CN113881592B - 一株罗伊氏乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物技术领域，公开了一株罗伊氏乳杆菌及其应用。该罗伊氏乳杆菌，名称为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)L2，于2021年9月6日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：61919，该罗伊氏乳杆菌具有抗氧化能力，具有清除DPPH自由基、还原力、清除超氧阴离子自由基和清除羟自由基的能力；可以抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等肠道致病菌；具有耐胃肠道内环境的能力，同时，具有优良的自聚集性和疏水性从而使其能够粘附到肠道上皮发挥益生作用，可用于制备具有抗氧化和/或抑制有害菌的食品、药品或添加剂。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株罗伊氏乳杆菌及其应用。
背景技术
联合国粮食及农业组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）将益生菌定义为“当给予足够数量时，对宿主健康有益的活微生物”，即表明益生菌为活的微生物，当应用足够数量时，会对宿主产生一种或多种特殊且经论证的功能性健康益处，包括调节肠道菌群的平衡来预防因菌群紊乱引发的一系列疾病，在增强机体免疫功能、降低血清胆固醇、降低心血管病发病率、缓解氧化应激、抑制致病菌定植、预防癌症等与人体健康紧密关联的方面都发挥着关键作用。乳酸菌，尤其是乳酸杆菌，是最常被用作益生菌的微生物，被认为是肠道微生物群中理想的成员，而且这些细菌具有“公认安全”（Generally Recognized As Safe, GRAS）的地位。
益生菌以其绿色健康的优点愈发引起研究者及产业界的关注，在保健食品、药品和乳品工业上得到广泛应用。胃肠道和母乳是分离人源潜在益生菌菌株的可靠来源。众所周知，母乳是新生儿无菌肠道中菌群定植的重要因素。基于此，有人认为母乳中含有可能用作益生菌的细菌菌株。此外，成人、儿童和婴儿的粪便也被发现含有大量的益生菌。动物源性食品，如生奶或发酵食品，以及植物源发酵食品，都是分离潜在益生菌菌株的其他丰富来源。尽管所有用于人类的益生菌也可以用于动物和家禽，但通常建议用于人类的益生菌应该来自“人体或食物来源”，因为这些菌株更有可能对人体安全，并且能够附着在人体肠道上皮细胞上。因此，在一定程度上，研究健康人体的肠道益生菌组成对益生菌的开发利用更具有潜力和价值。
发明内容
本发明第一方面的目的，在于提供一株罗伊氏乳杆菌。
本发明第二方面的目的，在于提供一种罗伊氏乳杆菌培养物。
本发明第三方面的目的，在于提供第二方面的罗伊氏乳杆菌培养物的制备方法。
本发明第四方面的目的，在于提供一种菌剂。
本发明第五方面的目的，在于提供第一方面的罗伊氏乳杆菌、第二方面的罗伊氏乳杆菌培养物和/或第四方面的菌剂在制备产品中的应用。
本发明第六方面的目的，在于提供一种产品。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供一株罗伊氏乳杆菌，名称为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2，于2021年9月6日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：61919。
所述罗伊氏乳杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个方面，提供一种罗伊氏乳杆菌培养物，通过培养第一方面的罗伊氏乳杆菌得到。
本发明的第三个方面，提供本发明第二方面的罗伊氏乳杆菌培养物的制备方法，将第一方面的罗伊氏乳杆菌接种于培养基中，培养，得到罗伊氏乳杆菌培养物。
优选地，所述罗伊氏乳杆菌的接种量为所述培养基的2%（v/v）～5%（v/v）。
优选地，所述培养基为MRS肉汤培养基、强化梭菌（RCM）培养基和LB培养基中的至少一种；进一步为MRS肉汤培养基。
优选地，所述培养的条件为35～40℃下培养8～24h；进一步为36～38℃下培养10～12h。
本发明的第四个方面，提供一种菌剂，包含本发明第一方面的罗伊氏乳杆菌。
优选地，所述菌剂还包含：其他益生菌、营养物质和辅料。
优选地，所述营养物质包括：蛋白质、碳水化合物、脂类物质、矿物质、维生素、植物提取物、氨基酸、免疫调节剂和乳汁替代物中的至少一种。
优选地，所述辅料包括稳定剂、增溶剂、赋形剂和缓释剂。
本发明的第五个方面，提供（1）～（3）中至少一种在制备产品中的应用：
（1）本发明第一方面的罗伊氏乳杆菌；
（2）本发明第二方面的罗伊氏乳杆菌培养物；
（3）本发明第四方面的菌剂。
优选地，所述产品具有以下功能：
（a1）抗氧化；和/或
（a2）抑制有害菌。
优选地，所述抗氧化包括清除DPPH自由基、还原力、清除超氧阴离子自由基和清除羟自由基中的至少一种。
优选地，所述有害菌为肠道致病菌；进一步为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌中的至少一种；更进一步为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少一种。
优选地，所述产品包括食品、药品和添加剂。
本发明的第六个方面，提供一种产品，包含：（1）～（3）中至少一种；
（1）本发明第一方面的罗伊氏乳杆菌；
（2）本发明第二方面的罗伊氏乳杆菌培养物；
（3）本发明第四方面的菌剂。
优选地，所述产品具有以下功能：
（a1）抗氧化；和/或
（a2）抑制有害菌。
优选地，所述抗氧化包括清除DPPH自由基、还原力、清除超氧阴离子自由基和清除羟自由基中的至少一种。
优选地，所述有害菌为肠道致病菌；进一步为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌中的至少一种；更进一步为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少一种。
优选地，所述产品包括食品、药品和添加剂。
本发明的有益效果是：
本发明提供了一株罗伊氏乳杆菌，名称为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2，于2021年9月6日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：61919，该罗伊氏乳杆菌具有抗氧化能力，具有清除DPPH自由基、还原力、清除超氧阴离子自由基和清除羟自由基的能力；可以抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等肠道致病菌；具有耐胃肠道内环境的能力，同时，具有优良的自聚集性和疏水性从而使其能够粘附到肠道上皮发挥益生作用，对目前益生菌菌库的有效补充。
附图说明
图1是实施例1罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2革兰氏染色后菌体形态图。
图2是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG抗氧化活性对比图：其中，A是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的DPPH自由基清除活性对比图；B是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的还原力对比图；C是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的超氧阴离子自由基清除活性对比图；D是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosusLGG的羟自由基清除活性对比图；*表示p<0.05。
图3是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的胆盐耐受结果对比图。
图4是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的模拟胃肠液耐受结果对比图：其中，A是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosusLGG的模拟胃液耐受结果对比图；B是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的模拟肠液耐受结果对比图；**表示p<0.01；***表示p<0.001；****表示p<0.0001。
图5是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的自聚集率结果对比图；*表示p<0.05。
图6是Lactobacillus reuteri L2和Lactobacillus rhamnosus LGG的疏水性能结果对比图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。本实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的试剂和材料；本实施例所涉及的各种培养基配方均可以在实验手册中查到。本实施例中所提到的目前广泛应用的益生乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus LGG（菌种号ATCC 53103），在具体实施例中出现均作为阳性对照菌株。
BNMM培养基：富集培养基（basal nutrient growth medium supplemented withmomordica grosvenori, BNMM）成分（100mL）：0.2g酵母提取物，0.2g蛋白胨，0.01g NaCl，0.004g KH2PO4，0.004g K2HPO4，0.001g MgSO4·7H2O，0.001g CaCl2，0.2g NaHCO3，0.002g氯化血红素，0.05g半胱氨酸-盐酸，0.05g胆盐，0.2mL吐温80，5μL 1%刃天青溶液和1μL维生素K1，添加1.0g的罗汉果提取物干粉（终浓度为10.0 mg/mL）作为主要碳源，加水定容至100mL。
MRS肉汤培养基（g/L）：蛋白胨10.0，牛肉粉10.0，酵母粉5.0，葡萄糖20.0，硫酸镁0.1，乙酸钠5.0，柠檬酸铵2.0，磷酸氢二钾2.0，硫酸锰0.05，吐温80 1.0，pH值6.2±0.2。
实施例1 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的分离与鉴定
用一次性粪便采集杯收集广州市2526岁的健康成年人粪便，由当地伦理委员会批准同意了这项过程。
将经BNMM培养基富集后的粪便肠道菌群发酵液用无菌PBS梯度稀释至10-6倍，各取100 μL分别涂布于MRS琼脂平板上，倒置平皿，37℃厌氧培养至长出单菌落。根据菌落大小、形态等特征选取单菌落进行分离纯化，至平板上菌落形态一致。将筛选出的菌株进行革兰氏染色、产气实验、过氧化氢酶实验，选取革兰氏染色阳性（如图1所示）、产气阴性、过氧化氢酶阴性的菌株进行测序鉴定。
提取目标菌株基因组DNA，采用细菌通用引物对提取的DNA进行16S rDNA的PCR扩增，将试验所得PCR产物进行测序鉴定。该菌株16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，经16SrDNA测序结果显示，L2菌株为罗伊氏乳杆菌。将分离纯化后的罗伊氏乳杆菌L2菌株保存至甘油中，-20℃下冻存。该菌株名称为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2，于2021年9月6日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：61919。
实施例2 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的抗氧化能力测定
采用4种互补的方法对菌株的抗氧化功能进行了评价，以LGG菌株为阳性对照株。
1）DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除试验
取1 mL菌株（罗伊氏乳杆菌L2或LGG）菌悬液（109 CFU/mL）与1 mL DPPH-无水乙醇溶液（0.2 mM）等体积混合，在25℃黑暗中孵育30 min；以2300×g离心10 min后收集上清液；在517 nm处一式三份测量吸光度，计算菌株对DPPH自由基的清除能力。
清除DPPH自由基活性(%)=[1-(Abs1-Abs2)/Abs0]×100%；
其中Abs0是对照（MRS肉汤培养基代替样品（菌悬液））的Abs，Abs1是样品的Abs，Abs2是样品在与Abs1相同条件下用无水乙醇代替DPPH溶液的Abs。
结果如图2中A所示：罗伊氏乳杆菌L2的DPPH自由基清除能力与LGG相当，可达到85%以上。
2）还原力
将0.5 mL菌株（罗伊氏乳杆菌L2或LGG）菌悬液（109 CFU/mL）与0.5 mL PBS（0.2 M，pH 6.6）和0.5 mL K3Fe(CN)6溶液（铁氰化钾，1%，w/v）混合，在50℃下孵育20 min；然后，快速冷却后加入0.5 mL 10%(w/v)三氯乙酸，沉淀蛋白质；混合物2300×g离心10 min后，将1mL上清液与1 mL 0.1%(w/v) FeCl3混合，反应10 min后，在700 nm处测定吸光度；通过使用上述方法测量0.00～1.50 μmol/mL抗坏血酸来制作标准曲线。将吸光度值与标准曲线进行比较，以确定抗坏血酸当量。结果如图2中B所示：罗伊氏乳杆菌L2的还原力略高于LGG。
3）超氧阴离子自由基清除试验
NADH（还原型辅酶Ⅰ）、NBT（氯化硝基四氮唑蓝）和PMS（吩嗪硫酸甲酯）用PBS（0.1M，pH 7.4）溶液溶解；将0.5 mL菌株（罗伊氏乳杆菌L2或LGG）菌悬液（109 CFU/mL）、0.5 mL的NADH（468 μM）、0.5 mL的NBT（156 μM）和0.5 mL的PMS（60 μM）混合。混合物在25℃孵育5min，2300×g离心10 min后，在560 nm处一式三份测定吸光度，计算菌株对超氧阴离子的清除能力。
超氧阴离子自由基清除活性(%)=[1-(Abs1-Abs2)/Abs0]×100%；
其中Abs0是对照（MRS肉汤培养基代替样品（菌悬液））的Abs，Abs1是样品的Abs，Abs2是样品在与Abs1相同条件下用PBS（0.1 M，pH 7.4）代替NBT溶液的Abs。
结果如图2中C所示：罗伊氏乳杆菌L2的超氧阴离子自由基清除率达到94%以上，显著高于LGG（p<0.05）。
4）羟自由基清除试验
将菌株（罗伊氏乳杆菌L2或LGG）菌悬液0.5 mL（109 CFU/mL）与1.0 mL PBS（pH7.4）、0.5 mL 1,10-菲咯啉（2.5 mM）、0.5 mL FeSO4（2.5 mM）和0.5 mL H2O2（2.5 mM）混合；混合物在37℃孵育1 h，2300×g离心10 min后，在536 nm处一式三份测定吸光度，计算菌株对羟自由基的清除能力。
羟自由基清除活性(%)=[(Abs1- Abs2)/ (Abs0- Abs2)]×100%；
其中Abs2是对照（MRS肉汤培养基代替样品（菌悬液））的Abs，Abs0为去离子水代替H2O2和培养基代替样品的Abs，Abs1是样品的Abs。
结果如图2中D所示：罗伊氏乳杆菌L2的羟自由基清除略高于LGG，达到90%。
实施例3 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的抑菌能力测定
采用琼脂扩散的国际通用牛津杯法测定菌株对肠道致病菌的抑制能力，选择金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌O157: H7 ATCC25922为指示病原菌。将按2%(v/v)接种量接种于MRS肉汤培养基中37℃厌氧培养10h后的Lactobacillus reuteri L2及Lactobacillus rhamnosus LGG菌液离心收集上清液（12000 rpm，2 min），并利用0.22 μm无菌滤膜过滤除菌。
分别将2株指示病原菌的菌悬液（约108 CFU/mL）按1%的量加入到 LB 琼脂培养基中，充分混合，定量加入约15 mL/培养皿。待含有病原菌的LB平板冷凝后，将无菌的牛津杯轻置于混入指示菌的培养基上，分别向牛津杯中加入100 μL过滤除菌发酵上清液，以未接菌的MRS液体培养基作为阴性对照。将平板正置于37℃恒温培养24 h。培养结束后，用游标卡尺测量抑菌圈直径。
结果如表1所示，该结果表明，Lactobacillus reuteri L2对病原菌Escherichia coli和Staphylococcus aureus均有抑制效果，与阳性对照株Lactobacillus rhamnosus LGG无显著差异。
表1. L2和LGG对Escherichia coli和Staphylococcus aureus的抑菌圈直径(mm)
实施例4 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的胃肠道内环境耐受力
胃肠道内环境包括胆盐环境，胃液、肠液环境。
1）胆盐耐受力
在MRS肉汤培养基中加入0.3%(w/v)的牛胆盐，将活化后的菌株过夜培养至对数期后，通过离心（6000 g，10 min，4℃）收集菌体细胞并在MRS肉汤培养基中重悬。在900 μL0.3%(w/v)的牛胆盐的MRS肉汤培养基中加入100 μL（108 CFU/mL）等量细菌悬液。将悬浮液在37℃下厌氧培养3 h，分别于0，2，3 h取100 μL进行涂板，MRS琼脂平板在37℃厌氧培养48h后，计算活菌数量，结果以存活率表示。
结果如图3所示，在0.3%的牛胆盐存在下37℃厌氧培养3 h，L2和LGG都能存活，两者存活率无显著性差异，均可达到85%以上。
2）胃、肠液耐受力
125 mM NaCl、7 mM KCl、45 mM NaHCO3和3 g/L胃蛋白酶，用盐酸调节至pH 2.5，经0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，此为模拟胃液。45 mM NaCl、1 g/L胰酶和3 g/L牛胆汁，用氢氧化钠调节至pH 8.0，经0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，此为模拟肠液。
6000 g，10 min，4℃离心收集过夜培养至对数生长期的菌体细胞，用0.85%NaCl洗涤两次并在500 μL相同的缓冲液中重悬。在900 μL模拟胃液或模拟肠液中加入100 μL（108 CFU/mL）等量细菌悬液。将悬浮液在37℃下厌氧培养3 h，分别于0，1，2，3 h取100 μL进行涂板，MRS琼脂平板在37℃厌氧培养48 h后，计算活菌数量，结果以存活率表示。
结果如图4所示，L2在模拟胃液中处理1、2 h后存活率较高（且2 h优于LGG），而在模拟胃液3 h后存活率相对LGG较低，但L2在模拟胃液3 h后存活率仍有约65%，而在模拟肠液中，L2的耐受能力（暴露3 h后存活率达到170%以上）显著高于LGG；说明Lactobacillus reuteri L2对人工胃肠液耐受性能良好，能够存活于人体胃肠道内，具有作为益生菌的潜力。
实施例5罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的自聚集性能
6000 g，10 min，4℃离心收集过夜培养至对数生长期的菌体细胞，用PBS洗涤两次并重悬调节OD600 nm为1.0。将细胞悬浮液涡旋10 s，在37℃静置厌氧培养2、4、24 h。最后，吸取上清液用PBS稀释来测定OD600 nm的值。用公式(A0-At)/A0×100%计算自聚集，其中A0表示0小时的吸光度，At表示2、4、24 h的上清液吸光度。试验一式三份，重复分析。
结果如图5所示，L2的自聚集率在培养2 h，4 h，24 h后都比LGG强，并且二者随着培养时间的增加自聚集率提高，其中24 h后L2的自聚集能力显著高于LGG(p<0.05)。
实施例6 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的疏水性能
6000 g，10 min，4℃离心收集过夜培养至对数生长期的菌体细胞，用PBS洗涤两次并重悬调节OD600 nm为1.0。向9 mL菌体细胞悬浮液中加入9 mL二甲苯，剧烈混合5 min，在37℃静置1 h后，缓慢去除水相并测量水相的OD600，记录为At。按照公式H% =[(A0-At)/A0]×100%计算细胞表面疏水性，其中A0和At分别为二甲苯混合前后的吸光度。试验一式三份，重复分析。
结果如图6所示，LGG和L2经过二甲苯处理1 h后，其表面疏水性分别为84.19%和80.77%，差异不显著；罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的自聚集性能力和表面疏水性能说明罗伊氏乳杆菌L2能够有效定植于肠道上皮，具有粘附于人体肠道的能力，为其发挥益生作用提供了基础。
实施例7 罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2的溶血试验
菌株37℃培养至对数期，在含5%无菌绵羊血的哥伦比亚血琼脂平板上划线，37℃下培养24 h，观察菌落周围培养基变化。在菌落周围产生绿色区域的菌株被认为是α溶血（部分溶血性），在菌落周围产生透明区域的菌株被认为是β溶血（完全溶血性），而在菌落周围没有区域的菌株被认为是γ溶血（不溶血）。金黄色葡萄球菌ATCC25923作为阳性对照（β溶血）。
结果显示，Lactobacillus reuteri L2没有出现溶血现象，即γ溶血，而金黄色葡萄球菌ATCC25923完全溶血，即β溶血。表明，Lactobacillus reuteri L2菌株不产生溶血素，体外培养不产生溶血环，因此应用于人体或动物体不产生致病性，是安全的。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南理工大学
<120> 一株罗伊氏乳杆菌及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1466
<212> DNA
<213> Lactobacillus reuteri L2
<400> 1
ccgaaaacat gcaagtcgta cgcactggcc caactgattg atggtgcttg cacctgattg 60
acgatggatc accagtgagt ggcggacggg tgagtaacac gtaggtaacc tgccccggag 120
cgggggataa catttggaaa cagatgctaa taccgcataa caacaaaagc cacatggctt 180
ttgtttgaaa gatggctttg gctatcactc tgggatggac ctgcggtgca ttagctagtt 240
ggtaaggtaa cggcttacca aggcgatgat gcatagccga gttgagagac tgatcggcca 300
caatggaact gagacacggt ccatactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccaca 360
atgggcgcaa gcctgatgga gcaacaccgc gtgagtgaag aagggtttcg gctcgtaaag 420
ctctgttgtt ggagaagaac gtgcgtgaga gtaactgttc acgcagtgac ggtatccaac 480
cagaaagtca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta 540
tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttgct taggtctgat gtgaaagcct 600
tcggcttaac cgaagaagtg catcggaaac cgggcgactt gagtgcagaa gaggacagtg 660
gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg 720
gctgtctggt ctgcaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac aggattagat 780
accctggtag tccatgccgt aaacgatgag tgctaggtgt tggagggttt ccgcccttca 840
gtgccggagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc 900
aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagctacgc 960
gaagaacctt accaggtctt gacatcttgc gctaacctta gagataaggc gttcccttcg 1020
gggacgcaat gacaggtggt gcatggtcgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta 1080
agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgttact agttgccagc attaagttgg gcactctagt 1140
gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggacgacg tcagatcatc atgcccctta 1200
tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cggtacaacg agtcgcaagc tcgcgagagt 1260
aagctaatct cttaaagccg ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg cctacacgaa 1320
gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt 1380
acacaccgcc cgtcacacca tgggagtttg taacgcccaa agtcggtggc ctaaccttta 1440
tggagggagc cgctaagccg atcaaa 1466
Claims (12)
1.一株罗伊氏乳杆菌，名称为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）L2，于2021年9月6日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：61919。
2.一种罗伊氏乳杆菌培养物，通过培养权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌得到。
3.权利要求2所述的罗伊氏乳杆菌培养物的制备方法，其特征在于，
将权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌接种于培养基中，培养，得到罗伊氏乳杆菌培养物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述罗伊氏乳杆菌的接种量为所述培养基的2v/v%～5v/v%。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述培养基为MRS肉汤培养基、强化梭菌培养基和LB培养基中的至少一种。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述培养的条件为35～40℃下培养8～24h。
7.一种菌剂，包含权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌。
8.（1）～（3）中至少一种在制备产品中的应用：
（1）权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌；
（2）权利要求2所述的罗伊氏乳杆菌培养物；
（3）权利要求7所述的菌剂；
所述产品为食品、药品或添加剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，
所述产品具有以下功能：抗氧化。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，
所述产品具有以下功能：抑制有害菌；
所述有害菌为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少一种；
所述产品为药品。
11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，
所述抗氧化包括清除DPPH自由基、还原力、清除超氧阴离子自由基和清除羟自由基中的至少一种。
12.一种产品，包含：（1）～（3）中至少一种；
（1）权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌；
（2）权利要求2所述的罗伊氏乳杆菌培养物；
（3）权利要求7所述的菌剂；
所述产品为食品、药品或添加剂。
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