CN112716914B - 白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法 - Google Patents

白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法。所述白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体按重量份计，包括以下原料：卡巴他赛5～10份；固态脂质材料20～170份；液态脂质材料20～130份；脂溶性乳化剂50～300份；水溶性乳化剂100～600份；阳离子材料4～15份；白蛋白材料10～100份；其中，所述阳离子材料包括双十烷基二甲基溴化铵、二油酰三甲基铵丙烷、二油酰丙基氯化三甲铵、二油酰磷脂酰胆碱醚和十六烷基三甲基溴化铵的至少一种，优选为十六烷基三甲基溴化铵。本发明提供的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体粒径均一、包封率高、且生物相容性和生物可降解性良好。

Description

白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种纳米脂质载体，尤其涉及一种白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法。
背景技术
卡巴他赛(cabazitaxel，Cbz)属于紫衫烷类抗肿瘤药物，是由紫杉的针叶中提取的化合物半合成的紫杉醇衍生物，其作用机理与其他紫杉烷类药物类似，通过促进微管双聚体装配成微管，同时防止去多聚化过程而使微管稳定，抑制细胞进一步分裂，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增值。目前已上市产品为卡巴他赛注射液，为增加卡巴他赛的溶解性及制剂稳定性，注射剂处方中加有大量聚山梨酯80、脱水乙醇等表面活性剂作为共溶剂，临床研究证实可导致严重超敏反应，甚至可能包括普遍性皮疹/红斑，低血压和支气管痉挛，给患者本人及家属都带来很大的痛苦；同时，给药剂量大、时间长，稀释后的注射液需在短时间内使用，否则将会产生沉淀，稳定性比较差，存在用药方面的安全隐患。因此，为了克服卡巴他赛的水溶性差及上市产品的局限性问题，进一步发挥其广谱抗肿瘤治疗作用，寻求卡巴他赛新的给药体系成为研究者们关注的热点。
近年来，纳米脂质载体(NLC)作为一种新型的载体，通过将固态脂质与其空间不相容的液态脂质混合，使其具有特殊的纳米结构，从而增加难溶药物的溶解度，提高载药量并控制药物释放；白蛋白是天然的亲水性物质，能增加载体的亲水性，提高载体在血液中的稳定性，由于其等电点为4.8，在pH中性条件下带负电荷，为了提高白蛋白在载体上的的包覆率，通过在处方中加入阳离子材料制备阳离子纳米脂质载体使其表面带正电荷，利用静电吸附作用，使带负电荷的白蛋白吸附在阳离子纳米脂质载体表面。本发明是基于纳米脂质载体和白蛋白两者自身特点设计开发的，能有效包载脂溶性的卡巴他赛，增加卡巴他赛的溶解性及其肿瘤靶向性。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述技术问题，而提供一种白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体及其制备方法。本发明很好解决了现有的卡巴他赛注射液存在的毒副作用大、易致使严重超敏反应，并且给药剂量大、时间长、稳定性比较差、存在用药方面的安全隐患的问题。本发明提供的纳米脂质载体及其制备方法具备毒副作用小、不易发生超敏反应，并且可实现给药剂量小、时间短、稳定性好、用药安全。
本发明的目的之一是提供一种白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，按重量份计，包括以下原料：
卡巴他赛5～10份；固态脂质材料20～170份；液态脂质材料20～130份；脂溶性乳化剂50～300份；水溶性乳化剂100～600份；阳离子材料4～15份；白蛋白材料10～100份；
其中，所述阳离子材料包括双十烷基二甲基溴化铵、二油酰三甲基铵丙烷、二油酰丙基氯化三甲铵、二油酰磷脂酰胆碱醚和十六烷基三甲基溴化铵的至少一种，优选为十六烷基三甲基溴化铵。
作为优选的方案，按重量份计，所述纳米脂质载体包括以下原料：
卡巴他赛10份；固态脂质材料30～85份；液态脂质材料30～70份；脂溶性乳化剂100～200份；水溶性乳化剂100～400份；阳离子材料4～15份；白蛋白材料10～40份。
进一步的是，所述固态脂质材料包括单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和棕榈酸中的至少一种，优选为硬脂酸。
进一步的是，所述液态脂质材料包括油酸和脂肪酸甘油酯中的至少一种，优选为脂肪酸甘油酯；所述脂肪酸甘油酯包括辛酸甘油酯或癸酸甘油酯。
进一步的是，所述脂溶性乳化剂包括蛋黄卵磷脂和大豆磷脂中的至少一种，优选为蛋黄卵磷脂。
进一步的是，所述水溶性乳化剂包括聚氧乙烯20油醚(Brij20)、泊洛沙姆188、十二烷基苯磺酸钠和吐温-80中的至少一种，优选为聚氧乙烯20油醚(Brij20)。
本发明上述白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体的平均粒径为50nm～500nm。
进一步的是，所述白蛋白材料包括牛血清白蛋白和人血清白蛋白中的至少一种，优选为人血清白蛋白。
本发明的目的之二是提供一种上述白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体的制备方法，其包括以下步骤：
1)按重量份称取卡巴他赛、固态脂质材料、液态脂质材料及脂溶性乳化剂，溶于热的有机溶剂内，作为油相，备用；
2)按重量份称取水溶性乳化剂、阳离子材料，溶于热的纯水中，作为水相，备用；
3)在600～1200r/min搅拌速度下，将油相慢速注入水相中，在65～80℃下，继续搅拌乳化0.5～2h；
4)趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌固化10～90min，优选为60min，即得卡巴他赛阳离子纳米脂质载体混悬液；
5)按重量份取白蛋白于超纯水中稀释溶解，与步骤4)的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体混悬液等体积混合，继续搅拌10～60min，即得白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体。
进一步的是，步骤1)所述有机溶剂和步骤2)所述纯水的温度均为70～78℃，所述有机溶剂与纯水的体积比为1:5。
进一步的是，步骤1)中所述有机溶剂为丙酮与无水乙醇按体积比1:1的混合液。
进一步的是，步骤3)中所述搅拌速度为1000r/min，温度为75℃，乳化时间为1h。
进一步的是，步骤5)中所述白蛋白的浓度为2mg/mL。
本发明的有益效果如下：
本发明提供的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，具备粒径均一、包封率高、且生物相容性和生物可降解性良好的优点。本发明提高了卡巴他赛的溶解性，增加了卡巴他赛在体内的长循环时间及肿瘤靶向性，进而减少了制剂毒性并实现其较好的癌症治疗效果。
附图说明
图1为实施例7所得的HSA-Cbz-cNLCs粒径分布图；
图2a为实施例7所得的Cbz-cNLCs的透射电镜图；图2b为HSA-Cbz-cNLCs的透射电镜图；
图3为样品的HSA-Cbz-cNLCs的差示热量扫描分析图；其中，A、Cbz，B、Cbz和HSA-cNLCs的物理混合，C、HSA-cNLCs，D、HSA-Cbz-cNLCs；
图4为乙醇和丙酮混合液、HSA-Cbz-cNLCs的气相色谱对比图；
图5为实施例7所得的HSA-Cbz-cNLCs的累积释药曲线图；
图6为实施例7所得的HSA-Cbz-cNLCs的体外细胞毒性结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体描述，有必要指出的是，以下实施例仅仅用于对本发明进行解释和说明，并不用于限定本发明。本领域技术人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸57mg；辛酸甘油酯43mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵10mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为216.2nm，PDI为0.287，Zeta电位为7.48mV，包封率为93.77％，蛋白包覆率为79.54％。
实施例2
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸57mg；辛/癸酸甘油酯43mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20100mg；十六烷基三甲基溴化铵10mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为184.8nm，PDI为0.422，Zeta电位为8.54mV，包封率为83.29％，蛋白包覆率为82.15％。
实施例3
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸57mg；辛/癸酸甘油酯43mg；蛋黄卵磷脂200mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵10mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛/癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为193.2nm，PDI为0.265，Zeta电位为8.26mV，包封率为90.01％，蛋白包覆率为80.24％。
实施例4
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸33mg；辛/癸酸甘油酯67mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵10mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛/癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为220.9nm，PDI为0.332，Zeta电位为7.83mV，包封率为89.10％，蛋白包覆率为78.45％。
实施例5
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸67mg；辛/癸酸甘油酯33mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵15mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛/癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为192.5nm，PDI为0.301，Zeta电位为21.30mV，包封率为94.91％，蛋白包覆率为67.47％。
实施例6
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸71mg；辛/癸酸甘油酯54mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵4mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛/癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为193.28nm，PDI为0.248，Zeta电位为4.58mV，包封率为97.60％，蛋白包覆率为77.53％。
实施例7
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸81mg；辛/癸酸甘油酯54mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵8mg；人血清白蛋白40mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，辛/癸酸甘油酯，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为198.7nm，PDI为0.279，Zeta电位为3.44mV，包封率为98.14％，蛋白包覆率为83.58％。
对比例1
白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，包括以下原料：卡巴他赛10mg；硬脂酸71mg；蛋黄卵磷脂100mg；Brij20400mg；十六烷基三甲基溴化铵8mg；人血清白蛋白10mg。
其制备过程如下：
将卡巴他赛，硬脂酸，蛋黄卵磷脂，溶解于约75℃的有机溶剂(丙酮：乙醇＝1:1，共4ml)，作为油相备用；将Brij20和十六烷基三甲基溴化铵溶解于约75℃超纯水中，作为水相备用；在1000r/min的搅拌速度下，用注射器吸取油相以一定速度注入水相中，75℃下，继续搅拌乳化1h，趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌1h，即得Cbz-cNLCs。取一定量HSA(浓度为2mg/ml)于超纯水中稀释溶解，取已制备的Cbz-cNLCs与HSA稀释液等体积混合，继续搅拌1h，即得HSA-Cbz-cNLCs混悬液。
该混悬液外观为类乳白色，有白色乳光，激光照射有丁达尔现象，平均粒径为183.80nm，PDI为0.285，Zeta电位为12.93mV，包封率为86.91％，蛋白包覆率仅为27.84％。
实验例1
表征和药效学实验
以下性能测试实验，以实施例7的混悬液为例进行测定，其它实施例1-6的测试结果与该实施例相差不大，此处不详细列出。
1、HSA-Cbz-cNLCs的粒径分布
采用马尔文(Malvern)粒度仪来检测HSA-Cbz-cNLCs粒径分布，测试结果如图1所示。测定结果表明，HSA-Cbz-cNLCs的平均粒径为198.70nm，多分散系数为0.279，平均zeta电位为3.44mV。
2、透射电镜表征
图2a和图2b分别为Cbz-cNLCs和实施例7制备的HSA-Cbz-cNLCs的透射电镜图。从图中可以看出，Cbz-cNLCs和HSA-Cbz-cNLCs的微观形态均为球形或类球形，且大小较为均匀。
由图2b可知，由于HSA的加入，在阳离子纳米脂质载体外表面可看见一层较明显的蛋白层，说明蛋白包裹成功。
3、差示扫描量热表征
图3为Cbz、Cbz和HSA-cNLCs的物理混合、HSA-cNLCs及HSA-Cbz-cNLCs的差示扫描量热分析图。Cbz的吸热峰和放热峰分别为162.3℃和220.1℃。而Cbz和HSA-cNLCs的物理混合的热分析图谱中，在162℃处出现Cbz特征峰，表明物理混合中，药物和辅料都保持原有晶型，没有发生相互作用。而HSA-KBTS-cNLCs的热分析图谱中，Cbz和辅料的特征吸收峰均消失，说明，Cbz已被白蛋白包裹的阳离子纳米脂质载体所包裹，形成了新的物相，而不是简单的物理混合。
4、HSA-Cbz-cNLCs的蛋白包覆率考察
取HSA-Cbz-cNLCs胶体溶液溶液0.5mL，用超纯水稀释到1mL，将稀释液全部移至超滤离心管，于4℃条件下，10000r/min，离心30min，取外层滤液25μL于96孔板中，再每孔加入100μL BCA工作液，37℃恒温条件下，孵育30min，然后使用酶标仪在565nm检测波长处，测定样品和BCA标准液吸光度，绘制的标准曲线，将样品吸光度代入标准曲线，计算其蛋白包覆率为83.58％。
5、HSA-Cbz-cNLCs的制剂稳定性考察
将按实施例7制备的HSA-Cbz-cNLCs置于4℃冰箱，观察2月(60天)后的粒径变化。该制剂第一天的粒径为185.60nm，PDI为0.257，包封率为97.61％；第60天的粒径为197.40nm，PDI为0.282，包封率为95.61％。表明在4℃环境下，该制剂在60天内稳定存在，粒径、PDI及包封率无明显变化，说明HSA-Cbz-cNLCs的稳定性良好。
6、HSA-Cbz-cNLCs的有机溶剂残留量考察
参照Chp2015附录。残留溶剂检测法，采用气相色谱分别检测乙醇和丙酮混合液、HSA-Cbz-cNLCs制剂。由气相色谱图(图4)可知，在乙醇和丙酮混合液中，乙醇和丙酮的出峰时间分别为3.95min、4.36min；在HSA-Cbz-cNLCs中，乙醇在3.95min左右处出了峰，4.36min处无丙酮峰出现；说明样品中只有微量乙醇残留而无丙酮。计算结果显示样品中乙醇残留量为0.047％，远小于药典要求0.5％，表明HSA-Cbz-cNLCs制剂有机残留符合药典规定。
7、HSA-Cbz-cNLCs的体外释放测试
将实施例7制得的HSA-Cbz-cNLCs在pH为7.4的磷酸盐缓冲液100mL(含5％乙醇)中进行体外释放测试。配制pH为7.4的磷酸盐缓冲液100mL(含5％乙醇)作为透析介质，然后取一定量HSA-Cbz-cNLCs于截留分子量为2000的透析袋中，将其置于上述透析介质中，采用恒温振荡法，分别于0.5h、1h、4h、6h、8h、12h、24h、48h取样2mL用HPLC检测，补液2mL，计算累积释放度。图5为各药物的释放曲图，由该图可知，游离Cbz在12h释放量达到94％左右，24h左右基本释放完全。而HSA-Cbz-cNLCs胶体溶液中Cbz的释放有两个阶段，前4h时，释放速度稍快，释放量达到36.03％；6h时，释放明显减慢，12h时，释放量累积达到57.69％，表明HSA-Cbz-cNLCs具有一定的缓慢释放作用，延长药物在体内的作用时间。分析原因可能是，制剂在制备过程中，有部分药物未被载体完全包埋而只是吸附在载体外表面或部分药物包埋位置不深，因此，前期可快速释放到介质中；另一部分被载体完全包埋在内层的药物，随着释放时间的增加，当载体溶蚀崩解后，再慢慢释放到介质中，故后期药物缓慢释放。
8、HSA-Cbz-cNLCs的体外抗肿瘤能力考察
以鼠源乳腺癌4T1细胞为模型，采用CCK-8试剂法考察Cbz、HSA-cNLCs、HSA-Cbz-cNLCs对4T1细胞的增殖毒性。取对数生长期的鼠源乳腺癌4T1细胞，按照每孔2000个细胞对消化后的细胞悬液进行稀释。在96孔板接种细胞悬液，每孔100uL，置于二氧化碳细胞培养箱内培养24小时。配制药物浓度为100ug/mL的HSA-Cbz-cNLCs溶液，采用十倍稀释法使得载药蛋白纳米组的药物浓度分别为100ug/mL、10ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL、0.01ug/mL，对照组为相对应的游离Cbz溶液，空白组为HSA-cNLCs，配制浓度为1000ug/mL的HSA-cNLCs溶液，采用十倍稀释法使得其浓度分别为1000ug/mL、100ug/mL、10ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL。每孔加入100uL，每个浓度平行3孔，在细胞培养箱内培养24h、48h、72h。培养结束后每孔加入10uLCCK-8(Cell Counting Kit-8)溶液，在细胞培养箱内培养2h，用酶标仪测定在450nm处的吸收值，计算其细胞存活率，其细胞存活率趋势如图6所示。结果表明在一定浓度范围内，HSA-cNLCs无毒性，而HSA-Cbz-cNLCs的抗鼠源乳腺癌细胞的效果明显。

Claims (13)

1.一种白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体的制备方法，其特征在于，按重量份计，所述白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体包括以下原料： 卡巴他赛5～10份；固态脂质材料20～170份；液态脂质材料20～130份；脂溶性乳化剂50～300份；水溶性乳化剂100～600份；阳离子材料4～15份；白蛋白材料10～100份；其中，所述阳离子材料包括双十烷基二甲基溴化铵、二油酰三甲基铵丙烷、二油酰丙基氯化三甲铵、二油酰磷脂酰胆碱醚和十六烷基三甲基溴化铵的至少一种；所述固态脂质材料包括单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和棕榈酸中的至少一种；所述液态脂质材料包括油酸和脂肪酸甘油酯中的至少一种；所述脂溶性乳化剂包括蛋黄卵磷脂和大豆磷脂中的至少一种；所述水溶性乳化剂包括聚氧乙烯20油醚、泊洛沙姆188、十二烷基苯磺酸钠和吐温-80中的至少一种； 所述制备方法包括以下步骤： 1)按重量份称取卡巴他赛、固态脂质材料、液态脂质材料及脂溶性乳化剂，溶于热的有机溶剂内，作为油相，备用； 2)按重量份称取水溶性乳化剂、阳离子材料，溶于热的纯水中，作为水相，备用； 3)在600～1200r/min搅拌速度下，将油相慢速注入水相中，在温度65～80℃下，继续搅拌乳化0.5～2h； 4)趁热将乳化液缓慢滴入预冷的超纯水中，冰浴环境下继续搅拌固化10～90min，即得卡巴他赛阳离子纳米脂质载体混悬液； 5)按重量份取白蛋白于超纯水中稀释溶解，与步骤4)的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体混悬液等体积混合，继续搅拌10～60min，即得白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体；
其中，步骤1)所述有机溶剂和步骤2)所述纯水的温度均为70～78℃，所述有机溶剂与纯水的体积比为1:5；步骤1)中所述有机溶剂为丙酮与无水乙醇按体积比1:1的混合液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述搅拌速度为1000r/min，温度为75℃，乳化时间为1h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中搅拌固化的时间为60 min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5)中所述白蛋白稀释后的浓度为2mg/mL。
5.如权利要求1-4任一项所述方法制备得到的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体。
6.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，按重量份计，包括以下原料： 卡巴他赛10份；固态脂质材料30～85份；液态脂质材料30～70份；脂溶性乳化剂100～200份；水溶性乳化剂100～400份；阳离子材料4～15份；白蛋白材料10～40份。
7.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述固态脂质材料为硬脂酸。
8.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述液态脂质材料为脂肪酸甘油酯。
9.根据权利要求8所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述脂肪酸甘油酯包括辛酸甘油酯或癸酸甘油酯。
10.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述脂溶性乳化剂为蛋黄卵磷脂。
11.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述水溶性乳化剂为聚氧乙烯20油醚。
12.根据权利要求5所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述白蛋白材料包括牛血清白蛋白和人血清白蛋白中的至少一种。
13.根据权利要求12所述的白蛋白包裹的卡巴他赛阳离子纳米脂质载体，其特征在于，所述白蛋白材料为人血清白蛋白。
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