CN112813006B - 植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用 - Google Patents

植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物领域，具体涉及一株植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用。所述植物乳杆菌的保藏编号为GDMCC No.61249。本发明提供的植物乳杆菌GDMCC No.61249发酵得到的果蔬汁的益生效果得到了有效提高。

Description

植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一株植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用。
背景技术
乳酸菌(LAB)作为人体正常菌群的主要构成之一，可以改善肠道健康，增强免疫系统，降低某些癌症的风险，降低血清胆固醇浓度，降低血压在高血压患者，预防某些致病菌感染。
LAB由一组革兰氏阳性细菌组成，其特征在于其形态，代谢和生理特性。从实用的食品技术角度来看，以下属属LAB组：浮球菌，食肉杆菌，肠球菌，乳球菌，乳球菌，隐球菌，羊球菌，小球菌，链球菌，四氢球菌，阴道球菌和韦氏菌。该组中包括的细菌为革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，不运动，能进行无氧呼吸和非孢子形成球菌或杆，在生产过程中会产生乳酸作为主要终产物碳水化合物的发酵。它们具有很高的耐酸性，可以在pH5或更低的环境中生存使它们比其他细菌更具竞争优势。在人类社会中水果是饮食中最重要的营养来源，例如碳水化合物，蛋白质，维生素，矿物质和纤维。水果中包括膳食纤维，蛋白质，人类营养所需的能量，矿物质和维生素。但是，水果的营养状况通常会因抗营养素成分的存在而受到抵消。如肌醇六磷酸，蛋白酶抑制剂和多酚。植酸盐与微量营养素(例如钙，铁，钾，镁，锰和锌)形成复合物不溶的，因此无法在人体的肠道中吸收。蛋白质抑制剂(如胰蛋白酶抑制剂)会通过干扰蛋白质消化导致胰腺肥大胰腺酶过度分泌和硫氨酸利用中的代谢紊乱。单宁酸在消化道中也形成酶复合物，降低其利用率。据报道乳酸发酵可显着降低水果基中的植酸含量食物改善矿物溶解度，发酵会增加无味饮食的安全性，营养价值使产品具备不同风味。同时乳酸菌发酵是一种相对具有低成本高效益，低能量保存食物的过程，这对于确保产品的保质期和微生物安全性至关重要。发酵食品约占中国饮食的25％甚至更高，LAB之所以得名是因为它们在发酵过程中会产生有机酸。除了保鲜效果外还产生了天然的浓缩效应和增强食物营养(维生素和必需氨基酸合成)，减少饮料的散装过程中的有害菌污染，如菌毒素，改善感官品质如味道，香气，质地，稠度和食物外观等。此外，这些因素有助于简化准备过程(减少烹饪时间并降低能耗)并增强产品安全性。
含有益生菌的乳制品的有益作用的认识已得到公认。但对乳制品的过敏，乳糖不耐症和胆固醇含量是与大部分消费者使用发酵乳制品有关的主要缺点。现代消费者对他们的个人健康越来越感兴趣，并期望他们食用的食物对健康有利或预防疾病的危害。加之现代社会非传染性疾病(心血管疾病，血压升高等)的升高导致了对非乳类功能性饮料代用品具有较高的接受度。在最近十年，消费者生活方式也在发生改变(素食主义，素食主义等)，与饮食相关的不利因素增加如食物不耐受，吸收不良和过敏都倾向于更多的使用非乳制饮料。因此果蔬发酵饮料具有巨大的潜力填补消费市场中的这一空白，充当提供功能的潜在功能化合物，例如抗氧化剂，膳食纤维，矿物质，益生菌和维生素。LAB还可以用于生产功能性生物分子，对提高发酵水果饮料的质量性具有重要意义，因为它们提供并保存了水果的各种风味，香气，优良质地和丰富的营养，丰富了人类饮食。
目前国内乳酸菌饮品主要是以少数几种乳酸菌进行发酵，在益生菌制剂中使用的常见微生物主要是乳酸杆菌种，例如嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，罗伊氏乳杆菌，鼠李糖乳杆菌，约翰逊氏乳杆菌和植物乳杆菌和双歧杆菌物种。但目前由这些菌种发酵得到的果蔬汁的益生效果还有待进一步提高。
发明内容
本发明的目的是为了提高由现有菌种发酵得到的果蔬汁的益生效果，从而提供一株植物乳杆菌及其在果蔬汁发酵中的应用，本发明提供的植物乳杆菌GDMCC No.61249发酵得到的果蔬汁的益生效果得到了有效提高。
为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，所述植物乳杆菌的保藏编号为GDMCC No.61249。
第二方面，本发明提供了一种发酵菌剂，该发酵菌剂含有如上所述的植物乳杆菌，优选还含有乳酸片球菌GDMCC No.61250。
第三方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于抗肠道致病菌的产品中的应用。
第四方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于降解胆固醇的产品中的应用。
第五方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于抗氧化的产品中的应用。
第六方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备果蔬饮料中的应用。
第七方面，本发明提供一种发酵果蔬饮料，所述发酵果蔬饮料含有如上1所述的植物乳杆菌，或者如上所述的发酵菌剂。
第八方面，本发明提供一种发酵果蔬饮料的制备方法，该方法包括：将如上所述的植物乳杆菌，或者如上所述的发酵菌剂接种至待发酵的果蔬汁中，并进行发酵。
本发明可取得如下的有益效果：
在本发明中，采用发酵成熟的泡菜为菌种来源解决了菌种的安全性问题，且还具有以下优点：
1、本发明提供的植物乳杆菌，优选提供的植物乳杆菌和乳酸片球菌的复合乳酸菌相比于普通乳酸菌发酵饮料，其益生效果可得到有效提高。而且，复合乳酸菌发酵饮品相对于单一饮品菌株间相互协调能更好的发挥作用具有更好的益生效果。
2、本发明提供的植物乳杆菌发酵后通过检测复合果蔬汁对常见致病菌的抑制作用，同常规乳酸菌发酵果汁相比最大抑菌活性提升27％，具有良好的抑菌效果。
3、本发明提供的植物乳杆菌发酵后通过测定其抗氧化活性，对胆固醇的降解能力均有很好的提升效果，即便是发酵果汁通过离心取出菌体后其仍然能降解掉36.7％的胆固醇。
4、本发明提供的乳酸菌，改变了传统菌种发酵造成的发酵风味不足，功能性差等进行优化，寻找到了安全有效的果蔬深加工方式，为其发酵在食品中的运用奠定基础，进促进岭南地区果蔬产业发展，增加国内发酵饮品种类具有良好的市场前景。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
生物保藏
植物乳杆菌
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心(地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼，邮政编码：510075)(保藏单位的缩写为GDMCC)，保藏编号为GDMCC No.61249，简称W928。
乳酸片球菌
本发明的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心(地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼，邮政编码：510075)(保藏单位的缩写为GDMCC)，保藏编号为GDMCC No.61250，简称W929。
附图说明
图1为不同温度下培养本发明混合菌株12小时后以稀释涂布法计算活菌数目；
图2为不同温度下本发明混合菌株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性；
图3为在37℃下发酵本发明混合菌株不同时间后，以稀释涂布法计数活菌数目；
图4为在最佳发酵温度37℃下测定不同发酵时间后发酵果汁对铜绿假单胞菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等常见致病菌的抑菌活；
图5为最佳发酵温度37℃下测定不同发酵时间后发酵果汁的有机酸含量；
图6为在37℃下发酵，每隔6小时测定发酵液的还原糖和总糖的含量；
图7为无细胞液对超氧自由基和DPPH的清除率。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
一方面，本发明提供了一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，其中，所述植物乳杆菌的保藏编号为GDMCC No.61249。
本发明的植物乳杆菌从发酵成熟的泡菜中分离得到的。
本发明提供的植物乳杆菌经过液体培养能够产生大量植物乳杆菌的活菌体，所述培养的方法没有特别的要求，只要是能使所述植物乳杆菌增殖即可，例如可以按照107CFU/mL的接种量将所述植物乳杆菌的活菌体接种于乳杆菌培养基中，并且在厌氧或好氧的条件下，在15-38℃的温度下培养8-72小时后，得到培养液。所述乳杆菌的培养基可以为本领域公知的各种适合乳杆菌培养的培养基，例如可以为乳汁和/或《乳酸菌——生物学基础及应用》(杨洁彬，轻工业出版社，1996年出版)中所述的乳酸菌(MRS)培养基。
本发明可以进一步分离上述培养液中的植物乳杆菌的活菌体，所述分离的方法没有特别的限制，只要是能从培养液中富集菌体即可，例如可以通过离心和/或过滤的方法实现，所述离心和所述过滤的条件可以为公知的条件，本发明在此不再赘述。
第二方面，本发明提供了发酵菌剂，该发酵菌剂含有如上所述的植物乳杆菌GDMCCNo.61249。
根据本发明，为了进一步提高所述植物乳杆菌在果蔬汁中的发酵性能，优选的，所述发酵剂中还含有乳酸片球菌，更优选为乳酸片球菌GDMCC No.61250。
本发明的乳酸片球菌从发酵成熟的泡菜中分离得到的。
本发明提供的乳酸片球菌经过液体培养能够产生大量乳酸片球菌的活菌体，所述培养的方法没有特别的要求，只要是能使所述乳酸片球菌增殖即可，例如可以按照107CFU/mL的接种量将所述乳酸片球菌的活菌体接种于乳杆菌培养基中，并且在厌氧或好氧的条件下，在15-38℃的温度下培养8-72小时后，得到培养液。所述乳杆菌的培养基可以为本领域公知的各种适合乳杆菌培养的培养基，例如可以为乳汁和/或《乳酸菌——生物学基础及应用》(杨洁彬，轻工业出版社，1996年出版)中所述的乳酸菌(MRS)培养基。
本发明可以进一步分离上述培养液中的乳酸片球菌的活菌体，所述分离的方法没有特别的限制，只要是能从培养液中富集菌体即可，例如可以通过离心和/或过滤的方法实现，所述离心和所述过滤的条件可以为公知的条件，本发明在此不再赘述。
根据本发明，该发酵菌剂可以由所述植物乳杆菌和乳酸片球菌在发酵培养基中进行发酵培养后制得，其中，可以将两种菌株进行混合培养，也可以独立培养后再进行混合。所述发酵培养基可以为本领域常规的各种用于发酵乳酸菌，例如，可以为如上所述的MRS培养基，也可以为在MRS培养基的基础上优化的各种适合于发酵乳酸菌的培养基。
根据本发明，所述发酵的条件可以为本领域公知的常规的用于乳酸菌发酵培养的条件，例如，所述发酵培养的温度可以为30-40℃。
根据本发明，所述发酵菌剂的制备方法可以按照本领域常规的方法进行制备，在本发明的一种优选实施方式中，可以按以下方法制备得到：培养植物乳杆菌GDMCCNo.61249至活菌数达到108cfu/mL以上，培养乳酸片球菌GDMCC No.61250至活菌数达到108cfu/mL以上，混合均匀后进行真空冷冻干燥制得。
第三方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于抗肠道致病菌的产品中的应用。
第四方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于降解胆固醇的产品中的应用。
第五方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备用于抗氧化的产品中的应用。
第六方面，本发明提供了如上所述的植物乳杆菌或如上所述的发酵菌剂在制备果蔬饮料中的应用。
第七方面，本发明提供一种发酵果蔬饮料，所述发酵果蔬饮料含有如上1所述的植物乳杆菌，或者如上所述的发酵菌剂。
第八方面，本发明提供一种发酵果蔬饮料的制备方法，该方法包括：将如上所述的植物乳杆菌，或者如上所述的发酵菌剂接种至待发酵的果蔬汁中，并进行发酵。
根据本发明，接种至待发酵的果蔬汁中的植物乳杆菌，或者植物乳杆菌和乳酸片球菌为活菌。但本领域技术人员公知的是，在菌体培养的过程中，其通常也伴随着菌体的死亡，所述活菌体并不指严格意义上的全部为活菌体。
本发明对接种的植物乳杆菌、乳酸片球菌的菌体的数量并没有特别的限定，可以根据不同的用途进行具体的调整。优选的，以每毫升或每克的待发酵的原料为基准，以所述植物乳杆菌计的植物乳杆菌接种量为106-108CFU，以乳酸片球菌计的乳酸片球菌接种量为106-108CFU。
CFU(Colony-Forming Units，菌落形成单位)指活菌个数。在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。
根据本发明，所述发酵的条件可以按照本领域常规的条件进行，例如，所述发酵的温度为35-37℃，时间为24-48小时，初始pH为4-6。
根据本发明，需要说明的是，所述果蔬汁可以为果汁，可以为蔬菜汁，还可以为果汁和蔬菜汁的混合果汁。
其中，所述果汁可以为常规的各种果汁，例如，苹果汁、梨汁、荔枝汁、橙汁、草莓汁、芒果汁等等。
其中，所述蔬菜汁可以为常规的各种蔬菜汁，例如，西红柿汁、芹菜汁、胡萝卜汁、黄瓜汁、南瓜汁、圆白菜汁等等。
根据本发明一种优选的实施方式，所述发酵果蔬汁为发酵西红柿汁和荔枝汁的混合果汁。其中，西红柿汁和荔枝汁的比例可以为1:0.1-10，优选为1:0.5-5。
具体的，可以将购买新鲜的荔枝去核去皮后进行破碎榨汁。西红柿和荔枝汁用4层纱布过滤，对收集的果汁进行50％稀释后将荔枝和西红柿汁进行1:1复合，得到果蔬汁。
以下的制备例、实施例和对比例将对本发明作进一步的说明，但并不因此限制本发明。
在下述制备例、实施例和对比例中：
实验菌株：本发明的植物乳杆菌(该菌株于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心(地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼，邮政编码：510075)(保藏单位的缩写为GDMCC)，保藏编号为GDMCC No.61249)，以下简称菌株W928；
本发明的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，于2020年12月7日被保藏在广东省微生物菌种保藏中心(地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼，邮政编码：510075)(保藏单位的缩写为GDMCC)，保藏编号为GDMCC No.61250，简称W929
对比的菌株为保加利亚乳杆菌、嗜热乳杆菌
MRS液体培养基配方：磷酸氢二甲2g，无水乙酸钠5g，酵母浸粉5g，七水合硫酸镁0.5g，牛肉膏10g，柠檬酸铵2g，葡萄糖20g，胰蛋白胨10g，硫酸锰0.25g，吐温801mL，蒸馏水1000mL(固体培养基加20g琼脂)，pH6.5，115℃灭菌15min后备用，以上试剂均购自科百奥生物技术公司；
活菌数的测定方法：取1ml的发酵果蔬汁加入9ml 0.85％的生理盐水管中依次进行10倍梯度稀释，选择3个合适的稀释梯度从中取1ml稀释液加入至90mm培养皿中，倾注加入55℃、15mlMRS固体培养基，轻轻混匀后静置待凝固后倒置放入37℃恒温培养箱，培养48h后计菌落总数。
制备例1
本制备例用于说明菌株的活化
将冻存于-80℃超低温冰箱内的植物乳杆菌W928、乳酸片球菌W929、保加利亚乳杆菌，嗜热乳杆菌，油管保藏的菌种，按2体积％的接种量分别接种至MRS液体培养基中，然后在37℃，180r/min条件下，培养12h，连续活化3代后进行后续试验。
制备例2
本制备例用于说明果蔬汁的制备
购买新鲜的荔枝，西红柿，荔枝去核去皮后进行破碎榨汁。西红柿和荔枝汁用4层纱布过滤，对收集的果汁进行50％稀释后将荔枝和西红柿汁进行1:1复合，调节初始pH值为5，得到果蔬汁。
实施例1
对植物乳杆菌GDMCC No.61249和乳酸片球菌GDMCC No.61250(1:1比例使用)混合发酵(总接种量2体积％)的最佳条件的确定
1.对最佳发酵温度的确定
分别在35℃，37℃，39℃，41℃，43℃条件下对混合菌进行培养，培养12小时后以稀释涂布法计算活菌数目，以活菌数最多的为最佳发酵温度，结果如图1所示。同时测定不同温度下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性，以抑菌圈大小为判断指标，结果如图2所示。
2.最佳发酵时间的确定
由1得出最佳发酵温度为37℃，在该温度下对发酵时间进行测定，以稀释涂布法计数活菌数目确定最佳发酵时间，结果如图3所示。
3.不同发酵时间对抑菌活性的影响
在最佳发酵温度37℃下测定不同发酵时间后发酵果汁对铜绿假单胞菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等常见致病菌的抑菌活性，以抑菌圈大小为判断指标，结果如图4所示。
4.不同发酵时间对有机酸积累的影响
乳酸作为乳酸菌发酵的重要产物，同时赋予发酵食品的特殊风味，有机酸含量对发酵食品的风味具有重要的意义，有机酸的检测方法以酸碱滴定计算有机酸的含量。即在最佳发酵温度37℃下测定不同发酵时间后发酵果汁的有机酸含量，结果如图5所示。
5.不同发酵时间发酵果汁中总糖和还原糖积累的影响
在37℃下发酵，每隔6小时测定发酵液的还原糖和总糖的含量，结果如图6所示。
实验结果表明，该复合菌系发酵果汁的最佳优化发酵条件为温度为37℃，发酵时间按为30小时，该条件下，混合菌系活菌数达到峰值，对致病菌的抗菌效果明显，经30h的发酵后，果汁中的总糖和还原糖达到最高，有机酸含量有明显提升。
实施例2
按照表1中的方式将各组菌以2体积％总接种量接种至制备例2制备的果蔬汁中，在温度为37℃，初始pH值为5的条件下发酵30小时，收集以上各组的无细胞上清液(CFS)。
表1
菌株
实验组1 植物乳杆菌GDMCC No.61249
实验组2 乳酸片球菌GDMCC No.61250
实验组3 植物乳杆菌GDMCC No.61249+乳酸片球菌GDMCC No.61250以1:1混合
实验组4 植物乳杆菌GDMCC No.61249+保加利亚乳杆菌以1:1混合
对照组1 嗜热乳杆菌
对照组2 乳酸片球菌GDMCC No.61250+保加利亚乳杆菌以1:1混合
(1)大肠杆菌，肠炎沙门氏菌，索状芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌在营养肉汤中孵育24小时，在600nm下稀释至0.06，这相当于McFarland标准0.5，取200微升涂布于固体LB平板。然后，将牛津杯放于固体培养基上分别加入发酵后果蔬汁每只牛津杯加入量为150微升，并在37℃下孵育24小时。空白对照为等体积的果蔬汁，培养24小时后用游标卡尺测定抑菌圈大小评估抗菌活性。其中，以上各组上清液在使用前还用过氧化氢酶，脂肪酶和蛋白酶K(0.1mg/mL)在37℃处理1小。结果如表2所示。
为了检查有机酸如乳酸，琥珀酸和氨基酸代谢物如苯基乳酸是否有助于上清液的拮抗活性，将购自的乳酸，琥珀酸和苯基乳酸稀释在果蔬汁中后加入牛津杯中。大肠杆菌35150，肠炎沙门氏菌梭状芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌混合后过夜培养在600nm下调节至0.06，并在存在或不存在乳酸，琥珀酸或苯基乳酸的情况下于37℃温育24小时。测定致病菌生长评估其抗菌活性，结果如表2所示。
表2
单位：mm
(2)探究发酵后果蔬汁对胆固醇的降解能力
称取500μg胆固醇与发酵后各组果蔬汁混合，每组果蔬汁分为2小组，一小组为上清液，另一组为离心破碎后的细胞液。在37度下孵育4小时后加入无水乙醇和50％氢氧化钾溶液在65℃下进行充分皂化。冷却后加入3ml 5％氯化钠、10ml石油醚，盖紧玻璃塞，振摇2分钟，静置分层。取上层石油醚2ml，置于10ml具玻璃塞的试管内，在65℃恒温水浴中用氮气吹干，加入4ml冰乙酸，2ml铁矾显色液，混匀，放置15分钟后560-575nm下比色。
标准曲线：准确吸取胆固醇工作液0；0.5；1.0；1.5；2.0ml分别置于10ml试管内，在各管内加入冰乙酸，使总体积达4ml。沿管壁加2ml铁矾显色液，混匀，在15-90分钟内，560-575nm下比色。计算胆固醇的降解量评估其胆固醇降解能力，结果如表3所示。
(3)探究复合乳酸菌群在胃酸，胆盐，肠胰蛋白酶和胰蛋白酶作用下的存活率评估其定植肠道能力。
将3g/升胃蛋白酶悬浮于无菌果蔬汁(0.5％NaCl，w/v)中并通过加入1M HCl调节至pH2.5，pH3.5，pH4.5来模拟胃液环境。然后使用膜过滤器(0.2μm)过滤。
通过将1g每升胰酶与0.2％，0.3％，0.4％胆汁盐(w/v)一起悬浮在无菌复合果汁中并通过加入1M NaOH调节至pH8.0来制备模拟肠液环境。然后使用膜过滤器(0.2μm)过滤。
为了确定以上各组菌是否耐受模拟胃环境，果蔬汁接种表1所示各组菌后过夜培养，然后将每组细菌悬浮液(200μL)与1mL模拟胃液和300μL无菌果蔬汁混合。然后将混合物在37℃下孵育每过30分钟测定一次OD600的吸光度，连续测定6次。模拟肠液环境与上述相同，同时将菌种接种到无菌果蔬汁作为空白对照，以第6次结果次来评估以上各组菌对肠道环境的耐受能力，每组实验重复三次。结果如表3所示。
表3
进一步研究还发现，本发明的菌株，特别是本发明的原始菌株、复合菌株发酵果汁后的无细胞液对超氧自由基和DPPH的清除率较高，如图7所示。
此外，为本发明的原始菌株，复合菌株发酵果汁后的果汁有机酸和还原性糖对比，发酵时间为最佳发酵时间28小时。
由以上可见，使用本发明的植物乳杆菌，相比于现有乳酸菌，对果蔬汁进行发酵，一方面同风味层次更加多样口感更加醇厚，另一方面能其抗氧化活性，胆固醇降解能力，对人工胃液和胆盐的抗性均有所提升。且优选使用本发明的复合乳酸菌发酵果蔬汁，和单一的乳酸菌相比复合乳酸菌具有较好的优势。
以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，其特征在于，所述植物乳杆菌的保藏编号为GDMCC No.61249。
2.一种发酵菌剂，其特征在于，该发酵菌剂含有权利要求1所述的植物乳杆菌GDMCCNo.61249。
3.根据权利要求2所述的发酵菌剂，其中，该发酵菌剂还含有乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)，所述乳酸片球菌的保藏编号为GDMCC No.61250。
4.权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂在制备用于抗肠道致病菌的产品中的应用；
其中，所述肠道致病菌选自大肠杆菌，肠炎沙门氏菌，索状芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
5.权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂在制备用于降解胆固醇的产品中的应用。
6.权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂在制备用于抗氧化的产品中的应用。
7.权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂在制备果蔬饮料中的应用。
8.一种发酵果蔬饮料，其特征在于，所述发酵果蔬饮料含有权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂。
9.一种发酵果蔬饮料的制备方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1所述的植物乳杆菌，或者权利要求2或3所述的发酵菌剂接种至待发酵的果蔬汁中，并进行发酵。
10.根据权利要求9项所述的方法，其中，所述发酵的温度为35-37℃，时间为24-48小时，初始pH为4-6。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117187141A (zh) * 2023-10-07 2023-12-08 四川大学 一株用于果蔬浅发酵的植物乳杆菌及发酵果蔬的制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104357353A (zh) * 2014-11-03 2015-02-18 郑州大学 一株植物乳杆菌在发酵果蔬汁制作中的应用
CN108102959A (zh) * 2017-12-23 2018-06-01 浙江大学 人源性降胆固醇植物乳杆菌zy08及其应用
CN109628354A (zh) * 2019-01-30 2019-04-16 江南大学 一株高抑菌活性的植物乳杆菌及应用
CN110218681A (zh) * 2019-06-25 2019-09-10 吉林农业大学 一株发酵乳杆菌kp101及其应用
CN110272842A (zh) * 2019-06-25 2019-09-24 吉林农业大学 一株具有减肥降脂功能的植物乳杆菌lp104
CN111436203A (zh) * 2018-11-12 2020-07-21 中粮营养健康研究院有限公司 一株发酵植物乳杆菌及其用途
CN112111433A (zh) * 2020-09-30 2020-12-22 兰州大学 一株具有耐酸耐胆盐活性的植物乳杆菌lzu-j-qa85及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112012023635A2 (pt) * 2010-03-19 2017-12-12 Yakult Honsha Kk novos lactobacilos classificados como lactobacillus plantarum e seu uso

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104357353A (zh) * 2014-11-03 2015-02-18 郑州大学 一株植物乳杆菌在发酵果蔬汁制作中的应用
CN108102959A (zh) * 2017-12-23 2018-06-01 浙江大学 人源性降胆固醇植物乳杆菌zy08及其应用
CN111436203A (zh) * 2018-11-12 2020-07-21 中粮营养健康研究院有限公司 一株发酵植物乳杆菌及其用途
CN109628354A (zh) * 2019-01-30 2019-04-16 江南大学 一株高抑菌活性的植物乳杆菌及应用
CN110218681A (zh) * 2019-06-25 2019-09-10 吉林农业大学 一株发酵乳杆菌kp101及其应用
CN110272842A (zh) * 2019-06-25 2019-09-24 吉林农业大学 一株具有减肥降脂功能的植物乳杆菌lp104
CN112111433A (zh) * 2020-09-30 2020-12-22 兰州大学 一株具有耐酸耐胆盐活性的植物乳杆菌lzu-j-qa85及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
自然发酵泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定与体外益生特性研究;侯颖等;《动物营养学报》;20170828;第29卷(第10期);3611-3619 *

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