CN114854637B - 溶磷促生的热带芽孢杆菌sg15及生物菌剂以及在马铃薯拌种剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15及生物菌剂以及在马铃薯拌种剂中的应用，旨在提供一种对磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁具有促溶效果，并且具有根际促生和修复土壤胁迫等多功能的热带芽孢杆菌；该溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，于2022年04月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.24682；本发明还提供含该菌株的生物菌剂，该生物菌剂能够促进玉米植株的生长；可显著提高马铃薯商品薯产量，达到丰产增收的效果；为微生物肥料产业提供一种新的菌株资源，在土壤磷活化、根际促生和土壤修复等方面显示出潜在的应用前景；属于农业生物技术领域。

Description

溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15及生物菌剂以及在马铃薯拌种 剂中的应用
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，涉及一株热带芽孢杆菌，具体涉及一株具有溶磷效果的热带芽孢杆菌(Bacillus tropicus)，本发明还涉及含该热带芽孢杆菌的马铃薯拌种剂，以及该马铃薯拌种剂的应用。
背景技术
磷是作物生长所必需的营养元素之一，在土壤溶液中，植物吸收可溶性形式的磷，即正磷酸盐(HPO4 2-、H2PO4 -)，它们仅占土壤总磷的0.1％至0.5％(<10μM)(Kopittke,etal.,2018)。目前，施用磷肥是解决土壤缺磷的主要方式，但长期施用化肥会加剧土壤的酸化，降低细菌多样性。而且施用的肥料中超过80％的磷会发生吸附或沉淀反应被固定，导致土壤中全磷含量虽然增加，但土壤中磷素可利用率降低，对作物的增产效果不显著，甚至可能会由于淋失或地表径流造成水体富营养化(Bhat,et al.,2017；Mohammad,et al.,2019)。溶磷微生物可以将土壤中难溶的磷素溶解，以供给植物吸收利用，此外还能分泌一些植物生长所需的生长激素，促进植物生长，从而减少化学磷肥的使用量，对农业可持续发展具有重要意义。
芽孢杆菌具有产芽孢，货架期长等优点，在溶磷微生物研究具有显著的优势。其中巨大芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌等均具有溶磷能力。Ahmad等(2021)从棉花根际筛选出1株具有溶磷能力的枯草芽孢杆菌IA6，通过盆栽试验，证实该菌具有促进棉花幼苗生长的作用。Mahdi等人(2021)筛选出的地衣芽孢杆菌具有溶磷、产IAA、铁载体，耐盐、重金属胁迫的能力，将该菌用于盐胁迫土壤中，结果显示该菌株可显著促进藜麦种子的发芽率、株高和鲜重，并降低植株对Na+的吸收。王呈玉等人(2018)从玉米根际土壤中分离出一株具有溶磷－聚磷能力的阿氏芽孢杆菌XF1，对以磷酸三钙、磷酸铝和磷酸铁为磷源的PVK培养基，溶磷量分别为891.6、205.4和27.2mg.L-1；Pradhan等人(2017)从酸性土壤中筛选出一株解淀粉芽孢杆菌CTC12，该菌对磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的溶磷能力分别为393.3、40.0和175.5mg.L-1，将该菌与磷肥联合施用于花生盆栽时，可提高土壤中磷的有效性，显著促进花生生长，提高花生产量。这些研究结果显示芽孢杆菌在土壤溶磷方面促进植物生长的巨大潜力。
充分挖掘微生物肥料菌株资源，对推进高产优质和绿色高效现代农业具有至关重要的意义。本发明在已分离的100多株芽孢杆菌菌株中，筛选并通过分子鉴定得到一株热带芽孢杆菌(B.tropicus)SG15，因此，有必要挖掘其在微生物肥料开发利用方面的潜力。
热带芽孢杆菌是近年来报道的新菌株。B.tropicusN24T是2017年Liu等人采用多相分类学方法，首次鉴定成热带芽孢杆菌新种。B.tropicus Gxun-17是一株从广西地区分离的热带芽孢杆菌，首次报道该菌具有耐盐、分泌角蛋白酶、降解羽毛的功能(Shen,etal.,2022)。B.tropicus DE-6首次报道具有耐Pb、Zn和Cu特征，但没有溶磷、产IAA和铁载体等根际促生特征(Efe,et al.,2022)。B.tropicus MK318648首次报道具有降解低密度聚乙烯微塑料(LDPE)的功能，将该菌与LDPE膜共培养40d后，其LDPE膜重量降低了10.15％(Samanta,et al.,2020)。然而，至今尚未有人报道过其溶磷、产IAA和促进作物生长方面的能力，因此，本发明挖掘B.tropicus SG15在难溶性磷、根际促生和土壤胁迫修复等方面的潜力，对于开发新型功能微生物资源具有十分重要的意义。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供的第一个目的在于提供一种对磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的促溶效果，并且可以促进根际促生和土壤胁迫性能的热带芽孢杆菌。
一株溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，保藏编号为CGMCC No.24682，于2022年04月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。
该菌的16S rRNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
该溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15是以5％的磷酸钙为磷源的液体培养基，通过富集筛选到一株溶磷菌，利用摇瓶试验进行复筛，最终确定其溶磷效果，以及对不同难溶性磷酸盐的溶解效果。利用16S rRNA及生理生化试验，鉴定为热带芽孢杆菌(Bacillustropicus)。通过摇瓶试验，确定该菌株对磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的促溶效果，并利用盆栽试验，验证了该菌对玉米植株的促生作用，进一步通过大田试验，证实了该菌株具有提高马铃薯商品薯产量的作用，这一菌株对提高土壤肥力、减少磷肥使用量具有重要的应用价值和实践意义。
上述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，所述的热带芽孢杆菌SG15作为难溶性磷酸钙溶解剂的应用；或者所述的热带芽孢杆菌SG15作为难溶性磷酸铁溶解剂的应用；所述的热带芽孢杆菌SG15作为难溶性磷酸铝溶解剂的应用。
上述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，所述的热带芽孢杆菌SG15作为产吲哚乙酸IAA剂的应用。
上述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，所述的热带芽孢杆菌SG15作为耐重金属Cd修复剂的应用。
本发明还有一个目的是含上述溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15的生物菌剂，其溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15活菌数为3.2×109cfu·mL-1。
上述的生物菌剂作为促进玉米种子萌发时的芽长和根长促进剂的应用。
上述的生物菌剂作为提高盆栽玉米植株生物量的应用。
上述的生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用。
进一步的，上述生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用时还包括滑石粉。
进一步的，上述的生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用，用于促进马铃薯的生长，提高马铃薯块茎产量。
上述的生物菌剂作为促进马铃薯的生长，提高马铃薯块茎产量的应用。
与现有技术相比，本发明提供的菌株对难溶性磷酸钙、磷酸铁和磷酸铝有显著溶解作用，该菌还具有产吲哚乙酸(IAA)特性，具有显著的耐重金属Cd胁迫能力。该菌株制备的菌剂能够促进玉米植株的生长。采用该菌株与滑石粉制成马铃薯拌种剂，可显著提高马铃薯商品薯产量，达到丰产增收的效果。
本发明提供的热带芽孢杆菌能为微生物肥料产业提供一种新的菌株资源，在土壤磷活化、根际促生和土壤修复等方面显示出潜在的应用前景。
附图说明
图1为该菌的系统发育树。
图2为该菌的菌落特性、芽孢染色和革兰氏结果图：(a为芽孢染色图，b是革兰氏染色图)。
图3为该菌在以不同难溶性磷为磷源的培养基中的溶磷效果图。
图4是该菌的产IAA能力效果图。
图5是该菌对金属、酸和盐胁迫的能力效果图。
图6是该菌对玉米种子发芽试验和根、芽的作用效果图。
图7是该菌在玉米盆栽试验中对玉米促生效果图和第10d玉米各指标的数据统计图。
图8是在马铃薯田间试验过程中，田间布置和不同处理的分布图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
以下具体实施方式说明，旨在对本发明做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围之内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
以下实施例中除特别说明外，均为本领域中的常规实验方法和操作步骤，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。
实施例1菌株的筛选、分离和纯化
以华南农业大学农场红壤根际土为筛选土样，准确称取土样10.0g，放入装有90mL无菌水的250mL三角瓶中(装有玻璃珠5-7颗)，180r·min-1，摇床振荡30min，使土样充分分散，静置20-30s，取5mL上清液于试管中，90℃加热10min。取1mL水浴后的上清液加入装有25mL溶磷培养基(葡萄糖10.0g，磷酸三钙5.0g，MgCl2·6H2O 5.0g，MgSO4·7H2O 0.25g，KCl0.2g，(NH4)2SO40.1g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)的100mL三角瓶中，置于摇床中进行富集培养，180r·min-1，30℃。以5d为一个富集培养周期，每次取样后取1mL培养液到新的溶磷培养基中进行下一周期的富集培养。依次进行4个周期的富集培养，并在每周期的第1d.第3d和第5d分别在超净工作台中用移液枪取适量上清液，置于离心管中，6000r·min-1，离心10min，取上清液，用钼锑抗比色法测定上清液中水溶性磷含量。最后选取水溶性磷含量达200mg·L-1以上的培养物采用甘油保藏法进行保存。
将筛选出的菌株利用平板划线法纯化后，保存于LB斜面培养基(蛋白胨10.0g，酵母提取粉5.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水1L，pH7.0-7.5)，置于4℃冰箱备用。结合生长力情况与溶磷能力，从大量菌株中，选择(Bacillus tropicus)SG15为合适的菌株作为后续实验的材料。
实施例2特性鉴定
(1)菌落形态特性
SG15在营养琼脂培养基上培养24h后形成的菌落为不规则形，白色，表面湿润光滑，不粘稠易挑起。
(2)生长特性
挑取平板上单菌落于LB液体培养基中，转速180rpm，温度为37℃的摇床中培养12h后，按1％接种量接入新鲜的LB液体培养基中，培养12h，通过平板计数方法，测得菌株发酵液活菌数为3.2×109cfu·mL-1。
(3)芽孢染色
挑取营养琼脂培养基上培养48h后形成的菌落于载玻片上，吸取20μL无菌水在载玻片上与菌株混匀，自然干燥，通过火焰加热固定，滴加5％孔雀绿染色液，加热，在30s内使其冒蒸汽3-4次，冷却后自来水冲洗30s。加0.5％沙黄复染液，30s后，水洗，待干，用显微镜观察结果。结果见图2(a)，芽孢呈绿色，菌体呈红色，表明该菌SG15具有产芽孢能力。
(4)革兰氏染色
挑取单菌落于液体LB培养基中，在37℃，180rpm摇床中培养12h，吸取10μL无菌水于载玻片上，吸取1μL菌液于加好的无菌水中，混匀，于火焰上进行干燥和固定；结晶紫初染1min，水洗，自然晾干；碘液媒染1min，水洗，晾干；95％的乙醇脱色30s，水洗，晾干；0.5％沙黄复染液复染1min，水洗，晾干，在100倍油镜下镜检观察，菌体呈蓝紫色，见图2(b)，表明该菌SG15为革兰氏阳性菌。
(5)分子生物学特性
挑取单菌落放入含100μL无菌水的离心管中吸打均匀后，95℃水浴加热15min使细胞破裂释放出DNA，最后吸出1μL加入到PCR体系中(20μL的PCR反应体系为：DNA模板1μL，引物F1(1mM)0.5μL，引物R1(1mM)0.5μL，ddH2O 8μL，2×Taq PCR Mix 10μL。)进行扩增和跑胶验证。
PCR反应扩增体系：95℃预变性2min，进入热循环；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共32个循环；72℃延伸10min。
采用1.5％琼脂凝胶电泳检测PCR产物的长度和浓度，选择DL2000 Maeker，凝胶成像系统下观察Maeker的1000bp和2000bp条带间是否有明细条带出现。有条带出现的PCR扩增产物送由广州天一辉远基因科技有限公司完成测序，将获得的16S rDNA序列输入美国国立生物信息中心NCBI网页上进行Blast比对，以Blast程序对数据库中的所有序列进行比较分析。运用Mega 7.0软件进行序列分析并构建系统发育树，确定SG15菌株为热带芽孢杆菌，该菌的16S rRNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
实施例3SG15对不同难溶性磷酸盐的溶解效果试验
挑取甘油中SG15菌体划线于LB固体培养基平板上，37℃培养12h。挑取平板上的SG15单菌落接入含有LB液体培养基的试管中，37℃，180rpm，摇床培养12h。将培养液转接至新鲜的LB液体培养基中，在37℃，180rpm的摇床中摇至OD600＝0.4。吸取菌液按1％培养基的量分别接种至20mL以磷酸钙、磷酸铁和磷酸铝为唯一磷源的液体溶磷培养基中，30℃，180rpm，摇床培养10d。分别在第3、5、7、10天取2mL培养液在8000rpm离心5min，取上清液，采用钼锑抗法测定水溶性磷含量，设不接菌为对照，去除对照处理磷含量即为菌株溶磷量，每个处理重复3次。水溶性磷含量试验结果见图3，该菌在以磷酸钙、磷酸铁和磷酸铝为唯一磷源培养基培养10d，该菌在以磷酸钙为磷源培养基中培养5d达最大溶磷量为235.77mg·L-1，在以磷酸铁和磷酸铝为唯一磷源培养基中培养10d达最大溶磷量，分别为24.62和12.34mg·L-1。
实施例4SG15产IAA能力测定
(1)菌株产IAA定性测定
挑取LB平板上单菌落于3mL含100mg·L-1色氨酸的LB培养基中，于30℃摇床，180rpm培养24h。吸取200μL菌液与等量Salkowski比色液(50mL35％HClO4和1mL0.5mol·L-1的FeCl3混合，现配现用)于白瓷板中，分别以200μL未接菌的含100mg·L-1色氨酸的LB培养基和200μL含25mg·L-1的IAA溶液为空白对照和阳性对照，置于黑暗环境下显色30min，结果如图4所示，混合液变红，说明该菌株具有产IAA的能力。
(2)SG15产IAA的定量测定
配制0、2.5、5、10、15、20、25mg·L-1的IAA溶液，分别取2mL各浓度的IAA溶液与等量Salkowski比色液混合，置于黑暗环境下显色30min后，用分光光度计测定混合液在波长为530nm处的OD值，以OD值为纵坐标，IAA溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。接种菌株SG15于LB培养基中过夜培养，测定其OD600值，将其离心，吸取上清液与等量Salkowski比色液混合，置于黑暗环境下显色30min后，用分光光度计测定混合液在波长为530nm处的OD值，对比标曲，计算出该菌株在OD600＝1.0时产生的IAA量为11.94mg·L-1。
实施例5SG15对金属、酸和盐胁迫的效果试验
耐金属和酸胁迫能力：挑取LB平板上的SG15单菌落于LB液体培养基中，37℃，180rpm，过夜培养后，按1％接种量转接至4mL LB液体培养基中，37℃，180rpm，培养至OD600＝0.4。取100uL菌液加至50-60℃的4mL0.75％LB固体培养基中，混匀，倒在15mL1.5％LB固体培养基平板上，在超净工作台上吹20min。取灭菌后的滤纸片放于平板中，分别在滤纸片上滴加10uL 50、100、200、300、400mM Cu(II)；10、20、30、40、50mM Cd(II)；1、2、3、4、5MHCl；20、40、60、80、100mM Mn(II)和200、400、600、800、1000mM Fe(III)。吹干后放于37℃生化培养箱中培养20h。用枯草芽孢杆菌模式菌株3610作为对照，记录透明圈直径大小，试验结果比较见图5(a)。
试验结果表明，SG15在Mn(II)和Fe(III)金属的胁迫下，产生的透明圈直径比3610小，说明该菌对Mn(II)和Fe(III)金属表现出抗性，其中对Cu(II)和Cd(II)金属胁迫的抗性与3610相比，SG15表现出明显抗性；在低浓度的HCl胁迫下，SG15的抗性比3610强，而在高浓度的3-5M HCl胁迫下，SG15的抗性比3610弱。这些试验结果对今后将该菌应用于重金属土壤、酸性土壤等方面提供工作基础。
耐盐胁迫能力：配制含1％、3％、5％、7％和10％NaCl的LB固体培养基，将菌株SG15接种至LB板上，于37℃培养箱中培养12h，观察菌株生长状况并拍照，试验结果如图5(b)。
结果表明，菌株SG15在含1％-5％NaCl平板上培养时可正常生长，在7％NaCl浓度下，菌株生长受到抑制，仅长出少数菌落，在10％NaCl浓度时，菌株完全受到抑制，无法生长。该试验结果对今后将该菌应用于盐胁迫土壤时提供工作基础。
实施例6SG15对玉米种子发芽时芽长和根长的效果试验
(1)菌悬液制备：
①将菌种活化后接入LB液体培养基，过夜培养后转接至新鲜的LB液体培养基中，摇至OD600＝1.0；
②将菌液于离心机中离心，转速为8000rpm，离心5min；
③将菌液浓度稀释至107cfu·mL-1备用。
(2)种子表面消毒处理：用75％乙醇浸泡2min，用无菌水清洗2遍，再用2％次氯酸钠溶液浸泡2min，再用无菌水清洗2-3遍，置于灭菌滤纸上自然晾干，发芽待用。
(3)采用SG15和空白对照进行效果对比试验，共分2个处理组(第一组采用5mLSG15菌悬液+0.025g磷酸钙，第二组采用5mL无菌水+0.025g磷酸钙作为空白对照，用CK表示)。各处理设2个重复，各重复含20颗大小均一、已发芽的玉米种子，将菌悬液加入到滤纸片上，将玉米种子放置滤纸片上，于25℃生化培养箱中培养7d，每天浇水适量，每皿的水量相同。7天后测定种子的芽长和根长。试验结果显示：SG15能够促进玉米种子的芽长和根系生长(见图6)，CK处理和施加菌液处理，芽长分别为5.08和6.58cm，根长分别为7.56和10.77cm，与对照相比，芽长和根系长度分别提高了29.5％和42.5％。
实施例7SG15对盆栽玉米生长效果的试验
(1)菌悬液制备：
①将菌种活化后接入LB液体培养基，过夜培养后转接至新鲜的LB液体培养基中，摇至OD600＝1.0；
②将菌液于离心机中离心，转速为8000rpm，离心5min；
③将菌体重悬于等量无菌水中并稀释至108cfu·mL-1备用。
(2)玉米育苗：
玉米种子水洗催芽，用纱布浸润保存水分，放置25℃生化培养箱中，待种子芽长1cm左右移至50孔育苗盆中，每孔1粒。每天浇水适量，待玉米苗长出3片叶子时，备用移苗。
(3)试验设计：
选取学校周边全磷较高，有效磷较低的土壤，晒干过筛备用。用SG15和空白对照进行效果对比试验，共分2个处理组(第一组加入菌SG15，用T1表示；第二组加入等量的无菌水作为空白对照，用CK表示)，每个处理重复4次。各处理每盆装1.5kg土，施用化学肥料尿素和氯化钾，施用量分别为每千克土尿素87mg，氯化钾63.5mg。
移苗前，将肥料与土混合均匀，挑选长势大小均一的玉米苗移至盆中，覆土后将15mL菌悬液施加至玉米根际，使每克盆栽土壤含菌落数达106cfu。每天浇水适量，每盆水量相同，注意不要使水流出盆底以免菌液和肥料损失而误差。移苗后第10d进行拍照(图7)。第30d进行收样，对玉米植株的株高、茎粗、叶片数和地上部鲜重进行测量。收获后的地上部在105℃下杀青30min，65℃烘干至恒重后称量干重。
结果如图7所示：玉米在种植第10d时，施用菌株SG15和CK处理的株高、叶片数和茎粗分别为30.19和36.22cm、4.08和4.5片、3.08和3.2mm，施用菌株SG15处理的株高、叶片数都显著高于不施菌的CK处理，分别提高了19.97％和11.03％，施用菌株SG15处理的茎粗高于不施菌的CK处理，提高了3.9％，说明施用该菌株能提高玉米的生长速度。
玉米在种植第30d时，对玉米植株的株高、茎粗、叶片数和地上部鲜重、干重进行测量。结果如表1所示：施用菌株SG15处理的株高、茎粗、叶片数和地上部鲜重、干重分别为：61.52cm、9.45mm、46.44g和5.02g；CK处理的株高、茎粗、叶片数、地上部和地下部鲜重、干重分别为：53.48cm、7.90mm、30.51和3.54g。与CK相比，施用菌株SG15玉米植株的株高、茎粗和地上部鲜重、干重分别提高了15.03％、19.62％、52.21％和41.81％。说明加入本发明分离的热带芽孢杆菌SG15能够显著促进玉米植株的生长。
表1不同处理下盆栽玉米植株生长指标的比较(第30d)
注：图中数值为平均值±标准误，同列数据相同字母者表示方差不显著(Duncan，p＜0.05)，下同。
实施例8SG15对促进大田马铃薯产量的效果试验
(1)试验材料
种薯切块：薯种切成块，每块重量为25-30g，每块薯种含1-2个芽点。
种植规格：采用双行起垄种植，垄宽1.2米(含垄沟)，垄高25-30cm，株距20cm，垄内行距25-30cm，种植深度为5-6cm。
常规施肥：商品有机肥400kg/亩+高钾复合肥(13-6-24)120kg/亩，翻耕整地后散施有机肥和复合肥，然后起垄覆盖肥料，种植马铃薯后第50d时进行追施高钾复合肥(13-6-24)25kg/亩。
(2)试验设计
小区面积：小区面积根据实际地块安排，如图8示，每小区约15.84m2，具体如下：共三垄，1.2×3×4.4米＝15.84m2。每垄种植两行，每行种20颗薯块，每小区共种6×20＝120颗薯块，重复4次，每处理共准备薯块4*120＝480颗。
拌种配料及处理：将菌剂SG15和250g滑石粉充分混匀，制得拌种剂含菌量为3.2×109cfu﹒g-1，以市面上杀菌剂(70％甲基托布津，可湿性粉剂，剂量1000g/100kg马铃薯)为CK1对照，不加菌剂为CK2对照，种植后第100d进行收获测产。
马铃薯种植100d后进行收获测产，结果如表2所示，与CK1相比，施加菌剂SG15的处理可提高12.89％的大薯亩产量；与CK1和CK2相比，施加菌剂SG15的处理可显著提高马铃薯中薯亩产量，分别提高了22.28％和25.08％，对小薯亩产量分别提高了4.91％和45.49％；除此之外，杀菌剂甲基托布津、不施菌剂和菌剂SG15处理的商品薯亩产量分别为2177.61kg、2425.82kg和2564.51kg，与杀菌剂甲基托布津、不施菌剂处理相比，施加菌剂SG15处理的商品薯亩产分别提高了17.77％和5.7％，分别提高了386.9kg和138.68kg，按照市场价1.6元/kg，使用菌剂SG15与滑石粉制得的拌种剂可比市面上的杀菌剂甲基托布津每亩增收600-700元。
表2不同处理下田间马铃薯产量指标的比较
注：特大薯产量是指≥175g的块薯，一级薯是指75～175g的块薯，商品薯是指≥75g以上的块薯，小薯是指<75g的块薯，马铃薯按市场收购价1.6元/kg计。
本试验在常规施肥条件下，使用菌剂SG15与滑石粉制得的拌种剂取代市面上的杀菌剂甲基托布津对马铃薯进行拌种，在马铃薯收获期可提高商品薯产量，增加农户收入。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> 溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15及生物菌剂以及在马铃薯拌种剂中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1449
<212> DNA/RNA
<213> Bacillus tropicus
<400> 1
ggggggtgct ataatgcaag tcgagcgaat ggattaagag cttgctctta tgaagttagc 60
ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcccataag actgggataa ctccgggaaa 120
ccggggctaa taccggataa cattttgaac cgcatggttc gaaattgaaa ggcggcttcg 180
gctgtcactt atggatggac ccgcgtcgca ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca 240
aggcaacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca cactgggact gagacacggc 300
ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca atggacgaaa gtctgacgga 360
gcaacgccgc gtgagtgatg aaggctttcg ggtcgtaaaa ctctgttgtt agggaagaac 420
aagtgctagt tgaataagct ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact 480
acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt atccggaatt attgggcgta 540
aagcgcgcgc aggtggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc cacggctcaa ccgtggaggg 600
tcattggaaa ctgggagact tgagtgcaga agaggaaagt ggaattccat gtgtagcggt 660
gaaatgcgta gagatatgga ggaacaccag tggcgaaggc gactttctgg tctgtaactg 720
acactgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg 780
taaacgatga gtgctaagtg ttagagggtt tccgcccttt agtgctgaag ttaacgcatt 840
aagcactccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc 900
cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct 960
tgacatcctc tgacaaccct agagataggg cttctccttc gggagcagag tgacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttgatct tagttgccat cattaagttg ggcactctaa ggtgactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg acggtacaaa gagctgcaag accgcgaggt ggagctaatc tcataaaacc 1260
gttctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agctggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
acgagagttt gtaacacccg aagtcggtgg ggtaaccttt ttggagccag ccgcctaagg 1440
gcacttacg 1449

Claims (8)

1.一株溶磷促生的热带芽孢杆菌(Bacillus tropicus)SG15，于2022年04月15日 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.24682。
2.权利要求1所述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15作为难溶性磷酸钙溶解剂的应用；或者所述的热带芽孢杆菌SG15作为难溶性磷酸铁溶解剂的应用。
3.权利要求1所述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15作为产吲哚乙酸剂的应用。
4.一种生物菌剂，其特征在于，含权利要求1所述的溶磷促生的热带芽孢杆菌SG15，其活菌数为3.2×109cfu·mL-1。
5.根据权利要求4所述的生物菌剂，其特征在于，所述的生物菌剂作为促进玉米种子萌发时的芽长和根长促进剂的应用；或者作为提高盆栽玉米植株生物量促进剂的应用。
6.根据权利要求4所述的生物菌剂，其特征在于，所述的生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用。
7.权利要求6所述的生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用，其特征在于，所述的马铃薯拌种剂还包括滑石粉。
8.权利要求6所述的生物菌剂作为马铃薯拌种剂的应用，其特征在于，马铃薯拌种剂用于促进马铃薯的生长，提高马铃薯块茎产量。
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