CN112661853A - 靶向caix、ano1、间皮素、trop2或紧密连接蛋白18.2的多特异结合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及靶向CAIX、ANO1、间皮素、TROP2或紧密连接蛋白18.2的多特异性结合蛋白。具体地，本发明描述了结合NKG2D受体、CD16和选自碳酸酐酶9(CAIX)、钙激活氯通道蛋白1(ANO1)、间皮素、TROP2、CEA和紧密连接蛋白‑18.2的肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白，以及可用于治疗癌症的药物组合物和治疗方法。

Description

靶向CAIX、ANO1、间皮素、TROP2或紧密连接蛋白18.2的多特异 结合蛋白
本申请是申请日为2018年2月27日，申请号为201880028256.X，发明名称同上的中国发明专利申请的分案申请。
与相关申请的交叉引用
本申请要求2017年2月27日提交的美国申请号62/464,341、2017 年2月27日提交的美国申请号62/464,344、2017年2月27日提交的美国申请号62/464,347、2017年3月06日提交的美国申请号62/467,557、2017年3月20日提交的美国申请号62/473,652和2017 年3月20日提交的美国申请号62/473,659的利益和优先权，所述每个申请的全部内容为所有目的整体通过参考并入本文。
序列表
本申请含有以ASCII格式电子提交并整体通过参考并入本文的序列表。所述在2018年2月27日生成的ASCII拷贝被命名为 DFY-012WO_ST25.txt，大小为212,480个字节。
技术领域
本发明涉及结合到NKG2D受体、CD16和选自碳酸酐酶9(CAIX)、钙激活氯通道蛋白1(ANO1)、间皮素、滋养层细胞表面抗原(TROP2)、癌胚抗原(CEA)和紧密连接蛋白-18.2的肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白。
背景技术
尽管在文献中已报道了治疗癌症的大量研究尝试和科学进展，但这种疾病依然是显著的健康问题。一些最经常被诊断到的癌症包括前列腺癌、乳腺癌和肺癌。前列腺癌是男性中最常见的癌症形式。乳腺癌仍然是女性中死亡的主导原因。小细胞肺癌仍然是最致命的恶性肿瘤。当前用于这些癌症的治疗选项不对所有患者有效和/或可能具有大量严重副作用。其他类型的癌症对于使用现有治疗选项治疗来说也仍然具有挑战性。
癌症免疫疗法是理想的，因为它们是高度特异性的并且可以使用患者自己的免疫系统来促进癌细胞的破坏。融合蛋白例如双特异性T- 细胞衔接器是文献中描述的结合到肿瘤细胞和T-细胞以促进肿瘤细胞破坏的癌症免疫疗法。结合到某些肿瘤相关抗原和结合到某些免疫细胞的抗体在文献中已有描述。参见例如WO 2016/134371和WO 2015/095412。
自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的组成部分并占循环淋巴细胞的大约15％。NK细胞事实上浸润所有组织，并且最初因它们不需前期致敏即可杀伤肿瘤细胞的能力而被表征。激活的NK细胞通过与细胞毒性T细胞相似的手段杀伤靶细胞，即通过含有穿孔素和颗粒酶的细胞溶解颗粒以及通过死亡受体途径。激活的NK细胞还分泌炎性细胞因子例如IFN-γ和促进其他白细胞向靶组织的招募的趋化因子。
NK细胞通过它们表面上的各种不同激活和抑制受体对信号做出响应。例如，当NK细胞遇到健康的自体细胞时，它们的活性通过杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的激活而被抑制。或者，当NK细胞遇到外来细胞或癌细胞时，它们通过它们的激活受体(例如NKG2D、NCR、DNAM1)而被激活。NK细胞也通过它们表面上的CD16受体被某些免疫球蛋白的恒定区激活。NK细胞对激活的总体灵敏度取决于刺激性和抑制性信号的总和。
碳酸酐酶9(CAIX)是一种锌金属酶，并属于参与二氧化碳的可逆水合以形成碳酸氢根和氢离子的酶的家族。CAIX在正常组织中具有有限的表达，但在广泛的各种不同实体肿瘤中过表达，并在肿瘤发育中发挥重要作用。受低氧肿瘤微环境诱导，CAIX发挥作用以对抗肿瘤细胞中高速率的糖酵解代谢通过维持有利于肿瘤细胞生长和存活的细胞内pH并在同时产生促进肿瘤细胞侵袭性的酸性细胞外空间而带来的有害效应。到目前为止，已在肾细胞癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌中以及常见的上皮癌例如食道、肺、结肠、肾、宫颈的上皮癌和非小细胞肺癌中检测到CAIX的过表达。
间皮素是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的细胞表面蛋白，并且在胸膜、腹膜和心包膜的间皮细胞中表达。除了正常表达之外，间皮素在各种不同的癌症包括间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胆管癌、胃癌、子宫浆液性癌、胸腺癌和急性髓性白血病中过表达。已提出间皮素可能在肿瘤发展包括细胞粘附、细胞存活/增殖和化疗耐药性中发挥重要作用。
钙激活氯通道蛋白1(ANO1)是一种电压敏感性钙激活的氯离子通道。它也有其他名称，例如TMEM16、TAOS2、ORAOV2和DOG-1。钙激活的氯离子通道在许多生理过程中起作用，包括经上皮分泌、心脏和神经元兴奋、感觉传导、平滑及收缩和受精。ANO1可能参与上皮流体分泌、嗅觉和光传导、神经元和心脏兴奋性和血管张力包括胃肠动力的调控。ANO1也在某些癌症中高表达，在那里它被认为增大细胞增殖、细胞迁移和转移，例如在食道鳞状细胞癌(ESCC)、胃肠间质肿瘤(GIST)、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肉瘤中。发现～85％的HNSCC肿瘤是ANO1阳性的，并且具有 ANO1的高水平肿瘤表达的HNSCC患者具有降低的总存活率；还发现 ANO1的过表达与前列腺癌的恶性程度和乳腺癌的不良预后密切相关。
TROP2是一种跨膜糖蛋白和Ca2+信号转导物。除了在某些正常组织中表达之外，TROP2在各种不同的癌症包括乳腺、肺、胃、结肠直肠、胰腺、前列腺、宫颈、头颈癌、鼻咽癌和卵巢癌中过表达。它向癌细胞传递用于增殖、侵入和存活的信号。
癌胚抗原(CEA)，也被称为CD66e或CEACAM5，是免疫球蛋白超家族的成员。它是一种大的细胞表面糖蛋白，并且主要充当介导细胞间接触的细胞粘附分子。除了在细胞粘附和迁移中的作用之外，还发现CEA在高百分率的人类癌症中过表达，包括90％的胃肠、结肠直肠和胰腺癌，70％的非小细胞肺癌细胞和50％的乳腺癌。已显示CEA 的过表达与致瘤性和肿瘤侵袭性的提高相关联。
紧密连接蛋白-18.2是Claudin-18的两种亚型之一，是调控上皮层的通透性、屏障功能和极性的紧密连接的主要组分。在健康组织中，紧密连接蛋白-18.2只在胃黏膜的短寿命分化细胞中表达。然而，它在高达80％的胃肠腺癌和60％的胰腺肿瘤中过表达。此外，已在患有食道癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、结肠癌和几种形式的胆管癌的不同的个体亚群中观察到它的表达。
发明内容
本发明提供了结合到癌细胞上的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、 CEA或紧密连接蛋白-18.2并结合到自然杀伤细胞上的NKG2D受体和 CD16受体的多特异性结合蛋白。这些蛋白质可以接合超过一种以上 NK激活受体，并且可以阻断天然配体与NKG2D的结合。在某些实施方式中，所述蛋白质可以在人类和其他物种例如啮齿动物和食蟹猴中激动NK细胞。本发明的各个不同方面和实施方式将在下文中更详细描述。
因此，本发明的一个方面提供了一种蛋白质，其包含：结合NKG2D 的第一抗原结合位点；结合CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的第二抗原结合位点；和足以结合CD16的抗体Fc 结构域、其部分或结合CD16的第三抗原结合位点。所述抗原结合位点可以各自包含抗体重链可变结构域和抗体轻链可变结构域(例如像在抗体中那样排列或融合在一起以形成scFv)，或者一个或多个所述抗原结合位点可以是单域抗体，例如VHH抗体如骆驼抗体或VNAR抗体如在软骨鱼中发现的。
在一个实施方式中，所述结合到NKG2D的第一抗原结合位点包含与SEQ ID NO：1相关的重链可变结构域，例如通过具有与SEQ ID NO：1至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列，和/或包含与SEQ ID NO：1的CDR1(SEQ ID NO：51)、CDR2(SEQ ID NO：52)和CDR3 (SEQ ID NO：53)序列相同的氨基酸序列。所述与SEQ ID NO：1相关的重链可变结构域可以偶联各种不同的轻链可变结构域，以形成 NKG2D结合位点。例如，所述包含与SEQ ID NO：1相关的重链可变结构域的第一抗原结合位点还可以包含选自与SEQ ID NO：2、4、6、 8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36和 40相关的任一序列的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点包含具有与SEQ ID NO：1至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和具有与选自SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、 16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36和40的任一序列至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。可选地，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：41相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：42相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：41至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：41的CDR1(SEQ ID NO：54)、CDR2 (SEQID NO：55)和CDR3(SEQ ID NO：56)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：42至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：42的 CDR1(SEQ ID NO：57)、CDR2(SEQ ID NO：58)和CDR3(SEQ ID NO：59)序列相同的氨基酸序列。在其他实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：43相关的重链可变结构域和与 SEQ IDNO：44相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQID NO：43至少90％(例如90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：43的CDR1(SEQ ID NO：60)、CDR2(SEQ ID NO：61)和CDR3(SEQ ID NO：62)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO： 44至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、 98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：44的CDR1(SEQ ID NO：63)、CDR2(SEQ ID NO：64)和CDR3(SEQ ID NO：65) 序列相同的氨基酸序列。在某些实施方式中，得到第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：45相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：46相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ IDNO：45至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：45的CDR1(SEQ ID NO：66)、CDR2(SEQ ID NO： 67)和CDR3(SEQ ID NO：68)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：46至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：46的CDR1(SEQ ID NO：69)、CDR2(SEQID NO：70)和CDR3(SEQ ID NO：71)序列相同的氨基酸序列。
可选地，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：47相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：48相关的轻链可变结构域，例如通过具有分别与SEQ ID NO：47和SEQ IDNO：48至少90％(例如 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ IDNO：49相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO： 50相关的轻链可变结构域，例如通过具有分别与SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：50至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：132相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：133相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：132至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：132的 CDR1(SEQ ID NO：134)、CDR2(SEQ ID NO：135)和CDR3(SEQ ID NO：136)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：133至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：133的CDR1(SEQ ID NO：137)、CDR2 (SEQ ID NO：138)和CDR3(SEQ ID NO：139)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：140相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：141相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：140至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：140的 CDR1(SEQ ID NO：142)、CDR2(SEQ ID NO：143)和CDR3(SEQ ID NO：144)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：141至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：141的CDR1(SEQ ID NO：145)、CDR2 (SEQ ID NO：146)和CDR3(SEQ ID NO：147)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：148相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：149相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：148至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：148的 CDR1(SEQ ID NO：150)、CDR2(SEQ ID NO：151)和CDR3(SEQ ID NO：152)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：149至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：149的CDR1(SEQ ID NO：153)、CDR2 (SEQ ID NO：154)和CDR3(SEQ ID NO：155)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：156相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：157相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：156至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：156的 CDR1(SEQ ID NO：158)、CDR2(SEQ ID NO：159)和CDR3(SEQ ID NO：160)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：157至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：157的CDR1(SEQ ID NO：161)、CDR2 (SEQ ID NO：162)和CDR3(SEQ ID NO：163)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第一抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：164相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：165相关的轻链可变结构域。例如，所述第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：164至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：164的 CDR1(SEQ ID NO：166)、CDR2(SEQ ID NO：167)和CDR3(SEQ ID NO：168)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：165至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：165的CDR1(SEQ ID NO：169)、CDR2 (SEQ ID NO：170)和CDR3(SEQ ID NO：171)序列相同的氨基酸序列。
所述第二抗原结合位点可以结合到CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、 CEA或紧密连接蛋白-18.2。在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到CAIX，并包含可以偶联以形成CAIX结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：72相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：73相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：72至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ IDNO：72的 CDR1(SEQ ID NO：74)、CDR2(SEQ ID NO：75)和CDR3(SEQ ID NO：76)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：73至少90％(例如90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：73的CDR1(SEQ ID NO：77)、CDR2(SEQ ID NO：78)和CDR3(SEQ ID NO：79)序列相同的氨基酸序列。
可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：80相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：81相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：80至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：80的CDR1(SEQ ID NO：82)、CDR2(SEQID NO：83)和CDR3(SEQ ID NO：84)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：81至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：81的CDR1(SEQ IDNO：85)、CDR2(SEQ ID NO： 86)和CDR3(SEQ ID NO：87)序列相同的氨基酸序列。
可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：88相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：89相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：88至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：88的CDR1(SEQ ID NO：90)、CDR2(SEQID NO：91)和CDR3(SEQ ID NO：92)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：89至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：89的CDR1(SEQ ID NO：93)、CDR2(SEQ ID NO： 94)和CDR3(SEQ ID NO：95)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到ANO1，并包含可以偶联以形成ANO1结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含各种不同的与SEQ ID NO： 97相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：98相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO： 97至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、 98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：97的CDR1(SEQ ID NO：99)、CDR2(SEQ ID NO：100)和CDR3(SEQ ID NO：101)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ IDNO：98至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：98的CDR1(SEQ ID NO：102)、CDR2(SEQ ID NO： 103)和CDR3(SEQ ID NO：104)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到间皮素，并包含可以偶联以形成间皮素结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含各种不同的与SEQ ID NO： 106相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：107相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：106至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：106的 CDR1(SEQ ID NO：108)、CDR2(SEQ ID NO：109)和CDR3(SEQ IDNO：110)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：107至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：107的CDR1(SEQ ID NO：111)、CDR2 (SEQ ID NO：112)和CDR3(SEQ ID NO：113)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含各种不同的与SEQ ID NO：114相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：115相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：114至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：115的 CDR1(SEQ ID NO：116)、CDR2(SEQ ID NO：117)和CDR3(SEQ IDNO：118)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：115至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：115的CDR1(SEQ ID NO：119)、CDR2 (SEQ ID NO：120)和CDR3(SEQ ID NO：121)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含各种不同的与SEQ ID NO：122相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：123相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：122至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：122的 CDR1(SEQ ID NO：124)、CDR2(SEQ ID NO：125)和CDR3(SEQ IDNO：126)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：123至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：123的CDR1(SEQ ID NO：127)、CDR2 (SEQ ID NO：128)和CDR3(SEQ ID NO：129)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到TROP2，并包含可以偶联以形成TROP2结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：172相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：173相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点得重链可变结构域可以与SEQ ID NO：172至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ IDNO：172的CDR1(SEQ ID NO：174)、CDR2(SEQ ID NO：175)和CDR3(SEQ ID NO：176) 序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：173至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：173的CDR1(SEQ ID NO：177)、CDR2(SEQ ID NO： 178)和CDR3(SEQID NO：179)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ IDNO：180相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：181相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：180至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％) 同一性。和/或包含与SEQ ID NO：180的CDR1(SEQ ID NO：182)、 CDR2(SEQ ID NO：183)和CDR3(SEQ ID NO：184)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：181至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO： 181的CDR1(SEQ ID NO：185)、CDR2(SEQ ID NO：186)和CDR3 (SEQ ID NO：187)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：188相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：189相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：188至少90％(例如90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：189 至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：190相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：191相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与 SEQ ID NO：190至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、 96％、97％、98％、99％或100％)同一性，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：191至少90％(例如90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ IDNO：192相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：193相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：192至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：193至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到CEA，并且包含可以偶联以形成CEA结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：195相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：196相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：195至少 90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ IDNO：195的CDR1(SEQ ID NO：197)、CDR2(SEQ ID NO：198)和CDR3(SEQ ID NO：199) 序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：196至少90％(例如90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与 SEQ ID NO：196的CDR1(SEQ ID NO：200)、CDR2(SEQ ID NO： 201)和CDR3(SEQID NO：202)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ IDNO：203相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：204相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：203至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％) 同一性，和/或包含与SEQ ID NO：203的CDR1(SEQ ID NO：205)、 CDR2(SEQ ID NO：206)和CDR3(SEQ ID NO：207)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：204至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO： 204的CDR1(SEQ ID NO：208)、CDR2(SEQ ID NO：209)和CDR3 (SEQ ID NO：210)序列相同的氨基酸序列。可选地，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO：211相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：212相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ ID NO：211至少90％(例如90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：212的CDR1(SEQ ID NO：213)、CDR2 (SEQ ID NO：214)和CDR3(SEQ ID NO：215)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：196至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：212的 CDR1(SEQ ID NO：216)、CDR2(SEQ ID NO：217)和CDR3(SEQ ID NO：218)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点结合到紧密连接蛋白 -18.2，并包含可以偶联以形成紧密连接蛋白-18.2结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点可以包含与 SEQ ID NO：220相关的重链可变结构域和与SEQ IDNO：221相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQID NO：220至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO： 220的CDR1(SEQ ID NO：222)、CDR2(SEQ ID NO：223)和CDR3 (SEQ ID NO：224)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：221至少90％(例如 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％) 同一性，和/或包含与SEQ ID NO：221的CDR1(SEQ ID NO：225)、 CDR2(SEQ ID NO：226)和CDR3(SEQ ID NO：227)序列相同的氨基酸序列。例如，所述第二抗原结合位点可以包含与SEQ ID NO： 228相关的重链可变结构域和与SEQ ID NO：229相关的轻链可变结构域。例如，所述第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQ IDNO：228至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：228的 CDR1(SEQ ID NO：230)、CDR2(SEQ ID NO：231)和CDR3(SEQ ID NO：232)序列相同的氨基酸序列。同样地，所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQ ID NO：229至少90％(例如90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，和/或包含与SEQ ID NO：229的CDR1(SEQ ID NO：233)、CDR2 (SEQ ID NO：234)和CDR3(SEQ ID NO：235)序列相同的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述第二抗原结合位点包含具有与所述第一抗原结合位点中存在的轻链可变结构域的氨基酸序列相同的氨基酸序列的轻链可变结构域。
在某些实施方式中，所述蛋白质包含抗体Fc结构域的足以结合 CD16的部分，其中所述抗体Fc结构域包含铰链和CH2结构域，和/ 或与人类IgG抗体的234-332位氨基酸序列至少90％同一性的氨基酸序列。
还提供了含有这些蛋白质之一的制剂，含有表达这些蛋白质的一种或多种核酸的细胞，以及使用这些蛋白质增强肿瘤细胞死亡的方法。
本发明的另一方面提供了一种在患者中治疗癌症的方法。所述方法包括向需要的患者施用治疗有效量的本文描述的多特异性结合蛋白。使用靶向CAIX的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如肾细胞癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、食道、肺、结肠、肾、宫颈癌和非小细胞肺癌。使用靶向间皮素的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胆管癌、胃癌、子宫浆液性癌、胸腺癌和急性髓性白血病。使用靶向ANO1的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如食道鳞状细胞癌(ESCC)、胃肠间质肿瘤(GIST)、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肉瘤。使用靶向TROP2的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如乳腺、肺、胃、结肠直肠、胰腺、前列腺、宫颈、头颈癌、鼻咽癌和卵巢癌。使用靶向CEA的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如胃肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌和乳腺癌。使用靶向紧密连接蛋白-18.2的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如食道癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、结肠癌和几种形式的胆管癌。
附图说明
图1是一种异二聚体多特异性抗体的图示。每个臂可以代表 NKG2D结合结构域或选自CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA和紧密连接蛋白-18.2结合结构域的一种肿瘤相关抗原结合结构域。在某些实施方式中，所述NKG2D和肿瘤相关抗原结合结构域可以享有共同轻链。
图2是一种异二聚体多特异性抗体的图示。NKG2D结合结构域或选自CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA和紧密连接蛋白-18.2结合结构域的肿瘤相关抗原结合结构域中的任一者可以采取scFv格式(右臂)。
图3是在ELISA测定法中显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)对人类重组NKG2D的结合亲和力的线图。
图4是在ELISA测定法中显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)对食蟹猴重组NKG2D的结合亲和力的线图。
图5是在ELISA测定法中显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)对小鼠重组NKG2D的结合亲和力的线图。
图6是通过流式细胞术显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)与表达人类NKG2D的EL4细胞的结合的柱形图，示出了与背景相比的平均荧光强度(MFI)倍数。
图7是通过流式细胞术显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)与表达小鼠NKG2D的EL4细胞的结合的柱形图，示出了与背景相比的平均荧光强度(MFI)倍数。
图8是通过与天然配体ULBP-6的竞争显示的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)对重组人类NKG2D-Fc的特异性结合亲和力的线图。
图9是通过与天然配体MICA的竞争显示的NKG2D结合结构域 (作为克隆列出)对重组人类NKG2D-Fc的特异性结合亲和力的线图。
图10是通过与天然配体Rae-1δ的竞争显示的NKG2D结合结构域 (作为克隆列出)对重组小鼠NKG2D-Fc的特异性结合亲和力的线图。
图11是通过定量表达人类NKG2D-CD3ζ融合蛋白的TNF-α阳性细胞的百分率显示出人类NKG2D被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图12是通过定量表达人类NKG2D-CD3ζ融合蛋白的TNF-α阳性细胞的百分率显示出小鼠NKG2D被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图13是显示出人类NK细胞被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图14是显示出人类NK细胞被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图15是显示出小鼠NK细胞被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图16是显示出小鼠NK细胞被NKG2D结合结构域(作为克隆列出)激活的柱形图。
图17是显示了NKG2D结合结构域(作为克隆列出)对肿瘤细胞的细胞毒性效应的柱形图。
图18是显示了通过差示扫描荧光测定法测量的NKG2D结合结构域(作为克隆列出)的解链温度的柱形图。
图19A-19C是NK细胞使用CD16和NKG2D结合的协同激活的柱形图。图19A展示了CD107a的水平；图19B展示了IFNγ的水平；图19C展示了CD107a和IFNγ的水平。图指示了平均值(n＝2)±SD。数据代表了使用5位不同健康供体的5个独立实验。
图20是采取双特异性抗体(Triomab)型的TriNKET的图示，其是一种维持IgG样形状的三功能双特异性抗体。该嵌合体由源自于两个亲本抗体亲本抗体的两个半抗体构成，各自具有一条轻链和一条重链。Triomab型体型可以是含有1/2的大鼠抗体和1/2的小鼠抗体的异二聚体构建体。
图21是采取KiH共同轻链(LC)型的TriNKET的图示，其包含杵臼结构(KIH)技术。KiH是含有结合到靶标1和2的2个Fab和通过异二聚化异二聚化突变稳定化的FC的异二聚体。采取KiH格式的 TriNKET可以是具有结合到靶标1和靶标2的2个fab，含有2条不同重链和1条与两个重链配对的共同轻链的异二聚体构建体。
图22是采取双可变结构域免疫球蛋白(DVD-IgTM)型的TriNKET 的图示，其将两个单克隆抗体的靶结合结构域通过柔性的天然存在的连接物结合，并产生四价IgG样分子。DVD-IgTM是同型二聚体构建体，其中靶向抗原2的可变结构域被融合到靶向抗原1的Fab的可变结构域的N端。构建体含有正常的Fc。
图23是采取正交Fab界面(Ortho-Fab)型的TriNKET，其是含有结合于融合到Fc的靶标1和靶标2的2个Fab的异二聚体构建体。 LC-HC配对通过正交界面来确保。异二聚化异二聚化通过Fc中的突变来确保。
图24是采取二合一Ig格式的TriNKET的图示。
图25是采取ES型型的TriNKET的图示，其是含有融合到Fc的结合到靶标1和靶标2的2个不同Fab的异二聚体构建体。异二聚化通过Fc中的静电操控突变来确保。
图26是采取Fab臂交换型的TriNKET的图示：通过将重链和附连的轻链(半分子)与来自于另一个分子的重链-轻链对交换来交换Fab 臂以产生双特异性抗体的抗体。Fab臂交换型(cFae)是含有结合到靶 1和2的2个Fab和通过异二聚化突变稳定化的Fc的异二聚体。
图27是采取SEED体型型的TriNKET的图示，其是含有结合到靶标1和2的2个Fab和通过异二聚化突变稳定化的Fc的异二聚体。
图28是采取LuZ-Y型的TriNKET的图示，其中使用亮氨酸拉链来诱导两个不同HC的异二聚化。LuZ-Y型是含有结合于融合到Fc的靶标1和标2的两个不同scFab的异二聚体。异二聚化通过融合到Fc 的C-端的亮氨酸拉链基序来确保。
图29是采取Cov-X体型型的TriNKET的图示。
图30A-30B是采取κλ体型型的TriNKET的图示，其是具有融合到通过异二聚化突变稳定化的Fc的2个不同Fab的异二聚体构建体：靶向抗原1的Fab1含有κLC，而靶向抗原2的第二个Fab含有λLC。图30A是κλ体的一种型的示例性图示；图30B是另一种κλ体的示例性图示。
图31是Oasc-Fab异二聚体构建体，其包括融合到Fc的结合到靶 1的Fab和结合到靶2的scFab。异二聚化通过Fc中的突变来确保。
图32是DuetMab，其是含有结合到抗原1和2的2个不同Fab和通过异二聚化突变稳定化的FC的异二聚体构建体。Fab 1和2含有不同的S-S桥，其确保正确的轻链(LC)和重链(HC)配对。
图33是CrossmAb，其是具有融合到通过异二聚化稳定化的Fc的结合到靶1和2的2个不同Fab的异二聚体构建体。CL和CH1结构域与VH和VL结构域被调换，例如CH1与VL内联融合，而CL与VH 内联融合。
图34是Fit-Ig，其是一种同二聚体构建体，其中结合到抗原2的 Fab被融合到结合到抗原1的Fab的HC的N端。所述构建体含有野生型Fc。
图35显示了包括CAIX结合结构域和NKG2D结合结构域的 TriNKET与EL4细胞上表达的NKG2D的结合。
图36显示了包括CAIX结合结构域和NKG2D结合结构域的 TriNKET与人类肾细胞癌细胞A498上表达的CAIX的结合。
图37A显示了KHYG-1效应细胞对CAIX阳性肾细胞癌A498细胞的TriNKET介导的细胞毒性。虚线指示在不添加TriNKET的情况下，在与静息KHYG-1细胞共培养期间A498细胞的背景灭杀。图37B显示了静息NK细胞对CAIX阳性肾细胞癌A498细胞的TriNKET介导的细胞毒性。
详细描述
本发明提供了结合癌细胞上的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2和自然杀伤细胞上的NKG2D受体和CD16 受体以激活所述自然杀伤细胞的多特异性结合蛋白，包含这些多特异性结合蛋白的药物组合物，以及使用这些多特异性蛋白和药物组合物的治疗方法，包括用于治疗癌症的治疗方法。本发明的各个不同方面在下文分章节阐述；然而，在一个特定章节中描述的本发明的方面不应限于任何特定章节。
为了便于本发明的理解，下文定义了许多术语和短语。
当在本文中使用时，没有具体数目的指称意味着“一个或多个”，并包括复数指称物，除非上下文不适合。当在本文中使用时，术语“抗原结合位点”是指免疫球蛋白分子的参与抗原结合的部分。在人类抗体中，抗原结合位点由重(“H”)链和轻(“L”)链的N-端可变(“V”) 区的氨基酸残基形成。所述重链和轻链的V区内的三个高度趋异的区段被称为“高变区”，它们插入在被称为“构架区”或“FR”的更保守的侧翼区段之间。因此，术语“FR”是指天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间并与其相邻的氨基酸序列。在人类抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此配置，以形成抗原结合表面。所述抗原结合表面与被结合的抗原的三维表面互补，并且每个重链和轻链的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”。在某些动物例如骆驼和软骨鱼类中，抗原结合位点由单条抗体链形成，提供了“单域抗体”。抗原结合位点可以存在于完整抗体中、抗体的保留了抗原结合表面的抗原结合片段中或重组多肽例如scFv中，所述 scFv在单一多肽中使用肽连接物将重链可变结构域连接到轻链可变结构域。
当在本文中使用时，术语“肿瘤相关抗原”意味着与癌症相关的任何抗原，包括但不限于蛋白质、糖蛋白、神经节苷脂、糖类、脂类。这些抗原可以表达在恶性细胞上或肿瘤微环境中，例如与肿瘤相关的血管、细胞外基质、间充质基质或免疫浸润物上。
当在本文中使用时，术语“受试者”和“患者”是指将要通过本文描述的方法和组合物治疗的生物体。这些生物体优选地包括但不限于哺乳动物(例如鼠科、猿猴、马科、牛科、猪科、犬科、猫科动物等)，更优选地包括人类。
当在本文中使用时，术语“有效量”是指化合物(例如本发明的化合物)的足以实现有益或期望结果的量。有效量可以在一次或多次施用、应用或剂量中施用，并且不打算限于特定制剂或施用途径。当在本文中使用时，术语“治疗”包括导致病症、疾病、障碍等的改善的任何效应例如减轻、降低、调节、改善或消除或改善其症状。
当在本文中使用时，术语“药物组合物”是指活性药剂与惰性或有活性的载体的组合，使得所述组合物特别适合于体内或离体诊断或治疗用途。
当在本文中使用时，术语“可药用载体”是指任何标准的制药载体，例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如油/水或水/油乳液)和各种不同类型的润湿剂。所述组合物也可以包括稳定剂和防腐剂。对于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见例如Martin，《Remington's制药学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第15版，Mack Publ.Co., Easton,PA[1975]。
当在本文中使用时，术语“可药用盐”是指本发明的化合物的任何制药上可接受的盐(例如酸或碱式盐)，其在施用到受试者后，能够提供本发明的化合物或其有活性的代谢物或残留物。正如本领域技术人员所知，本发明的化合物的“盐”可以源自于无机或有机酸和碱。示例性的酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、延胡索酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其他酸例如草酸，尽管本身不是可药用的，但可用于制备在获得本发明的化合物及其可药用酸加成盐中可用作中间体的盐。
示例性的碱包括但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物、碱土金属 (例如镁)氢氧化物、氨和式NW4 +的化合物(其中W是C1-4烷基) 等。
示例性的盐包括但不限于：乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，延胡索酸盐，氟代庚酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐，十一烷酸盐等。盐的其他实例包括与适合的阳离子例如Na+、NH4 +和NW4 +(其中W是C1-4烷基) 等化合的本发明的化合物的阴离子。
对治疗应用来说，设想的本发明的化合物的盐是可药用的。然而，不可药用的酸和碱的盐也可以在例如可药用化合物的制备或纯化中发现用途。
在整个本描述中，在组合物被描述为具有、包括或包含特定组分时，或在过程和方法被描述为具有、包括或包含特定步骤时，设想了另外还存在基本上由所叙述的组分构成或由所叙述的组分构成的本发明的组合物，并且还存在基本上由所叙述的过程步骤构成或由所叙述的过程步骤构成的符合本发明的过程和方法。
一般来说，除非另有规定，否则规定百分率的组成是以重量计的。此外，如果变量不伴有定义，则以所述变量的以前的定义为准。
I.蛋白质
本发明提供了结合癌细胞上的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、 CEA或紧密连接蛋白-18.2和自然杀伤细胞上的NKG2D受体和CD16 受体以激活所述自然杀伤细胞的多特异性结合蛋白。所述多特异性结合蛋白在本文描述的药物组合物和治疗方法中有用。所述多特异性结合蛋白与自然杀伤细胞上的NKG2D受体和CD16受体的结合增强了所述自然杀伤细胞对癌细胞的破坏的活性。所述多特异性结合蛋白与癌细胞上的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2 的结合将所述癌细胞带到所述自然杀伤细胞附近，促进了所述癌细胞被所述自然杀伤细胞的直接和间接破坏。示例性的多特异性结合蛋白的进一步描述在下文中提供。
所述多特异性结合蛋白的第一组分结合到表达NKG2D受体的细胞，其可以包括但不限于NK细胞、γδT细胞和CD8+αβT细胞。在结合NKG2D后，所述多特异性结合蛋白可以阻断天然配体例如ULBP6 和MICA结合到NKG2D并激活NKG2D受体。
所述多特异性结合蛋白的第二组分结合到表达CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的细胞。表达CAIX的细胞包括但不限于肾细胞癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、食道、肺、结肠、肾、宫颈癌和非小细胞肺癌。表达间皮素的细胞包括但不限于间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胆管癌、胃癌、子宫浆液性癌、胸腺癌和急性髓性白血病。表达ANO1的细胞包括但不限于食道鳞状细胞癌(ESCC)、胃肠间质肿瘤(GIST)、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肉瘤。表达TROP2的细胞包括但不限于乳腺、肺、胃、结肠直肠、胰腺、前列腺、宫颈、头颈癌、鼻咽癌和卵巢癌。表达CEA的细胞包括但不限于胃肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌和乳腺癌。表达紧密连接蛋白-18.2的细胞包括但不限于食道癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、结肠癌和几种形式的胆管癌。
所述多特异性结合蛋白的第三组分结合到表达CD16的细胞，所述CD16是白细胞包括自然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、肥大细胞和滤泡树突细胞的表面上的Fc受体。
本文中描述的多特异性结合蛋白可以采取各种不同的格式。例如，一种格式是异二聚体多特异性抗体，其包括第一免疫球蛋白重链、第一免疫球蛋白轻链、第二免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白轻链(图 1)。所述第一免疫球蛋白重链包括第一Fc(铰链-CH2-CH3)结构域、第一重链可变结构域和任选的第一CH1重链结构域。所述第一免疫球蛋白轻链包括第一轻链可变结构域和第一轻链恒定结构域。所述第一免疫球蛋白轻链与所述第一免疫球蛋白重链一起，形成结合NKG2D的抗原结合位点。所述第二免疫球蛋白重链包含第二Fc(铰链-CH2-CH3) 结构域、第二重链可变结构域和任选的第二CH1重链结构域。所述第二免疫球蛋白轻链包括第二轻链可变结构域和第二轻链恒定结构域。所述第二免疫球蛋白轻链与所述第二免疫球蛋白重链一起，形成结合 CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的抗原结合位点。所述第一Fc结构域和第二Fc结构域一起能够结合到CD16(图 1)。在某些实施方式中，所述第一免疫球蛋白轻链与所述第二免疫球蛋白轻链相同。
另一种示例性格式涉及一种异二聚体多特异性抗体，其包括第一免疫球蛋白重链、第二免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链(图2)。所述第一免疫球蛋白重链包括通过连接物或抗体铰链融合到单链可变片段(scFv)的第一Fc(铰链-CH2-CH3)结构域，所述scFv由配对并结合NKG2D或结合选自CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA和紧密连接蛋白-18.2的肿瘤相关抗原之一的重链可变结构域和轻链可变结构域构成。所述第二免疫球蛋白重链包括第二Fc(铰链-CH2-CH3)结构域、第二重链可变结构域和任选的CH1重链结构域。所述免疫球蛋白轻链包括轻链可变结构域和轻链恒定结构域。所述第二免疫球蛋白重链与所述免疫球蛋白轻链配对并结合到NKG2D或选自CAIX、 ANO1、间皮素、TROP2、CEA和紧密连接蛋白-18.2的肿瘤相关抗原之一。所述第一Fc结构域和所述第二Fc结构域一起能够结合到CD16 (图2)。
一个或多个另外的结合基序，可以任选地通过连接物序列融合到所述恒定区CH3结构域的C-端。在某些实施方式中，所述抗原结合位点可以是单链或二硫键稳定的可变区(scFv)或可以形成四价或三价分子。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取三功能抗体型，其是维持IgG样形状的三功能、双特异性抗体。这种嵌合体由源自于两个亲本抗体的两个半抗体构成，各自具有一条轻链和一条重链。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白是KiH共同轻链(LC) 型，其涉及杵臼结构(KIH)技术。所述KIH包括工程化的CH3结构域，以在每条重链中产生“杵”或“臼”来促进异二聚化。在“杵臼结构(KiH)”Fc技术背后的概念是通过将小残基用大体积的残基替换而在一个CH3结构域(CH3A)中引入“杵”(例如采取EU编号的 T366WCH3A)。为了容纳所述“杵”，通过将最邻近所述杵的残基用较小的残基代替，在另一个CH3结构域(CH3B)上产生互补的“臼”表面(例如T366S/L368A/Y407VCH3B)。所述“臼”突变通过结构化指导的噬菌体筛选进行优化(Atwell S,Ridgway JB,Wells JA,Carter P.，使用噬菌体展示文库从同二聚体的结构域界面的重塑得到的稳定的异二聚体(Stable heterodimers from remodeling thedomain interface of a homodimer using a phage display library)，J Mol Biol(1997) 270(1):26–35)。KiH Fc变体的X-射线晶体结构(Elliott JM,Ultsch M, Lee J,Tong R,Takeda K,Spiess C等，杵和臼非糖基化半抗体同二聚体的反平行构象由CH2-CH3疏水相互作用介导(Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylatedhalf-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3hydrophobic interaction)，JMol Biol(2014)426(9):1947–57； Mimoto F,Kadono S,Katada H,Igawa T,Kamikawa T,Hattori K等，对 FcγR具有提高的亲和性的新的不对称工程化Fc变体的晶体结构(Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant withimproved affinity for FcgammaRs)，Mol Immunol(2014)58(1):132–8) 证实了由CH3结构域间核心界面处的空间互补性驱动的疏水相互作用使异二聚化在热力学上有利，而杵-杵和臼-臼界面分别由于空间位阻和有利相互作用的破坏而不利于同二聚作用。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取双可变结构域免疫球蛋白(DVD-IgTM)型，其通过柔性的天然存在的连接物将两个单克隆抗体的靶结合结构域合并，并得到四价IgG样分子。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取正交Fab界面 (Ortho-Fab)形式。在ortho-Fab IgG方法中(Lewis SM,Wu X,Pustilnik A,Sereno A,Huang F,Rick HL等，通过正交Fab界面的基于结构的设计产生双特异性IgG抗体(Generation of bispecific IgGantibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface)，Nat.Biotechnol.(2014)32(2):191–8)，基于结构的区域性设计在仅仅一个 Fab中的LC和HCVH-CH1界面处引入互补突变，对另一个Fab没有做出任何改变。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取二合一Ig格式。在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取ES型，其是含有融合到Fc的结合到靶1和靶2的2个不同Fab的异二聚体构建体。异二聚化通过所述Fc中的静电操控突变来确保。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取κλ体型，其是具有融合到通过异二聚化突变稳定化的Fc的2个不同Fab的异二聚体构建体：靶向抗原1的Fab1含有κLC，而靶向抗原2的第二Fab含有λ LC。图30A是一种型的κλ体的示例性图示；图30B是另一种κλ体的示例性图示。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取Fab臂交换形式 (通过将重链和附连的轻链(半分子)与来自于另一个分子的重链-轻链对交换来交换Fab臂以产生双特异性抗体的抗体)。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取SEED体型(所述链交换工程化结构域(SEED)平台被设计成产生不对称且双特异性的抗体样分子，这种能力扩展了天然抗体的治疗性应用。这种蛋白质工程化平台是基于保守的CH3结构域内免疫球蛋白的结构相关的序列的交换。所述SEED设计允许高效产生AG/GA异二聚体，而不利于AG和GA SEED CH3结构域的同二聚作用。(Muda M.等，Protein Eng. Des.Sel.，2011,24(5):447-54)。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取LuZ-Y型，其中使用亮氨酸拉链来诱导两个不同HC的异二聚化(Wranik,BJ.等，J.Biol. Chem.(2012),287:43331-9)。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取Cov-X体型(在双特异性CovX体中，两个不同的肽使用支链氮杂环丁酮连接物联结在一起，并在温和条件下以位点特异性方式融合到支架抗体)。所述抗体支架提供长的半衰期和Ig样分布，而所述药效团负责功能活性。所述药效团可以被化学优化或用其他药效团代替，以产生优化的或独特的双特异性抗体(Doppalapudi VR等，PNAS(2010),107(52)； 22611-22616)。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白下去Oasc-Fab异二聚体型，其包括融合到Fc的结合到靶1的Fab和结合到靶2的scFab。异二聚化通过所述Fc中的突变来确保。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取DuetMab型，其是含有结合到抗原1和2的2个不同Fab和通过异二聚化突变稳定化的FC的异二聚体构建体。Fab 1和2含有不同的S-S桥，其确保正确的 LC和HC配对。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取CrossmAb型，其是具有融合到通过异二聚化稳定化的Fc的结合到靶1和2的2个不同Fab的异二聚体构建体。CL和CH1结构域与VH和VL结构域被调换，例如CH1与VL内联融合，而CL与VH内联融合。
在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白采取Fit-Ig型，其是一种同二聚体构建体，其中结合到抗原2的Fab被融合到结合到抗原1 的Fab的HC的N端。所述构建体含有野生型Fc。
表1列出了相组合可以结合到NKG2D的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。所述NKG2D结合结构域在它们对NKG2D的结合亲和力方面可以不同，然而它们都激活人类NKG2D和NK细胞。
Figure BDA0002773106610000281
Figure BDA0002773106610000291
Figure BDA0002773106610000301
Figure BDA0002773106610000311
Figure BDA0002773106610000321
Figure BDA0002773106610000331
Figure BDA0002773106610000341
Figure BDA0002773106610000351
Figure BDA0002773106610000361
Figure BDA0002773106610000371
Figure BDA0002773106610000381
或者，由SEQ ID NO：47所定义的重链可变结构域可以与由SEQ ID NO：48所定义的轻链可变结构域配对，以形成如US 9,273,136中所示的可以结合到NKG2D的抗原结合位点。
SEQ ID NO：47
Figure BDA0002773106610000382
SEQ ID NO：48
Figure BDA0002773106610000383
或者，由SEQ ID NO：49所定义的重链可变结构域可以与由SEQ ID NO：50所定义的轻链可变结构域配对，以形成如US 7,879,985中所示的可以结合到NKG2D的抗原结合位点。
SEQ ID NO：49
Figure BDA0002773106610000384
SEQ ID NO：50
Figure BDA0002773106610000392
表2列出了相组合可以结合到CAIX的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000391
Figure BDA0002773106610000401
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：96所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到CAIX的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：96
Figure BDA0002773106610000402
Figure BDA0002773106610000412
表3列出了相组合可以结合到ANO1的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000411
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：105所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到ANO1的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：105
Figure BDA0002773106610000413
Figure BDA0002773106610000421
表4列出了相组合可以结合到间皮素的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000422
Figure BDA0002773106610000431
Figure BDA0002773106610000441
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：130所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到间皮素的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：130
Figure BDA0002773106610000442
表5列出了相组合可以结合到TROP2的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000443
Figure BDA0002773106610000451
Figure BDA0002773106610000461
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：194所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到TROP2的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：194
Figure BDA0002773106610000462
Figure BDA0002773106610000471
表6列出了相组合可以结合到CEA的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000472
Figure BDA0002773106610000481
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：219所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到CEA的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：219
Figure BDA0002773106610000482
Figure BDA0002773106610000491
表7列出了相组合可以结合到紧密连接蛋白-18.2的重链可变结构域和轻链可变结构域的肽序列。
Figure BDA0002773106610000492
Figure BDA0002773106610000501
或者，可以通过筛选与SEQ ID NO：236所定义的氨基酸序列的结合，来鉴定可以结合到紧密连接蛋白-18.2的新的抗原结合位点。
SEQ ID NO：236
Figure BDA0002773106610000502
在所述Fc结构域内，CD16结合由所述铰链区和CH2结构域介导。例如，在人类IgG1内，与CD16的相互作用主要聚焦于氨基酸残基Asp 265-Glu 269、Asn 297-Thr 299、Ala327-Ile 332、Leu 234-Ser 239 和CH2结构域中的糖残基N-乙酰基-D-葡萄糖胺(参见Sondermann等， Nature,406(6793):267-273)。在所述已知结构域的基础上，可以选择突变以提高或降低与CD16的结合亲和力，例如通过使用噬菌体展示文库或酵母表面cDNA文库，或者可以在相互作用的已知三维结构的基础上设计突变。
异二聚体抗体重链的组装可以通过在同一细胞中表达两种不同抗体重链序列来实现，这可能导致每种抗体重链的同二聚体的组装以及异二聚体的组装。促进异二聚体的偏好性组装可以通过在每种抗体重链恒定区的CH3结构域中并入不同的突变来实现，如US13/494870、 US16/028850、US11/533709、US 12/875015、US13/289934、US14/773418、US12/811207、US13/866756、US 14/647480和US14/830336中所示。例如，可以在人类IgG1的基础上在CH3结构域中制造突变，并在第一多肽和第二多肽内并入不同对的氨基酸替换，以允许这两条链选择性地彼此异二聚化。下面示出的氨基酸替换的位置都按照Kabat中的EU指数来编号。
在一种情形中，所述第一多肽中的氨基酸替换将原始氨基酸用选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)的较大氨基酸代替，并且所述第二多肽中的至少一个氨基酸替换将原始氨基酸用选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)或缬氨酸(V)的较小氨基酸代替，使得所述较大氨基酸替换(突起)契合到所述较小氨基酸替换(孔穴)的表面中。例如，一个多肽可以包含T366W替换，并且另一个多肽可以包含三个替换，包括T366S、L368A和Y407V。
本发明的抗体重链可变结构域可以被任选地偶联到与抗体恒定区、例如包括铰链、CH2和CH3结构域并含有或不含CH1结构域的 IgG恒定区至少90％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述恒定区的氨基酸序列与人类抗体恒定区例如人类IgG1恒定区、IgG2恒定区、IgG3恒定区或IgG4恒定区至少90％同一性。在某些其他实施方式中，所述恒定区的氨基酸序列与来自于另一种哺乳动物例如兔、狗、猫、小鼠或马的抗体恒定区至少90％同一性。与人类IgG1恒定区相比可以在所述恒定区内并入一个或多个突变，例如在Q347、Y349、L351、 S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411和/或 K439处。示例性的替换包括例如Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、 Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、T350V、L351K、L351D、L351Y、 S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、 S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、 T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、 N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、 T394W、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、 F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、 T411E、K439D和K439E。
在某些实施方式中，可以并入到人类IgG1恒定区的CH1中的突变可以在氨基酸V125、F126、P127、T135、T139、A140、F170、P171 和/或V173处。在某些实施方式中，可以并入到人类IgG1恒定区的Cκ中的突变可以在氨基酸E123、F116、S 176、V163、S174和/或T164处。
或者，氨基酸替换可以选自下面表8中示出的成组替换。
Figure BDA0002773106610000521
Figure BDA0002773106610000531
或者，氨基酸替换可以选自下面表9中示出的成组替换。
表9
第一多肽 第二多肽
组1 K409W D399V/F405T
组2 Y349S E357W
组3 K360E Q347R
组4 K360E/K409W Q347R/D399V/F405T
组5 Q347E/K360E/K409W Q347R/D399V/F405T
组6 Y349S/K409W E357W/D399V/F405T
或者，氨基酸替换可以选自下面表10中示出的成组替换。
表10
第一多肽 第二多肽
组1 T366K/L351K L351D/L368E
组2 T366K/L351K L351D/Y349E
组3 T366K/L351K L351D/Y349D
组4 T366K/L351K L351D/Y349E/L368E
组5 T366K/L351K L351D/Y349D/L368E
组6 E356K/D399K K392D/K409D
或者，每条多肽链中的至少一个氨基酸替换可以选自表11。
Figure BDA0002773106610000532
Figure BDA0002773106610000541
或者，至少一个氨基酸替换可以选自下面表12中的成组替换，其中在所述第一多肽列中标注的位置被任何已知的带负电荷的氨基酸代替，并且在所述第二多肽列中标注的位置被任何已知的带正电荷的氨基酸代替。
表12
第一多肽 第二多肽
K392，K370，K409或K439 D399，E356或E357
或者，至少一个氨基酸替换可以选自下面表13中的成组替换，其中在所述第一多肽列中标注的位置被任何已知的带正电荷的氨基酸代替，并且在所述第二多肽列中标注的位置被任何已知的带负电荷的氨基酸代替。
表13
第一多肽 第二多肽
D399，E356或E357 K409，K439，K370或K392
或者，氨基酸替换可以选自下面表14中的成组替换。
表14
第一多肽 第二多肽
T350V，L351Y，F405A和Y407V T350V，T366L，K392L和T394W
可选地或另外地，异多聚体蛋白的结构稳定性可以通过在所述第一或第二多肽链任一者上引入S354C并在相对的多肽链上引入Y349C 来提高，所述突变在所述两个多肽的界面内形成人造二硫桥。
上述的多特异性蛋白可以使用本领域技术人员公知的重组DNA 技术来制造。例如，可以将编码所述第一免疫球蛋白重链的第一核酸序列克隆到第一表达载体中；可以将编码所述第二免疫球蛋白重链的第二核酸序列克隆到第二表达载体中；可以将编码所述免疫球蛋白轻链的第三核酸序列克隆到第三表达载体中；可以将所述第一、第二和第三表达载体一起稳定转染到宿主细胞中，以产生所述多聚体蛋白。
为了获得所述多特异性蛋白的最高产量，可以探索所述第一、第二和第三表达载体的不同比率，以确定用于转染到所述宿主细胞中的最佳比率。在转染后，可以使用本领域中已知的方法例如有限稀释法、 ELISA、FACS、显微术或Clonepix来分离单一克隆，用于细胞库产生。
可以将克隆在适合于生物反应器规模放大的条件下培养，并维持所述多特异性蛋白的表达。所述多特异性蛋白可以使用本领域中已知的方法包括离心、深度过滤、细胞裂解、匀浆、冻融、亲和纯化、凝胶过滤、离子交换层析、疏水相互作用交换层析和混合模式层析来分离和纯化。
II.多特异性蛋白的特征
在某些实施方式中，本文中描述的包括NKG2D结合结构域和用于CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的结合结构域的多特异性结合蛋白，结合到表达人类NKG2D的细胞。在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白以与具有相同的相应CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2结合结构域的单克隆抗体可比的水平结合到肿瘤相关抗原CAIX、ANO1、间皮素、 TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2。然而，本文中描述的多特异性蛋白与所述相应的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2单克隆抗体相比，在降低肿瘤生长和杀伤表达CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的癌细胞中可能更加有效。
在某些实施方式中，本文中描述的包括NKG2D结合结构域和用于CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的结合结构域的多特异性结合蛋白，当与表达抗原CAIX、ANO1、间皮素、 TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的肿瘤细胞培养时，可以激活原代人类NK细胞。NK细胞激活以CD107a脱颗粒和IFNγ细胞因子生产的增加为标志。此外，与包括相同的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、 CEA或紧密连接蛋白-18.2结合结构域的单克隆抗体相比，在表达所述抗原的肿瘤细胞存在下，所述多特异性结合蛋白显示出人类NK细胞的更高的激活。例如，与单克隆抗体曲妥珠单抗相比，在表达抗原CAIX、 ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的肿瘤细胞存在下，所述多特异性结合蛋白显示出人类NK细胞的更高的激活。
在某些实施方式中，本文中描述的包括NKG2D结合结构域和用于CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的结合结构域的多特异性结合蛋白，在表达抗原CAIX、ANO1、间皮素、 TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的肿瘤细胞存在下，可以提高静息和IL-2激活的人类NK细胞的活性。
在某些实施方式中，本文中描述的包括NKG2D结合结构域和用于肿瘤相关抗原CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的结合结构域的多特异性结合蛋白，在表达抗原CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的肿瘤细胞存在下，可以提高静息和IL-2激活的人类NK细胞的细胞毒性活性。在某些实施方式中，与相应的单克隆抗体相比，所述多特异性蛋白可以针对表达中和低CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的肿瘤细胞提供优势。
在某些实施方式中，与相应的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、 CEA或紧密连接蛋白-18.2单克隆抗体相比，本文中描述的多特异性蛋白在具有Fc受体(FcR)的高表达的癌症或驻留在具有高水平FcR的肿瘤微环境中的癌症的治疗中可能是有利的。单克隆抗体通过包括 ADCC、CDC、吞噬作用和信号阻断等的多种机制发挥它们对肿瘤生长的作用。在FcγR中，CD16对IgG Fc具有最低的亲和力；FcγRI(CD64) 是高亲和力FcR，其比CD16强约1000倍地结合到IgG Fc。CD64通常表达在许多造血谱系例如髓系谱系上，并且可以表达在源自于这些细胞类型的肿瘤例如急性髓性白血病(AML)细胞上。浸润到所述肿瘤中的免疫细胞例如MDSC和单核细胞也表达CD64，并已知浸润所述肿瘤微环境。CD64被所述肿瘤或在肿瘤微环境中的表达可能对单克隆抗体疗法具有有害效应。CD64在肿瘤微环境中的表达使得这些抗体难以接合NK细胞表面上的CD16，因为所述抗体优先接合所述高亲和力受体。所述多特异性蛋白通过靶向NK细胞表面上的两种激活受体，可以克服CD64表达(在肿瘤或肿瘤微环境上)对单克隆抗体疗法的有害效应。不论所述肿瘤细胞上是否存在CD64表达，所述多特异性蛋白都能介导针对所有肿瘤细胞的人类NK细胞应答，因为NK细胞上的两个激活受体的双重靶向提供了与NK细胞的更强的特异性结合。
在某些实施方式中，本文中描述的多特异性蛋白可以通过减少中靶偏离肿瘤(on-target off-tumor)副作用而提供更好的安全性。自然杀伤细胞和CD8T细胞两者能够直接裂解肿瘤细胞，尽管NK细胞和CD8 T细胞识别正常的自身细胞和肿瘤细胞所通过的机制不同。NK细胞的活性受到来自于激活(NCR、NKG2D、CD16等)和抑制(KIR、NKG2A 等)受体的信号的平衡调控。这些激活和抑制信号的平衡允许NK细胞确定是健康的自身细胞还是应激的、病毒感染的或转化的自身细胞。这种自体耐受的“内置”机制将帮助保护正常的健康组织免于NK细胞应答。为扩展这个原理，NK细胞的自体耐受将允许TriNKET靶向在自体和肿瘤两者上表达的抗原而没有偏离肿瘤副作用，或者具有增加的治疗窗口。不同于自然杀伤细胞，T细胞需要识别被MHC分子呈递的特定肽才能激活和发挥效应功能。T细胞已作为免疫疗法的主要靶点，并且已经开发了许多策略来重新引导针对肿瘤的T细胞应答。T 细胞双特异性物质、检查点抑制剂和CAR-T细胞都已被FDA批准，但通常苦于剂量限制性毒性。T细胞双特异性物质和CAR-T细胞通过使用结合结构域来靶向肿瘤细胞表面上的抗原并使用工程化的信号传导结构域将激活信号传导到效应细胞中，围绕TCR-MHC识别系统工作。尽管在引发抗肿瘤免疫应答中有效，但这些疗法通常伴有细胞因子释放综合征(CRS)和中靶偏离肿瘤副作用。在这种背景下所述多特异性蛋白是独特的，因为它们不“重写”NK细胞激活和抑制的天然系统。相反，所述多特异性蛋白被设计成动摇所述平衡并为NK细胞提供另外的激活信号，同时维持对健康自体细胞的NK耐受。
在某些实施方式中，本文中描述的多特异性蛋白与包括相同抗原结合结构域的相应的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2单克隆抗体相比，可以更有效地延迟肿瘤的进展。在某些实施方式中，本文中描述的多特异性蛋白与包括相同抗原结合结构域的相应的CAIX、ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2 单克隆抗体相比，可以更加有效地对抗癌症转移。
III.治疗性应用
本发明提供了使用本文中描述的多特异性结合蛋白和/或本文中描述的药物组合物治疗癌症的方法。所述方法可用于治疗表达CAIX、 ANO1、间皮素、TROP2、CEA或紧密连接蛋白-18.2的各种不同的癌症，其包括向需要的患者施用治疗有效量的本文中描述的多特异性结合蛋白。
所述治疗方法可以根据待治疗的癌症来表征。使用靶向CAIX的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如肾细胞癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、食道、肺、结肠、肾、宫颈癌和非小细胞肺癌。使用靶向间皮素的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胆管癌、胃癌、子宫浆液性癌、胸腺癌和急性髓性白血病。使用靶向ANO1的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如食道鳞状细胞癌(ESCC)、胃肠间质肿瘤(GIST)、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肉瘤。使用靶向TROP2的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如乳腺、肺、胃、结肠直肠、胰腺、前列腺、宫颈、头颈癌、鼻咽癌和卵巢癌。使用靶向CEA的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如胃肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌和乳腺癌。使用靶向紧密连接蛋白-18.2的多特异性结合蛋白治疗的癌症包括例如食道癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、结肠癌和几种形式的胆管癌。
在某些其他实施方式中，所述癌症是脑癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、白血病、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、直肠癌、肾癌、胃癌、睾丸癌或子宫癌。在其他实施方式中，所述癌症是鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、肉瘤(例如血管肉瘤或软骨肉瘤)、喉癌、腮腺癌、胆管癌、甲状腺癌、肢端雀斑痣样黑素瘤、光化性角化病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、腺样囊性癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鳞癌、肛管癌、肛门癌、肛门直肠癌、星形胶质细胞瘤、巴氏腺癌、基底细胞癌、胆管癌、骨癌、骨髓癌、支气管癌、支气管腺体癌、类癌瘤、胆管癌、软骨肉瘤、脉络丛乳头状瘤/癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、透明细胞癌、结缔组织癌、囊腺瘤、消化系统癌症、十二指肠癌、内分泌系统癌症、内胚窦瘤、子宫内膜增生、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜样腺癌、内皮细胞癌、室管膜癌、上皮细胞癌、尤文氏肉瘤、眼和眼眶癌、女性生殖器癌、局灶性结节性增生、胆囊癌、胃窦癌、胃底癌、胃泌素瘤、成胶质细胞瘤、胰高血糖素瘤、心脏癌症、成血管细胞瘤、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝胆管癌、肝细胞癌、霍奇金氏病、回肠癌、胰岛细胞瘤、上皮内瘤变、上皮内鳞状细胞瘤变、肝内胆管癌、侵入性鳞状细胞癌、空肠癌、关节癌、卡波斯肉瘤、盆腔癌、大细胞癌、大肠癌、平滑肌肉瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、淋巴瘤、男性生殖器癌、恶性黑素瘤、恶性间皮肿瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、脑膜癌、间皮癌、转移性癌、口腔癌、粘液表皮样癌、多发性骨髓瘤、肌肉癌、鼻道癌、神经系统癌症、神经上皮腺癌、结节性黑素瘤、非上皮性皮肤癌、非霍奇金氏淋巴瘤、燕麦细胞癌、少突神经胶质癌、口腔癌、骨肉瘤、浆液性乳头状腺癌、阴茎癌、舌咽癌、垂体肿瘤、浆细胞瘤、假性肉瘤、肺母细胞瘤、直肠癌、肾细胞癌、呼吸系统癌症、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、浆液性癌、窦癌、皮肤癌、小细胞癌、小肠癌、平滑肌癌、软组织癌、分泌生长抑素的肿瘤、脊椎癌、鳞状细胞癌、横纹肌癌、间皮下癌、浅表扩散性黑素瘤、T细胞白血病、舌癌、未分化癌、输尿管癌、尿道癌、尿道膀胱癌、泌尿系统癌症、宫颈癌、宫体癌、葡萄膜黑素瘤、阴道癌、疣状癌、血管活性肠肽瘤、外阴癌、高分化癌或肾母细胞瘤。
在某些其他实施方式中，所述癌症是非霍奇金氏淋巴瘤例如B-细胞淋巴瘤或T-细胞淋巴瘤。在某些实施方式中，所述非霍奇金氏淋巴瘤是B-细胞淋巴瘤，例如弥漫性大B-细胞淋巴瘤、原发性纵隔B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区B-细胞淋巴瘤、淋巴结外边缘区B-细胞淋巴瘤、淋巴结边缘区B- 细胞淋巴瘤、脾边缘区B-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、毛细胞白血病或原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤。在某些其他实施方式中，所述非霍奇金氏淋巴瘤是T-细胞淋巴瘤，例如前T 淋巴母细胞淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞T-细胞淋巴瘤、淋巴结外自然杀伤细胞/T-细胞淋巴瘤、肠病型T-细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T-细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤或外周T-细胞淋巴瘤。
所述待治疗的癌症可以根据在所述癌细胞表面上表达的特定抗原的存在来表征。在某些实施方式中，所述癌细胞可以表达下述一者或多者：CD2，CD19，CD20，CD30，CD38，CD40，CD52，CD70， EGFR/ERBB1，IGF1R，HER3/ERBB3，HER4/ERBB4，MUC1，cMET， SLAMF7，PSCA，MICA，MICB，TRAILR1，TRAILR2，MAGE-A3， B7.1，B7.2，CTLA4和PD1。
IV.组合疗法
本发明的另一方面提供了组合疗法。将本文描述的多特异性结合蛋白与其他治疗剂组合使用以治疗癌症。
可以在治疗癌症中用作组合疗法的一部分的示例性治疗剂包括例如放射线、丝裂霉素、维甲酸、盐酸苯达莫司汀(ribomustin)、吉西他滨、长春新碱、依托泊苷、克拉屈滨、二溴甘露醇、甲氨蝶呤、多柔比星、卡波醌、喷司他丁、硝基可润、净司他丁、西曲瑞克、来曲唑、雷替曲塞、柔红霉素、法倔唑、福莫司汀、胸腺法新、索布佐生、奈达铂、阿糖胞苷、比卡鲁胺、长春瑞滨、维司力农、氨鲁米特、安吖啶、丙谷胺、依利醋铵、酮色林、去氧氟尿苷、依曲替酯、异维甲酸、链脲佐菌素、尼莫司汀、长春地辛、氟他胺(flutamide)、氟他胺 (drogenil)、布缩宫素、卡莫氟、雷佐生、西佐喃、卡铂、二溴卫矛醇、替加氟、异环磷酰胺、泼尼莫司汀、毕西巴尼、左旋咪唑、替尼泊苷、英丙舒凡、依诺他滨、麦角乙脲、羟甲烯龙、他莫昔芬、孕酮、美雄烷、环硫雄醇、福美司坦、干扰素-α、干扰素-2α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子-1、集落刺激因子-2、地尼白介素、白介素-2、黄体生成激素释放因子和上述药剂的可能表现出对同源受体的差异结合和增加或减少的血清半衰期的变化型。
可以在治疗癌症中用作组合疗法的一部分的另一类药剂是免疫检查点抑制剂。示例性的免疫检查点抑制剂包括抑制下述一者或多者的药剂：(i)细胞毒性T-淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)，(ii)程序化细胞死亡蛋白1(PD1)，(iii)PDL1，(iv)LAG3，(v)B7-H3， (vi)B7-H4，和(vii)TIM3。CTLA4抑制剂伊匹单抗已被美国食品和药品监督管理局(UnitedStates Food and Drug Administration)批准用于治疗黑素瘤。
可以在治疗癌症中用作组合疗法的一部分的另一类药剂是靶向非检查点靶的单克隆抗体(例如赫赛汀)和非细胞毒性药剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)。
另一类抗癌药剂包括例如：(i)选自ALK抑制剂、ATR抑制剂、 A2A拮抗剂、碱基切除修复抑制剂、Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂、Bruton's 酪氨酸激酶抑制剂、CDC7抑制剂、CHK1抑制剂、周期蛋白依赖性激酶抑制剂、DNA-PK抑制剂、DNA-PK和mTOR两者的抑制剂、DNMT1抑制剂、DNMT1抑制剂加2-氯-脱氧腺苷、HDAC抑制剂、Hedgehog 信号传导途径抑制剂、IDO抑制剂、JAK抑制剂、mTOR抑制剂、MEK 抑制剂、MELK抑制剂、MTH1抑制剂、PARP抑制剂、磷脂酰肌醇 3-激酶抑制剂、PARP1和DHODH两者的抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶-II抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、VEGFR抑制剂和WEE1 抑制剂的抑制剂；(ii)OX40、CD137、CD40、GITR、CD27、HVEM、 TNFRSF25或ICOS的激动剂；和(iii)选自IL-12、IL-15、GM-CSF 和G-CSF的细胞因子。
本发明的蛋白质也可用作原发性病灶的手术去除的辅助物。
为了实现所需的组合治疗效果，可以选择多特异性结合蛋白和其他治疗剂的量和施用的相对时间安排。例如，当向需要这种施用的患者施用组合疗法时，所述组合的治疗剂或包含所述治疗剂的一种或多种药物组合物可以以任何顺序施用，例如顺序、并行、一起、同时施用等。此外，例如，多特异性结合蛋白可以在所述其他治疗剂发挥其预防或治疗效果的时间内施用，或与之相反。
V.药物组合物
本发明还描述了含有治疗有效量的本文中描述的蛋白质的药物组合物。所述组合物可以被配制成用于各种不同的药物递送系统。对于适合的制剂来说，一种或多种生理上可接受的赋形剂或载体也可以包含在所述组合物中。适合在本公开中使用的制剂参见《Remington's制药学》(Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCompany, Philadelphia,Pa.,17th ed.,1985)。对于用于药物递送的方法的简要综述，参见例如Langer(Science 249:1527-1533,1990)。
本公开的静脉内药物递送制剂可以包含在袋子、笔或注射器中。在某些实施方式中，所述袋子可以被连接到包含管和/或针头的通道。在某些实施方式中，所述制剂可以是冷冻干燥制剂或液体制剂。在某些实施方式中，所述制剂可以被冷冻干燥(冻干)并包含在约12-60 个小瓶中。在某些实施方式中，所述制剂可以被冷冻干燥，并且可以将45mg所述冷冻干燥的制剂包含在一个小瓶中。在某些实施方式中，可以将约40mg-约100mg所述冷冻干燥的制剂包含在一个小瓶中。在某些实施方式中，将来自于12、27或45个小瓶的冷冻干燥的制剂合并，以获得所述蛋白质在静脉内药物制剂中的治疗剂量。在某些实施方式中，所述制剂可以是液体制剂，并以约250mg/小瓶至约1000mg/ 小瓶储存。在某些实施方式中，所述制剂可以是液体制剂并以约600mg/ 小瓶储存。在某些实施方式中，所述制剂可以是液体制剂并以约250mg/ 小瓶储存。
本公开可以以水性液体药物制剂的形式存在，其在形成制剂的缓冲溶液中包括治疗有效量的所述蛋白质。
这些组合物可以通过常规的灭菌技术灭菌，或者可以除菌过滤。得到的水性溶液可以原样包装以备使用，或者可以被冷冻干燥，所述冷冻干燥的制剂在施用之前与无菌水性载体合并。所述制剂的pH通常在3至11之间，更优选地在5至9之间或6至8之间，最优选地在7 至8之间，例如7至7.5。所述得到的固体型的组合物可以被包装在多个单一剂量单元中，各自含有固定量的上述一种或多种药剂。所述固体型的组合物也可以以灵活的量包装在容器中。
在某些实施方式中，本公开提供了具有延长的储存期限的制剂，其包含本公开的蛋白质与甘露糖醇、单水柠檬酸、柠檬酸钠、二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、氯化钠、聚山梨醇酯80、水和氢氧化钠的组合。
在某些实施方式中，制备了一种水性制剂，其在pH缓冲的溶液中包含本公开的蛋白质。本发明的缓冲液可以具有约4至约8，例如约 4.5至约6.0或约4.8至约5.5范围内的pH，或者可以具有约5.0至约 5.2的pH。在上述pH之间的范围也打算作为本公开的一部分。例如，打算包括使用任何上述值的组合作为上限和/或下限的值范围。将pH 控制在这个范围之内的缓冲剂的实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂。
在某些实施方式中，所述制剂包括含有柠檬酸盐和磷酸盐的缓冲系统，以将pH维持在约4至约8的范围内。在某些实施方式中，所述 pH范围可以是约4.5至约6.0或约pH 4.8至约5.5，或在约5.0至约5.2 的pH范围内。在某些实施方式中，所述缓冲系统包括单水柠檬酸、柠檬酸钠、二水磷酸氢二钠和/或二水磷酸二氢钠。在某些实施方式中，所述缓冲系统包括约1.3mg/mL柠檬酸(例如1.305mg/mL)、约0.3 mg/mL柠檬酸钠(例如0.305mg/mL)、约1.5mg/mL二水磷酸氢二钠 (例如1.53mg/mL)、约0.9mg/mL二水磷酸二氢钠(例如0.86)和约6.2mg/mL氯化钠(例如6.165mg/mL)。在某些实施方式中，所述缓冲系统包括1-1.5mg/mL柠檬酸、0.25至0.5mg/mL柠檬酸钠、1.25 至1.75mg/mL二水磷酸氢二钠、0.7至1.1mg/mL二水磷酸二氢钠和 6.0至6.4mg/mL氯化钠。在某些实施方式中，所述制剂的pH用氢氧化钠调节。
充当等渗剂并且可以使抗体稳定的多元醇，也可以包含在所述制剂中。所述多元醇以可能根据制剂的所需等渗性而变的量添加到所述制剂。在某些实施方式中，所述水性制剂可以是等渗的。添加的多元醇的量也可能根据所述多元醇的分子量而变。例如，与二糖(例如海藻糖)相比，可以添加较低量的单糖(例如甘露糖醇)。在某些实施方式中，可以在所述制剂中用作等渗剂的多元醇是甘露糖醇。在某些实施方式中，甘露糖醇的浓度可以是约5至约20mg/mL。在某些实施方式中，甘露糖醇的浓度可以是约7.5至15mg/mL。在某些实施方式中，甘露糖醇的浓度可以是约10-14mg/mL。在某些实施方式中，甘露糖醇的浓度可以是约12mg/mL。在某些实施方式中，多元醇山梨糖醇可以包含在所述制剂中。
也可以向所述制剂添加去污剂或表面活性剂。示例性的去污剂包括非离子型去污剂例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。添加的去污剂的量使得它减少所述配制的抗体的聚集和/或将所述制剂中颗粒物的形成降至最低和/或减少吸附。在某些实施方式中，所述制剂可以包含作为表面活性剂的聚山梨醇酯。在某些实施方式中，所述制剂可以含有去污剂聚山梨醇酯80或吐温80。吐温80是用于描述聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇单油酸酯的术语(参见Fiedler,Lexikon der Hifsstoffe,EditioCantor Verlag Aulendorf, 4th ed.,1996)。在某些实施方式中，所述制剂可以含有约0.1mg/mL 至约10mg/mL之间或约0.5mg/mL至约5mg/mL之间的聚山梨醇酯 80。在某些实施方式中，可以在所述制剂中添加约0.1％聚山梨醇酯80。
在实施方式中，本公开的蛋白质产品被配制成液体制剂。所述液体制剂可以以10mg/mL的浓度存在于USP/Ph Eur I型50R小瓶中，用橡胶塞封闭并用铝制压合密封盖密封。所述橡胶塞可以由符合USP和 Ph Eur的弹性体制成。在某些实施方式中，小瓶可以装填有61.2mL 所述蛋白质产品溶液，以便允许可抽出体积为60mL。在某些实施方式中，可以将所述液体制剂用0.9％盐水溶液稀释。
在某些实施方式中，本公开的液体制剂可以被制备成浓度为10 mg/mL的溶液，并与稳定剂水平的糖相组合。在某些实施方式中，所述液体制剂可以在水性载体中制备。在某些实施方式中，稳定剂可以以不超过可能产生对静脉内施用来说不理想或不适合的黏度的量添加。在某些实施方式中，所述糖可以是二糖例如蔗糖。在某些实施方式中，所述液体制剂也可以包括一种或多种缓冲剂、表面活性剂和防腐剂。
在某些实施方式中，所述液体制剂的pH可以通过添加可药用酸和 /或碱来设定。在某些实施方式中，所述可药用酸可以是盐酸。在某些实施方式中，所述碱可以是氢氧化钠。
除了聚集之外，脱酰胺是肽和蛋白质在发酵、收获/细胞澄清、纯化、药物物质/药物制品储存期间和样品分析期间可能发生的常见产品变异。脱酰胺是从蛋白质失去NH3，形成琥珀酰亚胺中间体，其可能经历水解。所述琥珀酰亚胺中间体引起母体肽的质量减少17道尔顿。随后的水解导致质量增加18道尔顿。由于在水性条件下不稳定，所述琥珀酰亚胺中间体的分离是困难的。因此，脱酰胺通常可检测为质量增加1道尔顿。天冬酰胺的脱酰胺产生天冬氨酸或异天冬氨酸。影响脱酰胺速率的参数包括pH、温度、溶剂介电常数、离子强度、一级序列、局部多肽构象和三级结构。在肽链中与Asn相邻的氨基酸残基影响脱酰胺速率。蛋白质序列中Asn之后的Gly和Ser导致对脱酰胺更高的敏感性。
在某些实施方式中，本公开的液体制剂可以在防止所述蛋白质产品脱酰胺的pH和湿度条件下保存。
本文中感兴趣的水性载体是可药用(对于向人类施用来说安全且无毒)并且可用于制备液体制剂的水性载体。说明性载体包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌性注射用水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
防腐剂可以任选地添加到本发明的制剂以减少细菌作用。防腐剂的添加可以例如便于生产多次使用(多剂)制剂。
在特定情况下，例如当患者在医院中在移植后通过IV途径接受所有药物时，静脉内(IV)制剂可能是优选的施用途径。在某些实施方式中，在施用前将所述液体制剂用0.9％氯化钠溶液稀释。在某些实施方式中，所述稀释的注射用药物产品是等渗的，并适合于通过静脉内输注施用。
在某些实施方式中，盐或缓冲剂组分可以以10mM-200mM的量添加。所述盐和/或缓冲剂是可药用的，并源自于各种不同的已知酸(无机和有机酸)和“成碱”金属或胺。在某些实施方式中，所述缓冲剂可以是磷酸盐缓冲剂。在某些实施方式中，所述缓冲剂可以是甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐缓冲剂，在所述情况下，钠、钾或铵离子可以充当平衡离子。
防腐剂可以任选地添加到本发明的制剂以减少细菌作用。防腐剂的添加可以例如便于生产多次使用(多剂)制剂。
本文中感兴趣的水性载体是可药用(对于向人类施用来说安全且无毒)并且可用于制备液体制剂的水性载体。说明性载体包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌性注射用水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
本公开可以以冷冻干燥制剂的形式存在，其包括所述蛋白质和冻干保护剂。所述冻干保护剂可以是糖例如二糖。在某些实施方式中，所述冻干保护剂可以是蔗糖或麦芽糖。所述冷冻干燥制剂也可以包括一种或多种缓冲剂、表面活性剂、增量剂和/或防腐剂。
可用于使所述冷冻干燥的药物制品稳定的蔗糖或麦芽糖的量可以是蛋白质与蔗糖或麦芽糖至少1:2的重量比。在某些实施方式中，所述蛋白质与蔗糖或麦芽糖的重量比可以为1:2至1:5。
在某些实施方式中，在冷冻干燥之前，所述制剂的pH可以通过添加可药用酸和/或碱来设定。在某些实施方式中，所述可药用酸可以是盐酸。在某些实施方式中，所述可药用碱可以是氢氧化钠。
在冷冻干燥之前，含有本公开的蛋白质的溶液的pH可以被调整到 6至8之间。在某些实施方式中，用于所述冷冻干燥的药物制品的pH 范围可以是7至8。
在某些实施方式中，盐或缓冲剂组分可以以10mM-200mM的量添加。所述盐和/或缓冲剂是可药用的，并源自于各种不同的已知酸(无机和有机酸)和“成碱”金属或胺。在某些实施方式中，所述缓冲剂可以是磷酸盐缓冲剂。在某些实施方式中，所述缓冲剂可以是甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐缓冲剂，在所述情况下，钠、钾或铵离子可以充当平衡离子。
在某些实施方式中，可以添加“增量剂”。“增量剂”是为冻干混合物增添质量并对冻干饼的物理结构有贡献(例如便于生产维持开放孔隙结构的基本上均匀的冻干饼)的化合物。说明性的增量剂包括甘露糖醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨糖醇。本发明的冷冻干燥制剂可以含有这些增量剂。
防腐剂可以任选地添加到本发明的制剂以减少细菌作用。防腐剂的添加可以例如便于生产多次使用(多剂)制剂。
在某些实施方式中，所述冷冻干燥的药物制品可以用水性载体构造。本文中感兴趣的水性载体是可药用(例如对于向人类施用来说安全且无毒)并且可用于在冷冻干燥后制备液体制剂的水性载体。说明性稀释剂包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌性注射用水(BWFI)、pH 缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
在某些实施方式中，本公开的冷冻干燥的药物制品用USP级无菌注射用水(SWFI)或USP级0.9％氯化钠注射液重构。在重构期间，将所述冷冻干燥的粉剂溶解在溶液中。
在某些实施方式中，本公开的冷冻干燥的蛋白质产品构造到约4.5 mL注射用水，并用0.9％盐水溶液(氯化钠溶液)稀释。
本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以便获得对特定患者、组合物和施用方式来说有效实现所需治疗响应并且对所述患者无毒的活性成分的量。
具体剂量可以是对每位患者来说均一的剂量，例如50-5000mg蛋白质。或者，患者的剂量可以根据所述患者的近似体重或表面积定制。确定适合剂量的其他因素可以包括待治疗或预防的疾病或病症、疾病的严重性、施用途径和患者的年龄、性别和医疗状况。确定用于治疗的适合剂量所必需的计算的进一步精化由本领域技术人员按常规进行，特别是根据本文中公开的剂量信息和测定法。所述剂量也可以通过使用用于确定使用剂量的已知测定法并联合适合的剂量响应数据来确定。当监测到疾病进展时，个体患者的剂量可以进行调整。可以测量患者中可靶向构建体或复合物的血液水平，以观察是否需要调整剂量来达到或维持有效浓度。可以使用药物基因组学来确定哪些可靶向构建体和/或复合物及其剂量最可能对给定个体有效(Schmitz等， Clinica Chimica Acta 308:43-53,2001；Steimer等，Clinica Chimica Acta 308:33-41,2001)。
一般来说，基于体重的剂量是每kg体重约0.01μg至约100mg，例如约0.01μg至约100mg/kg体重、约0.01μg至约50mg/kg体重、约0.01μg至约10mg/kg体重、约0.01μg至约1mg/kg体重、约0.01μg 至约100μg/kg体重、约0.01μg至约50μg/kg体重、约0.01μg至约 10μg/kg体重、约0.01μg至约1μg/kg体重、约0.01μg至约0.1μg/kg 体重、约0.1μg至约100mg/kg体重、约0.1μg至约50mg/kg体重、约0.1μg至约10mg/kg体重、约0.1μg至约1mg/kg体重、约0.1μg 至约100μg/kg体重、约0.1μg至约10μg/kg体重、约0.1μg至约1μg/kg 体重、约1μg至约100mg/kg体重、约1μg至约50mg/kg体重、约1 μg至约10mg/kg体重、约1μg至约1mg/kg体重、约1μg至约100μg/kg 体重、约1μg至约50μg/kg体重、约1μg至约10μg/kg体重、约10μg 至约100mg/kg体重、约10μg至约50mg/kg体重、约10μg至约10 mg/kg体重、约10μg至约1mg/kg体重、约10μg至约100μg/kg体重、约10μg至约50μg/kg体重、约50μg至约100mg/kg体重、约50μg至约50mg/kg体重、约50μg至约10mg/kg体重、约50μg至约1mg/kg 体重、约50μg至约100μg/kg体重、约100μg至约100mg/kg体重、约100μg至约50mg/kg体重、约100μg至约10mg/kg体重、约100μg 至约1mg/kg体重、约1mg至约100mg/kg体重、约1mg至约50mg/kg 体重、约1mg至约10mg/kg体重、约10mg至约100mg/kg体重、约 10mg至约50mg/kg体重、约50mg至约100mg/kg体重。
药剂可以每日、每周、每月或每年施用一次或多次，或甚至每2 至20年施用一次，本领域普通技术人员可以根据体液或组织中可靶向构建体或复合物的测量到的停留时间和浓度，容易地估算施用的重复率。本发明的施用可以是静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、胸膜内、鞘内、腔内、通过导管灌注或通过直接病灶内注射。这可以施用每日一次或多次、每周一次或多次、每月一次或多次或每年一次或多次。
上面的描述描述了本发明的多个方面和实施方式。本申请具体来说设想了所述方面和实施方式的所有组合和排列。
实施例
现在正一般性描述的本发明，通过下面的实施例将更容易被理解，包括所述实施例仅仅是出于说明本发明的某些方面和实施方式，并不打算限制本发明。
实施例1–NKG2D结合结构域结合到NKG2D
NKG2D结合结构域结合到纯化的重组NKG2D
将人类、小鼠或食蟹猴NKG2DNKG2D胞外结构域(ectodomains) 的核酸序列与编码人类IgG1Fc结构域的核酸序列融合，并引入到哺乳动物细胞中进行表达。在纯化后，将NKG2D-Fc融合蛋白吸附到微孔板的孔。在用牛血清白蛋白阻断所述孔以防止非特异性结合后，对 NKG2D结合结构域进行滴定并将其添加到预先吸附有NKG2D-Fc融合蛋白的孔。第一抗体结合使用偶联到辣根过氧化物酶并特异性识别人类κ轻链以避免Fc交叉反应性的第二抗体来检测。向所述孔添加辣根过氧化物酶的底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)以可视化结合信号，所述信号在450nm处测量并在540nm处校正。向每个孔添加NKG2D 结合结构域克隆、同种型对照或阳性对照(选自SEQ ID NO：47-50，或可以在eBioscience获得的抗小鼠NKG2D抗体克隆MI-6和CX-5)。
所述同种型对照显示出与重组NKG2D-Fc蛋白极小的结合，而所述阳性对照最强结合到所述重组抗原。由所有克隆产生的NKG2D结合结构域都表现出跨人类、小鼠和食蟹猴重组NKG2D-Fc蛋白的结合，尽管在不同克隆之间具有不同的亲和力。总体来说，每种抗NKG2D克隆以相近的亲和力结合到人类(图3)和食蟹猴(图4)重组NKG2D-Fc，但结合到小鼠(图5)重组NKG2D-Fc的亲和力较低。
NKG2D结合结构域结合到表达NKG2D的细胞
对EL4小鼠淋巴瘤细胞系进行工程化改造，以表达人类或小鼠 NKG2D-CD3ζ信号传导结构域嵌合抗原受体。将NKG2D结合克隆、同种型对照或阳性对照以100nM的浓度用于染色在所述EL4细胞上表达的细胞外NKG2D。抗体结合使用荧光团偶联的抗人类IgG第二抗体来检测。细胞通过流式细胞术进行分析，并使用表达NKG2D的细胞与母体EL4细胞的平均荧光强度(MFI)的比较来计算背景倍数(FOB)。
由所有克隆产生的NKG2D结合结构域都结合到表达人类和小鼠 NKG2D的EL4细胞。阳性对照抗体(选自SEQ ID NO：45-48，或可以在eBioscience获得的抗小鼠NKG2D抗体克隆MI-6和CX-5)给出最好的FOB结合信号。在表达人类NKG2D(图6)和小鼠(图7)NKG2D 的细胞之间，每种克隆的NKG2D结合亲和力相近。
实施例2–NKG2D结合结构域阻断天然配体结合到NKG2D
与ULBP-6的竞争
将重组人类NKG2D-Fc蛋白吸附到微孔板的孔，并将所述孔用牛血清白蛋白阻断以降低非特异性结合。向所述孔添加饱和浓度的 ULBP-6-His-生物素，然后添加NKG2D结合结构域克隆。在孵育2小时后，将孔清洗，并通过链亲合素偶联的辣根过氧化物酶和TMB底物检测仍结合于NKG2D-Fc包被的孔的ULBP-6-His-生物素。吸收值在 450nm处测量并在540nm处校正。在减去背景后，从被阻断与孔中的 NKG2D-Fc蛋白结合的ULBP-6-His-生物素的百分率，来计算NKG2D 结合结构域与NKG2D-Fc蛋白的特异性结合。阳性对照抗体(选自SEQ IDNO：47-50)和各种不同的NKG2D结合结构域阻断ULBP-6结合到 NKG2D，而同种型对照显示出与ULBP-6的竞争很小(图8)。
ULBP-6序列由SEQ ID NO：131表示
Figure BDA0002773106610000711
与MICA的竞争
将重组人类MICA-Fc蛋白吸附到微孔板的孔，并将所述孔用牛血清白蛋白阻断以降低非特异性结合。向所述孔添加NKG2D-Fc-生物素，然后添加NKG2D结合结构域。在孵育和清洗后，使用链亲合素-HRP 和TMB底物检测仍结合于MICA-Fc包被的孔的NKG2D-Fc-生物素。吸收值在450nm处测量并在540nm处校正。在减去背景后，从被阻断与MICA-Fc包被的孔结合的NKG2D-Fc-生物素的百分率，来计算 NKG2D结合结构域与NKG2D-Fc蛋白的特异性结合。阳性对照抗体(选自SEQ ID NO：47-50)和各种不同的NKG2D结合结构域阻断MICA 结合到NKG2D，而同种型对照显示出与MICA的竞争很小(图9)。
与Rae-1δ的竞争
将重组小鼠Rae-1δ-Fc(购自R&D Systems)吸附到微孔板的孔，并将所述孔用牛血清白蛋白阻断以降低非特异性结合。向所述孔添加小鼠NKG2D-Fc-生物素，然后添加NKG2D结合结构域。在孵育和清洗后，使用链亲合素-HRP和TMB底物检测仍结合于Rae-1δ-Fc包被的孔的NKG2D-Fc-生物素。吸收值在450nm处测量并在540nm处校正。在减去背景后，从被阻断与Rae-1δ-Fc包被的孔结合的NKG2D-Fc-生物素的百分率，来计算NKG2D结合结构域与NKG2D-Fc蛋白的特异性结合。阳性对照(选自SEQ ID NO：47-50，或可以在eBioscience 获得的抗小鼠NKG2D抗体克隆MI-6和CX-5)和各种不同的NKG2D 结合结构域克隆阻断Rae-1δ结合到小鼠NKG2D，而同种型对照抗体显示出与Rae-1δ的竞争很小(图10)。
实施例3–NKG2D结合结构域克隆激活NKG2D
将人类和小鼠NKG2D的核酸序列融合到编码CD3ζ信号传导结构域的核酸序列以获得嵌合抗原受体(CAR)构建体。然后将所述 NKG2D-CAR构建体使用Gibson组装克隆到逆转录病毒载体中，并转染到expi293细胞中用于逆转录病毒生产。将EL4细胞用含有NKG2D-CAR的病毒与8μg/mL聚凝胺一起感染。感染后24小时，通过流式细胞术分析所述EL4细胞中NKG2D-CAR的表达水平，并选择在细胞表面上表达高水平NKG2D-CAR的克隆。
为了确定NKG2D结合结构域是否激活NKG2D，将它们吸附到微孔板的孔，并将NKG2D-CAR EL4细胞在布雷菲德菌素-A和莫能菌素存在下在抗体片段包被的孔上培养4小时。通过流式细胞术测定细胞内TNF-α生产这种NKG2D激活的指示。将TNF-α阳性细胞归一化到用阳性对照处理的细胞。所有NKG2D结合结构域激活人类NKG2D(图 11)和小鼠NKG2D(图12)两者。
实施例4–NKG2D结合结构域激活NK细胞
原代人类NK细胞
使用密度梯度离心从人类外周血血沉棕黄层分离外周血单核细胞 (PBMC)。使用磁珠负选择从PBMC分离NK细胞(CD3-CD56+)，分离到的NK细胞的纯度通常>95％。然后将分离的NK细胞在含有100 ng/mL IL-2的培养基中培养24-48小时，然后将它们转移到吸附有NKG2D结合结构域的微孔板孔，并在含有荧光团偶联的抗CD107a抗体、布雷菲德菌素-A和莫能菌素的培养基中培养。在培养后，使用荧光团偶联的针对CD3、CD56和IFN-γ的抗体通过流式细胞术测定NK 细胞。在CD3-CD56+细胞中分析CD107a和IFN-γ染色，以评估NK细胞激活。CD107a/IFN-γ双阳性细胞的增加指示了通过接合两个激活受体而不是一个受体的更好的NK细胞激活。NKG2D结合结构域和阳性对照(选自SEQ ID NO：47-50)与同种型对照相比显示出变成CD107a+和IFN-γ+的NK细胞的百分率更高(图13和图14代表了来自于两个独立实验的数据，其各自使用不同供体的PBMC用于NK细胞制备)。
原代小鼠NK细胞
从C57Bl/6小鼠获得脾脏并将其通过70μm细胞筛压碎，以获得单细胞悬液。将细胞离心沉淀并重悬浮在ACK裂解缓冲液(购自 Thermo Fisher Scientific#A1049201；155mM氯化铵，10mM碳酸氢钾， 0.01mM EDTA)中，以除去红细胞。将剩余的细胞用100ng/mL hIL-2培养72小时，然后收获并准备用于NK细胞分离。然后用磁珠使用反向贫化技术从脾细胞分离NK细胞(CD3-NK1.1+)，通常纯度>90％。将纯化的NK细胞在含有100ng/mL mIL-15的培养基中培养48小时，然后将它们转移到吸附有NKG2D结合结构域的微孔板孔，并在含有荧光团偶联的抗CD107a抗体、布雷菲德菌素-A和莫能菌素的培养基中培养。在NKG2D结合结构域包被的孔中培养后，使用荧光团偶联的针对CD3、NK1.1和IFN-γ的抗体通过流式细胞术测定NK细胞。在CD3- NK1.1+细胞中分析CD107a和IFN-γ染色，以评估NK细胞激活。 CD107a/IFN-γ双阳性细胞的增加指示了通过接合两个激活受体而不是一个受体的更好的NK细胞激活。NKG2D结合结构域和阳性对照(选自可以在eBioscience获得的抗小鼠NKG2D抗体克隆MI-6和CX-5) 与同种型对照相比显示出变成CD107a+和IFN-γ+的NK细胞的百分率更高(图15和图16代表了来自于两个独立实验的数据，其各自使用不同小鼠用于NK细胞制备)。
实施例5–NKG2D结合结构域能够引起对靶肿瘤细胞的细胞毒性
人类和小鼠原代NK细胞激活测定法显示的在与NKG2D结合结构域孵育后NK细胞上的细胞毒性标志物增加。为了研究这是否转变成肿瘤细胞裂解的增加，利用了基于细胞的测定法，其中将每个NKG2D 结合结构域开发成单特异性抗体。将Fc区用作一个靶向臂，而Fab区 (NKG2D结合结构域)充当另一个靶向臂，以激活NK细胞。将人类起源并表达高水平Fc受体的THP-1细胞用作肿瘤靶，并使用Perkin Elmer DELFIA细胞毒性试剂盒。将THP-1细胞用BATDA试剂标记，并以105/mL重悬浮在培养基中。然后将标记的THP-1细胞与NKG2D 抗体和分离的小鼠NK细胞在微孔板的孔中合并，在37℃下孵育3小时。在孵育后，取出20μl培养上清液，与200μl Europium溶液混合，并在暗处振摇孵育15分钟。通过装备有时间分辨荧光模块(激发 337nm，发射620nm)的PheraStar读板器随时间测量荧光，并按照试剂盒说明书计算特异性裂解。
阳性对照ULBP-6、即NKG2D的天然配体，显示出THP-1靶细胞被小鼠NK细胞的特异性裂解的增加。NKG2D抗体也增加了THP-1靶细胞的特异性裂解，而同种型对照抗体显示出特异性裂解的减少。虚线指示在不添加抗体的情况下THP-1细胞被小鼠NK细胞的特异性裂解(图17)。
实施例6–NKG2D抗体显示出高的热稳定性
使用差示扫描荧光测定法测定NKG2D结合结构域的解链温度。外推的表观解链温度相对于典型的IgG1抗体来说更高(图18)。
实施例7–人类NK细胞被交联的NKG2D和CD16的协同激活
原代人类NK细胞激活测定法
使用密度梯度离心从人类外周血血沉棕黄层分离外周血单核细胞 (PBMC)。使用负磁珠(StemCell#17955)从PBMC纯化NK细胞。通过流式细胞术确定NK细胞为>90％CD3-CD56+。然后将分离的NK 细胞在含有100ng/mL hIL-2(Peprotech#200-02)的培养基中扩增48 小时，然后用于激活测定法中。将抗体以2μg/ml(抗CD16抗体， Biolegend#302013)和5μg/mL(抗NKG2D抗体，R&D#MAB139) 的浓度，在100μl无菌PBS中在96孔平底板上在4℃包被过夜，然后充分清洗所述孔以除去过量抗体。为了评估脱颗粒，将IL-2激活的NK 细胞以5×105个细胞/ml重悬浮在增补有100ng/mL hIL2和1μg/mL APC偶联的抗CD107a mAb(Biolegend#328619)的培养基中。然后将1×105个细胞/孔添加到抗体包被的板上。分别以1:1000和1:270的最终稀释度添加蛋白质转运抑制剂布雷菲德菌素A(BFA，Biolegend#420601)和莫能菌素(Biolegend#420701)。将铺板的孔在5％CO2中在37℃下孵育4小时。对于IFN-γ的细胞内染色来说，将NK细胞用抗CD3抗体(Biolegend#300452)和抗CD56mAb(Biolegend# 318328)标记，然后固定并通透化，并用抗IFN-γmAb(Biolegend# 506507)标记。在对活的CD56+CD3-细胞进行门选后，通过流式细胞术分析NK细胞的CD107a和IFN-γ表达。
为了调查受体组合的相对效能，通过板结合刺激进行了NKG2D 或CD16的交联和两种受体的共同交联。如图19(图19A-19C)中所示，CD16和NKG2D的组合刺激产生大大提高的CD107a水平(脱颗粒)(图19A)和/或IFN-γ生产(图19B)。虚线表示每种受体的单独刺激的累加效应。
在用抗CD16抗体、抗NKG2D抗体或两种单克隆抗体的组合进行 4小时的板结合刺激后，分析IL-2激活的NK细胞的CD107a水平和细胞内IFN-γ生产。图指示了平均值(n＝2)±SD。图19A展示了CD107a 的水平；图19B展示了IFNγ的水平；图19C展示了CD107a和IFNγ的水平。图19A-19C中示出的数据代表了使用5位不同健康供体的5 个独立实验。
实施例8–多特异性结合蛋白结合到NKG2D
对EL4小鼠淋巴瘤细胞系进行工程化改造以表达人类NKG2D。试验如图1中所示各自含有NKG2D结合结构域、肿瘤相关抗原结合结构域(CAIX结合结构域)和结合到CD16的Fc结构域的三特异性结合蛋白(TriNKET)对EL4细胞上表达的细胞外NKG2D的亲和力。所述多特异性结合蛋白与NKG2D的结合使用荧光团偶联的抗人类IgG第二抗体来检测。通过流式细胞术分析细胞，并使用表达NKG2D的细胞的平均荧光强度(MFI)与母体EL4细胞进行比较，来计算背景倍数 (FOB)。
所试验的TriNKET包括A44-TriNKET-CAIX(ADI-27744和CAIX 结合结构域)、F63-TriNKET-CAIX(ADI-29404和CD33结合结构域)、 E79-TriNKET-CAIX(ADI-29379和CAIX结合结构域)、 F47-TriNKET-CAIX(ADI-29447和CAIX结合结构域)和 A49-TriNKET-CAIX(ADI-27749和CAIX结合结构域)。所述CAIX 结合结构域由SEQ ID NO：80的重链可变结构域和SEQID NO：81的轻链可变结构域构成。
图35显示，各自包括CAIX结合结构域和不同的NKG2D结合结构域的TriNKET结合到在EL4细胞上表达的NKG2D。
实施例9–多特异性结合蛋白结合到人类肿瘤抗原
三特异性结合蛋白结合到CAIX
使用表达CAIX的人类肾细胞癌细胞系A498来测定TriNKET与肿瘤相关抗原CAIX的结合。将TriNKET和任选地母体抗CAIX单克隆抗体与所述细胞孵育，并使用荧光团偶联的抗人类IgG第二抗体来检测结合。通过流式细胞术分析细胞，并使用归一化到第二抗体对照的来自于TriNKET和母体单克隆抗CAIX抗体的平均荧光强度(MFI) 来计算背景倍数(FOB)。靶向CAIX的TriNKET与母体抗CAIX抗体相比显示出可比水平的与A498细胞上的CAIX的结合(图36)。在 TriNKET之间总体结合信号是可比的，因为它们含有相同的CAIX结合结构域。
实施例10–三特异性结合蛋白能够引起对靶癌细胞的细胞毒性
使用密度梯度离心从人类外周血血沉棕黄层分离外周血单核细胞 (PBMC)。使用磁珠负选择从PBMC分离NK细胞(CD3-CD56+)，分离到的NK细胞的纯度通常>90％。将分离的NK细胞在含有100 ng/mL IL-2的培养基中培养用于激活或在没有细胞因子的情况下静息过夜。IL-2激活的或静息NK细胞在第二天用于细胞毒性测定法。
将NK/NK T-细胞系KHYG-1细胞为处在含有10ng/mL IL-2的 10％HI-FBS-RPMI-1640中。在用于效应细胞前一天，从培养物收获 KHYG-1细胞，并将细胞洗掉含有IL-2的培养基。在清洗后，将KHYG-1 细胞重悬浮在10％HI-FBS-RPMI-1640中，并在没有细胞因子的情况下静息过夜。
DELFIA细胞毒性测定法：
从培养物收获表达CAIX的人类A498癌细胞，将细胞用PBS清洗并以106/mL重悬浮在生长培养基中，用于使用BATDA试剂(Perkin Elmer AD0116)进行标记。按照制造商的说明书标记所述靶细胞。在标记后，将细胞用PBS清洗3x，并以0.5-1.0x105/mL重悬浮在培养基中。为了制备背景孔，放置标记细胞的等分试样，并将细胞从培养基离心出来。小心地一式三份向孔添加100μl所述培养基，以避免扰动沉积的细胞。向96孔板的每个孔添加100μlBATDA标记的细胞。保留用于来自于靶细胞的自发释放的孔，并通过添加1％Triton-X制备用于靶细胞的最大裂解的孔。将针对感兴趣的肿瘤靶的TriNKET在培养基中稀释，并向每个孔添加50μl稀释的TriNKET。从培养收获静息 NK细胞、激活的NK细胞或KHYG-1细胞，将细胞清洗，并根据所需效应细胞与靶细胞的比例(E:T)以105-2.0x106/mL重悬浮在培养基中。向每个板孔添加50μl NK细胞，以使总培养体积为200μl。在测定法显色之前将所述板在37℃和5％CO2下孵育2-3小时。
在培养2-3小时后，将板从温箱取出并通过以200g离心5分钟将细胞沉积。将20μl培养上清液转移到由制造商提供的清洁的微孔板，向每个孔添加200μl室温的europium溶液。将板避光并在摇板器上以 250rpm孵育15分钟。使用Victor 3或SpectraMax i3X仪器读板。特异性裂解的％如下计算：特异性裂解的％＝((实验释放–自发释放)/ (最大释放–自发释放))*100％。
TriNKET介导人类NK细胞对CAIX阳性人类癌细胞的细胞毒性。静息KHYG-1细胞与A498靶细胞的共培养导致～38％的特异性肿瘤裂解(由图37A中的虚线显示)。向所述共培养物添加三种不同的靶向 CAIX的TriNKET(A49-TriNKET-CAIX、E79-TriNKET-CAIX和 A44-TriNKET-CAIX)，对于所有三种NKG2D结合结构域来说将肿瘤细胞的特异性裂解提高约20％(图37A)。
将静息人类NK细胞与A498癌细胞细胞混合。在不添加CAIX mAb或TriNKET的情况下，静息人类NK细胞对A498细胞没有细胞毒性活性。针对CAIX的单克隆抗体(具有hIgG1的BAY79-4620可变结构域作为mAb(同二聚体))能够将特异性裂解提高约9％。与所述单克隆抗体相比，TriNKET(例如A49-TriNKET-CAIX、 E79-TriNKET-CAIX和A44-TriNKET-CAIX)提高静息人类NK细胞对所述癌细胞的细胞毒性活性(图37B)。
通过参考并入
本文中提到的每个专利文献和科学论文的整个公开内容为所有目的通过参考并入本文。
等同性
本发明可以以其他特定形式体现而不背离其精神或本质特征。因此，前述实施方式应该在所有情况下被认为是说明性的而不是限制本文描述的发明。因此，本发明的范围由随附的权利要求书而不是上面的描述指明，并且打算将进入权利要求书的意义和等同性范围之内的所有变化涵盖在其中。
序列表
<110> 蜻蜓疗法股份有限公司
<120> 靶向CAIX、ANO1、间皮素、TROP2或紧密连接蛋白18.2的多特异性结合蛋白
<130> AJ4309PT1911-DIV
<150> 62/473,659
<151> 2017-03-20
<150> 62/473,652
<151> 2017-03-20
<150> 62/467,557
<151> 2017-03-06
<150> 62/464,347
<151> 2017-02-27
<150> 62/464,344
<151> 2017-02-27
<150> 62/464,341
<151> 2017-02-27
<160> 236
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 5
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105
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<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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115
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 11
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
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115
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 12
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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100 105
<210> 15
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
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115
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 17
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
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115
<210> 18
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Thr
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<210> 19
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
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Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
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115
<210> 20
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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100 105
<210> 21
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
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100 105 110
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115
<210> 22
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<210> 23
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
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115
<210> 24
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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<210> 25
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
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115
<210> 26
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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100 105
<210> 27
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
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20 25 30
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100 105 110
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115
<210> 28
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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100 105
<210> 29
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
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50 55 60
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100 105 110
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115
<210> 30
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
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85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 31
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
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65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Phe Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 33
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 37
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Leu Tyr Ser Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 39
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 42
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 42
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 43
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 43
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 46
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 47
<211> 121
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 48
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 49
<211> 115
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 49
Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Asn Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 50
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 51
Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 52
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 52
Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 53
Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 54
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 55
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 56
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 56
Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 57
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 58
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 59
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 60
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5 10
<210> 61
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 61
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 62
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 62
Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 63
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 64
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 65
Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro Thr
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 66
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 67
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 67
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 68
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 68
Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 69
Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 70
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 71
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 72
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 72
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Leu Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Arg Ser Gly Tyr Phe Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 73
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Arg Phe Met Ser Thr Thr Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Val Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Met Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Phe Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 74
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
1 5
<210> 75
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 75
Asn Ser Asp Gly Gly Ile
1 5
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 76
His Arg Ser Gly Tyr Phe Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 77
Gln Asn Val Val Ser Ala Val Ala
1 5
<210> 78
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 78
Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 79
Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 80
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 80
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Ser Pro Gly Thr Phe Met His Gly Asp His Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 81
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Gly Arg Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 82
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 83
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 83
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 84
Thr Gly Ser Pro Gly Thr Phe Met His Gly Asp His
1 5 10
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 85
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 86
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 87
Gln Gln Tyr Tyr Gly Arg Pro Thr
1 5
<210> 88
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Arg Ser Gly Tyr Phe Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 89
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 89
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Val Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 90
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
1 5
<210> 91
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 91
Asn Ser Asp Gly Gly Ile
1 5
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 92
His Arg Ser Gly Tyr Phe Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 93
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 93
Gln Asn Val Val Ser Ala Val Ala
1 5
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 94
Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 95
Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 96
<211> 459
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: CAIX 多肽
<400> 96
Met Ala Pro Leu Cys Pro Ser Pro Trp Leu Pro Leu Leu Ile Pro Ala
1 5 10 15
Pro Ala Pro Gly Leu Thr Val Gln Leu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu
20 25 30
Val Pro Val His Pro Gln Arg Leu Pro Arg Met Gln Glu Asp Ser Pro
35 40 45
Leu Gly Gly Gly Ser Ser Gly Glu Asp Asp Pro Leu Gly Glu Glu Asp
50 55 60
Leu Pro Ser Glu Glu Asp Ser Pro Arg Glu Glu Asp Pro Pro Gly Glu
65 70 75 80
Glu Asp Leu Pro Gly Glu Glu Asp Leu Pro Gly Glu Glu Asp Leu Pro
85 90 95
Glu Val Lys Pro Lys Ser Glu Glu Glu Gly Ser Leu Lys Leu Glu Asp
100 105 110
Leu Pro Thr Val Glu Ala Pro Gly Asp Pro Gln Glu Pro Gln Asn Asn
115 120 125
Ala His Arg Asp Lys Glu Gly Asp Asp Gln Ser His Trp Arg Tyr Gly
130 135 140
Gly Asp Pro Pro Trp Pro Arg Val Ser Pro Ala Cys Ala Gly Arg Phe
145 150 155 160
Gln Ser Pro Val Asp Ile Arg Pro Gln Leu Ala Ala Phe Cys Pro Ala
165 170 175
Leu Arg Pro Leu Glu Leu Leu Gly Phe Gln Leu Pro Pro Leu Pro Glu
180 185 190
Leu Arg Leu Arg Asn Asn Gly His Ser Val Gln Leu Thr Leu Pro Pro
195 200 205
Gly Leu Glu Met Ala Leu Gly Pro Gly Arg Glu Tyr Arg Ala Leu Gln
210 215 220
Leu His Leu His Trp Gly Ala Ala Gly Arg Pro Gly Ser Glu His Thr
225 230 235 240
Val Glu Gly His Arg Phe Pro Ala Glu Ile His Val Val His Leu Ser
245 250 255
Thr Ala Phe Ala Arg Val Asp Glu Ala Leu Gly Arg Pro Gly Gly Leu
260 265 270
Ala Val Leu Ala Ala Phe Leu Glu Glu Gly Pro Glu Glu Asn Ser Ala
275 280 285
Tyr Glu Gln Leu Leu Ser Arg Leu Glu Glu Ile Ala Glu Glu Gly Ser
290 295 300
Glu Thr Gln Val Pro Gly Leu Asp Ile Ser Ala Leu Leu Pro Ser Asp
305 310 315 320
Phe Ser Arg Tyr Phe Gln Tyr Glu Gly Ser Leu Thr Thr Pro Pro Cys
325 330 335
Ala Gln Gly Val Ile Trp Thr Val Phe Asn Gln Thr Val Met Leu Ser
340 345 350
Ala Lys Gln Leu His Thr Leu Ser Asp Thr Leu Trp Gly Pro Gly Asp
355 360 365
Ser Arg Leu Gln Leu Asn Phe Arg Ala Thr Gln Pro Leu Asn Gly Arg
370 375 380
Val Ile Glu Ala Ser Phe Pro Ala Gly Val Asp Ser Ser Pro Arg Ala
385 390 395 400
Ala Glu Pro Val Gln Leu Asn Ser Cys Leu Ala Ala Gly Asp Ile Leu
405 410 415
Ala Leu Val Phe Gly Leu Leu Phe Ala Val Thr Ser Val Ala Phe Leu
420 425 430
Val Gln Met Arg Arg Gln His Arg Arg Gly Thr Lys Gly Gly Val Ser
435 440 445
Tyr Arg Pro Ala Glu Val Ala Glu Thr Gly Ala
450 455
<210> 97
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 97
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asn Gly Lys Thr Gln Tyr Asn Ser Gly Leu Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Ser Tyr Tyr Ser Leu Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 98
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 98
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Pro Thr Leu Ser Ala Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Ser
85 90 95
Thr His Ala Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 99
Asn Tyr Asp Met His
1 5
<210> 100
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 100
Val Ile Trp Gly Asn Gly Lys Thr Gln Tyr Asn Ser Gly Leu Thr Ser
1 5 10 15
<210> 101
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 101
Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Ser Tyr Tyr Ser Leu Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 102
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 103
Leu Val Ser Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 104
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 104
Val Gln Ser Thr His Ala Pro Ala
1 5
<210> 105
<211> 986
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: ANO1 多肽
<400> 105
Met Arg Val Asn Glu Lys Tyr Ser Thr Leu Pro Ala Glu Asp Arg Ser
1 5 10 15
Val His Ile Ile Asn Ile Cys Ala Ile Glu Asp Ile Gly Tyr Leu Pro
20 25 30
Ser Glu Gly Thr Leu Leu Asn Ser Leu Ser Val Asp Pro Asp Ala Glu
35 40 45
Cys Lys Tyr Gly Leu Tyr Phe Arg Asp Gly Arg Arg Lys Val Asp Tyr
50 55 60
Ile Leu Val Tyr His His Lys Arg Pro Ser Gly Asn Arg Thr Leu Val
65 70 75 80
Arg Arg Val Gln His Ser Asp Thr Pro Ser Gly Ala Arg Ser Val Lys
85 90 95
Gln Asp His Pro Leu Pro Gly Lys Gly Ala Ser Leu Asp Ala Gly Ser
100 105 110
Gly Glu Pro Pro Met Asp Tyr His Glu Asp Asp Lys Arg Phe Arg Arg
115 120 125
Glu Glu Tyr Glu Gly Asn Leu Leu Glu Ala Gly Leu Glu Leu Glu Arg
130 135 140
Asp Glu Asp Thr Lys Ile His Gly Val Gly Phe Val Lys Ile His Ala
145 150 155 160
Pro Trp Asn Val Leu Cys Arg Glu Ala Glu Phe Leu Lys Leu Lys Met
165 170 175
Pro Thr Lys Lys Met Tyr His Ile Asn Glu Thr Arg Gly Leu Leu Lys
180 185 190
Lys Ile Asn Ser Val Leu Gln Lys Ile Thr Asp Pro Ile Gln Pro Lys
195 200 205
Val Ala Glu His Arg Pro Gln Thr Met Lys Arg Leu Ser Tyr Pro Phe
210 215 220
Ser Arg Glu Lys Gln His Leu Phe Asp Leu Ser Asp Lys Asp Ser Phe
225 230 235 240
Phe Asp Ser Lys Thr Arg Ser Thr Ile Val Tyr Glu Ile Leu Lys Arg
245 250 255
Thr Thr Cys Thr Lys Ala Lys Tyr Ser Met Gly Ile Thr Ser Leu Leu
260 265 270
Ala Asn Gly Val Tyr Ala Ala Ala Tyr Pro Leu His Asp Gly Asp Tyr
275 280 285
Asn Gly Glu Asn Val Glu Phe Asn Asp Arg Lys Leu Leu Tyr Glu Glu
290 295 300
Trp Ala Arg Tyr Gly Val Phe Tyr Lys Tyr Gln Pro Ile Asp Leu Val
305 310 315 320
Arg Lys Tyr Phe Gly Glu Lys Ile Gly Leu Tyr Phe Ala Trp Leu Gly
325 330 335
Val Tyr Thr Gln Met Leu Ile Pro Ala Ser Ile Val Gly Ile Ile Val
340 345 350
Phe Leu Tyr Gly Cys Ala Thr Met Asp Glu Asn Ile Pro Ser Met Glu
355 360 365
Met Cys Asp Gln Arg His Asn Ile Thr Met Cys Pro Leu Cys Asp Lys
370 375 380
Thr Cys Ser Tyr Trp Lys Met Ser Ser Ala Cys Ala Thr Ala Arg Ala
385 390 395 400
Ser His Leu Phe Asp Asn Pro Ala Thr Val Phe Phe Ser Val Phe Met
405 410 415
Ala Leu Trp Ala Ala Thr Phe Met Glu His Trp Lys Arg Lys Gln Met
420 425 430
Arg Leu Asn Tyr Arg Trp Asp Leu Thr Gly Phe Glu Glu Glu Glu Glu
435 440 445
Ala Val Lys Asp His Pro Arg Ala Glu Tyr Glu Ala Arg Val Leu Glu
450 455 460
Lys Ser Leu Lys Lys Glu Ser Arg Asn Lys Glu Lys Arg Arg His Ile
465 470 475 480
Pro Glu Glu Ser Thr Asn Lys Trp Lys Gln Arg Val Lys Thr Ala Met
485 490 495
Ala Gly Val Lys Leu Thr Asp Lys Val Lys Leu Thr Trp Arg Asp Arg
500 505 510
Phe Pro Ala Tyr Leu Thr Asn Leu Val Ser Ile Ile Phe Met Ile Ala
515 520 525
Val Thr Phe Ala Ile Val Leu Gly Val Ile Ile Tyr Arg Ile Ser Met
530 535 540
Ala Ala Ala Leu Ala Met Asn Ser Ser Pro Ser Val Arg Ser Asn Ile
545 550 555 560
Arg Val Thr Val Thr Ala Thr Ala Val Ile Ile Asn Leu Val Val Ile
565 570 575
Ile Leu Leu Asp Glu Val Tyr Gly Cys Ile Ala Arg Trp Leu Thr Lys
580 585 590
Ile Glu Val Pro Lys Thr Glu Lys Ser Phe Glu Glu Arg Leu Ile Phe
595 600 605
Lys Ala Phe Leu Leu Lys Phe Val Asn Ser Tyr Thr Pro Ile Phe Tyr
610 615 620
Val Ala Phe Phe Lys Gly Arg Phe Val Gly Arg Pro Gly Asp Tyr Val
625 630 635 640
Tyr Ile Phe Arg Ser Phe Arg Met Glu Glu Cys Ala Pro Gly Gly Cys
645 650 655
Leu Met Glu Leu Cys Ile Gln Leu Ser Ile Ile Met Leu Gly Lys Gln
660 665 670
Leu Ile Gln Asn Asn Leu Phe Glu Ile Gly Ile Pro Lys Met Lys Lys
675 680 685
Leu Ile Arg Tyr Leu Lys Leu Lys Gln Gln Ser Pro Pro Asp His Glu
690 695 700
Glu Cys Val Lys Arg Lys Gln Arg Tyr Glu Val Asp Tyr Asn Leu Glu
705 710 715 720
Pro Phe Ala Gly Leu Thr Pro Glu Tyr Met Glu Met Ile Ile Gln Phe
725 730 735
Gly Phe Val Thr Leu Phe Val Ala Ser Phe Pro Leu Ala Pro Leu Phe
740 745 750
Ala Leu Leu Asn Asn Ile Ile Glu Ile Arg Leu Asp Ala Lys Lys Phe
755 760 765
Val Thr Glu Leu Arg Arg Pro Val Ala Val Arg Ala Lys Asp Ile Gly
770 775 780
Ile Trp Tyr Asn Ile Leu Arg Gly Ile Gly Lys Leu Ala Val Ile Ile
785 790 795 800
Asn Ala Phe Val Ile Ser Phe Thr Ser Asp Phe Ile Pro Arg Leu Val
805 810 815
Tyr Leu Tyr Met Tyr Ser Lys Asn Gly Thr Met His Gly Phe Val Asn
820 825 830
His Thr Leu Ser Ser Phe Asn Val Ser Asp Phe Gln Asn Gly Thr Ala
835 840 845
Pro Asn Asp Pro Leu Asp Leu Gly Tyr Glu Val Gln Ile Cys Arg Tyr
850 855 860
Lys Asp Tyr Arg Glu Pro Pro Trp Ser Glu Asn Lys Tyr Asp Ile Ser
865 870 875 880
Lys Asp Phe Trp Ala Val Leu Ala Ala Arg Leu Ala Phe Val Ile Val
885 890 895
Phe Gln Asn Leu Val Met Phe Met Ser Asp Phe Val Asp Trp Val Ile
900 905 910
Pro Asp Ile Pro Lys Asp Ile Ser Gln Gln Ile His Lys Glu Lys Val
915 920 925
Leu Met Val Glu Leu Phe Met Arg Glu Glu Gln Asp Lys Gln Gln Leu
930 935 940
Leu Glu Thr Trp Met Glu Lys Glu Arg Gln Lys Asp Glu Pro Pro Cys
945 950 955 960
Asn His His Asn Thr Lys Ala Cys Pro Asp Ser Leu Gly Ser Pro Ala
965 970 975
Pro Ser His Ala Tyr His Gly Gly Val Leu
980 985
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 106
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 107
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 108
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
1 5
<210> 109
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 109
Thr Pro Tyr Asn Gly Ala
1 5
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 110
Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 111
Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 112
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 113
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 113
Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
1 5
<210> 114
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 114
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Lys Gln Ala Gly Ser Glu Lys Thr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Ala Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ala Ser Tyr Tyr Pro Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 115
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 115
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Gln
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 116
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
1 5
<210> 117
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 117
Lys Gln Ala Gly Ser Glu
1 5
<210> 118
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 118
Glu Gly Ala Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ala Ser Tyr Tyr Pro Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ser Met Asp Val
20
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 119
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5
<210> 120
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 120
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 121
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 121
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Thr
1 5
<210> 122
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 122
Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 123
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 123
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Ile Glu
85 90 95
Ser Ala Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 124
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 125
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 125
Asp Pro Gly Asp Ser Arg
1 5
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 126
Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly
1 5 10
<210> 127
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 127
Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser
1 5 10
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 128
Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 129
Ser Ser Tyr Asp Ile Glu Ser Ala Thr Pro Val
1 5 10
<210> 130
<211> 630
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: 间皮蛋白多肽
<400> 130
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln
20 25 30
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro Leu
35 40 45
Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asn Ile Ser Ser Leu Ser Pro Arg
50 55 60
Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu
65 70 75 80
Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys Leu
85 90 95
Ser Thr Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro
100 105 110
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro
115 120 125
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg Ile
130 135 140
Thr Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln
145 150 155 160
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu
165 170 175
Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu
180 185 190
Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg Leu
195 200 205
Val Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg
210 215 220
Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235 240
Ser Val Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Val Leu Gly
245 250 255
Gln Pro Ile Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Val Ala Ala Trp Arg
260 265 270
Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr Ile
275 280 285
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
290 295 300
Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys
305 310 315 320
Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met
325 330 335
Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu
340 345 350
Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val
355 360 365
Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile
370 375 380
Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu
385 390 395 400
Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Ala Pro Arg Arg Pro Leu
405 410 415
Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly Gln
420 425 430
Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr
435 440 445
Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser
450 455 460
Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln
465 470 475 480
Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn
485 490 495
Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro
500 505 510
Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu
515 520 525
Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val
530 535 540
Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala
545 550 555 560
Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln
565 570 575
Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn
580 585 590
Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly Thr
595 600 605
Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu
610 615 620
Leu Ala Ser Thr Leu Ala
625 630
<210> 131
<211> 246
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: ULBP-6 多肽
<400> 131
Met Ala Ala Ala Ala Ile Pro Ala Leu Leu Leu Cys Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Phe Leu Leu Phe Gly Trp Ser Arg Ala Arg Arg Asp Asp Pro His Ser
20 25 30
Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg
35 40 45
Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr
50 55 60
Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys
65 70 75 80
Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu
85 90 95
Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn
100 105 110
Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu
115 120 125
Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp
130 135 140
Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr
145 150 155 160
Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys
165 170 175
Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly
180 185 190
Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser
195 200 205
Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser Gly Thr Thr Gln Leu Arg Ala
210 215 220
Thr Ala Thr Thr Leu Ile Leu Cys Cys Leu Leu Ile Ile Leu Pro Cys
225 230 235 240
Phe Ile Leu Pro Gly Ile
245
<210> 132
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 132
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 133
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 134
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 135
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 135
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 136
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 136
Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr
1 5 10
<210> 137
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 137
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 138
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 138
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 139
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 139
Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 140
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 140
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 141
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 141
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 142
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 143
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 143
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 144
Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 145
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 146
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 146
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 147
Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 148
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 150
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 151
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 151
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 152
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 152
Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 153
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 153
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 154
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 154
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 155
Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro Thr
1 5
<210> 156
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 157
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 158
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 159
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 159
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 160
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 160
Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 161
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 161
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 162
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 162
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 163
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 163
Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe Thr
1 5
<210> 164
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 164
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 165
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 165
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 166
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 166
Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 167
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 167
Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 168
Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 169
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 169
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 170
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 170
Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 171
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 171
Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr
1 5
<210> 172
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 172
Ser Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 173
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 173
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 174
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 175
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 175
Asn Thr Tyr Thr Gly Glu
1 5
<210> 176
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 176
Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 177
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
peptide
<400> 177
Gln Asp Val Ser Ile Ala Val Ala
1 5
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 178
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 179
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 179
Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 180
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 180
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 181
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 181
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 182
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 183
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 183
Asn Thr Lys Thr Gly Glu
1 5
<210> 184
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 184
Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 185
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 185
Gln Asp Val Ser Ile Ala Val Ala
1 5
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 186
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 187
Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 188
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 189
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 189
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 190
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 190
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 191
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 191
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 192
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 192
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Gln Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Lys Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 193
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 193
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Gln Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 194
<211> 323
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: TROP2 多肽
<400> 194
Met Ala Arg Gly Pro Gly Leu Ala Pro Pro Pro Leu Arg Leu Pro Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val Leu Ala Ala Val Thr Gly His Thr Ala Ala Gln Asp
20 25 30
Asn Cys Thr Cys Pro Thr Asn Lys Met Thr Val Cys Ser Pro Asp Gly
35 40 45
Pro Gly Gly Arg Cys Gln Cys Arg Ala Leu Gly Ser Gly Met Ala Val
50 55 60
Asp Cys Ser Thr Leu Thr Ser Lys Cys Leu Leu Leu Lys Ala Arg Met
65 70 75 80
Ser Ala Pro Lys Asn Ala Arg Thr Leu Val Arg Pro Ser Glu His Ala
85 90 95
Leu Val Asp Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Pro Glu Gly
100 105 110
Arg Phe Lys Ala Arg Gln Cys Asn Gln Thr Ser Val Cys Trp Cys Val
115 120 125
Asn Ser Val Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Gly Asp Leu Ser Leu Arg
130 135 140
Cys Asp Glu Leu Val Arg Thr His His Ile Leu Ile Asp Leu Arg His
145 150 155 160
Arg Pro Thr Ala Gly Ala Phe Asn His Ser Asp Leu Asp Ala Glu Leu
165 170 175
Arg Arg Leu Phe Arg Glu Arg Tyr Arg Leu His Pro Lys Phe Val Ala
180 185 190
Ala Val His Tyr Glu Gln Pro Thr Ile Gln Ile Glu Leu Arg Gln Asn
195 200 205
Thr Ser Gln Lys Ala Ala Gly Asp Val Asp Ile Gly Asp Ala Ala Tyr
210 215 220
Tyr Phe Glu Arg Asp Ile Lys Gly Glu Ser Leu Phe Gln Gly Arg Gly
225 230 235 240
Gly Leu Asp Leu Arg Val Arg Gly Glu Pro Leu Gln Val Glu Arg Thr
245 250 255
Leu Ile Tyr Tyr Leu Asp Glu Ile Pro Pro Lys Phe Ser Met Lys Arg
260 265 270
Leu Thr Ala Gly Leu Ile Ala Val Ile Val Val Val Val Val Ala Leu
275 280 285
Val Ala Gly Met Ala Val Leu Val Ile Thr Asn Arg Arg Lys Ser Gly
290 295 300
Lys Tyr Lys Lys Val Glu Ile Lys Glu Leu Gly Glu Leu Arg Lys Glu
305 310 315 320
Pro Ser Leu
<210> 195
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 196
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 196
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 197
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 197
Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr
1 5
<210> 198
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 198
His Pro Asp Ser Ser Thr
1 5
<210> 199
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
peptide
<400> 199
Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 200
Gln Asp Val Gly Thr Ser Val Ala
1 5
<210> 201
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 201
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 202
Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser
1 5
<210> 203
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 204
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 204
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 205
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 205
Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe
1 5
<210> 206
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 206
Asn Thr Lys Thr Gly Glu
1 5
<210> 207
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 207
Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 208
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 208
Ala Ala Val Gly Thr Tyr Val Ala
1 5
<210> 209
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 209
Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg
1 5
<210> 210
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 210
His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Phe Thr
1 5 10
<210> 211
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 211
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ile Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Glu Asn Val Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn His Tyr Arg Tyr Ala Gly Gly Gly Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 212
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 212
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Val Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Asn Asn Pro Tyr Ser
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys Thr Val
100 105
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 213
Gly Phe Asn Ile Lys His Tyr
1 5
<210> 214
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 214
Asn Pro Glu Asn Val Asp
1 5
<210> 215
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 215
Tyr Arg Tyr Ala Gly Gly Gly Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 216
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 216
Ser Ser Val Ser Tyr Ile His
1 5
<210> 217
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 217
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 218
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 218
Gln Gln Trp Asn Asn Asn Pro Tyr Ser
1 5
<210> 219
<211> 702
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: CEA 多肽
<400> 219
Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln
1 5 10 15
Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile
100 105 110
Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn
195 200 205
Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg
210 215 220
Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn
245 250 255
Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser
290 295 300
Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu
325 330 335
Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr
340 345 350
Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg
355 360 365
Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr
370 375 380
Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Lys Leu Ser
385 390 395 400
Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp
405 410 415
Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser
435 440 445
Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile
450 455 460
Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn
465 470 475 480
Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val
485 490 495
Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro
500 505 510
Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln
515 520 525
Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser
530 535 540
Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn
545 550 555 560
Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser
565 570 575
Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly
580 585 590
Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly
595 600 605
Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln
610 615 620
Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu
625 630 635 640
Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe
645 650 655
Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile
660 665 670
Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr
675 680 685
Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile
690 695 700
<210> 220
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 220
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Phe Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 221
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 221
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 222
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 223
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 223
Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro
1 5
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 224
Ala Arg Leu Gly Phe Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 225
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 225
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 226
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 226
Trp Ala Ser
1
<210> 227
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 227
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 228
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 228
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser Trp Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 229
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 229
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 230
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 230
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 231
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 231
Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 232
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 232
Thr Arg Ser Trp Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 233
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
peptide
<400> 233
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 234
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 234
Trp Ala Ser
1
<210> 235
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的描述：合成的肽
<400> 235
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 236
<211> 261
<212> PRT
<213> 未知（Unknown）
<220>
<223> 未知的描述: 紧密连接蛋白-18.2 多肽
<400> 236
Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile
1 5 10 15
Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr
20 25 30
Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly
35 40 45
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
50 55 60
Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65 70 75 80
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
85 90 95
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260

Claims (57)

1.一种蛋白质，其包含：
(a)结合NKG2D的第一抗原结合位点；
(b)结合CAIX、ANO1、间皮素、TROP2或紧密连接蛋白-18.2的第二抗原结合位点；和
(c)足以结合CD16的抗体Fc结构域或其部分或结合CD16的第三抗原结合位点。
2.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点结合到人类和非人类灵长动物中的NKG2D。
3.如权利要求1或2所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。
4.如权利要求3所述的蛋白质，其中所述重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。
5.如权利要求3或4所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。
6.如权利要求5所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。
7.如权利要求5或6所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点的轻链可变结构域具有与所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
8.如前述权利要求任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQ IDNO：1至少90％同一性的重链可变结构域。
9.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：41至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：42至少90％同一性的轻链可变结构域。
10.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：43至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：44至少90％同一性的轻链可变结构域。
11.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：45至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：46至少90％同一性的轻链可变结构域。
12.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：47至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：48至少90％同一性的轻链可变结构域。
13.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：49至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：50至少90％同一性的轻链可变结构域。
14.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：132至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：133至少90％同一性的轻链可变结构域。
15.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：140至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：141至少90％同一性的轻链可变结构域。
16.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：148至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：149至少90％同一性的轻链可变结构域。
17.如前述权利要求1-7任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQID NO：156至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：157至少90％同一性的轻链可变结构域。
18.如前述权利要求1-7任一项的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQ IDNO：164至少90％同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：165至少90％同一性的轻链可变结构域。
19.如权利要求1或2所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点是单域抗体。
20.如权利要求19所述的蛋白质，其中所述单域抗体是VHH片段或VNAR片段。
21.如权利要求1-2或19-20任一项的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。
22.如权利要求21的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于同一多肽上。
23.如前述权利要求任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：72至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：73至少90％同一性的氨基酸序列。
24.如前述权利要求任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX且包含：
与SEQ ID NO：74的氨基酸序列相同的重链CDR1序列；
与SEQ ID NO：75的氨基酸序列相同的重链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：76的氨基酸序列相同的重链CDR3序列。
25.如权利要求24所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含：
与SEQ ID NO：77的氨基酸序列相同的轻链CDR1序列；
与SEQ ID NO：78的氨基酸序列相同的轻链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：79的氨基酸序列相同的轻链CDR3序列。
26.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：80至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：81至少90％同一性的氨基酸序列。
27.如权利要求1-22或26任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX且包含：
与SEQ ID NO：82的氨基酸序列相同的重链CDR1序列；
与SEQ ID NO：83的氨基酸序列相同的重链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：84的氨基酸序列相同的重链CDR3序列。
28.如权利要求27所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包括：
与SEQ ID NO：85的氨基酸序列相同的轻链CDR1序列；
与SEQ ID NO：86的氨基酸序列相同的轻链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：87的氨基酸序列相同的轻链CDR3序列。
29.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：88至少90％同一性的氨基酸序列，并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：89至少90％同一性的氨基酸序列。
30.如权利要求1-22或29任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合CAIX并包含：
与SEQ ID NO：90的氨基酸序列相同的重链CDR1序列；
与SEQ ID NO：91的氨基酸序列相同的重链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：92的氨基酸序列相同的重链CDR3序列。
31.如权利要求30所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含：
与SEQ ID NO：93的氨基酸序列相同的轻链CDR1序列；
与SEQ ID NO：94的氨基酸序列相同的轻链CDR2序列；和
与SEQ ID NO：95的氨基酸序列相同的轻链CDR3序列。
32.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合ANO1且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：97至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：98至少90％同一性的氨基酸序列。
33.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合间皮素且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：106至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：107至少90％同一性的氨基酸序列。
34.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合间皮素且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：114至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：115至少90％同一性的氨基酸序列。
35.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合间皮素且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：122至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：123至少90％同一性的氨基酸序列。
36.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合TROP2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：172至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：173至少90％同一性的氨基酸序列。
37.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合TROP2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：180至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：181至少90％同一性的氨基酸序列。
38.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合TROP2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：188至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：189至少90％同一性的氨基酸序列。
39.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合TROP2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：190至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：191至少90％同一性的氨基酸序列。
40.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合TROP2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO：192至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：193至少90％同一性的氨基酸序列。
41.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合紧密连接蛋白-18.2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ IDNO：220至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：221至少90％同一性的氨基酸序列。
42.如权利要求1-22任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点结合紧密连接蛋白-18.2且包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与SEQ IDNO：228至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：229至少90％同一性的氨基酸序列。
43.如权利要求1-4或8-20任一项所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点是单域抗体。
44.如权利要求43所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点是VHH片段或VNAR片段。
45.如前述权利要求任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质包含抗体Fc结构域的足以结合CD16的部分，其中所述抗体Fc结构域包含铰链和CH2结构域。
46.如权利要求45所述的蛋白质，其中所述抗体Fc结构域包含人类IgG1抗体的铰链和CH2结构域。
47.如权利要求45或46所述的蛋白质，其中所述Fc结构域包含与人类IgG1抗体的234-332位氨基酸至少90％同一性的氨基酸序列。
48.如权利要求45-47任一项所述的蛋白质，其中所述Fc结构域包含与人类IgG1的Fc结构域至少90％同一性的氨基酸序列，并在选自Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、和K439的一个或多个位置处有差异。
49.一种制剂，其包含符合前述权利要求任一项的蛋白质和可药用载体。
50.一种细胞，其包含编码如权利要求1-48任一项所述的蛋白质的一种或多种核酸。
51.一种直接和/或间接增强肿瘤细胞死亡的方法，所述方法包括将肿瘤和自然杀伤细胞暴露于如权利要求1-48任一项所述的蛋白质。
52.一种治疗癌症的方法，其中所述方法包括向患者施用如权利要求1-48任一项所述的蛋白质或如权利要求49所述的制剂。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述蛋白质的第二抗原结合位点结合CAIX，且所述待治疗的癌症选自肾细胞癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、头颈癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、食道、肺、结肠、肾、宫颈癌和非小细胞肺癌组成的组。
54.如权利要求52所述的方法，其中所述蛋白质的第二抗原结合位点结合间皮素，且所述待治疗的癌症选自间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胆管癌、胃癌、子宫浆液性癌、胸腺癌和急性髓性白血病组成的组。
55.如权利要求52所述的方法，其中所述蛋白质的第二抗原结合位点结合ANO1，且所述待治疗的癌症选自食道鳞状细胞癌(ESCC)、胃肠间质肿瘤(GIST)、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肉瘤组成的组。
56.如权利要求52所述的方法，其中所述蛋白质的第二抗原结合位点结合TROP2，且所述待治疗的癌症选自乳腺、肺、胃、结肠直肠、胰腺、前列腺、宫颈、头颈癌、鼻咽癌和卵巢癌组成的组。
57.如权利要求52所述的方法，其中所述蛋白质的第二抗原结合位点结合紧密连接蛋白-18.2，且所述待治疗的癌症选自食道癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、结肠癌和几种形式的胆管癌组成的组。
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