CN112969473A - 皮脂腺调节剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种使皮脂腺正常化的外用剂,所述外用剂包含选自属于肠球菌(Enterococcus)属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分,或从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种使皮脂腺正常化的外用剂。
背景技术
痤疮(寻常痤疮)是一种毛囊皮脂腺单位的慢性炎症性疾病,其显著的病理生理学被认为包括由于雄激素的皮脂腺刺激作用引起的皮脂分泌增加、由于漏斗状毛囊的异常角质化导致的毛孔堵塞以及漏斗状毛囊中存在生物。还考虑了其他内部因素和外部因素,包括遗传因素、年龄、饮食因素、环境因素(例如温度和湿度)、机械刺激、压力、化妆品和药物。
已知属于肠球菌(Enterococcus)属的乳酸菌对活生物体具有多种作用。
例如,据报道粪肠球菌(Enterococcus faecalis)NF-1011菌株具有以下作用:抑制血压升高和预防心脏肥大(专利文献1)、免疫刺激作用(专利文献2)、增强干扰素产生(专利文献3)、防止感染(专利文献4)、增强抗癌性(专利文献5)、降低抗癌药的毒性(专利文献6)和激活生物抗氧化能力(专利文献7)。
然而,专利文献1-7基本上公开了乳酸菌的口服给药,并且没有假定其作为外用剂使用。
引文清单
专利文献
专利文献1:JP1993-201871A
专利文献2:JP1996-99887A
专利文献3:JP1996-259450A
专利文献4:JP1996-283166A
专利文献5:JP1996-295631A
专利文献6:JP1997-48733A
专利文献7:JP2017-1961A
发明内容
技术问题
本发明旨在提供一种具有使皮脂腺正常化的优异效果的外用剂。
解决技术问题的技术方案
为了实现上述目的,本发明人进行了广泛的研究。结果,他们发现在皮脂腺细胞中,当痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)存在时,粪肠球菌(Enterococcus faecalis)NF-1011菌株的细胞及其细胞成分抑制了由痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)引起的皮脂产生,并且它们在没有痤疮丙酸杆菌的情况下刺激皮脂腺产生皮脂。
基于上述发现,作为进一步研究的结果,完成了本发明。本发明提供以下使皮脂腺正常化的外用剂。
项1.一种使皮脂腺正常化的外用剂,其包含选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分,或从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分。
项2.根据项1的外用剂,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌。
项3.根据项1或2的外用剂,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌NF-1011菌株(FERM BP-10902)。
项4.根据项1-3中任一项的外用剂,其中细胞为死细胞。
项5.根据项1-4中任一项的外用剂,其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶(溶菌酵素)处理和热处理而获得的成分。
项6.根据项1-5中任一项的外用剂,其中外用剂用于促进或抑制皮脂分泌、预防或改善皮肤干燥、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮或抑制体臭。
项7.一种使皮脂腺正常化的方法,其包括将选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分,或从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分,施用于需要皮脂腺正常化的哺乳动物的皮肤上的步骤。
项8.根据项7的方法,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌。
项9.根据项7或8的方法,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌NF-1011菌株(FERM BP-10902)。
项10.根据项7-9中任一项的方法,其中细胞为死细胞。
项11.根据项7至10中任一项的方法,其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。
项12.选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分,或从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分在制备使皮脂腺正常化的外用剂中的用途。
项13.根据项12的用途,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌。
项14.根据项12或13的用途,其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌NF-1011菌株(FERM BP-10902)。
项15.根据项12-14中任一项的用途,其中细胞为死细胞。
项16.根据项12-15中任一项的用途,其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。
发明的有益效果
在正常条件下,属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分刺激皮脂腺以在皮脂腺细胞中产生皮脂,而当产生异常大量的皮脂时它们则抑制皮脂的产生。因此,该细胞和细胞成分可用作使皮脂腺正常化的外用剂的活性成分,特别是促进或抑制皮脂分泌、预防或改善皮肤干燥、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮或抑制体臭的外用剂的活性成分。
附图说明
图1为示出了在荧光显微镜下观察到的在实验例1中存在或不存在痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)的情况下,使用LFK或FK-23处理的SZ-95皮脂腺细胞的结果的照片。条为50μm。
图2为表示实验例2中的FK-23的分级(分画)方法的图。
图3为表示在荧光显微镜下观察到的在实验例2中存在或不存在痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)的情况下,使用FK-23级分处理的SZ-95皮脂腺细胞的结果的照片。
具体实施方式
下面详细说明本发明的实施方案。
在本说明书中,术语“包括”包括基本上由...组成和由...组成的含义。
根据本发明的用于使皮脂腺正常化的外用剂包括选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分,或从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分。
属于肠球菌属的乳酸菌没有特别限制。实例包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、鸟肠球菌(Enterococcus avium)、铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)、鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)、黄色肠球菌(Enterococcus flavescens)等。其中,粪肠球菌、屎肠球菌等是优选的,粪肠球菌是更优选的。粪肠球菌中,优选从健康个体的粪便中分离的粪肠球菌NF-1011株。粪肠球菌NF-1011菌株于1991年10月8日保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566)),保藏号为FERM P-12564。此外,该菌株已被转化为国际保藏,其保藏号为FERM BP-10902。另外,独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心已于2012年4月与独立行政法人制品评价技术基盘机构(NITE)专利生物保藏中心合并,独立行政法人制品评价技术基盘机构生物技术中心专利生物保藏中心(NITE-IPOD)(〒292-0818日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)现在接替了独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心的微生物保藏工作。
对属于肠球菌属的乳酸菌的细胞没有特别限制,只要它们是属于肠球菌属的乳酸菌的完整结构即可。细胞可以是活细胞或死细胞。细胞可以是干燥产品,例如冻干产品。属于肠球菌属的乳酸菌的活细胞可以从国家或国际分销组织(例如ATCC、IFO和JCM)订购,或者可以从生物体中分离出来。
由于可以通过培养容易地大量生产活细胞,因此使用培养的活细胞经济且生产成本低。属于肠球菌属的乳酸菌的活细胞也可以根据已知方法通过培养来增殖。例如,可以通过如下方法获得大量的活细胞:将乳酸菌接种到适量的无菌Rogosa液体培养基中,将细菌在35-37℃下有氧静态培养10-16小时,以获得预培养液,将预培养液添加到大量无菌Rogosa液体培养基中,以相同的方式进行静态培养。当使用活细胞时,可使用培养液本身,或可以使用培养液的固体(例如,通过离心等在培养液中沉淀活细胞,并任选用生理盐水溶液洗涤而获得的沉淀),或可以使用固体悬浮液(例如,通过将活细胞悬浮在等渗溶液(例如生理盐溶液)中而获得的悬浮液)。
属于肠球菌属的乳酸菌的死细胞没有特别限制。例如,可以使用热处理的活细胞。热处理的温度没有特别限制,只要为100℃以上即可。优选为可以进行高压釜处理的温度(例如110-125℃)。热处理时间例如为1分钟以上,优选为5-20分钟,更优选为约5-15分钟。
乳酸菌粪肠球菌NF-1011菌株的细胞可商购获得,例如,尼奇制药株式会社(ニチニチ製薬株式会社)的FK-23(商标)。
在本发明中,术语“乳酸菌的细胞成分”是指由于破坏乳酸菌的细胞壁而释放到细胞外的成分。
乳酸菌的细胞成分没有特别限制。它是例如其中活细胞的细胞壁被破坏的成分。要破坏的细胞壁可以是活细胞的全部或部分细胞壁。细胞壁破坏方法的实例包括热处理、通过物理力处理、用溶解酶处理及其组合。其中,包括用溶解酶处理的方法是优选的。更优选的一种方法,其包括:(a)用溶解酶处理和(b)选自热处理和通过物理力处理(优选热处理)中的至少一种的处理;进一步优选的方法为:其中在(a)经溶解酶处理后进行(b)选自热处理和通过物理力处理(优选热处理)中的至少一种处理。
热处理的温度没有特别限制,只要为100℃以上即可。优选为可以进行高压釜处理的温度(例如110-125℃)。热处理时间没有特别限制,只要可以破坏细胞壁的全部或部分即可,并且可以根据热处理温度适当设定。热处理时间例如为1分钟以上,优选为5-20分钟,更优选为5-15分钟左右。
通过物理力进行处理的方法没有特别限制,只要可以破坏细胞壁的全部或部分即可。实例包括超声处理、弗氏压碎(フレンチプレス)等。
对用于溶解酶处理的酶没有特别限制,只要其可以破坏全部或部分细胞壁即可。可以使用通常用于溶解细菌的各种酶。实例包括溶菌酶(リゾチーム)、链丝菌蛋白酶(アクチナーゼ)、消解酶(ザイモリエース)、chitarase(キタラーゼ)、mutanosylin(ムタノシリン)和acromopeptidase(アクロモペプチターゼ)。其中,优选为溶菌酶。可以使用一种溶解酶,并且可以组合使用两种或多种溶解酶。
可以根据溶解酶的种类、裂解靶(活细胞)的量等适当地确定用溶解酶处理的条件。例如,可以将溶解酶添加至活细胞悬液中,以使最终浓度为0.01-1mg/mL,并且处理在30-40℃下进行1-10小时。
乳酸菌的细胞成分没有特别限制,只要其为构成乳酸菌的细胞的成分即可。细胞成分优选是水溶性成分。水溶性成分例如通过离心分离等从细胞壁被破坏的乳酸菌中除去固体而得到。
粪肠球菌NF-1011菌株的细胞成分可商购获得,例如,尼奇制药株式会社(ニチニチ製薬株式会社)的LFK(商标)。
作为属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分,优选为从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞提取的可溶于乙酸乙酯的成分。如下述实施例所示,从属于肠球菌属的乳酸菌细胞中提取的成分中,可溶于乙酸乙酯的成分具有皮脂腺正常化作用。
由于本发明的外用剂具有归因于属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分而使皮脂腺正常化的作用,因此适合用作促进或抑制皮脂分泌、预防或改善皮肤干燥、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮或抑制体臭的外用剂。本发明的外用剂包括外用药物和化妆品。化妆品还包括准药物(医薬部外品)。本发明的外用剂被应用于包括人在内的哺乳动物的皮肤(包括头皮)。
在制备药物时,将乳酸菌的细胞及其细胞成分与已知成分一起制备成外用固体制剂、外用液体制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂等形式,从而获得外用制剂。
药物可以包括一种或多种已知的用于外用剂的添加剂,即选自抗菌剂、冷却剂、乳化剂、油、抗氧化剂、表面活性剂、香料、紫外线吸收剂、染料、乙醇、水、保湿剂、增稠剂、增溶剂、胶凝剂等中的一种或多种已知添加剂。
药物中所包含的乳酸菌的细胞或其细胞成分的比例没有特别限制。该比例例如为0.01-99质量%。
化妆品可以以各种形式配制,包括水溶液、增溶剂(可溶化系)、乳剂、油液、粉剂、凝胶剂、软膏剂、气雾剂、水油两层形式和水油粉三层形式。
化妆品可用于任何应用。实例包括基础化妆品,例如洗面奶、洗剂、乳液、面霜、凝胶、香精、精华液、敷面膜(パック)和面膜(マスク);化妆品(メークアップ化粧品),例如粉底、口红、胭脂、眼影、眼线笔和睫毛膏。其他示例包括洁面乳、按摩剂、清洁剂、剃须后润肤液、剃须前乳(プレシェーブローション)、剃须膏、沐浴露、香皂、洗发水、漂洗剂、头发护理、头发定型产品、头发滋补剂、止汗剂、痱子粉等。
除了乳酸菌的细胞或其细胞成分以外,化妆品还根据需要适当含有化妆品中通常使用的成分。实例包括增白剂、保湿剂、抗氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇、粉状成分、着色剂、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。
化妆品中乳酸菌的细胞或其细胞成分的比例没有特别限制。例如,该比例为0.01-99质量%。
如以下实施例所示,由于本发明人发现属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分在正常条件下刺激皮脂腺在皮脂腺细胞中产生皮脂,同时当产生异常大量的皮脂时,它们会抑制皮脂的产生,预期会产生以下效果:促进或抑制皮脂分泌、预防或改善皮肤干燥(老年人、肾病患者、糖尿病患者等)、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮作用和抑制体臭(例如腋臭)。痤疮和诸如腋臭之类的体臭是由于皮脂分泌过多引起的。
因此,由于属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分在皮脂腺细胞中具有显著高的正常化作用(特别是使皮脂分泌正常化的作用),因此它们可用作使皮脂腺正常化的外用剂的活性成分,特别是用于促进或抑制皮脂分泌、预防或改善皮肤干燥、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮、抑制体臭等的外用剂的活性成分。
实施例
给出以下实施例以更详细地说明本发明。然而,本发明不限于这些实施例。
实验例1
实验方法
1.细胞样品的制备:FK-23
将粪肠球菌NF-1011菌株在液体培养基(葡萄糖:2%、酵母提取物:2%、蛋白胨:2%、磷酸氢二钾:4%)中于37℃培养18小时。使用微滤膜,进行收获和洗涤以收集活细胞。将活细胞在110℃下热处理10分钟,然后通过喷雾干燥进行干燥。所得的干燥的死细胞在以下实验中用作细胞样品(FK-23)。
2.细胞样品的制备:LFK
将粪肠球菌NF-1011菌株接种在10ml Rogosa液体培养基中,并在37℃下有氧静态培养(初步培养)15小时,以获得细胞浓度约为109个细胞/ml的细胞溶液(种子)。将细胞接种在10L的Rogosa液体培养基中(细胞浓度:106个细胞/ml),并在37℃下进行有氧静态培养16小时,以获得活细胞数约为109个细胞/ml的细胞溶液。通过离心(12,000×g,20分钟)收集获得的细胞溶液,然后用生理盐水溶液(0.85%氯化钠溶液)洗涤两次,并悬浮在100ml蒸馏水中,从而获得细胞悬浮液。将溶菌酶(リゾチーム)添加到细胞悬浮液中,以使最终浓度为0.1mg/ml,然后在37℃处理4小时。此后,在110℃下热处理10分钟以获得处理过的细胞。在以下实验中,将得到的处理过的细胞用作细胞样品(LFK)。
3.SZ-95皮脂腺细胞分化试验
从德国德绍医学中心(デッサウ医療センター)进口人皮脂腺细胞株SZ-95,并在添加了10%FCS(Thermo Fisher Scientific Inc.,横滨,日本)、50IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素(Nacalai Tesque,京都,日本)和5ng/ml人EGF(PeproTech GmbH,汉堡,德国)的Sebomed基础培养基(Millipore,比勒利卡,马萨诸塞州)中进行培养。每隔一天更换一次培养基,并将细胞在60%-70%汇合度时进行传代培养。
此后,在没有hEGF的培养基中,在存在或不存在痤疮丙酸杆菌(Cutibacteriumacnes)提取物的情况下,将细胞于LFK和FK-23中暴露24小时。将SZ-95细胞以5.0×104细胞/孔的浓度接种在8孔腔室载玻片中。分别以终浓度300μg/ml添加LFK和FK-23,并以2.0×105CFU/ml添加痤疮丙酸杆菌,然后在37℃下孵育24小时。孵育后,以1μM的终浓度添加脂肪相容性指示剂BODIPY,并使用EVOS FL显微成像系统进行观察。进行了类似的跟踪测试,并确认了可重复性。
结果
结果显示在图1中。在不存在痤疮丙酸杆菌的情况下,LFK和FK-23刺激皮脂腺产生皮脂。相反,在痤疮丙酸杆菌的存在下,LFK和FK-23抑制痤疮丙酸杆菌诱导的皮脂产生。
实验例2
实验方法
为了在FK-23中寻找显示出在实验例1中确认的效果的成分,通过图2所示的方法进行FK-23的分级(分画)。
将通过将实验例1中制备的FK-23悬浮在饱和生理盐水中,并对该悬浮液进行抽滤而获得的滤液通过使用乙酸乙酯的溶剂萃取进行分级。将所得的乙酸乙酯层干燥并使用减压蒸发器固化,然后加入乙酸乙酯以分离可溶部分和不溶部分。通过使用90%MeOH和己烷的溶剂萃取(溶媒分配),将可溶于乙酸乙酯的成分分级。结果,90%MeOH级分显示出强活性,因此使用中压柱进行纯化。作为中压柱,使用ODS(SHOKO Purif-Pack(商标)-EX ODS-50μm,尺寸:20,60×20mm I.D.,由昭光科技株式会社制造)。使用乙腈和水的混合溶剂,按50%乙腈、60%乙腈、70%乙腈、80%乙腈、90%乙腈和100%乙腈的顺序进行梯度洗脱。
对于每个获得的级分,进行与实验例1中同样的SZ-95皮脂腺细胞分化测试。
结果
结果示于图中3。图3表明50%乙腈级分得到的结果与实验例1相似。因此,发现乙酸乙酯可溶级分含有表现出使皮脂腺正常化作用的成分。
Claims (7)
1.一种使皮脂腺正常化的外用剂,其包含选自属于肠球菌(Enterococcus)属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分。
2.根据权利要求1所述的外用剂,其中,所述属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。
3.根据权利要求1或2所述的外用剂,其中,所述属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌NF-1011菌株(FERM BP-10902)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的外用剂,其中,所述细胞为死细胞。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的外用剂,其中,所述乳酸菌的细胞成分是通过对所述乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的外用剂,其中,所述外用剂用于促进或抑制皮脂分泌、预防或改善干性皮肤、预防或改善油性皮肤、保湿、抗痤疮或抑制体臭。
7.一种使皮脂腺正常化的外用剂,其包含从属于肠球菌属的乳酸菌的细胞中提取的可溶于乙酸乙酯的成分。
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