CN112970670A - 一种肠粘膜炎动物模型的构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肠粘膜炎动物模型的构建方法，对动物样品的肠道进行菌群接种以诱导动物样品肠道产生炎症，对接种后的小鼠进行性状观察、生理生化指标检测和直肠中段粘膜组织结构显微观察，当小鼠出现血便或粘液便、与炎症因子相关的生理生化指标上升或直肠中段粘膜组织皮损或炎症浸润的症状时，即肠粘膜炎动物模型构建成功。通过控释或缓释的肠栓施用方式，解决施用过程中产生的不可控因素，将菌液接种的操作统一化和简便化，使肠粘膜炎动物的模型构建实现可重复。

Description

一种肠粘膜炎动物模型的构建方法

技术领域

本发明涉及生物医疗领域，尤其涉及一种肠粘膜炎动物模型的构建方法。

背景技术

肠炎是细菌、病毒、真菌和寄生虫等引起的小肠炎和结肠炎。临床表现主要有腹痛、腹泻、稀水便或黏液脓血便。部分病人可有发热及里急后重感觉，故亦称感染性腹泻。肠炎按病程长短不同，分为急性和慢性两类。肠道炎的病因主要包含病毒性肠炎、细菌性肠炎、真菌性肠炎、寄生虫性肠炎、饮食导致的肠炎以及抗生素导致的肠炎，其中，以痢疾杆菌、沙门菌、空肠弯曲菌以及大肠杆菌引起的细菌性肠炎最为常见。

目前用于肠炎疾病研究的动物模型主要分三类，包含自发性肠炎模型、诱发性肠炎模型和转基因肠炎模型，根据王开、裴志花和胡桂学等人在中国免疫学杂志发表的一篇名为“肠炎动物模型”的文章记载，诱发性肠炎模型能够从化学介质、病原菌诱导和免疫诱导三方面对动物模型进行肠炎疾病的诱发。专利号为CN108969513A的中国专利公开了一种肝郁脾虚证溃疡性结肠炎动物模型的建立及应用，包括建模前对大鼠进行预游泳，剔除不合格的大鼠，将合格大鼠进行慢性束缚、过度劳累与饮食失节处理造模7天，第8天进行灌肠建立溃疡性结肠炎模型，大鼠禁食不进水24h，腹腔注射麻醉后，将TNBS/乙醇溶液由大鼠肛门缓慢注入，倒立后将大鼠保持平躺状态，放置干净的鼠框内，自然清醒，第9天起大鼠继续进行慢性束缚、过度劳累与饮食失节处理，至第28天即得肝郁脾虚证溃疡性结肠炎动物模型。通过外接因素刺激使机体自身产生肠炎应激的现象无法持续进行药理观察，其治愈方式也无法作为典型范例为药物实验做科学依据。区别于身体因素刺激导致的肠炎，公开号为CN107950472A的中国专利公开了一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法和应用。本发明的溃疡性结肠炎动物模型以土狗为模型动物，采用醋酸致犬溃疡性结肠炎，实验结果基本能直接推广应用于人体。通过化学方式对动物模型进行诱导，醋酸对于肠道的损伤解答且会破坏肠道菌群结构，醋酸诱导对用量要求极高，因此，在需要探讨细菌性肠粘膜炎的病理机制和用药剂量时，此类模型不具备代表性。

区别于化学诱导或转基因方法，专利号为CN110013345A中国专利采用物理诱导，其提供了一种放射性结直肠炎动物模型的建立方法，包括将小鼠随机分成两个大组；正常喂养1～2周，让小鼠适应新的生活环境；模拟照射时小鼠的体位，取平均值；制定放射治疗计划；依据分组设计不同，采用不同剂量梯度射线单次大剂量照射；评估结直肠组织病变严重程度。放射性结肠炎动物模型成膜规律，但大多对于普通轻慢性肠炎的疾病机理研究不具备典型性，主要用于探究肠炎产生和反复对肠道组织病变的影响。

基于病原菌诱导的动物模型建立，主要以通过口服、灌胃或皮下注射等方式对小鼠进行一定浓度的病原菌的接种。病原菌接种能够使肠炎的发生更接近于自然状态，有助于深入剖析病原菌与宿主相互作用的分子调控机制。为保证动物模型建立的典型性和可反复重复性，动物模型菌群接种对于接种位置、接种菌液浓度、接种方法等因素应具备可控性。为探究细菌性肠炎的诱因、病理机制以及临床用药等，需要一种由细菌菌群紊乱引起的肠炎动物模型。

此外，一方面由于对本领域技术人员的理解存在差异；另一方面由于发明人做出本发明时研究了大量文献和专利，但篇幅所限并未详细罗列所有的细节与内容，然而这绝非本发明不具备这些现有技术的特征，相反本发明已经具备现有技术的所有特征，而且申请人保留在背景技术中增加相关现有技术之权利。

发明内容

本发明提供一种肠粘膜炎的动物模型的构建方法，其涉及动物模型的构建方法，构建过程中采用的菌液施用方法和施用装置。动物模型的构建依赖诱发肠炎产生的菌液的施用，而施用菌液的动物模型能够成为批量化或具有典型性的根本因素为操作统一的可重复性。构建方法中菌液的施用位置、施用浓度和体积、施用方法以及动物样品自身的各类因素均需要统一化，而目前能够实现菌液接种的方法大多采用灌肠或投喂等不可控且不直接作用目标位置的方法。由于动物样品个体的差异化，其胃部消化能力以及免疫能力具有异质化差异，因此，使菌液经过胃部消化或无法长时间保持于肠道内部的菌液接种方式无法做到同操作下接种动物样品能够统一进入肠炎发病状态。

本发明中细菌菌液的施用能够依赖胶囊缓释或控释进行不间断施用，其还能够以贴片的方式附着于肠道内，实现不间断持续施用。通过控释或缓释的肠栓施用方式，解决施用过程中产生的不可控因素，将菌液接种的操作统一化和简便化，使肠粘膜炎动物的模型构建实现可重复。

本发明还涉及一种菌液胶囊的施用装置，其通过夹持或连接菌液胶囊或贴片，并将菌液胶囊或贴片送入动物模型肠道内部的方式使菌液接种实现位置可控，接种菌株类型和数量可控。该肠粘膜炎动物模型的构建方法涉及对动物样品的肠道进行菌群接种以诱导动物样品肠道产生炎症，而后对接种后的小鼠进行性状观察、生理生化指标检测和肠道内部粘膜组织结构显微观察，当动物样品出现血便或粘液便、与炎症因子相关的生理生化指标上升或接种肠道粘膜组织皮损或炎症浸润的症状时，即肠粘膜炎动物模型构建成功。优选地，动物样品能够是实验用小鼠。肠道菌群接种的方式主要通过将菌液递送至肠道内部，使菌液接触肠道内壁。

根据一种优选的实施方式，肠道菌群接种能够是对动物样品的直肠中段进行菌液胶囊或菌液贴片的施用，通过采用保存有混合或单一株系且浓度和体积定量的菌液的菌液胶囊或菌液贴片通过菌液施用装置递送至动物样品的直肠中段预设位置，使菌液胶囊或菌液贴片持续在预设位置进行菌液释放实现细菌接种。优选地，肠道预设位置能够是直肠中段。

根据一种优选的实施方式，混合菌液的制备采用等浓度的不同菌液以等比体积进行混合，接种菌液的浓度应在10⁵个/ml以上。

根据一种优选的实施方式，模型用于构建由细菌诱导的慢性肠粘膜炎动物模型、急性肠粘膜炎动物模型、慢性结肠炎模型、急性结肠炎模型、慢性直肠炎模型、急性直肠炎模型以及溃疡性结肠炎模型，其在急性或慢性直/结肠炎相关的治疗药物的药学评价、生理或病理机制研究、临床数据收集、炎症对细胞癌变的影响等方向具有用途。

根据一种优选的实施方式，菌液胶囊按照能够被肠道包裹以卡合固定于肠道内部的方式设置有允许单个细菌穿透的渗透膜，渗透膜以密封包裹菌液的方式使胶囊成为具有弧形的可吸收单元，胶囊通过所述渗透膜的允许单体细菌穿透的孔道直径设置形成对细菌个体的控释。

根据一种优选的实施方式，菌液胶囊能够通过肠道的包裹作用卡合预设施用位置，并通过肠道的蠕动压力或肠道内部体液的作用帮助菌液胶囊内部的细菌通过所述渗透膜的孔径进入肠道或通过渗透膜被降解释放细菌至肠道。

根据一种优选的实施方式，菌液贴片按照能够吸附并保存菌液的方式设置有吸附层和粘贴层，吸附层按照能够在收到挤压时使体内菌液脱出其内部孔径的方式设置于所述粘贴层一侧，粘贴层能够是一种允许细菌穿过的可降解粘合层，其通过与肠道的粘合作用使菌液贴片与肠道内壁连接，并基于体液对粘贴层的降解作用在一段时间内匀速降解直至消失，吸附层于肠道内壁脱落。

根据一种优选的实施方式，菌液胶囊还能够是缓释制剂，其按照使活性菌液与低粘度亲水性聚合物混合形成中心缓释层，活性菌液和高粘度亲水性聚合物混合形成外缓释层的方式按照由内向外的顺序设置有中心缓释层、隔离层、外缓释层和包衣，包衣能够在接触体液后一定时间内降解以暴露外缓释层，外缓释层在施用一定时间后暴露隔离层，隔离层在一定时间内降解暴露中心缓释层，通过多层压制形成的缓释胶囊实现菌液的持续施用。

根据一种优选的实施方式，菌液胶囊或菌液贴片通过菌液施用装置被放置肠道内部，菌液施用装置包含固定单元、连接杆和握把，其中，

固定单元，与连接杆一侧连接，其包含用于夹持或连接菌液胶囊或菌液贴片的固定组件和能够撑开肠道的外轮廓，外轮廓按照能够在菌液施用装置退出和进入肠道时能够自小向大的趋势进行固定单元的退出的方式设置为两端宽度小于中间宽度；连接杆，用于连接固定单元和握把的柔性细杆，其设置有能够探测固定单元进入肠道内部深度的长度计量组件并设置有在进入不同动物肠道时用于提示使用者菌液胶囊或菌液贴片到达预设施用位置的接种提示标识；握把，相对固定单元一侧与连接杆连接，设置有控制固定组件工作状态的开关，用于为使用者提供操作区域和控制固定组件工作状态的区域。优选地，长度计量组件能够是标刻或粘贴于连接杆表面的以厘米计量的量尺。长度计量组件还能够是通过传感器对固定单元伸入肠道长度计量的电子长度检测组件，电子长度检测组件可移动的连接连接杆。在使用时电子长度检测组件抵触肛门并计量伸入肠道的连接杆长度。接种提示标识根据不同的长度计量方式分别设置为醒目颜色的形状提示标识或电子语音提示。

根据一种优选的实施方式，固定单元表面设置有片状吸液材料的润滑面，润滑面能够通过设置的吸液层在固定单元进入肠道受到挤压时排出润滑液体，以此减少菌液施用装置与肠道内壁的摩擦。

根据一种优选的实施方式，外轮廓按照能够在空间坐标轴x、y、z中任意两个方向设置有至少两条支撑框的方式形成包裹固定组件的立体结构，立体结构基于两端窄于中间的弧形使固定单元能够自小到大缓慢进入肠道，避免肠道损伤。优选地，支撑框能够是由两条弧形边框构成的椭圆体。

根据一种优选的实施方式，贴片能够是一种多孔液体吸附材料，其能够通过吸附菌液并将菌液保存于自身体内进行菌液递送的一种装置。优选地，贴片能够是医用海绵或其他能够吸附保存液体的高分子材料。贴片通过肠道自身的蠕动和包裹性质对贴片实施挤压，达到菌液施用的目的。

根据一种优选的实施方式，贴片还能够设置有可触控式微针阵列，固体微针阵列可以穿透肠道粘膜并产生水性微通道，用于菌群液体被动扩散到体循环中，加快菌液在肠道内壁和动物模型身体内的炎症反应。

附图说明

图1是本发明的胶囊施用装置的简化结构示意图；

图2是本发明的固定组件的一个优选实施方式的结构示意图。

附图标记列表

100：固定单元 110：固定组件

120：外轮廓 200：连接杆

300：握把

具体实施方式

下面结合附图1至2进行详细说明。

肠道作为人体食物吸收和毒素排出的主要场所，其内部广阔的面积作为人体内最大的微生态环境包容多种帮助消化食物、吸收并合成人体必须营养以及帮助排出毒素的菌群，而日常生活中引起急性或慢性肠粘膜炎发生的根本原因为菌群紊乱造成肠道产生炎症，从而引发腹泻、痉挛等症状。

针对细菌性肠炎的病理机制和药物临床试用，本发明采用包裹混合菌液的菌液胶囊在直肠中段控制释放的施用方法构建肠粘膜炎动物模型。通过胶囊自身外部包裹的高分子膜，使内部单个细菌能够在感受压力或其他原因时通过高分子膜孔径穿出，进入肠道内壁，并扰乱肠道正常工作。目前采用的菌液接种类型能够是单一菌株，也可以是多种引起肠道不适并引发炎症的混合菌群。

针对菌液胶囊的施用，本发明设计一种能够夹取胶囊并将胶囊递送至肠道预设位置的胶囊施用装置。

该胶囊施用装置包含连接杆200和分别设置于连接杆200两端的固定单元100和握把300。固定单元100能够通过夹持等方式与菌液胶囊连接，并设置有两端宽度小于中间宽度的形状。固定单元100的结构设置保证了作为远端优先进入肠道时在不伤害肠道内壁的同时撑开肠道，方便后续的胶囊施用装置的进入。固定装置的结构设置还保证了其在退出肠道时能够以小直径至大直径的顺序穿过肠道，避免大直径的宽度在肠道内部的突兀变化划伤肠道内壁。

实施例1

一种肠粘膜炎动物模型的构建方法

1、实验试剂：Harris苏木素液配制(包含A液苏木素1g和无水酒精10ml以及B液硫酸铝钾20g和超纯水200ml)

配制方法：称取KAl(SO₄)₂·12H₂O 36.72g和苏木素1g，分别溶解后混合，加热煮沸至固体溶解，缓慢加入氧化汞0.5g后将混合液体迅速降温冷却，冷却后液体使用0.45mm滤膜抽滤。待使用时，按照每100ml加入冰醋酸6ml和甘油(丙三醇)10ml的比例进行混匀配置使用。

Bouin氏固定液：苦味酸75ml、40％甲醛溶液25ml和冰乙酸5ml混匀。

2、实验动物选择和分组：SPF级别BALB/c小鼠9～10周龄20只，随机分组为对照组和模型组，每组各10只。

3、肠粘膜炎动物模型的构建：小鼠适应性喂食一周后，实验开始第0天对模型组进行给药，即使用肠给药器对肠道施用菌群控释胶囊，24h后再次进行小剂量菌液胶囊的补施。在实施菌群控释胶囊后，应选择匹配小鼠肛门部位大小的肛塞或使用胶带封堵小鼠肛门部位1～10h，使胶囊无法自小鼠肠道内排出。菌群控释胶囊施用72h后每天作大便隐血试验，并观察腹泻和肉眼血便情况。

对照组和模型组自实验第0天开始，进行时间定点食物定量的喂食，但可自由饮水。自施用胶囊的前2h进行断食断水，自施用胶囊的后2h恢复正常进食进水。

4、样品收集

各组选取典型性小鼠2至3只，以备数据收集。

4.1性状观察

观察并收集各组单只小鼠的体重变化、大便形态变化(包含颜色、软硬程度以及是否有异物掺杂等)，并在第3周进行的小鼠结肠摘取试验中记录每只小鼠结肠长度。

4.2生理生化指标检测

每三天固定时间点采集每组每只小鼠的静脉血液5ml，通过生理生化参数检测仪进行白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)等与炎症因子参数判断相关的生理生化指标监测。

4.3组织切片观察

取样：颈椎脱臼法处死小鼠后打开小鼠腹腔，分离小鼠全结肠，D-Hanks平衡盐溶液冲刷至无异物后置于D-Hanks平衡盐溶液内；

固定：沿肠系膜近端剪开肠壁，将肠壁平铺于锡箔纸表面，选取合适肠断放入预先配好的Bouin氏固定液中，使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞在动物模型死亡时间点时的形态结构；

脱水：用Bouin氏固定液固定的组织分别放置于40％、50％、60％乙醇中脱水0.5h，而后放置于70％乙醇中脱水1h以上；

透明：100％二甲苯对组织进行脱乙醇处理，浸泡1h；

浸蜡：组织分别放入25％、50％和75％石蜡-二甲苯溶液中，每次0.5h，于温度范围为3℃～60℃的恒温箱中进行；组织放入纯蜡溶液中，于温度范围为3℃～60℃的恒温箱中静置1h；

包埋：于模具内的蜡块表面放置组织并覆盖液体石蜡，模具置于冷水水面冷却；

切片：蜡块性状修正后于切蜡机出进行切片，蜡片放置于45℃温水表面延展；

粘片：通过粘附剂将切片粘附于玻片表面；

烤片：室温自然干燥；

脱蜡：纯二甲苯溶液切片浸泡10min，重复两次，75％、50％、25％二甲苯-乙醇溶液浸泡，每一级10min；

醇化：切片浸泡100％、70％、50％乙醇溶液中醇化，每一级10min；

染色：切片放置于Harris苏木素液中5～15min，盐酸乙醇和氨水中分色5～30s，流水冲洗1h后蒸馏水冲洗一遍，70％和90％酒精脱水10min，伊红染色液染色2～3分钟；

脱水透明：重复上述脱水和透明的步骤一遍；

封片：采用树胶或塑胶对切片组织覆盖，干燥后观察。

5、结果判断方法

在实验开始的第三天开始，对实验小鼠每天进行性状观察和记录以及生理生化指标检测。通过对实验开始第三天后小鼠的各项数据的对比，判断小鼠是否产生肠粘膜炎，并通过石蜡切片的病理组织检测和观察，判断菌液施用对肠道生存的生理影响。

6、结果

性状观察显示，小鼠在接种菌液的第三天开始产生与肠炎类似的腹泻症状，至后期发展小鼠产生明显的食欲不振并伴随血便或粘液便的症状。

病理组织检测结果显示，与对照组相比，直肠自菌液施用的中段向两边产生明显组织损伤和炎症因子浸润。生理生化指标检测显示，其与炎症产生相关的生理生化指标如白细胞、中性粒细胞、C反应蛋白和降钙素原等均产生了一定的波动和幅度，说明小鼠体内伴随有明显炎症的产生。

上述数据的变化和性状的出现表明肠粘膜炎动物模型构建成功。

实施例2

菌群在肠道的同时间大面积施用会导致小鼠身体不适或机体死亡，而小剂量施用又可能使施用的菌群被机体自身的免疫系统灭杀导致菌群施用的失败。基于长效少量不间断的菌群施用方式，本发明采用一种菌液胶囊。菌液胶囊由一种高分子渗透膜密封包裹菌液，其能够通过渗透膜的渗透作用或自身分解作用缓慢释放包裹于内部的菌液。由于细菌的大小一般在0.5～7μm之间，因此，本控释膜或缓释膜孔径应根据所需包裹的菌液设置孔径大小，例大肠杆菌的体积大小为0.5～3μm，包裹其菌液的渗透膜孔径能够是3μm。当包裹菌液为混合菌液时，渗透膜孔径能够以混合菌液中最大体积菌株作为孔径大小制定标准。渗透膜帮助菌株离开膜内部空间的孔径的数量至少为1个。

根据一种优选的实施方式，渗透膜能够依靠密封膜内部空间压力排挤膜内部空间的细菌个体。膜内部空间的细菌个体通过孔径通道被挤压出膜内部空间，并通过渗透膜与肠道的接触附着于肠道内壁，实现对肠道的菌群施用。优选地，渗透膜能够是改性EVA膜或核径迹微孔膜。

根据一种优选的实施方式，胶囊大小应能够匹配所施用对象的肠道大小的最大容纳直径。优选地，小鼠的肠道最大撑开直径为2cm，因此，胶囊的直径大小应设置为0.5～2cm范围内。为保证胶囊能够顺利进入肠道并通过肠道的包裹作用卡合肠道预设位置而不伤害肠道，胶囊能够是圆形或由近似圆形的弧线构成的形状。

根据一种优选的实施方式，胶囊还能够是通过缓释膜多层隔离和包裹菌液的菌液胶囊，其能够在肠道内通过肠道的体液对每一层缓释膜的销蚀达到一定时间内不间断对肠道进行小剂量菌群液体的施用。优选地，缓释膜能够是聚乙烯醇缓释膜。

实施例3

本实施例公开一种胶囊施用装置。施用装置包含固定单元100、连接杆200和握把300。固定单元100能够夹持胶囊，使胶囊在处于肠道预定位置时固定单元100放开胶囊，如图1所示；连接杆200能够在进入肠道时随肠道的弯曲形态变化，连接杆200设置有电子检测或刻度，使使用者能够了解进入小鼠体内的施用装置长度，并在定点位置放开胶囊，由于使用者在对小鼠进行胶囊施用时无法明确感知胶囊进入肠道的位置，因此需要设计能够辅助使用者了解胶囊所处肠道深度的工具。握把300通过使用者手持帮助控制施用装置。握把300处设置有能够控制固定单元100是否夹持胶囊的控制开关。连接杆200和固定单元100表面设置有润滑层，润滑层能够通过缓慢渗透润滑液减少施用装置与肠道的摩擦，避免肠道的损伤。固定单元100还能够包括椭圆体形态的外轮廓120。外轮廓120容纳固定组件110，通过自小到大的形状顶开肛门撑开肠道，使连接杆200和固定组件110能够顺利进入肠道内部。

固定单元100弧形侧边构成，侧边两端重合形成固定单元100的近端和远端。侧边能够设置为向外凸起的弧形曲线，如图2所示，以形成近端与远端宽度小于中间宽度的结构。弧形曲线自身能够构成夹持胶囊的固定组件110，其通过相对弧线的分离与靠近实现对胶囊的夹持。在胶囊施用装置进入动物肠道时，远端宽度小于中间宽度方便胶囊施用装置在进入肠道时能够以最小的突入点撑开肠道，以此减少对肠道的损伤。中间宽度能够帮助撑开肠道，使肠道自远端宽度缓慢变化至中间宽度，在不损伤肠道的情况下使肠道达到一定宽度，并辅助后续柔性杆的进入。在胶囊施用装置退出动物肠道时，固定单元100的近端宽度小于中间宽度，上述设置在近端以小于柔性杆直径的宽度将包裹柔性杆的肠道打开，并使被打开肠道能够沿固定单元100形状缓慢被中间宽度撑开，使固定单元100能够顺利推出动物肠道。远端和近端的宽度设置在胶囊施用装置进入肠道和退出肠道时均能够以较小宽度打开肠道，并通过圆润弧度的设计使肠道按照固定单元100的顺序缓慢被撑开，避免肠道被刮伤或撑破。

固定单元100的外部设置有能够缓慢渗透润滑剂的润滑面，润滑面能够设置有吸附润滑剂的孔径，在固定单元100受到挤压时润滑剂自变小的孔径中被挤出。润滑面能够是片状吸液材料，其包含三层：三维互通网络结构的吸液层、不透液透气的粘连层和在该吸液层的至少一侧相对粘连层且负载有三维互通网络结构的出液层。粘连层和出液层分别设置于吸液层两侧。粘连层用于将润滑面与固定单元100表面可分离式连接。出液层用于帮助保存于吸液层的润滑剂离开润滑面，并通过出液层与肠道的接触使润滑剂涂抹于肠道表面，以此减少胶囊施用装置与肠道间的摩擦。吸液层用于在胶囊施用装置待使用时，使用者可以通过体外润滑剂的施加，使润滑剂保存于吸液层内部。优选地，润滑面能够是负压吸附医用敷料。润滑面能够是一次性更换的灭菌敷料。

固定单元100远端设置有夹持胶囊的胶囊固定组件110。胶囊固定组件110能够使胶囊与固定单元100连接，并在胶囊施用装置进入肠道时胶囊不会自固定单元100脱落。在胶囊到达预设位置时，固定单元100能够借助外力或依靠肠道对胶囊的挤压力与胶囊脱离，使胶囊停留在肠道预设位置，胶囊施用装置退出肠道。优选地，胶囊固定组件110能够是可控机械手、夹片或吸附件。可控机械手的具体机械结构参考专利公告号为CN101732093B的中国专利。固定组件110为吸附件的具体机械结构参考专利公告号为CN100535628的中国专利。

连接杆200为两端分别连接固定单元100和握把300的柔性细杆。连接杆200自杆近端向杆远端方向设置有长度计量标识。优选地，连接杆200能够是在接受超出一定范围的外力时发生塑性变形的材料构成。长度计量标识最大为厘米单位，其间以毫米单位分离厘米单位。优选地，小鼠的直肠长度在12～15cm之间，而接种菌液的最佳位置在小鼠直肠中段，因此，小鼠的最佳菌液接种位置为距离肛门3～5cm处的肠道。基于上述判断，连接杆200长度应设置为3～20cm之间，其在自固定单元100向握把300方向延伸3～5cm的刻度处设置有接种提示标识，其能够通过不同颜色的标识设定提示使用者胶囊到达最佳接种位置。

胶囊施用装置的固定单元100和连接杆200设置有医用抗菌涂层和医用亲水涂层。优选地，医用抗菌涂层采用纳米银表面处理技术形成的纳米银抗菌涂层。医用亲水涂层为亲水性表面活性剂高聚物涂层。涂覆等表面处理可以采用最常用的浸泡等成膜的方式实现。

握把300作为使用者控制胶囊施用装置的控制件，握把300通过连接杆200与固定单元100连接。固定单元100卡合胶囊的胶囊固定组件110通过布置于连接杆200内部并延伸至握把300处，使使用者能够通过调控握把300上的开关调节胶囊固定组件110，使胶囊施用装置在伸入肠道内部时能够通过开关的工作状态的变化使胶囊固定组件110能够在夹持胶囊和与胶囊分离的两种工作状态中变化。优选地，握把300设置有放置使用者滑脱的防滑套，防滑套设置有防滑花纹。

所述外轮廓120按照能够在空间坐标轴x、y、z中任意两个方向设置有至少两条支撑框的方式形成包裹固定组件110的立体结构，所述立体结构基于两端窄于中间的弧形使固定单元100能够自小到大缓慢进入肠道，避免肠道损伤。

需要注意的是，上述具体实施例是示例性的，本领域技术人员可以在本发明公开内容的启发下想出各种解决方案，而这些解决方案也都属于本发明的公开范围并落入本发明的保护范围之内。本领域技术人员应该明白，本发明说明书及其附图均为说明性而并非构成对权利要求的限制。本发明的保护范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种肠粘膜炎动物模型的构建方法，其特征在于，

所述构建方法包括：

对动物样品的肠道进行菌群接种以诱导动物样品肠道产生炎症，

对接种后的动物样品进行性状观察、生理生化指标检测和接种肠道的粘膜组织结构显微观察，

当动物样品出现血便或粘液便、与炎症因子相关的生理生化指标上升或接种肠道粘膜组织皮损或炎症浸润的症状时，判断所述肠粘膜炎动物模型构建成功。

2.根据权利要求1所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述肠道菌群接种能够是对动物样品的直肠中段进行菌液胶囊或菌液贴片的施用，通过采用保存有混合或单一株系且浓度和体积定量的菌液的菌液胶囊或菌液贴片通过菌液施用装置递送至动物样品的直肠中段预设位置，使菌液胶囊或菌液贴片持续在预设位置进行菌液释放实现细菌接种。

3.根据权利要求2所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述胶囊是通过缓释膜多层隔离和包裹菌液的菌液胶囊，其在肠道内通过肠道的体液对每一层缓释膜的销蚀达到预设时间内不间断对肠道进行小剂量菌群液体的施用。

4.根据权利要求3所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述菌液胶囊按照能够被肠道包裹以卡合固定于肠道内部的方式设置有允许单个细菌穿透的渗透膜，所述渗透膜以密封包裹菌液的方式使胶囊成为具有弧形的可吸收单元，所述胶囊通过所述渗透膜的允许单体细菌穿透的孔道直径设置形成对细菌个体的控释。

5.根据权利要求4所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述菌液胶囊能够通过肠道的包裹作用卡合预设施用位置，并通过肠道的蠕动压力或肠道内部体液的作用帮助菌液胶囊内部的细菌通过所述渗透膜的孔径进入肠道或通过渗透膜被降解释放细菌至肠道。

6.根据权利要求5所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述菌液贴片按照能够吸附并保存菌液的方式设置有吸附层和粘贴层，所述吸附层按照能够在收到挤压时使体内菌液脱出其内部孔径的方式设置于所述粘贴层一侧，所述粘贴层能够是一种允许细菌穿过的可降解粘合层，其通过与肠道的粘合作用使菌液贴片与肠道内壁连接，并基于体液对粘贴层的降解作用在预设时间段内匀速降解直至消失，所述吸附层于肠道内壁脱落。

7.根据权利要求6所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述菌液胶囊还能够是缓释制剂，其按照使活性菌液与低粘度亲水性聚合物混合形成中心缓释层，活性菌液和高粘度亲水性聚合物混合形成外缓释层的方式按照由内向外的顺序设置有中心缓释层、隔离层、外缓释层和包衣，所述包衣能够在接触体液后一定时间内降解以暴露所述外缓释层，所述外缓释层在施用预设时间后暴露所述隔离层，所述隔离层在预设时间内降解暴露所述中心缓释层，通过多层压制形成的缓释胶囊实现菌液的持续施用。

8.根据权利要求7所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述菌液胶囊或菌液贴片通过菌液施用装置被放置肠道内部，所述菌液施用装置包含固定单元(100)、连接杆(200)和握把(300)，其中，

固定单元(100)，与所述连接杆(200)一侧连接，其包含用于夹持或连接菌液胶囊或菌液贴片的所述固定组件(110)和能够撑开肠道的外轮廓(120)，所述外轮廓(120)按照能够在菌液施用装置退出和进入肠道时能够自小向大的趋势进行固定单元(100)的退出的方式设置为两端宽度小于中间宽度；

连接杆(200)，用于连接所述固定单元(100)和所述握把(300)的柔性细杆，其设置有能够探测所述固定单元(100)进入肠道内部深度的长度计量组件并设置有在进入不同动物肠道时用于提示使用者菌液胶囊或菌液贴片到达预设施用位置的接种提示标识；

握把(300)，相对所述固定单元(100)一侧与所述连接杆(200)连接，设置有控制所述固定组件(110)工作状态的开关，用于为使用者提供操作区域和控制所述固定组件(110)工作状态的区域。

9.根据权利要求8所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述固定单元(100)表面设置有片状吸液材料的润滑面，所述润滑面能够通过设置的吸液层在固定单元(100)进入肠道受到挤压时排出润滑液体，以此减少菌液施用装置与肠道内壁的摩擦。

10.根据权利要求9所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述外轮廓(120)按照能够在空间坐标轴x、y、z中任意两个方向设置有至少两条支撑框的方式形成包裹固定组件(110)的立体结构，所述立体结构基于两端窄于中间的弧形使固定单元(100)能够自小到大缓慢进入肠道，避免肠道损伤。

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