CN112710772A - 一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，对肾安胶囊进行薄层色谱鉴别，判断是否含有芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱中的一种或多种。本发明与现行肾安胶囊药品标准相比增加了5个代表性成分的定性鉴别指标，鉴别方法对照更全面、专属性强，判断直观明确、结论客观可靠，为完善和提高民族药肾安胶囊的质量标准提供了技术方法。

Description

一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及了一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法。
背景技术
ZL 200410022330.7中的肾安胶囊有石椒草、肾茶、黄柏、白茅根、茯苓、白术、金银花、黄芪、甘草、灯心草、淡竹叶、泽泻共12味。肾安胶囊有清热解毒，利尿通淋的功效，用于湿热蕴结所致淋证，证见小便不利，淋沥涩痛，下尿路感染见上述证候者。
肾安胶囊定性鉴别仅有以盐酸小檗碱、绿原酸、泽泻药材为对照品的薄层色谱鉴别，分别指向组方药材黄柏、金银花和泽泻，其余的9味药材没有对应的鉴别项目。由于盐酸小檗碱是黄柏、三颗针、马尾黄连、十大功劳等多种药材均含有的共有成分，只以盐酸小檗碱的薄层色谱鉴别作为指向黄柏的鉴别方法存在专属性不强的缺点。
中药质量控制是保障药品安全的重要措施，用现代药物分析技术建立客观、多维、可靠的质量控制点是提升中药质量管理水平的重要途径。本品处方组成有12味药材，现行药品标准只有3味药材的定性鉴别，与中药质量控制的实际需求有较大差距。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提出一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，根据肾安胶囊处方主要药味所含有的代表性成分，选择专属性较强的芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱等代表性成分为对照品增加更多薄层色谱鉴别项目，为完善和提高民族药肾安胶囊的药品质量标准提供了技术方法。
本发明克服了肾安胶囊现行药品标准对组方药材鉴别的质量控制点偏少的技术缺点，增加更全面的定性分析指标来鉴别更多的组方药材，完善和提升肾安胶囊的药品质量标准。
其技术路线是以肾安胶囊处方药材含有的代表性成分为对照品研究组方药材的专属性鉴别方法，增加组方药材的可鉴别数量。提供的方法增加了以芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别项目，分别指向肾安胶囊组方主要药材石椒草、肾茶、白术、甘草、黄柏的检测。
本发明提供的薄层色谱鉴别方法在样品前处理方面能有效排除其它物质干扰，薄层色谱分离度佳、操作简便、重现性好。与现行肾安胶囊药品标准相比增加了5个代表性成分的定性鉴别指标，鉴别方法对照全面、专属性强，判断直观明确、结论客观可靠。
本发明的技术方案具体如下：
一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，对肾安胶囊进行薄层色谱鉴别，判断是否含有芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱中的一种或多种。
进一步地，芸香苦素的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，晾干后置紫外光灯下检视，供试品色谱在与芸香苦素对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色荧光斑点。
进一步地，取肾安胶囊内容物3g，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解作为供试品溶液；
另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲酸按质量比为30：30：1混合；
薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，晾干后置254nm紫外光灯下检视。
进一步地，熊果酸的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。
进一步地，取肾安胶囊内容物3g加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解作为供试品溶液；
另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-丙酮-甲醇按质量比8: 2: 0.3混合；
薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。
进一步地，苍术酮的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加正己烷超声处理，滤过，滤液浓缩作为供试品溶液；
另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。
进一步地，取肾安胶囊内容物3g，加正己烷30mL超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL作为供试品溶液；
另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯按质量比50：1混合的溶液；
薄层色谱喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。
进一步地，甘草苷的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加乙酸乙酯超声处理，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干；
残渣加水溶解后用正丁醇提取，合并正丁醇液用水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
进一步地，取肾安胶囊内容物6g加乙酸乙酯60mL超声处理30分钟，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇60mL超声处理30min，滤过，滤液蒸干；残渣加水20mL溶解后用正丁醇提取3次，每次10mL，合并正丁醇液用水洗涤3次，每次6mL，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3mL溶解作为供试品溶液；另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂是乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水按质量比15：1：1：2混合；薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
进一步地，盐酸黄柏碱的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物6g，加1%醋酸甲醇溶液60mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3mL溶解作为供试品溶液；
另取盐酸黄柏碱对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；展开剂为三氯甲烷：甲醇按质量比4：1混合；
薄层色谱置碘蒸气中熏蒸10分钟至斑点显色清晰，供试品色谱在与盐酸黄柏碱对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
本发明的薄层色谱鉴别方法中：
1、供试品溶液、阴性对照溶液的制备
（1）芸香苦素的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用水、乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。
结果表明：水提取物的薄层色谱无芸香苦素的斑点；乙醇和甲醇提取物的薄层色谱均有芸香苦素的斑点。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以甲醇为溶剂超声处理的方法来制备芸香苦素薄层色谱鉴别供试品溶液。缺石椒草的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。
（2）熊果酸的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用水、乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。
结果表明：水提取物的薄层色谱无熊果酸的斑点；乙醇和甲醇提取物的薄层色谱均有熊果酸的斑点。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以甲醇为溶剂超声处理的方法来制备熊果酸薄层色谱鉴别供试品溶液。缺肾茶的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。
（3）苍术酮的薄层鉴别：取胶囊内容物，分别采用乙醇、甲醇和正己烷为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。
结果表明：乙醇、甲醇、正己烷均能提取苍术酮，但正己烷提取物的斑点更清晰，干扰斑点更少。回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以正己烷为溶剂超声处理的方法来制备苍术酮薄层色谱鉴别供试品溶液。缺白术的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。
（4）甘草苷的薄层色谱鉴别：取胶囊内容物，分别采用乙醇、甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。
结果表明：甲醇和乙醇的提取物均不能获得良好的薄层色谱，但以甲醇超声处理获得提取物的薄层色谱斑点相对更清晰。为改进薄层色谱效果，进行了以下的样品前处理：胶囊内容物先加乙酸乙酯超声处理，滤过，弃去乙酸乙酯液，药渣再加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液。缺白术的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。
（5）盐酸黄柏碱的薄层鉴别：取胶囊内容物，分别采用甲醇、1%醋酸甲醇为溶剂，分别以回流、超声处理的方法提取试验。
结果表明：以1%醋酸甲醇为溶剂能有效提取黄柏碱，回流提取和超声处理提取没有明显区别。由此确定以1%醋酸甲醇为溶剂超声处理的方法来制备盐酸黄柏碱薄层色谱鉴别供试品溶液。缺黄柏的阴性对照溶液也按照上述方法平行制备。
2、薄层色谱展开剂的筛选
（1）芸香苦素的薄层色谱鉴别：以硅胶G薄层色谱板为固定相考察了环己烷：乙酸乙酯（50：50）、环己烷：丙酮（80：20）、石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯：甲酸（30：30：1）等展开系统。结果表明以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯：甲酸（30：30：1）为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。
（2）熊果酸的薄层色谱鉴别：以硅胶G薄层色谱板为固定相考察了石油醚（60～90℃）：丙酮：甲醇（8：2：0.3）、石油醚（60～90℃）：甲酸乙酯：甲酸（15：5：1）、环己烷：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（25：15：5：2）、甲苯：乙酸乙酯：冰乙酸（12：4：0.5）等展开系统。结果表明以石油醚（60～90℃）：丙酮：甲醇（8：2：0.3）为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。
（3）苍术酮的薄层鉴别：以硅胶G薄层色谱板为固定相考察了石油醚（60～90℃）：甲酸乙酯（50：1）、石油醚：三氯甲烷（20：1）、环己烷等展开系统。结果表明以石油醚（60～90℃）：甲酸乙酯（50：1）为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。
（4）甘草苷的薄层色谱鉴别：以硅胶G薄层色谱板为固定相考察了三氯甲烷：甲醇（6：1）、正丁醇：乙酸乙酯：水（4：1：5，下层溶液）、乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15：1：1：2，上层溶液）等展开系统。结果表明以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15：1：1：2，上层溶液）为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。
（5）盐酸黄柏碱的薄层鉴别：以硅胶G薄层色谱板为固定相考察了三氯甲烷：甲醇（4：1）、正丁醇：乙酸乙酯：水（4：1：5，下层溶液）、三氯甲烷：丙酮（5：1，氨水饱和）等展开系统。结果表明以三氯甲烷：甲醇（4：1）为展开剂进行薄层色谱具有最好的分离效果。
3、硅胶G薄层色谱板的比较
根据上述确定的各种的薄层色谱条件，比较了青岛海洋化工集团干燥剂厂、烟台信德科技公司和默克公司（上海）生产的硅胶G薄层色谱板的分离效果。结果表明所有厂家的硅胶G薄层色谱板在上述薄层色谱件下均有较好的分离效果，在实际应用中可以选择不同厂家的硅胶G薄层色板。
4、展开的环境温度、湿度对薄层色谱的影响
考察了不同展开温度、湿度对上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别的影响，在展开温度10℃～30℃、相对湿度35％～80％的条件下，上述薄层色谱均有较好分离效果。结果表明上述薄层色谱鉴别方法对具体的展开温度、湿度无特殊要求，在普通实验室即可完成薄层色谱鉴别工作。
5、展开剂蒸汽饱和时间的影响
考察了展开剂不同饱和时间对上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别的影响，展开剂不饱和、饱和10分钟、20分钟对薄层色谱无明显影响。结果表明在实际应用中展开剂不需预饱和即可进行薄层色谱鉴别。
6、上述薄层色谱鉴别方法的专属性
按照上述芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱为对照品的薄层色谱鉴别方法，制备供试品溶液、对照品溶液；并平行以供试品溶液相同的方法制备相应的阴性溶液。
按照上述确定的展开方法，分别吸取相应的供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液点于硅胶G薄层色谱板上，用确定的展开剂展开、显色。供试品薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点；阴性対照溶液没有相应斑点，其它成分无干扰。结果表明上述薄层色谱鉴别方法对其鉴别的代表性成分具有专属性。
与现有技术比较，本发明的优点在于：
（1）本发明提供的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，与现行的“肾安胶囊”药品标准比较，系统建立了肾安胶囊组方主要药材代表性成分芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱的薄层鉴别方法，完善和提高了民族药肾安胶囊的质量检测方法。
（2）本发明中，样品前处理采用超声处理样品以提取各组方药材的代表性化学成分，简化了实验操作步骤，缩短了供试溶液制备时间，排除了其它物质的干扰。
（3）本发明中，筛选的展开剂系统对相应的被检测成分分离效果好，薄层色谱斑点清晰，结果判断明确，能客观、高效的的鉴别民族药“肾安胶囊”主要组方药材中的代表性成分。
附图说明
图1为芸香苦素的鉴别结果；
图2为熊果酸的鉴别结果；
图3为苍术酮的鉴别结果；
图4为甘草苷的鉴别结果；
图5为盐酸黄柏碱的鉴别结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
为了使本发明的目的、技术方案及优点能够更加清晰明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。此处描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明保护内容。
本实施例中，根据现行肾安胶囊药品标准（2012）国药标字ZD-0334号的规定，肾安胶囊的处方和制备方法为：
石椒草200g、肾茶150g、黄柏100g、白茅根100g、茯苓100g、白术100g、金银花50g、黄芪100g、甘草100g、灯心草50g、淡竹叶50g、泽泻100g。以上12味，取黄柏、白术分别粉碎成细粉，备用；其余石椒草等十味分别粉碎成中粉，混匀，加水浸泡过夜，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.35（50℃）的稠膏，加入上述细粉制成颗粒，80℃以下干燥，装入胶囊，制成1000粒，即得。
本品为胶囊剂，内容物为棕褐色颗粒，气微香，味苦、涩。【功能主治】的彝医药描述为：西弗色哩哩诺奴诺，夫撒凯奴、吐土习。中医药描述为：清热解毒，利尿通淋。用于湿热蕴结所致淋证，证见小便不利，淋沥涩痛，下尿路感染见上述证候者。
本实施例涉及的“肾安胶囊”药品均为云南保元堂药业有限责任公司生产的“肾安胶囊”上市销售药品；涉及的对照品芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷和盐酸黄柏碱等均购于成都埃法生物科技有限公司，纯度≥98%。
使用的薄层色谱板为青岛海洋化工集团、烟台信德科技公司、默克公司（上海）生产的硅胶G普通薄层色谱板；展开剂系统筛选使用的溶剂（试剂）均为普通化学纯或分析纯溶剂（试剂）。
本实施例的肾安胶囊薄层色谱鉴别方法，包括了以芸香苦素（指向组方药材石椒草）、熊果酸（指向组方药材肾茶）、苍术酮（指向组方药材白术）、甘草苷（指向组方药材甘草）和盐酸黄柏碱（指向组方药材黄柏）为对照品的一系列薄层色谱鉴别。
1芸香苦素的薄层色谱鉴别
芸香苦素是肾安胶囊组方药材石椒草的主要代表性成分，鉴别肾安胶囊中存在芸香苦素可以比较专属的表征和判定肾安胶囊在生产过程中石椒草药材的投料情况。
取肾安胶囊内容物3g，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取芸香苦素对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液。
另取除石椒草之外的肾安胶囊组方药材11味，按照上述制法制成不含石椒草的阴性对照样品，并按照上述方法制成缺石椒草的阴性对照溶液。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（30： 30：1）溶液为展开剂，上行展开，取出，晾干。薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，晾干后置紫外光灯（254nm）下检视。
如图1所示，色谱图中斑点1、2、3为三个批次的民族药肾安胶囊供试品溶液，斑点4为芸香苦素对照品溶液，斑点5为缺石椒草的阴性对照溶液。
肾安胶囊供试品色谱中，在与芸香苦素对照品色谱相应的位置上，显相同色调的蓝紫色荧光斑点。缺石椒草的阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱对应的位置上没有相应的荧光斑点。
根据上述薄层色谱结果，可以客观、准确的判断被检测的民族药制剂“肾安胶囊”中是否含有组方主要药材“石椒草”。
2肾安胶囊中熊果酸的薄层色谱鉴别
熊果酸是肾安胶囊组方药材肾茶的主要代表性成分，鉴别肾安胶囊中存在熊果酸对表征和判定肾安胶囊在生产过程中肾茶药材的投料情况有一定的指向性意义。
取肾安胶囊内容物3g，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液。
另取除肾茶之外的肾安胶囊组方药材11味，按照上述制法制成不含肾茶的阴性对照样品，并按照上述方法制成缺肾茶的阴性对照溶液。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮-甲醇（8: 2: 0.3）溶液为展开剂，上行展开，取出，晾干。薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
如图2所示，色谱图中斑点1、2、3为三个批次的民族药肾安胶囊供试品溶液，斑点4为熊果酸对照品溶液，斑点5为缺肾茶的阴性对照溶液。
肾安胶囊供试品色谱中，在与熊果酸对照品色谱相应的位置上，显相同色调的紫红色斑点。缺肾茶的阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱对应的位置上没有相应的斑点。
根据上述薄层色谱结果，可以客观、准确的判断被检测的民族药制剂肾安胶囊中是否含有组方主要药材“肾茶”。
3肾安胶囊中苍术酮的薄层色谱鉴别
苍术酮是肾安胶囊组方药材白术的主要代表性成分，鉴别肾安胶囊中存在苍术酮可以比较专属的表征和判定肾安胶囊在生产过程中白术药材的投料情况。
取肾安胶囊内容物3g，加正己烷30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液。
另取除白术之外的肾安胶囊组方药材11味，按照上述制法制成不含白术的阴性对照样品，并按照上述方法制成缺白术的阴性对照溶液。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50：1）溶液为展开剂，上行展开，取出，晾干。薄层色谱喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
如图3所示，色谱图中斑点1、2、3为三个批次的民族药肾安胶囊供试品溶液，斑点4为苍术酮对照品溶液，斑点5为缺白术的阴性对照溶液。
肾安胶囊供试品色谱中，在与苍术酮对照品色谱相应的位置上，显相同色调的桃红色斑点。缺白术的阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱对应的位置上没有相应的斑点。
根据上述薄层色谱结果，可以客观、准确的判断被检测的民族药制剂肾安胶囊中是否含有组方主要药材“白术”。
4 肾安胶囊中甘草苷的薄层色谱鉴别
甘草苷是肾安胶囊组方药材甘草的主要代表性成分，鉴别肾安胶囊中存在甘草苷可以比较专属的表征和判定肾安胶囊在生产过程中甘草药材的投料情况。
取肾安胶囊内容物6g，加乙酸乙酯60mL超声处理30分钟，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇60mL超声处理30min，滤过，滤液蒸干；残渣加水20mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次10mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次6mL，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL对照品溶液。
另取除甘草之外的肾安胶囊组方药材11味，按照上述制法制成不含甘草的阴性对照样品，并按照上述方法制成缺甘草的阴性对照溶液。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15: 1: 1: 2）的上层液为展开剂，上行展开，取出，晾干。薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
如图4所示，色谱图中斑点1、2、3为三个批次的民族药肾安胶囊供试品溶液，斑点4为甘草苷对照品溶液，斑点5为缺甘草的阴性对照溶液。
肾安胶囊供试品色谱中，在与甘草苷对照品色谱相应的位置上，显相同色调的黄色斑点。缺甘草的阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱对应的位置上没有相应的斑点。
根据上述薄层色谱结果，可以客观、准确的判断被检测的民族药制剂肾安胶囊样品中是否含有组方主要药材“甘草”。
5 肾安胶囊中盐酸黄柏碱的薄层色谱鉴别
取肾安胶囊内容物6g，加1%醋酸甲醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸黄柏碱对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液。
另取除黄柏之外的肾安胶囊组方药材11味，按照上述制法制成不含黄柏的阴性对照样品，并按照上述方法制成缺黄柏的阴性对照溶液。
分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以三氯甲烷：甲醇（4：1）溶液为展开剂，上行展开，取出，晾干。薄层色谱置碘蒸气中熏蒸10分钟至斑点显色清晰。
如图5所示，色谱图中斑点1、2、3为三个批次的民族药“肾安胶囊”供试品溶液，斑点4为盐酸黄柏碱对照品溶液，斑点5为缺黄柏的阴性对照溶液。
肾安胶囊供试品色谱中，在与盐酸黄柏碱对照品色谱相应的位置上，显相同色调的黄色斑点。缺黄柏的阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱对应的位置上没有相应的斑点。
根据上述薄层色谱结果，可以客观、准确的判断被检测的民族药制剂肾安胶囊中是否含有组方主要药材“黄柏”。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：对肾安胶囊进行薄层色谱鉴别，判断是否含有芸香苦素、熊果酸、苍术酮、甘草苷、盐酸黄柏碱中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：芸香苦素的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，晾干后置紫外光灯下检视，供试品色谱在与芸香苦素对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色荧光斑点。
3.根据权利要求2所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：取肾安胶囊内容物3g，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解作为供试品溶液；
另取芸香苦素对照品，用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯-甲酸按质量比为30：30：1混合；
薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，晾干后置254nm紫外光灯下检视。
4.根据权利要求1所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：熊果酸的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。
5.根据权利要求4所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：取肾安胶囊内容物3g加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解作为供试品溶液；
另取熊果酸对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上；展开剂为60～90℃石油醚-丙酮-甲醇按质量比8: 2: 0.3混合；
薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点。
6.根据权利要求1所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：苍术酮的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加正己烷超声处理，滤过，滤液浓缩作为供试品溶液；
另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。
7.根据权利要求6所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：取肾安胶囊内容物3g，加正己烷30mL超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL作为供试品溶液；
另取苍术酮对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂为60～90℃石油醚-乙酸乙酯按质量比50：1混合的溶液；
薄层色谱喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与苍术酮对照品色谱相应的位置上显相同的桃红色斑点。
8.根据权利要求1所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：甘草苷的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物，加乙酸乙酯超声处理，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干；
残渣加水溶解后用正丁醇提取，合并正丁醇液用水洗涤，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液；
另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；
薄层色谱喷以硫酸-乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
9.根据权利要求8所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：取肾安胶囊内容物6g加乙酸乙酯60mL超声处理30分钟，滤过，弃去乙酸乙酯液；残留药渣加甲醇60mL超声处理30min，滤过，滤液蒸干；残渣加水20mL溶解后用正丁醇提取3次，每次10mL，合并正丁醇液用水洗涤3次，每次6mL，弃去水液；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3mL溶解作为供试品溶液；另取甘草苷对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂是乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水按质量比15：1：1：2混合；薄层色谱喷以10%硫酸-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱在与甘草苷对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
10.根据权利要求1所述的肾安胶囊的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：盐酸黄柏碱的薄层色谱鉴别如下：
取肾安胶囊内容物6g，加1%醋酸甲醇溶液60mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3mL溶解作为供试品溶液；
另取盐酸黄柏碱对照品用甲醇溶解制成0.5mg/mL的对照品溶液；
分别吸取供试品溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，展开剂上行展开，取出，晾干；展开剂为三氯甲烷：甲醇按质量比4：1混合；
薄层色谱置碘蒸气中熏蒸10分钟至斑点显色清晰，供试品色谱在与盐酸黄柏碱对照品色谱相应的位置上显相同的黄色斑点。
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