]环丁烷甲酸

实例18的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但在步骤1中，用4-氯-2-羟基-5-甲基苯甲醛代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.77(d,J＝7.83Hz,2H)，7.54-7.59(m,1H)，7.09-7.16(m,1H)，6.97-7.05(m,1H)，5.86-5.94(m,1H)，4.68-5.01(m,1H)，3.23-3.29(m,1H)，2.78-2.85(m,1H)，2.57-2.77(m,3H)，2.30(s,3H)，2.10-2.24(m,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：421.1。

实例19

3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2,2-二甲基-丙酸

实例19的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的方法，但在步骤1中，用3-氯-2,2-二甲基-丙酸甲酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.36-12.55(m,1H)，7.70-7.86(m,3H)，7.38-7.53(m,2H)，7.10-7.21(m,1H)，5.82-5.94(m,1H)，4.03-4.23(m,2H)，3.17-3.27(m,1H)，2.83-2.94(m,1H)，1.21(s,6H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：443.1。

实例20

3-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]环丁烷甲酸

步骤1：制备2-苄氧基乙氧基(三甲基)硅烷

向2-苄氧基乙醇(20.0g，131.4mmol)和TEA(20.0g，197.1mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液(在0℃冷却)中添加三甲基氯硅烷(17.1g，157.7mmol)，然后，将混合物在25℃搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝50:1至10:1的洗脱剂进行洗脱)，以得到无色油状的2-苄氧基乙氧基(三甲基)硅烷(25.0g，84.9％)。

步骤2：制备3-(2-苄氧基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯

向2-苄氧基乙氧基(三甲基)硅烷(25.0g，111.4mmol)和3-氧代环丁烷甲酸甲酯(CAS#：4934-99-0；Cat.#：PB01390，来自PharmaBlock(NanJing)R&DCo.Ltd；15.0g，117.0mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中，在-78℃逐滴地添加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(12.4g，55.7mmol)。添加之后，将混合物在-78℃再搅拌1小时，然后，向所得混合物中添加三乙基硅烷(14.25g，122.57mmol)。添加之后，将所得混合物温热至室温，然后再搅拌1小时。反应完成后，将混合物用饱和NH₄Cl溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE/EtOAc＝100:1～50:1洗脱剂进行洗脱)，以得到无色油状的3-(2-苄氧基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯(28g，95.1％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：265.1。

步骤3：制备3-(2-羟基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯

在室温下，向3-(2-苄氧基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯(28.0g，105.9mmol)在MeOH(300.0mL)中的溶液中添加Pd(OH)₂(湿)(1.48g，10.6mmol)，然后，在室温下，于H₂气氛下将混合物加氢过夜。反应完成后，通过硅胶垫过滤反应混合物，然后在真空中浓缩滤液，以得到18g的3-(2-羟基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯粗产物(18g，97.6％)，其为无色油状物。

步骤4：制备3-[2-(对-甲苯基磺酰氧基)乙氧基]环丁烷甲酸甲酯

在室温下，向3-(2-羟基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯(5g，28.7mmol)和DMAP(5.26g，43.1mmol)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中添加4-甲苯-1-磺酰氯(6.02g，31.6mmol)，然后，在室温下将混合物搅拌过夜。反应完成后，用1N盐酸(25mL)、水(15mL)、饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤混合物，然后在真空中浓缩，以得到3-[2-(对-甲苯基磺酰氧基)乙氧基]环丁烷甲酸甲酯的无色油状粗产物(8.1g，85.6％)，其不经进一步纯化直接用于下一步。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：329.2。

步骤5：制备3-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]环丁烷甲酸

实例20的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但在步骤1中，用3-[2-(对-甲苯基磺酰氧基)乙氧基]环丁烷甲酸甲酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.03-12.24(m,1H)，7.72-7.86(m,3H)，7.41-7.52(m,2H)，7.09-7.19(m,1H)，5.93-6.05(m,1H)，4.22-4.35(m,2H)，3.85-4.17(m,1H)，3.57-3.70(m,2H)，3.17-3.29(m,1H)，2.95-3.10(m,1H)，2.75-2.92(m,1H)，2.26-2.43(m,2H)，2.00-2.14(m,1H)，1.82-1.99(m,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：485.1。

实例21

2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]乙酸

步骤1：制备2-(2-苄氧基乙氧基)乙酸甲酯

在30℃，向NaOH(10M，300.0mL)、2-溴乙酸甲酯(23.5g，155.6mmol)与四丁基碘化铵(8.8g，24.06mmol)在DCM(300mL)中的溶液的混合物中，添加2-苄氧基乙醇(12.99mL,123.32mmol)，然后在30℃，将混合物在搅拌72小时。反应完成后，分离出有机相，并且用DCM(150mL)将水相萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝3:1洗脱剂进行洗脱)，以得到无色液体状的2-(2-苄氧基乙氧基)乙酸甲酯(21.3g，产率78.9％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：225.2。

步骤2：制备2-[2-(对-甲苯基磺酰氧基)乙氧基]乙酸甲酯

化合物21b的制备方法类似于所描述的用于制备化合物20d的程序，但在步骤2中，用2-(2-苄氧基乙氧基)乙酸甲酯代替3-(2-苄氧基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：289.1

步骤3：制备2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙氧基]乙酸

实例21的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但在步骤1中，用2-[2-(对-甲苯基磺酰氧基)乙氧基]乙酸甲酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.75-7.86(m,3H)，7.40-7.52(m,2H)，7.05-7.20(m,1H)，5.94-6.07(m,1H)，4.24-4.38(m,2H)，4.04-4.09(m,2H)，3.76-3.88(m,2H)，3.12-3.27(m,1H)，2.94-3.04(m,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：445.1。

实例22

2-[3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲基-苯氧基]丙氧基]乙酸

步骤1：制备2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙酸叔丁酯

在30℃，向NaOH(10M，300.0mL)、2-溴乙酸叔丁酯(23.5g，120.3mmol)与四丁基碘化铵(8.8g，24.06mmol)在DCM(300mL)中的溶液的混合物中，添加3-苄氧基丙-1-醇(12.99mL，120.32mmol)，然后，将混合物搅拌72小时。反应完成后，分离出有机相，并且用DCM(150mL)将水相萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝3:1洗脱剂进行洗脱)，以得到无色液体状的2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙酸叔丁酯(21.3g，产率63.3％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：303.2。

步骤2：制备2-[3-(对-甲苯基磺酰氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯

化合物22b的制备方法类似于所描述的用于制备化合物20d的程序，但在步骤2中，用2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙酸叔丁酯代替3-(2-苄氧基乙氧基)环丁烷甲酸甲酯作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：345.0。

步骤3：制备2-[3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-甲基-苯氧基]丙氧基]乙酸

实例22的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但在步骤1中，用2-羟基-4-甲基-苯甲醛和2-[3-(对-甲苯基磺酰氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯代替2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛和3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm7.71-7.82(m,2H)，7.38-7.48(m,1H)，7.06-7.15(m,1H)，6.81-6.97(m,2H)，5.79-5.98(m,1H)，4.06-4.14(m,2H)，3.95(s,2H)，3.50-3.62(m,2H)，3.21-3.30(m,1H)，2.78-2.87(m,1H)，2.33(s,3H)，1.87-2.01(m,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：405.1。

实例23

2-[3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙氧基]乙酸

实例23的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但在步骤1中，用2-[3-(对-甲苯基磺酰氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.74-7.85(m,3H)，7.41-7.52(m,1H)，7.35-7.42(m,1H)，7.06-7.18(m,1H)，5.94-6.11(m,1H)，4.16-4.32(m,2H)，3.97(s,2H)，3.55-3.67(m,2H)，3.15-3.26(m,1H)，2.85-2.99(m,1H)，1.92-2.08(m,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：459.1。

实例24

2-[3-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙氧基]乙酸

实例24的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但是，在步骤1中，用2-[3-(对-甲苯基磺酰氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质，且在步骤2中，用1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm12.59(s,1H)，7.85(dd,J＝8.8,6.4Hz,1H)，7.80(d,J＝8.0Hz,1H)，7.46(d,J＝8.1Hz,1H)，7.39(s,1H)，7.21(t,J＝8.8Hz,1H)，6.10(dd,J＝13.2,2.5Hz,1H)，4.16–4.28(m,2H)，3.96(s,2H)，3.60(t,J＝6.1Hz,2H)，3.24(dd,J＝16.8,13.2Hz,1H)，2.92(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，1.98(p,J＝6.0Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：477.0。

实例25

4-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丁酸

实例25的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但是，在步骤1中，用4-溴丁酸甲酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质，且在步骤2中，用1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.79-7.97(m,2H)，7.38(d,J＝7.9Hz,1H)，7.14(d,J＝11.6Hz,1H)，6.92(t,J＝8.5Hz,1H)，5.89(d,J＝12.2Hz,1H)，4.07-4.22(m,2H)，3.06(dd,J＝16.7,2.3Hz,1H)，2.81(dd,J＝16.7,13.5Hz,1H)，2.48-2.64(m,2H)，2.23-2.34(m,1H)，2.06-2.19(m,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：446.1。

实例26

2-[2-(8-氯-7-氟-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙酸

实例26的制备方法类似于所描述的用于制备实例17的程序，但是，在步骤1中，用溴乙酸甲酯代替3-氯环丁烷-1-甲酸甲酯作为起始物质，且在步骤2中，用1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮代替1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 13.18(s,1H)，7.80-7.91(m,2H)，7.50(d,J＝8.0Hz,1H)，7.39(s,1H)，7.22(t,J＝8.8Hz,1H)，6.10(dd,J＝12.9,1.9Hz,1H)，4.96(q,J＝16.7Hz,2H)，3.25(dd,J＝16.9,13.2Hz,1H)，3.03(dd,J＝16.9,2.6Hz,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：419.0

实例27

(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯

步骤1：制备2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛

向2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛(20.0g，105.2mmol)在THF(100mL)中的溶液(在冰水中冷却)中添加氢化钠(3.53g，147.28mmol)，然后在0℃，将混合物搅拌20分钟。然后，向混合物中逐滴地添加溴甲基甲醚(18.6g，147.3mmol)。添加之后，将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完成后，将反应溶液用水(10mL)淬灭，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到白色固体状的2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛(17.0g，产率69.0％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：257.0。

步骤2：制备(E)-1-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮

向1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮(13.0g，76.23mmol)与2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛(17.0g，72.6mmol)在EtOH(500mL)中的溶液的混合物中，添加KOH(24.4g，435.58mmol)，然后在35℃，将混合物搅拌16小时。反应完成后，通过添加盐酸(1M)，将混合物的pH调节至约为4。将所得悬浮液过滤，以得到淡黄色固体状的(E)-1-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮(27g，产率96.16％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：387.1。

步骤3：制备8-氯-2-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

向(E)-1-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮(7.6g，19.65mmol)在甲醇(30mL)与水(30mL)的混合溶剂中的溶液中，添加吡啶(30.4mL)。然后，将混合物在100℃搅拌2小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝8:1洗脱剂进行洗脱)，以得到白色固体状的8-氯-2-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮(3.5g，产率46.05％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：387.0。

步骤4：制备8-氯-2-[2-羟基-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

向8-氯-2-[2-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮(3.5g，9.05mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TFA(5.58mL，72.4mmol)，然后在室温下，将混合物搅拌2小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，以得到8-氯-2-[2-羟基-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮的棕色固体状粗产物(2.8g，产率90.28％)，其不经进一步纯化直接用于下一步。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：343.0。

步骤5：制备(2R)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯

向8-氯-2-[2-羟基-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮(948.18mg，2.77mmol)、(2R)-3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸甲酯(1000.0mg，2.77mmol)和三苯基膦(1088.55mg，4.15mmol)在THF(25mL)中的溶液中，添加DIAD(839.21mg，4.15mmol)，然后在室温下，将混合物搅拌16小时。然后，用水(30mL)稀释混合物，并且用EtOAc(30mL)萃取三次。将合并的有机层用1N盐酸(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。

将残余物溶于DCM(20mL)中，然后向所得溶液中添加TFA(3mL)。在室温下，将混合物搅拌2小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用DCM:MeOH＝20:1至10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到淡黄色固体状的(2R)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯(1200mg，产率63.21％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：444.1。

步骤6：制备(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯

向(2R)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯(100.0mg，0.230mmol)和TEA(0.09mL，0.680mmol)在DCM(4mL)中的溶液(在0℃冷却)中添加乙磺酰氯(0.02mL，0.230mmol)，然后在0℃，将混合物搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，并且用DCM(50ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝3:1至1:3洗脱剂进行洗脱)，以得到淡黄色固体状的(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯(70mg，产率57.97％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 8.07(s,1H)，7.75-7.90(m,3H)，7.51(br d,J＝7.9Hz,1H)，7.36-7.47(m,1H)，7.16(td,J＝7.8,5.4Hz,1H)，5.97-6.28(m,1H)，4.22-4.61(m,3H)，3.55-3.80(m,3H)，3.15-3.29(m,1H)，3.01-3.21(m,2H)，2.71-2.89(m,1H)，1.11-1.22(m,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：536.1。

实例28-A和实例28-B

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸和(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸

向(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯(90.0mg，0.170mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加BBr₃(93.7mg，0.370mmol)，然后在室温下，将混合物搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物倒入冰水(30mL)中，并且用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经MgSO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到两组非对映异构体，其中一组表征为实例27-A(7.6mg，产率8.67％)，另一组为实例27-B(10.7mg，产率12.1％)。

实例27-A：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.82(dd,J＝19.1,7.9Hz,3H)，7.41-7.53(m,2H)，7.15(t,J＝7.8Hz,1H)，6.54(s,1H)，6.04(d,J＝13.2Hz,1H)，4.38(dd,J＝26.2,6.0Hz,3H)，3.09-3.20(m,1H)，2.98(ddd,J＝19.9,16.0,4.9Hz,3H)，1.15(t,J＝7.3Hz,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：522.0。

实例27-B：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.61-7.95(m,3H)，7.33-7.57(m,2H)，7.15(t,J＝7.8Hz,1H)，6.54(s,1H)，6.25(d,J＝11.7Hz,1H)，4.51(dd,J＝9.5,3.6Hz,1H)，4.18-4.39(m,2H)，2.94-3.13(m,2H)，2.82(dd,J＝16.8,2.7Hz,1H)，1.02-1.24(m,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：522.1。

实例29

(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸

步骤1：制备(2S)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯

化合物29a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物27e的程序，但在步骤5中，用(2S)-3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸甲酯代替(2R)-3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸甲酯作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：442.1。

步骤2：制备(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯

化合物29b的制备方法类似于所描述的用于制备实例27的程序，但在步骤6中，用(2S)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯代替(2R)-2-氨基-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]丙酸甲酯作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：536.1。

步骤3：制备(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸

向(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯(100mg，0.18mmol)在1,2-二氯乙烷(10mL)中的溶液中添加羟基(三甲基)锡烷(67.5mg，0.7mmol)，然后在80℃，将混合物搅拌6小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过制备型HPLC纯化残余物，以得到白色固体状的(2S)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸(37.0mg，产率37.5％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 13.23(s,1H)，7.90-7.78(m,3H)，7.50(d,J＝8.0Hz,1H)，7.43(d,J＝20.4Hz,1H)，7.15(td,J＝7.8,1.8Hz,1H)，6.16(ddd,J＝87.1,13.0,2.2Hz,1H)，4.54-4.21(m,3H)，3.22-3.08(m,1H)，3.07-2.99(m,2H)，2.88(ddd,J＝52.7,16.9,2.7Hz,1H)，1.16(td,J＝7.2,4.6Hz,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：522.0。

实例30-A和实例30-B

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸和(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸

步骤1：制备(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸甲酯

化合物30a的制备方法类似于所描述的用于制备实例27的程序，但在步骤6中，用氨磺酰氯代替乙磺酰氯作为起始物质。

步骤2：制备(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸和(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸

实例30-A和实例30-B的制备方法类似于所描述的用于制备实例28-A和实例28-B的程序，但是，用(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(氨磺酰基氨基)丙酸甲酯代替(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯作为起始物质。

实例30-A：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.80(ddd,J＝7.9,7.2,4.7Hz,2H)，7.49(d,J＝8.3Hz,1H)，7.42(s,1H)，7.14(t,J＝7.8Hz,1H)，6.66(s,1H)，6.01(d,J＝12.8Hz,1H)，4.39(s,2H)，4.20(s,1H)，3.17-3.08(m,1H)，2.96(d,J＝16.5Hz,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：509.1。

实例30-B：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.79(dd,J＝7.5,5.8Hz,2H)，7.47(s,1H)，7.39(s,1H)，7.14(t,J＝7.9Hz,1H)，6.62(s,2H)，6.16(s,1H)，4.47(s,1H)，4.28(d,J＝8.9Hz,1H)，3.10–2.99(m,1H)，2.92(s,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：509.1。

实例31-A和实例31-B

(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸和(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸

步骤1：制备(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸甲酯

化合物31a的制备方法类似于所描述的用于制备实例27的程序，但在步骤6中，用N-乙基氨磺酰氯代替乙磺酰氯作为起始物质。

步骤2：制备(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸和(2R)-3-[2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸

实例31-A和实例31-B的制备方法类似于所描述的用于制备实例28-A和实例28-B的程序，但是，用(2R)-3-[2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基氨磺酰基氨基)丙酸甲酯代替(2R)-3-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基磺酰基氨基)丙酸甲酯作为起始物质。

实例31-A：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.76-7.83(m,3H)，7.46(d,J＝8.1Hz,1H)，7.41(s,1H)，7.15(s,1H)，6.86(br s,1H)，5.97(br d,J＝12.8Hz,1H)，4.26-4.41(m,2H)，3.85(br d,J＝6.4Hz,1H)，3.14(dd,J＝16.8,13.1Hz,1H)，2.92-3.01(m,1H)，2.82(brd,J＝6.5Hz,2H))，0.97(t,J＝7.2Hz,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：537.0。

实例31-B：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.75-7.85(m,3H)，7.48(br d,J＝7.9Hz,1H)，7.41(s,1H)，7.15(s,1H)，6.84(br s,1H)，6.19(br d,J＝12.1Hz,1H)，4.48(brdd,J＝9.4,3.7Hz,1H)，4.26(br dd,J＝9.5,2.9Hz,1H)，4.01(br s,1H)，3.06(br dd,J＝16.9,13.2Hz,1H)，2.75-2.90(m,3H)，0.96(t,J＝7.2Hz,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：537.0。

实例32

8-氯-7-氟-2-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

步骤1：制备2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛

向2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛(1000.0mg，5.26mmol)、1-溴-3-甲氧基丙烷(1207.29mg，7.89mmol)和KI(87.31mg，0.530mmol)在DMF(54mL)中的溶液中添加K₂CO₃(2180.82mg，15.78mmol)，然后在60℃，将混合物搅拌1小时。反应完成后，用水(50mL)稀释混合物，然后，用EtOAc(50mL)将所得溶液萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝100:1至10:1洗脱剂进行洗脱)，以得到黄色固体状的2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛(1200mg，产率487％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：263.1。

步骤2：制备(E)-1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)-3-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮

向1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮(250.0mg，1.33mmol)和2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛(347.6mg，1.33mmol)在EtOH(15mL)中的溶液中添加KOH(743.7mg，13.26mmol)，然后在35℃，将混合物搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物加入水(20mL)中，并通过添加1N盐酸将所得混合物的pH调节至约为6。然后过滤混合物，收集滤饼并在真空中干燥，以得到黄色固体状的(E)-1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)-3-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮(450mg，产率78.43％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：433.0。

步骤3：制备8-氯-7-氟-2-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

向(E)-1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)-3-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮(250.0mg，0.580mmol)在水(6.97mL)和甲醇(6.97mL)中的溶液中，添加吡啶(2.4mL，29.62mmol)，然后在110℃，将混合物搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，并且通过制备型HPLC纯化残余物，以得到淡黄色固体状的8-氯-7-氟-2-[2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮(28mg，产率11.13％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm7.80(d,J＝8.0Hz,1H)，7.86(dd,J＝8.7,6.5Hz,1H)，7.46(d,J＝8.0Hz,1H)，7.40(s,1H)，7.22(t,J＝8.8Hz,1H)，6.09(d,J＝11.4Hz,1H)，4.19(t,J＝5.1Hz,2H)，3.46(t,J＝6.2Hz,2H)，3.26(dd,J＝16.9,13.4Hz,1H)，3.21(s,3H)，2.91(dd,J＝16.8,2.5Hz,1H)，1.96(p,J＝6.0Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：433.0。

实例33

8-氯-7-氟-2-[2-(3-羟基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

实例33的制备方法类似于所描述的用于制备实例32的程序，但在步骤1中，用3-溴丙-1-醇代替1-溴-3-甲氧基丙烷作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.83(dd,J＝8.9,6.4Hz,1H)，7.78(d,J＝8.0Hz,1H)，7.43(d,J＝8.0Hz,1H)，7.37(s,1H)，7.19(t,J＝8.8Hz,1H)，6.05(dd,J＝13.2,2.5Hz,1H)，4.47(s,1H)，4.11-4.27(m,2H)，3.52(t,J＝6.2Hz,2H)，3.22(dd,J＝16.9,13.3Hz,1H)，2.89(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，1.85(t,J＝6.1Hz,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：419.1。

实例34

8-氯-7-氟-2-[2-(2-羟基乙氧基)-4-(三氟甲基)苯基]苯并二氢吡喃-4-酮

实例34的制备方法类似于所描述的用于制备实例32的程序，但在步骤1中，用2-溴乙醇代替1-溴-3-甲氧基丙烷作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 7.87(dd,J＝8.8,6.5Hz,1H)，7.82(d,J＝7.9Hz,1H)，7.46(d,J＝8.0Hz,1H)，7.41(s,1H)，7.22(t,J＝8.8Hz,1H)，6.19(dd,J＝13.2,2.4Hz,1H)，4.93(t,J＝5.8Hz,1H)，4.22-4.11(m,2H)，3.77-3.65(m,2H)，3.22(dd,J＝16.9,13.3Hz,1H)，2.95(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：405.0。

实例35

2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸乙酯

步骤1：制备N-[2-(5-氯-2-甲酰基-苯氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯

化合物35a的制备方法类似于所描述的用于制备化合物32a的程序，但在步骤1中，用N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯和4-氯-2-羟基-苯甲醛代替1-溴-3-甲氧基丙烷和2-羟基-4-(三氟甲基)苯甲醛作为起始物质。

步骤2：制备N-[2-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯

化合物35b的制备方法类似于所描述的用于制备实例32的程序，但在步骤2中，用N-[2-(5-氯-2-甲酰基-苯氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯和1-(3-氯-2-羟基-苯基)乙酮代替2-(3-甲氧基丙氧基)-4-(三氟甲基)苯甲醛和1-(3-氯-4-氟-2-羟基-苯基)乙酮作为起始物质。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：474.0。

步骤3：制备2-[2-(2-氨基乙氧基)-4-氯-苯基]-8-氯-苯并二氢吡喃-4-酮

向N-[2-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(180.0mg，040mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(2mL)，然后在室温下，将混合物搅拌2小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物，以得到2-[2-(2-氨基乙氧基)-4-氯-苯基]-8-氯-苯并二氢吡喃-4-酮的黄色固体状粗产物(140.2mg，产率92.3％)，其不经进一步纯化直接用于下一步。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：352.1。

步骤4：制备2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸乙酯

向2-[2-(2-氨基乙氧基)-4-氯-苯基]-8-氯-苯并二氢吡喃-4-酮(140mg，0.39mmol)在DCM(12mL)中的溶液(在0℃冷却)中添加DIPEA(154.1mg，1.2mmol)和乙基草酰氯(55.0mg，0.4mmol)，然后，在室温下搅拌反应1小时。反应完成后，用水(50mL)淬灭反应，并且用EtOAc(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，然后在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用PE:EtOAc＝5:1洗脱剂进行洗脱)，以得到黄色固体状的2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸乙酯(130mg，产率72.3％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 9.10(t,J＝5.7Hz,1H)，7.93-7.68(m,3H)，7.47(d,J＝8.1Hz,1H)，7.40(s,1H)，7.15(t,J＝7.8Hz,1H)，6.03(dd,J＝13.2,2.5Hz,1H)，4.32-4.07(m,4H)，3.61-3.43(m,2H)，3.18(dd,J＝16.9,13.3Hz,1H)，2.84(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H)，1.20(t,J＝7.1Hz,3H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：452.1。

实例36

2-[2-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸

在80℃，将2-[2-[2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-5-(三氟甲基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸乙酯(130mg，0.28mmol)在1N盐酸(2mL)中的溶液在微波条件下搅拌1.5小时。反应完成后，在真空中浓缩混合物。通过制备型HPLC纯化残余物，以得到白色固体状的2-[2-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]乙基氨基]-2-氧代-乙酸(7.8mg，产率6.2％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 8.31-8.41(m,1H)，7.78(d,J＝7.8Hz,2H)，7.57(d,J＝8.3Hz,1H)，7.22(d,J＝1.7Hz,1H)，7.09-7.16(m,2H)，5.97-6.06(m,1H)，4.00-4.15(m,2H)，3.37-3.45(m,2H)，3.19(dd,J＝17.0,13.1Hz,1H)，2.84ppm(dd,J＝16.9,2.7Hz,1H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：424.1。

实例37

顺式-3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]环丁烷甲酸

步骤1：制备3-(对-甲苯基磺酰氧基)环丁烷甲酸叔丁酯

在0℃，向3-羟基环丁烷甲酸叔丁酯(1.00g，5.82mmol)和TEA(1.17g，1.61mL，11.5mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，添加甲磺酰氯(1.92g，9.99mmol)，然后，在室温下降混合物搅拌过夜。然后，用二氯甲烷(50mL)稀释混合物，接着，将所得溶液用水(20mL)洗涤两次，用饱和NaHCO₃(20mL)洗涤两次，用盐水(20mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，在真空中浓缩，以得到无色油状的粗制3-(对-甲苯基磺酰氧基)环丁烷甲酸叔丁酯(1.9g，100％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：326.2。

步骤2：制备顺式-3-(5-溴-2-甲酰基-苯氧基)环丁烷甲酸叔丁酯

向4-溴-2-羟基苯甲醛(1.00g，4.97mmol)和3-(对-甲苯基磺酰氧基)环丁烷甲酸叔丁酯(1.62g，4.97mmol)在DMF(26mL)中的溶液中添加K₂CO₃(1.38g，9.95mmol)，然后将反应混合物在90℃搅拌16小时。反应完成后，在真空中浓缩反应混合物并且通过制备型HPLC纯化，以得到白色固体状的顺式-3-(5-溴-2-甲酰基-苯氧基)环丁烷甲酸叔丁酯(360mg，产率20.4％)。MS观察值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]：377.0。

步骤3：制备顺式-3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]环丁烷甲酸

实例37的制备方法类似于所描述的类似于制备实例17的程序，但在步骤2中，用顺式-3-(5-溴-2-甲酰基-苯氧基)环丁烷甲酸叔丁酯代替3-[2-甲酰基-5-(三氟甲基)苯氧基]环丁烷甲酸甲酯作为起始物质。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δppm 12.29(s,1H)，7.77(d,J＝7.7Hz,2H)，7.52(d,J＝8.2Hz,1H)，7.28(d,J＝8.0Hz,1H)，7.12(t,J＝7.6Hz,2H)，5.91(d,J＝11.5Hz,1H)，4.80(dd,J＝12.9,6.2Hz,1H)，3.23(dd,J＝16.6,13.5Hz,1H)，2.86(dd,J＝16.6,1.9Hz,1H)，2.63-2.78(m,3H)，2.11-2.26(m,2H)。MS观察值(ESI⁺)[(M+H)⁺]：451.0。

生物学实例

BIO-实例1：工程化HepDES19初步筛选测定法

该测定法用于筛选出cccDNA抑制剂。HepDES19是一种产生cccDNA的细胞系。在该细胞系中，细胞培养物上清液中的HBeAg作为替代标志物，因为HBeAg的产生取决于cccDNA水平和活性。HepDES19是一种工程化细胞系，包含1.1单位长度的HBV基因组，源自转基因的pgRNA转录受四环素(Tet)的控制。在没有Tet的情况下，将诱导pgRNA转录，但是，由于在HBeAg起始密码子之前的前导序列非常短以及起始密码子受到破坏，无法从该pgRNA产生HBVe抗原(HBeAg)。只有在cccDNA形成后，才能从pgRNA的3’末端冗余中恢复丢失的前导序列和起始密码子突变，然后才能合成HBeAg。因此，HBeAg可用作cccDNA的替代标志物(Zhou,T.等人，Antiviral Res.(2006),72(2),116-124；Guo,H.等人，J.Virol.(2007),81(22),12472-12484)。

按照每个T150烧瓶2×10⁶个细胞的量，接种HepDES19细胞，并用培养基(Dulbecco改良Eagle培养基：营养混合物F-12[DMEM-F12，Gibco Cat.11320-82]，10％胎牛血清[FBS，Clontech Cat.631101]，0.1mM的非必需氨基酸溶液[NEAA，Gibco Cat.11140-050]，50μg/mL青霉素-链霉素[PS，Invitrogen Cat.15140-163]，500μg/mL遗传霉素[G418，InvitrogenCat.10131-027])培养5天，该培养基含有3μg/mL Tet(Sigma，Cat.87128)。然后，按照每个T150烧瓶4×10⁶个细胞的量，将细胞接种到如上所述的相同培养基中，在没有Tet的情况下，培养8天。然后，收获细胞并且以每毫升2×10⁶个细胞的密度冷冻细胞。为了进行化合物测试，将冷冻的细胞解冻并且以每个孔6×10⁴个细胞的密度接种到96孔平板中。接种后24小时，将二甲基亚砜(DMSO，Sigma，Cat.D2650)制得的化合物的半对数系列稀释液用上述相同的培养基进一步稀释，然后将其添加到细胞中，以达到期望的最终化合物浓度和1％DMSO浓度。然后，在测量HBeAg水平和细胞活力之前，在37℃将平板再孵育5天。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(Shanghai Kehua Diagnostic Medical Products Co.,Ltd)测量细胞内的HBeAg水平。使用Cell Counting Kit-8(简称CCK-8试剂盒)(DonJindo，Cat.CK04-20)，评估细胞活力。使用4参数逻辑曲线拟合法，从剂量应答曲线得出IC₅₀值。

如本文所述，测试本发明的化合物抑制细胞外HBeAg水平的能力。据发现，本发明的化合物具有的IC₅₀低于50μM。据发现，特定式(I)化合物具有的IC₅₀低于5.0μM。表1给出了HepDES19初步筛选测定的结果。

表1：HepDES19初步筛选测定中的活性数据

实例编号	IC<sub>50</sub>(μM)	实例编号	IC<sub>50</sub>(μM)	实例编号	IC<sub>50</sub>(μM)
						1	0.73	16-B	0.48	30-B	10.7
2	1.97	17	1.56	31-A	3.3
						3	5.59	18	0.765	31-B	10.9
4	5.25	19	0.26	32	1.93
						5	3.06	20	0.01	33	0.68
6	5.22	21	4.89	34	3.36
						7	9.41	22	1.99	35	5.74
8	11.3	23	1.56	36	12.9
						9	9.41	24	7.14	37	0.67
10	11.4	25	1.18
						11	5.14	26	2.78
12	10.1	27	0.58
						13	0.39	28	16.3
14	1.05	28	3.76
						15	1.5	29	1.91
16-A	2.43	30-A	3.37

BIO-实例2：冻存的原代人肝细胞(PHH)测定

该测定法用于确认化合物在HBVPHH感染测定中的抗HBV作用。将冻存的PHH(BioreclamationIVT，Lot YJM)在37℃解冻，然后轻轻转移到预温热的InVitroGRO HT培养基(BioreclamationIVT，Cat.S03317)中。以70相对离心力(RCF)将混合物在RT下离心3分钟，并弃去上清液。将预温热的InVitroGRO CP培养基(BioreclamationIVT，Cat#S03316)添加到细胞沉淀物中，以便轻轻地让细胞重悬。将细胞以5.8×10⁴个细胞/孔的密度接种到胶原I包覆的含有InVitroGRO CP培养基的96孔板(Gibco，目录号A1142803)中。所有板均在37℃及5％CO₂和85％湿度下孵育。

铺板后20小时，将培养基更换为PHH培养基(杜贝克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)(DMEM)/F12(1:1)(Gibco，Cat.11320-033)，10％胎牛血清(Gibco，Cat.10099141)，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素(Gibco，Cat.151401-122)，5ng/mL人表皮生长因子(Invitrogen，Cat.PHG0311L)，20ng/mL地塞米松(Sigm，Cat.D4902)和250ng/mL人重组胰岛素(Gibco，Cat.12585-014))。然后，以5％CO₂和85％湿度，将细胞在37℃孵育4小时。然后，将培养基更换为预温热的PHH培养基，该培养基含有4％聚乙二醇(PEG)MW8000(Sigma，Cat.P1458-50ML)和1％DMSO(Sigma，Cat.D2650)。将5.8x10⁶基因组当量的HBV添加到培养基中。

感染后24小时，用PBS轻轻地洗涤细胞，然后，用补充有1％DMSO和0.25mg/mLMatrix凝胶(Corning，Cat.356237)的PHH培养基，以200μL/孔的量对细胞进行传代。将所有平板立即置于37℃CO₂培养箱中。

24小时后，使用相同的培养基(如上所述，PHH培养基中补充有1％DMSO和0.25mg/mL Matrix凝胶)进一步稀释DMSO制得的化合物的系列稀释液，然后再将其添加到细胞中，以达到期望的最终化合物浓度和1％DMSO浓度。对含有化合物的培养基每三天进行一次传代。

化合物治疗后9天，用化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio，HBsAgQuantitative CLIA)测量细胞外HBsAg水平。通过MagNA Pure 96系统(Roche)提取细胞外HBVDNA，然后使用以下引物和探针，通过定量PCR进行测定：

HBV正向引物(SEQ ID NO:1)：AAGAAAAACCCCGCCTGTAA(5'至3’)；

HBV反向引物(SEQ ID NO:2)：CCTGTTCTGACTACTGCCTCTCC(5’至3’)；

HBV探针：5’+四甲基罗丹明+SEQ ID NO:3+黑洞淬灭分子(Black Hole Quencher)2-3'，其中SEQ ID NO:3为CCTGATGTGATGTTCTCCATGTTCAGC。

HBsAg IC₅₀和HBV DNA IC₅₀值是使用4参数逻辑曲线拟合法从剂量应答曲线得出的。式(I)化合物的HBsAg IC₅₀<20μM，特别地<1μM；并且HBVDNA IC₅₀<50μM。表D2中给出了冷存PHH测定的结果。

表D2：冷冻保存的PHH试验中的HBsAg IC₅₀数据

实例编号	HBsAg IC<sub>50</sub>(μM)
		1	5.31
2	4.41
		3	11.2
11	8.34
		13	6.86

Claims

1.一种式(I)化合物，

其中

R¹为卤素；

R²选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R³选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁴选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁵选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁷选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

R⁹选自H、OH、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成杂环基环；

X选自O和S；

G₂选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中

R¹为卤素；

R²选自H、卤素和C_1-6烷氧基；

R³选自H、卤素和C_1-6烷氧基；

R⁴选自H和OH；

R⁵为H；

R⁷选自H；

R⁹选自H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成5元杂环基环；

R¹⁰为H；

X为O；

G₂选自C_1-6烷基和C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

3.根据权利要求2所述的化合物，其中

R¹为Cl；

R²选自H、F和甲氧基；

R³选自H、F和甲氧基；

R⁴选自H和OH；

R⁵为H；

R⁷选自H；

R⁸选自Cl、Br、甲基、CF₃、甲氧基和三氟甲氧基；

R⁹选自H、Br、甲基和甲氧基；

或者R⁸和R⁹与它们所连接的原子一起形成5元杂环基环；

R¹⁰为H；

X为O；

G₂选自甲基和环丁基；

m选自0和1；

或其药用盐。

4.根据权利要求1或2所述的化合物，或其药用盐，其中R⁶为羧基。

5.根据权利要求1、2和4中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R⁸选自卤代C_1-6烷基和卤代C_1-6烷氧基。

6.根据权利要求5所述的化合物，或其药用盐，其中R⁸选自CF₃和三氟甲氧基。

7.根据权利要求1、2、4和5中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R⁹选自H和C_1-6烷氧基。

8.根据权利要求7所述的化合物，或其药用盐，其中R⁹选自H和甲氧基。

9.根据权利要求1、2、4、5和7中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中G₁为C_1-6烷基。

10.根据权利要求9所述的化合物，或其药用盐，其中G₁选自乙基和丙基。

11.根据权利要求1、2、4、5、7和9中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中G₂为C_3-7环烷基；m选自0和1。

12.根据权利要求11所述的化合物，或其药用盐，其中G₂为环丁基；m选自0和1。

13.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式(II)，

其中

R¹为卤素；

R²选自H和卤素；

R³选自H和卤素；

R⁸选自卤代C_1-6烷基和卤代C_1-6烷氧基；

R⁹选自H和C_1-6烷氧基；

G₁为C_1-6烷基；

G₂为C_3-7环烷基；

m选自0和1；

或其药用盐。

14.根据权利要求13所述的化合物，其中

R¹为Cl；

R²选自H和F；

R³选自H和F；

R⁸选自CF₃和三氟甲氧基；

R⁹选自H和甲氧基；

G₁选自乙基和丙基；

G₂为环丁基；

m选自0和1；

或其药用盐。

15.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其选自

3-[5-溴-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-[(2S)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸；

3-[5-溴-2-[(2R)-8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]苯氧基]丙酸；

3-[5-氯-2-(8-氯-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基)-4-甲基-苯氧基]环丁烷甲酸甲酸；

或其药用盐。

16.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其选自

或其药用盐。

17.一种用于制备根据权利要求1至16中任一项所述的化合物的方法，所述方法包括以下步骤中的至少一个：

(a)将α,β-不饱和羰基中间体(XIII)，

在碱的存在下环化；

(b)将式(XIX)化合物，

用式(XXI)化合物，

在碱的存在下进行处理；

(c)将式(I-4)化合物，

在碱的存在下水解；

其中R¹至R¹⁰、G₁、G₂和m如权利要求1至14中任一项所定义；R¹²为C_1-6烷基磺酰基、氨基磺酰基或C_1-6烷基氨基磺酰基。

18.一种根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其用作治疗活性物质。

19.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的化合物以及治疗惰性载体。

20.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。

21.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于制备治疗或预防HBV感染的药物的用途。

22.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于抑制cccDNA的用途。

23.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于抑制HBeAg的用途。

24.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于抑制HBsAg的用途。

25.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物用于抑制HBVDNA的用途。

26.一种根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其用于治疗或预防HBV感染。

27.一种根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其是根据权利要求17所述的方法制备的。

28.一种用于治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的如权利要求1至16中任一项所定义的化合物。