CN112957274B - 一种重组胶原蛋白冻干球及制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种重组胶原蛋白冻干球及制备工艺。所述重组胶原蛋白冻干球包括壳聚糖和重组胶原蛋白,它们适当配比的混合物溶液通过低温冻干技术即可制备形状完整、质地柔软的冻干球,制备工艺简单,适合规模化生产;所述壳聚糖不仅对重组胶原蛋白具有良好的赋形效果,可以帮助高含量、广浓度范围的重组胶原蛋白形成形貌完整的重组胶原蛋白冻干球,而且具有天然抗生素类似的抗炎抗敏功能,可以促进伤口愈合,修复皮肤屏障;所述重组胶原蛋白冻干球可以很好的保持重组胶原蛋白的生物活性,实现了重组胶原蛋白的长期保鲜,并可以在水中快速溶解,使用方便,在皮肤修复敷料、化妆品中有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及到化妆品领域,具体涉及一种重组胶原蛋白冻干球及制备工艺。
背景技术
皮肤是人体最大的器官,而真皮层是皮肤最大和最重要的组成部分。胶原蛋白纤维是真皮层的最关键成分,它的含量占皮肤干重的75%左右。三螺旋结构的胶原蛋白形成一个致密有序的网状结构,为皮肤提供拉伸强度和弹性。随着年龄的增加,皮肤中胶原蛋白的含量逐渐减少,皮肤出现弹性下降、松弛、粗糙等衰老现象。作为皮肤的关键成分,胶原蛋白在护肤品中应用广泛。胶原蛋白不仅可以补水保湿,滋养肌肤,而且可以修复皮肤屏障,紧致肌肤。市场上的胶原蛋白主要来自牛、猪、鱼等动物的组织,可能存在病毒隐患、免疫原性等缺陷,而且动物胶原蛋白的水溶性较差,限制了其在化妆品中的应用。基因工程技术制备的重组胶原蛋白完全消除了动物病毒隐患,而且具有免疫原性低、分子量均一等优点。更重要的是,重组胶原蛋白的水溶性好,便于添加,在化妆品、医学美容、生物医药等领域有巨大的应用前景。
化妆品种类繁多,其中很多为液体或膏霜。液体及膏霜化妆品中较容易滋生微生物,因此需要添加防腐剂,但防腐剂存在刺激性的问题,长期使用可能会导致皮肤敏感和损伤。同时,液体及膏霜化妆品中的胶原蛋白容易降解,导致生物活性被破坏。冻干球作为一种新型的化妆品形式,具有保质期长、便于保存和运输、不容易滋生微生物、蛋白质活性不易被破坏等优点。然而,重组胶原蛋白的成型性差,单独的重组胶原蛋白原料很难冻干成球形。
为了解决重组胶原蛋白冻干球冻干成型的问题,现有技术中一般采用加入多种大量的成型物质来帮助冻干成型,例如,中国专利CN 109350555A通过在重组胶原蛋白中加入透明质酸、海藻糖、甘露糖醇、出芽短梗霉多糖等材料提高重组胶原蛋白的成型性,但是海藻糖和甘露糖醇无法冻干成型,而单独使用透明质酸、海藻酸钠、出芽短梗霉多糖(普鲁兰糖)虽然能够冻干成球形,但是透明质酸、海藻酸钠冻干后的溶解性较差,容易形成凝胶状。
本发明意外发现,在重组胶原蛋白中加入一定比例的壳聚糖,可以在重组胶原蛋白含量较高、以及很宽的含量范围内(4-91%wt),制备成型性良好的重组胶原蛋白冻干球。所述制备方法简单,只需要配置重组胶原蛋白和壳聚糖的混合液,适于规模化生产;所述重组胶原蛋白冻干球通过低温冻干技术制备,获得的冻干球可以保持完整的球型结构,质地柔软,在25℃下存放不会潮解或坍塌,并且可以很好的保持重组胶原蛋白的结构和生物活性;所述壳聚糖不仅可以帮助重组胶原蛋白冻干成型,并且可以发挥类似天然抗生素的作用,具有抗炎抗敏功能,能够促进伤口愈合,修复皮肤屏障。本发明提供了一种重组胶原蛋白冻干球,实现了重组胶原蛋白的长期保鲜,绿色安全,可在水中快速溶解,使用方便。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明将壳聚糖与重组胶原蛋白以一定比例混合,成功制备了成型性良好的重组胶原蛋白冻干球。具体方案包括:
第一方面,本发明提供了一种用于制备重组胶原蛋白冻干球的原料液,所述原料液包括重组胶原蛋白溶液与壳聚糖溶液,所述重组胶原蛋白溶液与壳聚糖溶液的浓度比为0.1-10mg/ml:0.75-2.25mg/ml。
优选地,所述重组胶原蛋白冻干球还包括化妆品可接受的功效成分,和/或化妆品可接受的辅助原料。
第二方面,本发明提供了一种根据上述第一方面所述原料液制备获得的重组胶原蛋白冻干球。
第三方面,本发明提供了一种重组胶原蛋白冻干球,所述重组胶原蛋白冻干球包括以下组份:重组胶原蛋白4-91%wt,壳聚糖9-96%wt。
优选地,所述胶原蛋白冻干球还包括化妆品可接受的功效成分,和/或化妆品可接受的辅助原料。
第四方面,本发明提供了一种重组胶原蛋白冻干球的制备工艺,所述制备工艺为:将所述的原料液置于球形冻干模具,低温预冻,梯度升温冻干;
其中,所述低温预冻程序为:-80℃至-20℃,预冻8-24h;所述梯度升温冻干程序为:以5-10℃/h升温至0-25℃后恒温,梯度升温冻干时间为16-48h。
第五方面,本发明提供了一种根据上述第四方面所述制备工艺制备获得的重组胶原蛋白冻干球。
第六方面,本发明提供了一种上述第二方面、第三方面、第四方面任一所述的重组胶原蛋白冻干球在制备皮肤修复敷料、化妆品中的应用。
本发明的有益效果是:
1.在重组胶原蛋白中加入一定比例的壳聚糖,可以在重组胶原蛋白含量很高,以及很宽的含量范围内(4-91%wt),制备成型性良好的重组胶原蛋白冻干球,解决了重组胶原蛋白难以成型的问题;
2.所述重组胶原蛋白完全消除了动物病毒隐患,生物相容性好、免疫原性低,而且水溶性好,方便在化妆品中添加;
3.所述壳聚糖不仅可以帮助重组胶原蛋白冻干成型,并且可以发挥天然抗生素的作用,具有抗炎抗敏功能,促进伤口愈合,修复皮肤屏障;
4.所述重组胶原蛋白冻干球可以保持完整的球型结构,质地柔软,在25℃下存放不会潮解或坍塌,并且可以很好的保持重组胶原蛋白的结构和生物活性,实现了重组胶原蛋白的长期保鲜;
5.所述重组胶原蛋白冻干球在水中可以快速溶解,使用方便;
6.该制备方法简单,只需要配置重组胶原蛋白和壳聚糖的混合液,适于规模化生产。
附图说明
图1实施例4制备的重组胶原蛋白冻干球;
图2实施例5制备的重组胶原蛋白冻干球的电镜图;
图3实施例6制备的重组胶原蛋白冻干球及其溶解效果;
图4实施例7制备的重组胶原蛋白冻干球及其溶解效果;
图5实施例8制备的重组胶原蛋白冻干球及其溶解效果。
具体实施方式
以下具体结合实施例进一步描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。
以下实施中所述的重组胶原蛋白是利用转基因技术和基因重组技术在动物、植物或者微生物表达体系中获得的胶原蛋白。
以下实施例中所述的重组胶原蛋白为大肠杆菌发酵获得的重组胶原蛋白,但不局限于上述方法,也可以为其他方法制备的重组胶原蛋白,包括毕赤酵母发酵的重组胶原蛋白、重组源胶原蛋白等。
以下实施例所述重组胶原蛋白参照文献(He M,Zhang Y,Munyemana J C,etal.Tuning the hierarchical nanostructure of hematite mesocrystals viacollagen-templated biomineralization[J].Journal of Materials Chemistry B,2017,5(7):1423-1429.)制备获得。但是本发明并不局限于上述方法制备获得的重组胶原蛋白,其他任何方法制备获得的重组胶原蛋白均适用本发明所述用于制备重组胶原蛋白冻干球的技术方案,因此,任何方法制备获得的重组胶原蛋白均在本发明的保护范围之内。
实施例1
分别配制0.10、1.00、3.00、5.00、10.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,分别注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至25℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。
不同浓度的重组胶原蛋白0.10mg/ml-10.00mg/ml和1.00mg/ml壳聚糖冻干球的效果如表1所示,它们均可冻干形成良好的球型结构,并且都能在等体积水中快速溶解形成均一溶液。
表1不同浓度的重组胶原蛋白与1.00mg/ml壳聚糖的冻干球效果
注:●成型性良好,○成型性不佳;+可溶解,-不溶解。
实施例2
分别配制0.10mg/ml的重组胶原蛋白溶液和0.50、0.75、1.00、2.00、2.25、2.50mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,分别注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至25℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。
0.10mg/ml的重组胶原蛋白和不同浓度的壳聚糖0.50mg/ml-2.50mg/ml的冻干球效果如表2所示,当壳聚糖的浓度为0.75-2.50mg/ml时,均可冻干形成良好的球型结构;当壳聚糖的浓度为0.75-2.25mg/ml时,良好形貌的冻干球可以在等体积水中快速溶解形成均一溶液。
表2 0.1mg/ml重组胶原蛋白与不同浓度的壳聚糖的冻干球效果
注:●成型性良好,○成型性不佳;+可溶解,-不溶解。
实施例3
分别配制10.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和0.50、0.75、1.00、1.25、2.25、2.50mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,分别注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至25℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。
10.00mg/ml的重组胶原蛋白和不同浓度的壳聚糖(0.50-2.50mg/ml)的冻干球效果如表3所示,当壳聚糖的浓度为1.00-2.50mg/ml时,均可冻干形成良好的球型结构;当壳聚糖的浓度为1.00-2.25mg/ml时,良好形貌的冻干球可以在等体积水中快速溶解形成均一溶液。
表3 10mg/ml重组胶原蛋白与不同浓度的壳聚糖的冻干球效果
注:●成型性良好,○成型性不佳;+可溶解,-不溶解。
实施例4
配制5.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至10℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。
所述重组胶原蛋白冻干球的形貌如图1所示,本实施例制备的重组胶原蛋白冻干球成型性良好,在25℃保存不会潮解或坍塌。
实施例5
配制3.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,分别注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至25℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球
所述重组胶原蛋白冻干球的电镜图如图2所示,本实施例制备的重组胶原蛋白冻干球具有网状结构。整个制备过程保持低温,可以很好的保持重组胶原蛋白的生物活性。
实施例6
分别配制0、1.00、5.00、10.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,分别注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至15℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。制备后,将重组胶原蛋白冻干球移至西林瓶中,加入等体积的超纯水,观察溶解效果。
表4重组胶原蛋白冻干球样品的成分配比
样品编号 | 1 | 2 | 3 | 4 |
壳聚糖(mg/ml) | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 |
重组胶原蛋白(mg/ml) | 0 | 1.00 | 5.00 | 10.00 |
重组胶原蛋白冻干球样品的成分配比如表4所示,其形貌与溶解效果如图3所示,其中A为样品1制备的重组胶原蛋白冻干球;B为样品2制备的重组胶原蛋白冻干球;C为样品3制备的重组胶原蛋白冻干球;D为样品4制备的重组胶原蛋白冻干球;E为样品1制备的重组胶原蛋白冻干球在纯水中溶解后的图像;F为样品2制备的重组胶原蛋白冻干球在纯水中溶解后的图像;G为样品3制备的重组胶原蛋白冻干球在纯水中溶解后的图像;H为样品4制备的重组胶原蛋白冻干球在纯水中溶解后的图像。
结果表明,重组胶原蛋白0-10.00mg/ml与壳聚糖1.00mg/ml混合制备的冻干球成型性良好,形成完整的球状结构,在25℃下不会潮解或坍塌;并且该冻干球在等体积的纯水中能快速溶解,形成澄清溶液。
实施例7
配制3.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;加入适量透明质酸钠,使其终浓度为0.10mg/ml;将上述混合溶液均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至10℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。制备后,将重组胶原冻干球移至西林瓶中,加入1ml的超纯水,观察溶解效果。
所述重组胶原蛋白冻干球的形貌与溶解效果如图4所示。其中左侧为制备的重组胶原蛋白冻干球,右侧为其溶解后的图像。结果表明,重组胶原蛋白与壳聚糖和适量透明质酸钠混合制备的冻干球成型性良好,形成完整的球状结构,在25℃下不会潮解或坍塌;并且该冻干球在等体积的纯水中能快速溶解,形成澄清溶液。可见,适量透明质酸钠的加入不会影响重组胶原蛋白与壳聚糖冻干球的成型性和溶解性。
实施例8
配制5.00mg/ml的重组胶原蛋白溶液和1.00mg/ml壳聚糖溶液的混合溶液;加入适量甘露糖醇溶液,使其终浓度为1.00mg/ml;将上述混合溶液均匀混合,静置除泡;取上述混合溶液,注入聚四氟乙烯球形模具,在-20℃下进行预冻24h,5℃/h梯度升温至10℃,恒温冻干48h,得重组胶原蛋白冻干球。制备后,将重组胶原冻干球移至西林瓶中,加入1ml的超纯水,观察溶解效果。
所述重组胶原蛋白冻干球的形貌与溶解效果如图5所示。其中左侧为制备的重组胶原蛋白冻干球,右侧为其溶解后的图像。结果表明,重组胶原蛋白与壳聚糖和适量甘露糖醇混合制备的冻干球成型性良好,形成完整的球状结构,在25℃下不会潮解或坍塌;并且该冻干球在等体积的纯水中能快速溶解,形成澄清溶液。可见,适量甘露糖醇的加入不会影响重组胶原蛋白与壳聚糖冻干球的成型性和溶解性。
上述结果表明,重组胶原蛋白与壳聚糖混合制备的重组胶原蛋白冻干球成型性良好,具有完整的球状结构,在25℃保存不会潮解或坍塌;并且,该重组胶原蛋白冻干球水溶性好,在等体积的纯水中可以快速溶解,形成澄清溶液。同时,透明质酸钠、甘露糖醇等化妆品添加剂的加入不会影响该重组胶原蛋白冻干球的成型性和溶解性。因此,可以在重组胶原蛋白与壳聚糖混合溶液中加入其它化妆品可接受的功效成分,和/或化妆品可接受的辅助原料也可制备出成型性和溶解性良好的重组胶原蛋白冻干球。
本发明具体实施例中所述的重组胶原蛋白虽然参照文献(He M,Zhang Y,Munyemana J C,et al.Tuning the hierarchical nanostructure of hematitemesocrystals via collagen-templated biomineralization[J].Journal of MaterialsChemistry B,2017,5(7):1423-1429.)制备获得,但是本发明并不局限于上述方法制备获得的重组胶原蛋白,其他任何方法制备获得的重组胶原蛋白均适用本发明所述用于制备重组胶原蛋白冻干球的技术方案,因此,任何方法制备获得的重组胶原蛋白均在本发明的保护范围之内。
以上所述仅为本发明的个别示范性实施案例的细节,对于本领域的技术人员来说,本发明在实际应用过程中根据具体的制备条件可以有各种更改和变化,并不用于限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种用于制备重组胶原蛋白冻干球的原料液,其特征在于,所述原料液包括重组胶原蛋白溶液与壳聚糖溶液,所述重组胶原蛋白溶液的浓度为0.1-10mg/ml,所述壳聚糖溶液的浓度为1.0-2.25mg/ml;所述原料液制备的重组胶原蛋白冻干球中所述重组胶原蛋白的含量为4-91%wt,壳聚糖的含量为9-96%wt。
2.如权利要求1所述的原料液,其特征在于,所述原料液还包括化妆品可接受的功效成分,和/或化妆品可接受的辅助原料。
3.一种由权利要求1或2所述原料液制备获得的重组胶原蛋白冻干球。
4.如权利要求3所述的重组胶原蛋白冻干球在制备皮肤修复敷料、化妆品中的应用。
5.一种重组胶原蛋白冻干球的制备工艺,其特征在于,所述制备工艺为:将权利要求1-2任一所述的原料液置于球形冻干模具,低温预冻,梯度升温冻干;其中,所述低温预冻程序为:-80℃至-20℃,预冻8-24h;所述梯度升温冻干程序为:以5-10℃/h升温至0-25℃后恒温,梯度升温冻干时间为16-48h。
6.根据权利要求5所述制备工艺制备获得的重组胶原蛋白冻干球。
7.如权利要求6所述的重组胶原蛋白冻干球在制备皮肤修复敷料、化妆品中的应用。
Priority Applications (1)
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