CN100486569C

CN100486569C - 一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体及其制备方法

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Publication number: CN100486569C
Application number: CNB2006100376354A
Authority: CN
Inventors: 周建平; 仝新勇; 徐向阳; 谭燕; 范博; 谢俊; 曹春陵; 陈振飞
Original assignee: JINTING PHARMACEUTICAL CO Ltd; China Pharmaceutical University
Current assignee: JINTING PHARMACEUTICAL CO Ltd; China Pharmaceutical University
Priority date: 2006-01-06
Filing date: 2006-01-06
Publication date: 2009-05-13
Anticipated expiration: 2026-01-06
Also published as: CN1823732A

Abstract

本发明公开一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体及其制备方法。该自组装前体脂质体的配方包含下列重量百分比的原料：0.1～8%多烯紫杉醇，1～40%磷脂，5～30%聚乙二醇修饰剂，30～70%分散介质；制备方法是按配方取各原料置于容器中，使其混合、分散，得澄明液体，微孔滤膜压滤后灌封于充氮容器中即可。该前体脂质体在临用前按临床剂量用适当水合介质稀释后可快速自组装成粒径均匀、包封率高的含药脂质体制剂，可用于静脉给药。本发明可采用常规工艺设备，生产效率高，产品质量稳定，通针性好，有效贮藏期在2年以上；水合后形成的脂质体质量稳定，能满足临床给药需要，该方法工艺简单、成本低，易于工业化大生产。

Description

一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体，本发明还涉及该前体脂质体的制备方法。

背景技术

多烯紫杉醇(Docetaxel)是新一代紫杉类抗肿瘤药物，其作用机制独特，作用靶点在胞浆的微管，抗瘤谱广，是现有药物中治疗转移乳腺癌(MBC)和非小细胞肺癌(NSCLC)最有效的单剂化疗药物。(梁晓丽，多烯紫杉醇的药理与临床应用，首都医药，1999，6(5)：28～29)。

多烯紫杉醇单独口服生物利用度仅为8％，将其制成注射剂是提高生物利用度手段之一(张学农，国外医学·药学分册，2002，29(6)：321-325)。由于多烯紫杉醇的水中溶解度低而限制其在临床上的使用。目前的市售的多烯紫杉醇注射液存在较为严重的溶血和过敏反应，需要在用药前提前服用抗过敏药加以预防，临床使用既不安全也不方便。

脂质体是一种含磷脂组分的纳米级微粒，可作为难溶性和水溶性药物的载体，是一种新型药物制剂。目前，已报到的脂质体制备方法是将磷脂分散(或溶解)在适宜有机溶剂中，采用薄膜分散法、或逆向蒸发法、或注入法等制备方法。但以上制备方法存在两大问题：

1、制备工艺复杂、易染菌、重现性差、难以工业化大生产，且制造成本高。

2、制剂质量稳定性差。其主要特征是：药物包封率不稳定或降低，脂质体平均粒径不稳定或平均粒径变大。

鉴于现有脂质体制剂客观上存在包封率、平均粒径不稳定、不易产业化以及高成本、高价格等问题，导致含药脂质体的商品化过程步履艰难。

前体脂质体(proliposomes)概念最先由Anye提出，其制备方法据现有文献报导可归纳为：薄膜载体沉积法、冷冻干燥法、喷雾干燥法、粉末床研磨法、流化床法、真空旋转法等。其基本特征是：将磷脂溶解在有机溶剂(如乙醇、乙醚等)中，以一定的方法(如蒸馏、干燥等)除去有机溶剂后，磷脂以薄膜形式分散在水溶性微粒骨架表面，临用前加水合介质重组成脂质体微粒或纳米粒。鉴于在制备固体型前体脂质体过程中，除去有机溶剂工艺是实现产业化的主要技术瓶颈，且固体型前体脂质体的水合过程也将客观存在水合速度较慢，局部溶解不完全、分散不均匀等问题，从而导致药物包封率和平均粒径等主要质量指标不易有效控制，难以满足临床使用要求，至今尚无该类制剂上市。在制备脂质体和前体脂质体的已有公开专利、研究文献及报道中，尚未发现直接采用液体型自组装前体脂质体的制备技术。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题提供一种含多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

本发明还有一个目的是提供上述自组装前体脂质体的制备方法。

本发明的目的是通过下列措施实现的：

一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体，该自组装前体脂质体的配方包含下列重量百分比的原料：

0.1～8％多烯紫杉醇，1～40％磷脂，5～30％聚乙二醇修饰剂，30～70％分散介质。

所述的自组装前体脂质体，其中磷脂采用天然磷脂，或者采用半合成或全合成的磷脂，或者采用天然磷脂与半合成或全合成磷脂的混合物，并且磷脂酰胆碱的含量在50％～99％之间。

所述的自组装前体脂质体，其中天然磷脂选自大豆、蛋黄、脑或脊髓等天然物质中的天然磷脂。

所述的自组装前体脂质体，其中聚乙二醇修饰剂是聚氧乙烯型非离子表面活性剂，选自下列物质中的一种或多种：吐温类、泊洛沙姆类、苄泽类或卖泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、聚氧乙烯烷基酚醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油或磷脂的聚乙二醇修饰物，或上述物质的衍生物。

所述的自组装前体脂质体，其中吐温类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单三油酸酯或上述物质的混合物；泊洛沙姆类非离子表面活性剂为聚氧乙烯链段分子量比例在10％～80％之间的聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物或上述物质的混合物；苄泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯月桂醇醚、聚氧乙烯月桂酯醚、聚氧乙烯油酸酯醚、聚氧乙烯十六烷基醚或上述物质的混合物；卖泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯40单硬脂酸酯或上述物质的混合物；聚氧乙烯烷基酚醚类为聚氧乙烯壬基酚醚、聚氧乙烯辛基酚醚或上述物质的混合物；聚氧乙烯蓖麻油为Cremophor EL、聚氧乙烯氢化蓖麻油为Cremophor RH40、Cremophor RH60或其混合物；磷脂的聚乙二醇修饰物为甲氧基聚乙二醇350磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇550磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇750磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇1000磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇2000磷脂酰乙醇胺或上述物质的混合物。

所述的自组装前体脂质体，其中分散介质选自丙二醇、乙醇、聚乙二醇、异丙醇、甘油、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或者上述物质的混合物。

所述的自组装前体脂质体，其配方中还含有下列重量百分比的原料：2～8％分散剂和/或0.2～6％稳定剂。

所述的自组装前体脂质体，其中分散剂选自含4～7个碳原子的链状、环状或芳香类有机醇。

所述的自组装前体脂质体，其中含4～7个碳原子的链状、环状或芳香类有机醇是正丁醇、叔丁醇、正戊醇、苯甲醇、环戊醇或环己醇中的一种或多种。

所述的自组装前体脂质体，其中稳定剂选自胆固醇、油酸、聚维酮、乳酸乙酯、苯甲酸苄酯、维生素E、叔丁基对羟基茴香醚、二丁基对甲酚、苯酚、枸橼酸、胆酸及其盐类、去氧胆酸及其盐类中的一种或多种。

所述的自组装脂质体的制备方法，包括下列步骤：

按配方取各原料置于容器中，使其混合、分散，得澄明液体，0.1～0.8μm微孔滤膜压滤(必要时可用活性炭除热原、脱炭后压滤)，滤液灌封于充氮容器中，得到含有多烯紫杉醇的自组装前体脂质体。

上述的多烯紫杉醇自组装前体脂质体，其配方组合中各原料也可采用分别包装或组合包装，临用前混合成前体脂质体的形式。

一种多烯紫杉醇的脂质体，该脂质体是将上述的自组装前体脂质体用适量(5倍量～250倍量(v/v))的水合介质分散稀释而成的脂质体制剂，且平均粒径<1000nm，包封率>80％。优选平均粒径为200～800nm，包封率>95％。

所述的脂质体，其中水合介质选自注射用水、纯水、磷酸盐水溶液、葡萄糖水溶液、氯化钠水溶液或葡萄糖氯化钠水溶液。

上述多烯紫杉醇的自组装前体脂质体或水合后的脂质体制剂，可用于静脉给药。

本发明的有益效果：

本发明将难溶性抗癌药物多烯紫杉醇直接分散或溶解在含有磷脂、聚乙二醇修饰剂的分散介质(也可含有分散剂和/或稳定剂)中，制成液体型含药前体脂质体。当将该液体型前体脂质体用适宜水合介质稀释时，水合过程中不必采用匀化技术或机械(如超声技术、均质机等)，即可快速(在60秒内)自组装成高包封率(包封率可达95％以上)、粒径均匀(平均粒径可达200～800nm)的纳米级含药脂质体制剂。这种制备方法采用制备液体制剂或注射剂的常规工艺设备，可规模化、高效率生产，且产品质量稳定，通针性好，其有效贮藏期在2年以上；水合后形成的脂质体质量稳定可控，能完全满足临床给药的需要。该方法是工艺简单、成本低。

本发明中所用各种成分均为生理相容性的，安全且易于购买，使用国产材料均可达到要求；而且通过调整处方中各组分的比例，可在一定范围内调节药物的溶解度和稀释稳定性，并可控制粒径大小(能够有效控制平均粒径<1000nm)，以适应各种用药要求。

根据本发明制得的成品(按实施例1制备)理化特征：

【成品性状】：本品为黄色澄清透明溶液。

【水合分散性】：本品在注射用溶剂如5％葡萄糖注射液、或氯化钠注射液中，经振摇分散即可在60秒内自组装形成半透明带蓝色乳光的脂质体溶液。

【粒径分布】：本品用5％葡萄糖做为稀释溶剂，按临床剂量稀释后用PCS法测定粒径(Malvern Zetasizer3000HS)，粒径分布图见图2，平均粒径为359.5±7.48nm。

【形态学考察】：本品用5％葡萄糖注射液做为稀释溶剂，按临床剂量稀释后在透射电镜下观察，空白未载药时呈现空心囊状或球状，载药后可见药物明显被包裹在脂质囊(球)内(结果见图3)。

【包封率测定】：

脂质体中药物含量测定方法：色谱柱：Diamonsil C₁₈(200mm × 4.6mm × 5μm)；流动相：甲醇：水＝75：25；检测波长：230nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量：20μl。

包封率测定方法：以重蒸馏水为洗脱溶剂，取自组装后的脂质体溶液上样填充好的Sephadex凝胶柱，接取其中带蓝色乳光部分，甲醇定容，HPLC法测定紫杉醇的峰面积代入标曲方程得药量为M₁，另取相同体积的脂质体溶液直接定容用HPLC法测定得总药量M₂。

包封率％＝M₁/M₂×100％

试验结果：本发明所述紫杉醇自组装(前体)脂质体经自组装形成脂质体的包封率为99.02±0.69％(n＝3)。

【急性毒性试验】：

试验动物：昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由南京军区南京总医院动物中心提供。合格证号为：SCXK(苏)2003-2004。饲以全价颗粒饲料，自由饮水。由南京安立默科技有限公司提供。

试验药物：多烯紫杉醇自组装前体脂质体，规格：40mg/2ml，由中国药科大学药剂教研室提供(按实施例1制备)。临用前用5％葡萄糖注射液配制成所需浓度。多烯紫杉醇注射液，江苏恒瑞制药有限公司，规格：20mg/0.5ml，临用前按说明书配制后用5％葡萄糖稀释至所需浓度。

试验方法：按化学药物急性毒性试验技术指导原则中所述安排设计试验。

试验结论：多烯紫杉醇自组装前体脂质体和多烯紫杉醇注射液小鼠静脉注射的急性毒性试验结果表明：多烯紫杉醇自组装前体脂质体的LD₅₀为183.57mg/kg，95％可信限165.10～204.11mg/kg。多烯紫杉醇注射液的LD₅₀为138.41mg/kg，95％可信限122.20～156.77mg/kg。给药后小鼠的中毒症状为：竖毛、后肢行动不便，部分小鼠精神萎靡、消瘦、腹泻、活动减少等症状。多烯紫杉醇自组装前体脂质体各组的小鼠死亡多出现于给药后第6天至第11天，而多烯紫杉醇注射液各组的小鼠死亡多出现在给药后第2-3天，个别小鼠延迟至给药第10天后死亡。解剖死亡小鼠，肉眼未见各脏器出现明显异常。

【对小鼠移植瘤Heps的抑制作用】：

试验动物：ICR种小白鼠，18-22g，雌雄各半，由中国药科大学动物室提供。合格证号：SCXK(苏)2002-0011；饲料：颗粒饲料，由中国药科大学动物室供给；饲养条件：空调房间，温度18-24℃，相对湿度70％。

剂量设置：空白对照组(生理盐水)，多烯紫杉醇注射液：5mg/kg，多烯紫杉醇自组装前体脂质体：5mg/kg，2.5mg/kg，1.25mg/kg共5个剂量组。

试验方法：取上述规格小鼠50只按移植性肿瘤研究法接种Heps实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为5组，每组10只，雌雄各半。接种24小时后iv给药，隔天一次，共给药4次，于停药后第2天小鼠称重，处死荷瘤小鼠并分离瘤块，称瘤重，所得数据进行统计学处理(t检验)。

试验结果：与空白对照组相比，多烯紫杉醇自组装前体脂质体高、中、低(5，2.5，1.25mg/kg)组均可显著地抑制Heps的肿瘤生长，其中高、中剂量组的作用极显著(P<0.01)，低剂量组的作用显著(P<0.05)。与多烯紫杉醇注射液(5mg/kg)比较，多烯紫杉醇自组装前体脂质体对实验小鼠的体重影响很小。见表1。

表1 多烯紫杉醇自组装前体脂质体对小鼠移植瘤Heps的抑制作用

^*P<0.05 ^**P<0.01 与空白对照组比较

附图说明

图1为多烯紫杉醇自组装前体脂质体的制备工艺流程图。

图2为实施例1多烯紫杉醇自组装前体脂质体在5％葡萄糖注射液中水合后形成脂质体的粒径分布图，平均粒径为359.5±7.48nm。

图3为实施例1多烯紫杉醇载药后自组装前体脂质体在5％葡萄糖注射液中水合后自组装形成脂质体的透射电镜照片(4万倍)。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述，这些实例并不意味着对本发明的限制。

实施例1

处方：

多烯紫杉醇 2g

蛋磷脂 27.5g

吐温80 12.5g

胆固醇 1g

乙醇加至100ml

制备工艺：按图1所示工艺流程(下同)将处方量的蛋磷脂溶于适量的乙醇中，随后添加处方量的多烯紫杉醇、吐温80、胆固醇及剩余量的乙醇，待药物及其他组分全部溶解后，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下将滤液灌封于充氮安瓿瓶或西林瓶中即得多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

将制得的多烯紫杉醇自组装前体脂质体加入至50倍量(v/v)的5％葡萄糖注射液中，可快速形成多烯紫杉醇脂质体溶液，平均粒径<800nm，包封率>95％。

实施例2

处方：

多烯紫杉醇 2g

大豆磷脂 16.7g

聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL) 16.7g

PEG400 3.33g

丙二醇 30ml

乙醇加至100ml

制备工艺：将处方量的大豆磷脂溶于适量的乙醇中，随后添加处方量的药物、聚氧乙烯蓖麻油Cremophor EL、PEG400、丙二醇及剩余量的乙醇，待药物及其他组分全部溶解后，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下将滤液灌封于充氮安瓿瓶或西林瓶中，即得多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

将制得的多烯紫杉醇自组装前体脂质体加入25倍量(v/v)的注射用水中，可快速形成多烯紫杉醇脂质体溶液，平均粒径<800nm，包封率>90％。

实施例3

处方：

多烯紫杉醇 3g

大豆磷脂 20g

聚氧乙烯(23)月桂醇醚 15.7g

苯甲醇 2.2g

异丙醇 20ml

乙醇加至 100ml

制备工艺：将处方量的大豆磷脂溶于适量的乙醇中，随后添加处方量的药物、聚氧乙烯(23)月桂醇醚、苯甲醇、异丙醇及剩余量的乙醇，待药物及其他组分全部溶解后，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下将滤液灌封于充氮安瓿瓶或西林瓶中，即得多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

将制得的多烯紫杉醇自组装前体脂质体加入100倍量(v/v)的氯化钠注射液中，可快速形成多烯紫杉醇脂质体溶液，平均粒径<800nm，包封率>90％。

实施例4

处方：

多烯紫杉醇 4g

蛋磷脂 20g

吐温80 5g

聚氧乙烯(40)硬脂酸酯 10g

甘油 2g

维生素E 1g

二甲基亚砜 20ml

乙醇加至100ml

制备工艺：将处方量的蛋磷脂溶于适量的乙醇中，随后添加处方量的药物、吐温80、聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、甘油、维生素E、二甲基亚砜及剩余量的乙醇，待药物及其他组分全部溶解后，0.22μrm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下将滤液灌封于充氮安瓿瓶或西林瓶中，即得多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

将制得的多烯紫杉醇自组装前体脂质体加入200倍量(v/v)的5％葡萄糖氯化钠注射液中，可快速形成多烯紫杉醇脂质体溶液，平均粒径<800nm，包封率>90％。

实施例5

处方：

多烯紫杉醇 2g

氢化磷脂 20g

泊洛沙姆188(商品名F68) 16.0g

丙二醇加至100ml

制备工艺：将处方量的氢化磷脂溶于适量的丙二醇中，随后添加处方量的药物、泊洛沙姆188及剩余量的丙二醇，待药物及其他组分全部溶解后，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下将滤液灌封于充氮安瓿瓶或西林瓶中，即得多烯紫杉醇自组装前体脂质体。

将制得的多烯紫杉醇自组装前体脂质体加入50倍量(v/v)的5％葡萄糖氯化钠溶液中，可快速形成多烯紫杉醇脂质体溶液，平均粒径<800nm，包封率>90％。

Claims

1、一种多烯紫杉醇自组装前体脂质体，其特征在于该自组装前体脂质体的配方包含下列重量百分比的原料：

1～8％多烯紫杉醇，1～40％磷脂，5～30％聚乙二醇修饰剂，30～70％分散介质；

其中：

磷脂采用天然磷脂，或者采用半合成或全合成的磷脂，或者采用天然磷脂与半合成或全合成磷脂的混合物，并且磷脂酰胆碱的含量在50％～99％之间；

聚乙二醇修饰剂是聚氧乙烯型非离子表面活性剂；

分散介质选自丙二醇、乙醇、聚乙二醇、异丙醇、甘油、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或者上述物质的混合物。

2、根据权利要求1所述的自组装前体脂质体，其特征在于所述的天然磷脂是选自大豆、蛋黄、脑或脊髓中的天然磷脂。

3、根据权利要求1所述的自组装前体脂质体，其特征在于聚氧乙烯型非离子表面活性剂选自下列物质中的一种或多种：吐温类、泊洛沙姆类、苄泽类或卖泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂、聚氧乙烯烷基酚醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油或磷脂的聚乙二醇修饰物，或上述物质的衍生物。

4、根据权利要求3所述的自组装前体脂质体，其特征在于吐温类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单三油酸酯或上述物质的混合物；泊洛沙姆类非离子表面活性剂为聚氧乙烯链段分子量比例在10％～80％之间的聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物或上述物质的混合物；苄泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯月桂醇醚、聚氧乙烯月桂酯醚、聚氧乙烯油酸酯醚、聚氧乙烯十六烷基醚或上述物质的混合物；卖泽类聚氧乙烯型非离子表面活性剂为聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯40单硬脂酸酯或上述物质的混合物；聚氧乙烯烷基酚醚类为聚氧乙烯壬基酚醚、聚氧乙烯辛基酚醚或上述物质的混合物；聚氧乙烯蓖麻油为聚氧乙烯蓖麻油EL、聚氧乙烯氢化蓖麻油为聚氧乙烯蓖麻油RH40、聚氧乙烯蓖麻油RH60或其混合物；磷脂的聚乙二醇修饰物为甲氧基聚乙二醇350磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇550磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇750磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇1000磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇2000磷脂酰乙醇胺或上述物质的混合物。

5、根据权利要求1所述的自组装前体脂质体，其特征是该前体脂质体的配方中还含有下列重量百分比的原料：2～8％分散剂和/或0.2～6％稳定剂；

其中：

分散剂选自含4～7个碳原子的链状、环状或芳香类有机醇；

稳定剂选自胆固醇、油酸、聚维酮、乳酸乙酯、苯甲酸苄酯、维生素E、叔丁基对羟基茴香醚、二丁基对甲酚、苯酚、枸橼酸、胆酸及其盐类、去氧胆酸及其盐类中的一种或多种。

6、根据权利要求5所述的自组装前体脂质体，其特征在于含4～7个碳原子的链状、环状或芳香类有机醇是正丁醇、叔丁醇、正戊醇、苯甲醇、环戊醇或环己醇中的一种或多种。

7、如权利要求1或5所述的自组装脂质体的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

按配方取各原料置于容器中，使其混合、分散，得澄明液体，0.1～0.8μm微孔滤膜压滤，滤液灌封于充氮容器中，得到含有多烯紫杉醇的自组装前体脂质体。

8、一种多烯紫杉醇的脂质体，其特征在于该脂质体是由权利要求1或5所述的自组装前体脂质体用适量的水合介质分散稀释而成的脂质体制剂，且平均粒径<1000nm，包封率>80％。

9、根据权利要求8所述的多烯紫杉醇的脂质体，其特征在于该脂质体的平均粒径为200～800nm，包封率>95％。

10、根据权利要求8所述的脂质体，其特征在于所述水合介质选自注射用水、纯水、磷酸盐水溶液、葡萄糖水溶液、氯化钠水溶液或葡萄糖氯化钠水溶液。