CN112940732A - 一种土壤有机磷农药降解催化剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种土壤有机磷农药降解催化剂及制备方法,属于环保领域。土壤有机磷农药降解催化剂,以重量份数计,包括如下成分:生物炭15‑50份、胡敏素5‑25份、黄腐酸钾10‑50份、锐钛型二氧化钛1‑25份、驯化污水底泥20‑50份、复合菌0.3‑1份、生物多糖0.4‑0.6份、硅藻土0.5‑1.5份和麦芽糊精1.2‑2.5份。本发明土壤有机磷农药降解催化剂可有效提高降解土壤有机磷农药降解效率,适于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及环保领域,更具体的说是涉及一种土壤有机磷农药降解催化剂及制备方法。
背景技术
有机磷农药是目前应用最广泛的一类有机农药,其毒性给人类、其他生物和环境带来一系列问题。农业生产中使用的有机磷农药大部分进入耕作环境,在土壤中残留累积;为了避免土壤有机磷农药残留过量累积对人类和环境造成更大的危害,研究有机磷农药的加速降解技术迫在眉睫。
利用微生物降解农药在土壤污染修复中具有较大应用潜力,但也存在一定挑战:由于土壤环境复杂,单纯的微生物制剂修复受到环境变化的冲击较大,无法在土壤中较好地发挥作用;市场上大多菌剂都是好氧菌,而土壤氧气不足,不足以支撑好氧菌的繁殖,进而影响修复作用的发挥;此外,有机磷农药的降解是一个逐级氧化、大分子变小分子、最终被矿化的过程,而土壤微生物更倾向于利用小分子化合物,导致现有的降解有机磷农药的生物制剂在有机磷降解的初始阶段非常缓慢。
因此,如何有效催化土壤有机磷农药降解是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种土壤有机磷农药降解催化剂及制备方法,将其应用于土壤有机磷农药降解效果显著。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种土壤有机磷农药降解催化剂,以重量份数计,包括如下成分:
生物炭15-50份、胡敏素5-25份、黄腐酸钾10-50份、锐钛型二氧化钛1-25份、驯化污水底泥20-50份、复合菌0.3-1份、生物多糖0.4-0.6份、硅藻土0.5-1.5份和麦芽糊精1.2-2.5份;
驯化污水底泥为污水底泥经有机磷农药厌氧驯化获得;
复合菌包括具有有机磷降解功能的好氧菌;
生物多糖为埃吉类芽孢杆菌SWL-W8发酵产生;埃吉类芽孢杆菌SWL-W8保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017113,保藏地址为中国武汉市武汉大学,保藏时间为2017年3月13日,分类命名为埃吉类芽孢杆菌Paenibacillus elgii。
本发明利用生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、生物多糖、硅藻土和麦芽糊精作为复合菌以及驯化污水底泥中兼性厌氧或厌氧菌的负载载体,将物理化学法与微生物法结合,从多方面提高土壤有机磷农药降解效率;
其中,生物炭是生物质在完全或者部分缺氧的情况下热裂解产生的一种高度芳香化难溶性固态物质,具有复杂的多孔隙结构和较大的比表面积,将其作为降解催化剂中的成分施入土壤可增大土壤通透性、改善土壤团聚体,进而有利于好氧的复合菌发挥其降解作用。进一步地,生物质炭中含有一定量的易分解有机化合物,并且其复杂的孔隙结构也能够吸附更多的水分和养分离子,提高土壤水容量和养分吸持容量;好氧的复合菌以及驯化污水底泥中的兼性厌氧或厌氧菌可以利用其中养分,进而提高生物量和活性。
胡敏素和黄腐酸钾均可为土壤提供养分,并且其富含具有电化学活性的基团,在微生物的胞外呼吸过程中发挥重要作用,可作为电子穿梭体介导微生物与胞外电子受体之间的电子传递,加速驯化污水底泥中的兼性厌氧或厌氧菌对有机磷的降解。
锐钛型二氧化钛具有光催化性能,能够在土壤有机磷的降解过程中产生活性氧,从而促进有机磷降解前期的氧化过程,提高降解效率。
复合菌与驯化污水底泥中的兼性厌氧或厌氧菌复配,提高降解催化剂在不同土壤环境中的降解效率,其与锐钛型二氧化钛配合,保证了整个降解过程持续快速进行。
生物多糖一方面能够通过微生物酶的作用水解为单糖为修复剂中的微生物的存活提供必要的养分,一方面通过一定的粘性保证菌体的有效负载;此外,生物多糖还能够与多种重金属形成聚合物,达到吸附重金属的目的,利于复合污染土壤的修复。
硅藻土作为菌剂喷雾助剂,能够保护高温喷雾时的菌株活性;麦芽糊精除了作为菌剂分散剂和喷雾助剂外,还能在土壤中为菌株的长期存活提供碳源。
优选地,一种土壤有机磷农药降解催化剂,以重量份数计,包括如下成分:
生物炭15-40份、胡敏素10-20份、黄腐酸钾20-40份、锐钛型二氧化钛1-20份、驯化污水底泥30-50份、复合菌0.3-0.5份、生物多糖0.4-0.6份、硅藻土0.5-1份和麦芽糊精1.5-2份。
优选地,复合菌包括绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)、巨大芽孢杆菌,还可添加其他具有有机磷降解功能的好氧菌。
洋葱伯克霍尔德菌菌株号BNS,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017663,保藏地址为中国武汉市武汉大学,保藏时间为2017年11月06日,分类命名为洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia。
上述土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)负载复合菌粉的制备
分别对具有有机磷降解功能的好氧菌进行液体培养,获得的菌液添加硅藻土和麦芽糊精,干燥后混合,制得负载复合菌粉;
(2)生物多糖的制备
对埃吉类芽孢杆菌SWL-W8进行发酵,获得含有生物多糖的发酵液;
(3)多糖包裹复合菌液的制备
将负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液混合,制成多糖包裹复合菌液;
(4)污水底泥的驯化
取污水底泥,使用液体培养基添加不同浓度有机磷农药进行厌氧驯化培养,培养结束后离心取沉淀,干燥后获得驯化污水底泥;
(5)复合固体载体的制备
将生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥混合,制成复合固体载体;
(6)有机磷农药降解催化剂的制备
将多糖包裹复合菌液喷洒于复合固体载体上,制得有机磷农药降解催化剂。
优选地,步骤(1)中,
分别对绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌和巨大芽孢杆菌进行液体通氧培养,获得的各菌液添加硅藻土和麦芽糊精,干燥后按照绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比(1-5):(2-5):(1-3):(1-3):(2-6)混合成负载复合菌粉;
制得的负载复合菌粉中绿色木霉有效活菌数≥8×108cfu/g,热带芽孢杆菌有效活菌数≥4×108cfu/g,毕赤酵母菌有效活菌数≥2×108cfu/g,洋葱伯克霍尔德菌有效活菌数≥2×108cfu/g,巨大芽孢杆菌有效活菌数≥4×108cfu/g。
进一步优选地,绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌和巨大芽孢杆菌培养温度28-37℃,培养时间2-5d。
优选地,步骤(2)中,
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8于28-32℃通氧液体培养5-9d,获得含有生物多糖的发酵液。
优选地,步骤(3)中,
负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液混合,并在均质机中均质,均质压力5-10Mpa,制备成多糖包裹的复合菌液。
进一步优选地,负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液按照1:(20-50)g/mL的固液比混合。
优选地,步骤(4)中,
取污水底泥,按照10-20%接种量接入液体培养基,并按照50mg/L加入有机磷农药,于28-37℃严格厌氧条件下驯化培养7-10d;
培养后离心,取沉淀,再次加入液体培养基,并且增加有机磷农药浓度,继续厌氧驯化培养;
重复上述操作直至有机磷浓度增加至200mg/L,驯化培养后离心,取沉淀于40℃以下晾干,得到驯化污水底泥。
驯化培养可提高污水底泥中具有有机磷降解功能兼性厌氧或厌氧菌的数量及活性,进而有利于缺氧土壤环境下的有机磷农药降解。
优选地,驯化培养过程中添加有机磷农药为甲拌磷、辛硫磷、对硫磷中的一种或几种。
优选地,步骤(5)中,
生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥避光混合;
制得的复合固体载体粒径为10-40目。
优选地,步骤(6)中,
多糖包裹复合菌液按照1:(0.5-2)g/mL的固液比均匀喷洒到复合固体载体上,40℃以下避光晾干。
进一步优选地,多糖包裹复合菌液按照1:(1-2)g/mL的固液比均匀喷洒到复合固体载体上。
综上所述,本发明制备简单、成本低,易使用,对于有机磷农药降解效果显著,适于推广应用。
附图说明
图1所示为埃吉类芽孢杆菌多糖发酵液。
图2所示为生物多糖的红外曲线。
图3所示为本发明有机磷农药降解催化剂样品。
图4所示为本发明实施例1有机磷农药降解催化剂对土壤有机磷的降解效果。
图5所示为不同降解催化剂对土壤有机磷的降解效果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种土壤有机磷农药降解催化剂,以重量份数计,包括如下成分:
生物炭25份、胡敏素10份、黄腐酸钾25份、锐钛型二氧化钛10份、驯化污水底泥30份、复合菌0.4份、生物多糖0.5份、硅藻土1份和麦芽糊精1.5份。
复合菌中绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比为1:2:1:1:2。
上述土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,具体步骤如下:
(1)负载复合菌粉的制备
1)菌株:绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、巨大芽孢杆菌均为市售菌;洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia菌株号BNS,保藏编号为CCTCC NO:M 2017663。
2)斜面活化:
将绿色木霉在PDA斜面培养基上划线,30℃静置活化至长满孢子;将热带芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德菌、巨大芽孢杆菌分别在牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基或LB固体斜面培养基划线,37℃静置活化12-18h;将毕赤酵母菌在麦芽汁固体斜面培养基上划线,28℃静置活化24h。
PDA斜面培养基:将去皮马铃薯200g,切成小块,煮沸60min,过滤,滤液加入20g葡萄糖、18g琼脂粉,用水补齐至1000mL,pH自然,分装试管,121℃灭菌20min,摆斜面冷却。
牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂粉18g,水1000mL,pH7.2-7.4,分装试管,121℃灭菌20min,摆斜面冷却。
LB固体斜面培养基:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠10g,琼脂粉18g,水1000mL,pH7.2-7.4,分装试管,121℃灭菌20min,摆斜面冷却。
麦芽汁固体斜面培养基:麦芽汁150mL,琼脂粉3g,pH自然,分装试管,121℃灭菌20min,摆斜面冷却。
3)种子液培养:
将5mL无菌水倒入活化好的绿色木霉的试管中,用接种环刮下孢子,并用手摇晃,制成孢子悬浮液,然后按10%接种量接入PDA液体培养基中,30℃摇瓶培养48h,即为绿色木霉种子液。
将活化好的热带芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德菌、巨大芽孢杆菌接入牛肉膏蛋白胨或LB液体培养基中,37℃摇瓶培养24h即为种子液。
将活化好的毕赤酵母菌接入麦芽汁液体培养基中,30℃摇瓶培养24h即为种子液。
各液体培养基配方除不加琼脂外,其余步骤2)配方。
4)发酵:
将步骤3)培养好的种子液,接种于液体发酵培养基(配方同种子培养基配方)中,绿色木霉28℃通氧培养5天,毕赤酵母菌30℃通氧培养2天,其它菌37℃通氧培养2天。
5)复合菌负载:
发酵完成后,根据绿色木霉发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行冷冻干燥得到绿色木霉负载菌粉。热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌、巨大芽孢杆菌分别按发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行喷雾干燥,获得热带芽孢杆菌负载菌粉、毕赤酵母菌负载菌粉、洋葱伯克霍尔德菌负载菌粉、巨大芽孢杆菌负载菌粉。
按照绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比1:2:1:1:2的比例将各负载菌粉混合成负载复合菌粉。
负载复合菌粉中绿色木霉有效活菌数不低于8×108cfu/g,热带芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g,毕赤酵母菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,洋葱伯克霍尔德菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,巨大芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g。
(2)生物多糖的制备
将埃吉类芽孢杆菌SWL-W8在牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基或LB固体斜面培养基划线,37℃静置活化12-18h。
活化好的埃吉类芽孢杆菌接入牛肉膏蛋白胨或LB液体培养基中,37℃摇瓶培养24h得到种子液。
将种子液接种于产多糖液体培养基中,32℃通氧培养7d,获得含有生物多糖的发酵液。
产多糖液体培养基成分为:蔗糖50g,蛋白胨7g,酵母粉0.5g,磷酸二氢钾1g,磷酸氢二钾1.5g,硫酸镁0.6g,去离子水1000mL。
制备的生物多糖发酵液如图1所示,干燥后对其进行红外谱图分析,结果如图2所示。发酵液中生物多糖含量约为0.5%。
(3)多糖包裹复合菌液的制备
将负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液按配方比例混合,并在均质机中均质,压力10Mpa,制成多糖包裹复合菌液。
(4)污水底泥的驯化
取污水底泥,使用液体培养基添加不同浓度有机磷农药进行厌氧驯化培养,培养结束后离心取沉淀,干燥后获得驯化污水底泥;
取污水处理厂污水底泥湿重100g(含水量40-50%),加入500mL厌氧驯化液体培养基,按照50mg/L加入甲拌磷,于30℃严格厌氧条件下进行定向驯化培养7天。
驯化培养后6000r/min离心20min,取沉淀继续加入厌氧驯化液体培养基,按照100mg/L加入甲拌磷,于30℃严格厌氧条件下定向驯化培养7天。
重复上述操作,甲拌磷浓度每次提高50mg/L,驯化至浓度为200mg/L,离心后将沉淀30℃晾干,即为驯化污水底泥。
厌氧驯化液体培养基成分:氯化钠1g,氯化镁0.5g,磷酸二氢钾0.2g,氯化铵0.3g,氯化钙0.015g,氯化钾0.3g,亚硒酸钠6μg,钨酸钠8μg,氯化亚铁1.5mg,氯化钴0.19mg,氯化锰0.1mg,氯化锌70μg,氯化铜7μg,10mM Tris乙磺酸2.292g,刃天青0.05μg,乳酸钠1.716g,去离子水补足至1000mL。
(5)复合固体载体的制备
将生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥按配方比例于暗室混合,拌匀,制成粒径10-40目的复合固体载体。
(6)有机磷农药降解催化剂的制备
将多糖包裹复合菌液按照固液比约1:1(g/mL)喷洒于复合固体载体上,拌匀,40℃以下阴暗处晾干,制得有机磷农药降解催化剂(图3)。
实施例2
一种土壤有机磷农药降解催化剂,包括以下重量组份的原料:
生物炭40份、胡敏素20份、黄腐酸钾40份、锐钛型二氧化钛20份、驯化污水底泥40份、复合菌0.5份、生物多糖0.6份、硅藻土1份和麦芽糊精2份。
复合菌中绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比为5:5:3:3:6。
上述土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,具体步骤如下:
(1)负载复合菌粉的制备
1)-4)同实施例1。
5)复合菌负载:
5)复合菌负载:
发酵完成后,根据绿色木霉发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行冷冻干燥得到绿色木霉负载菌粉。热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌、巨大芽孢杆菌分别按发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行喷雾干燥,获得热带芽孢杆菌负载菌粉、毕赤酵母菌负载菌粉、洋葱伯克霍尔德菌负载菌粉、巨大芽孢杆菌负载菌粉。
按照绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比5:5:3:3:6的比例将各负载菌粉混合成负载复合菌粉。
负载复合菌粉中绿色木霉有效活菌数不低于8×108cfu/g,热带芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g,毕赤酵母菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,洋葱伯克霍尔德菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,巨大芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g。
(2)生物多糖的制备
方法同实施例1。发酵液中生物多糖含量约为0.6%。
(3)多糖包裹复合菌液的制备
将负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液按配方比例混合,并在均质机中均质,压力10Mpa,制成多糖包裹复合菌液。
(4)污水底泥的驯化
同实施例1。
(5)复合固体载体的制备
将生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥按配方比例于暗室混合,拌匀,制成粒径10-40目的复合固体载体。
(6)有机磷农药降解催化剂的制备
将多糖包裹复合菌液按照固液比约1.4:1(g/mL)喷洒于复合固体载体上,拌匀,40℃以下阴暗处晾干,制得有机磷农药降解催化剂。
实施例3
一种土壤有机磷农药降解催化剂,包括以下重量组份的原料:
生物炭15份、胡敏素10份、黄腐酸钾20份、锐钛型二氧化钛5份、驯化污水底泥30份、复合菌0.3份、生物多糖0.4份、硅藻土0.5份和麦芽糊精1.5份。
复合菌中绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比为3:3:2:2:4。
上述土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,具体步骤如下:
(1)负载复合菌粉的制备
1)-4)同实施例1。
5)复合菌负载:
发酵完成后,根据绿色木霉发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行冷冻干燥得到绿色木霉负载菌粉。热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌、巨大芽孢杆菌分别按发酵液中的菌体干重加入对应比例的麦芽糊精、硅藻土进行喷雾干燥,获得热带芽孢杆菌负载菌粉、毕赤酵母菌负载菌粉、洋葱伯克霍尔德菌负载菌粉、巨大芽孢杆菌负载菌粉。
按照绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比3:3:2:2:4的比例将各负载菌粉混合成负载复合菌粉。
负载复合菌粉中绿色木霉有效活菌数不低于8×108cfu/g,热带芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g,毕赤酵母菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,洋葱伯克霍尔德菌有效活菌数不低于2×108cfu/g,巨大芽孢杆菌有效活菌数不低于4×108cfu/g。
(2)生物多糖的制备
方法同实施例1。发酵液中生物多糖含量约为0.4%。
(3)多糖包裹复合菌液的制备
将负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液按配方比例混合,并在均质机中均质,压力10Mpa,制成多糖包裹复合菌液。
(4)污水底泥的驯化
同实施例1。
(5)复合固体载体的制备
将生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥按配方比例于暗室混合,拌匀,制成粒径10-40目的复合固体载体。
(6)有机磷农药降解催化剂的制备
将多糖包裹复合菌液按照固液比约0.8:1(g/mL)喷洒于复合固体载体上,拌匀,40℃以下阴暗处晾干,制得有机磷农药降解催化剂。
对比例1
与实施例1不同的是,对比例1中采用金红石型二氧化钛替代锐钛型二氧化钛,其余完全相同。
对比例2
与实施例1不同的是,对比例2中添加灭活的负载复合菌粉,其余完全相同。
对比例3
与实施例1不同的是,对比例3中添加未经驯化污水底泥,其余完全相同。
实验例
取土样180kg,平均分成6组18份,每份土样分别按照200mg/kg的浓度加入甲拌磷和辛硫磷,搅拌均匀。再按照50g/kg的施用标准将实施例1-3、对比例1-3所制备的土壤有机磷降解催化剂对应添加到6组土壤中,拌匀后,静置30天,测定各组甲拌磷和辛硫磷,结果如图4、5,表明实施例1-3添加锐钛型二氧化钛、复合菌、驯化污水底泥的土壤有机磷降解催化剂除磷效果显著优于对比例1-3,说明锐钛型二氧化钛、复合菌、驯化污水底泥在土壤有机磷的去除中起到了关键性作用,证明了本发明产品的有效性。
本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种土壤有机磷农药降解催化剂,其特征在于,
以重量份数计,包括如下成分:
生物炭15-50份、胡敏素5-25份、黄腐酸钾10-50份、锐钛型二氧化钛1-25份、驯化污水底泥20-50份、复合菌0.3-1份、生物多糖0.4-0.6份、硅藻土0.5-1.5份和麦芽糊精1.2-2.5份;
所述驯化污水底泥为污水底泥经有机磷农药厌氧驯化获得;
所述复合菌包括具有有机磷降解功能的好氧菌;
所述生物多糖为埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8发酵产生;所述埃吉类芽孢杆菌SWL-W8保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为C CTCC NO:M 2017113。
2.根据权利要求1所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂,其特征在于,
所述复合菌包括绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)和巨大芽孢杆菌;
所述洋葱伯克霍尔德菌菌株号BNS,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017663。
3.权利要求1或2所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)负载复合菌粉的制备
分别对具有有机磷降解功能的好氧菌进行液体培养,获得的菌液添加硅藻土和麦芽糊精,干燥后混合,制得负载复合菌粉;
(2)生物多糖的制备
对埃吉类芽孢杆菌SWL-W8进行发酵,获得含有生物多糖的发酵液;
(3)多糖包裹复合菌液的制备
将负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液混合,制成多糖包裹复合菌液;
(4)污水底泥的驯化
取污水底泥,使用液体培养基添加不同浓度有机磷农药进行厌氧驯化培养,培养结束后离心取沉淀,干燥后获得驯化污水底泥;
(5)复合固体载体的制备
将生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥混合,制成复合固体载体;
(6)有机磷农药降解催化剂的制备
将多糖包裹复合菌液喷洒于复合固体载体上,制得有机磷农药降解催化剂。
4.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(1)中,
分别对绿色木霉、热带芽孢杆菌、毕赤酵母菌、洋葱伯克霍尔德菌和巨大芽孢杆菌进行液体通氧培养,获得的各菌液添加硅藻土和麦芽糊精,干燥后按照绿色木霉:热带芽孢杆菌:毕赤酵母菌:洋葱伯克霍尔德菌:巨大芽孢杆菌质量比(1-5):(2-5):(1-3):(1-3):(2-6)混合成负载复合菌粉;
制得的负载复合菌粉中绿色木霉有效活菌数≥8×108cfu/g,热带芽孢杆菌有效活菌数≥4×108cfu/g,毕赤酵母菌有效活菌数≥2×108cfu/g,洋葱伯克霍尔德菌有效活菌数≥2×108cfu/g,巨大芽孢杆菌有效活菌数≥4×108cfu/g。
5.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(2)中,
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8于28-32℃通氧液体培养5-9d,获得含有生物多糖的发酵液。
6.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(3)中,
负载复合菌粉与含有生物多糖的发酵液混合,并在均质机中均质,均质压力5-10Mpa,制备成多糖包裹的复合菌液。
7.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(4)中,
取污水底泥,按照10-20%接种量接入液体培养基,并按照50mg/L加入有机磷农药,于28-37℃严格厌氧条件下驯化培养7-10d;
培养后离心,取沉淀,再次加入液体培养基,并且增加有机磷农药浓度,继续厌氧驯化培养;
重复上述操作直至有机磷浓度增加至200mg/L,驯化培养后离心,取沉淀于40℃以下晾干,得到驯化污水底泥。
8.根据权利要求7所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
驯化培养过程中添加有机磷农药为甲拌磷、辛硫磷、对硫磷中的一种或几种。
9.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(5)中,
生物炭、胡敏素、黄腐酸钾、锐钛型二氧化钛、驯化污水底泥避光混合;
制得的复合固体载体粒径为10-40目。
10.根据权利要求3所述的一种土壤有机磷农药降解催化剂的制备方法,其特征在于,
步骤(6)中,
多糖包裹复合菌液按照1:(0.5-2)g/mL的固液比均匀喷洒到复合固体载体上,40℃以下避光晾干。
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