CN112656936B - 免疫细胞因子白介素-22在制备抗抑郁药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于抗抑郁药物技术领域，涉及免疫细胞因子白介素22在制备抗抑郁药物中的应用。该含有免疫细胞因子白介素22的抗抑郁药物或其组合物具有抗抑郁特性，且起效时间快、治疗效果确切、显著，且副作用较小，对于抗抑郁的药物研发和治疗抑郁症具有重大的应用价值。

Description

免疫细胞因子白介素-22在制备抗抑郁药物中的应用

技术领域

本发明属于抗抑郁药物技术领域，涉及免疫细胞因子白介素-22在制备抗抑郁药物中的应用。

背景技术

抑郁症又称抑郁障碍，以显著而持久的心情低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床多见心境低落，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，甚至悲观厌世，严重的患者会有自杀企图或行为；部分病例有明显的躯体性焦虑和运动性激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。抑郁症每次发作持续至少2周以上、长者甚或数年，多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。

抗抑郁药(antidepressant drugs)是指一组主要用来治疗以情绪抑郁为突出症状的精神疾病的精神药物。在20世纪50年代抗抑郁药问世以后，抗抑郁药就成为抑郁病人的首选治疗手段。目前，几乎所有抗抑郁药物的作用机制主要涉及单胺类神经递质的传递，虽然疗效机制相对明确，但存在较多不足，比如对有些患者无效以及起效慢等。另外，副作用相对较多，如消化系统副作用、代谢方面副作用及性功能方面的副作用等。

因此，目前存在的问题是需要研究开发一种起效快、治疗效果确切、显著，且副作用较小的抗抑郁新药。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术的不足提供一种免疫细胞因子白介素-22在制备抗抑郁药物中的应用。利用免疫细胞因子白介素22所制备的抗抑郁药物用于治疗抑郁症，起效快、治疗效果确切、显著，且副作用较小。

本发明第一方面提供了一种免疫细胞因子白介素22(IL-22)在用于制备抗抑郁药物中的应用。

根据本发明，所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为每日每千克体重0.0011-0.0013mg的免疫细胞因子白介素22。

本发明中，所述抗抑郁药物的剂型包括口服制剂或注射制剂。

根据本发明的一些实施方式，所述口服制剂选自片剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂。

在本发明的一些实施例中，所述口服制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.112-0.616mg，优选为0.252-0.616mg，进一步优选为0.308-0.364mg。

根据本发明的一些实施方式，所述注射制剂为粉剂或注射液。

在本发明的一些实施例中，所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.028-0.154mg，进一步优选为0.063-0.154mg，更进一步优选为0.077-0.091mg。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物连续给药1周内产生抗抑郁效果。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥1周，优选所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥2周。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

本发明第二方面提供了一种抗抑郁药物组合物，其包括作为活性成分的免疫细胞因子白介素22。

根据本发明，所述药物组合物中还含有其他活性成分，所述其他活性成分为GDNF。

根据本发明的一些实施方式，在所述药物组合物中，在所述药物组合物中，所述GDNF与免疫细胞因子白介素22的质量比为(0-0.6):1，优选为(0.001-0.55):1，更进一步优选为(0.063-0.27):1。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为每日每千克体重0.0011-0.0013mg的免疫细胞因子白介素22。

在本发明的另一些实施例中，所述药物组合物的药效剂量为每日每千克体重0-0.0006mg的GDNF，优选为每日每千克体重0.0000033-0.0006mg的GDNF，进一步优选为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF。

在本发明的一些实施例中，所述药物组合物连续给药一周内，优选为3天内产生抗抑郁效果。

在本发明的一些实施例中，所述药物组合物给药后持续有效时间≥1周，优选所述药物组合物给药后持续有效时间≥2周。

本发明第三方面提供了如本发明第二方面所述的药物组合物在用于制备抗抑郁药物中的应用。

根据本发明，所述抗抑郁药物的剂型包括口服制剂或注射制剂。

根据本发明的一些实施方式，所述口服制剂选自片剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂。

在本发明的一些实施例中，所述口服制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.112-0.616mg，优选为0.252-0.616mg，进一步优选为0.308-0.364mg；每一制剂单位中GDNF的含量为0-0.168mg，优选为0.000924-0.168mg，进一步优选为0.0230-0.168mg。

根据本发明的一些实施方式，所述注射制剂为粉剂或注射液。

在本发明的一些实施例中，所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.028-0.154mg，优选为0.063-0.154mg，进一步优选为0.077-0.091mg；所述注射制剂的每一制剂单位中GDNF的含量为0-0.042mg，优选为0.000231-0.042mg，进一步优选为0.00574-0.042mg。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为每日每千克体重0.0011-0.0013mg的免疫细胞因子白介素22。

在本发明的一些实施例中，所述药物组合物的药效剂量为每日每千克体重0-0.0006mg的GDNF，优选为每日每千克体重0.0000033-0.0006mg的GDNF，进一步优选为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

本发明中，所述免疫细胞因子白介素22(IL-22)具有抗抑郁特性，利用免疫细胞因子白介素22制备的抗抑郁药物或抗抑郁药物组合物用于治疗抑郁症，起效快、治疗效果确切、显著，且副作用较小，对于治疗抑郁症具有重大的应用价值。

附图说明

下面结合附图来对本发明作进一步详细说明。

图1示出CON和CDS模型小鼠给予IL-22或PBS后糖水偏爱值(％)。

图2示出CON和CDS模型小鼠给予IL-22或PBS后强迫游泳不动时间(s)。

图3示出CON和CDS模型小鼠给予IL-22或PBS后社会交往率(％)。

图4示出CON和CDS模型小鼠给予IL-22或PBS后悬尾实验不动时间(s)。

具体实施方式

为使本发明容易理解，下面将结合附图详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。

除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。

Ⅰ.术语

本发明中所述“水”一词，在没有特别说明或限定的情况下是指制药用水，包括纯化水、注射用水或灭菌注射用水。

本发明中所述用语“抑郁症”又称抑郁障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为；甚至发生木僵；部分病例有明显的焦虑和运动性激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。每次发作持续至少2周以上、长者甚或数年，多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。

本发明中所述抑郁症包括一般意义上的抑郁症和由心理、社会因素引发的抑郁症，或由其它任何躯体因素所诱发的抑郁症，可以由脑外伤、心脑血管疾病、癌症等疾病，及癌症治疗中使用干扰素等药物诱发、生活或社会节律紊乱引发、慢性睡眠障碍引发、也可以是慢性疼痛、糖尿病、慢性胃肠道炎症性疾病等慢性躯体疾病引发，等等。

Ⅱ.实施方案

如前所述，几乎所有抗抑郁药物的作用机制均主要涉及单胺类神经递质的传递，副作用相对较多，疗效明确，但不尽如人意，且部分患者对几乎所有抗抑郁药物均无效，几乎所有抗抑郁药的起效时间均比较长，本发明人对于抗抑郁药物进行了大量的研究。

本发明人研究发现，免疫细胞因子白介素22(IL-22)具有较好的抗抑郁活性，将一定用量和浓度的IL-22用于治疗抑郁症，起效快、治疗效果确切、显著，且副作用较小。本发明正是基于上述发现做出的。

因此，本发明第一方面所涉及的免疫细胞因子白介素22在用于制备抗抑郁药物中的应用。

白细胞介素-22(IL-22)是Th22亚型的主要效应细胞因子，是由生物体产生的属于白介素10家族的一种免疫细胞因子，人IL-22基因位于染色体12q15上，靠近IFN-γ和IL-26基因。IL-22是由CD4+淋巴细胞，自然杀伤T细胞(NKT)，先天性淋巴细胞(ILC)，以及较不常见的CD8+淋巴细胞分泌的一种细胞因子。IL-22与由IL-22受体(R)1和IL-10R2组成的异二聚体受体复合物结合，可以激活许多细胞内信号通路。大量证据表明IL-22在感染的上皮组织再生中起保护作用。特别是IL-22是维持肠道屏障完整性的主调节因子。目前很多研究证明IL-22及其信号转导通路可以调节许多参与组织保护、存活、分化和重塑的基因表达。在移植物抗宿主病(GVHD)、多发性骨髓瘤(MM)以及很多恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,有望成为新的治疗靶点。到目前为止，医学界尚没有将IL-22用于治疗抑郁症的先例。但是，本发明人通过研究意外发现，将一定用量和浓度的IL-22用于治疗抑郁症，1周内就可以起效，治疗效果确切、显著，且副作用较小，本发明人假设IL-22可以通过保护肠道屏障、血脑屏障完整性及神经免疫系统起到抗抑郁作用。

本发明中所述“免疫细胞因子白介素22(IL-22)”可以通过人工合成得到，也可以直接商购[例如，金斯瑞生物科技股份有限公司]获得，且所述IL-22的纯度≥98％。

本发明中所述白介素-22为人白介素-22，重组人白介素-22，鼠白介素-22和/或重组鼠白介素-22。

根据本发明，所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为每日每千克体重0.0011-0.0013mg，更进一步优选为每日每千克体重0.0011mg的免疫细胞因子白介素22。

本发明中，所述抗抑郁药物的剂型包括口服制剂或注射制剂。

根据本发明的一些实施方式，所述口服制剂选自片剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂，且每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.112-0.616mg，优选为0.252-0.616mg，进一步优选为0.308-0.364mg，更进一步优选为0.308mg。

基于上述，容易理解，本发明中所述抗抑郁药物口服制剂的用法和用量为：每日1次，每次1制剂单位。例如，所述抗抑郁药物口服制剂的用药可以为，每次0.308-0.364mg，特别是0.308mg，每日1次。

根据本发明的另一些实施方式，所述注射制剂为粉剂或注射液，且所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.028-0.154mg，优选为0.063-0.154mg，进一步优选为0.077-0.091mg，更进一步优选为0.077mg。

基于上述，容易理解，本发明中所述抗抑郁药物制剂注射制剂的用法和用量为：每日1次，每次1制剂单位。例如，所述抗抑郁药物静脉注射的用药可以为，每次0.077-0.091mg，特别是0.077mg，每日1次。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物连续给药1周内产生抗抑郁效果，且所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥1周，优选所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥2周。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

本发明人进一步研究发现，将GDNF作为其他活性成分与IL-22复合所构成的药物组合物，用于治疗抑郁症，可以在降低IL-22用量的同时，缩短起效时间，并进一步提高疗效的持续时间，且进一步减小副作用。

因此，本发明第二方面提供了一种抗抑郁药物组合物，其包括作为活性成分的免疫细胞因子白介素22。优选地，所述药物组合物中还含有其他活性成分，所述其他活性成分为GDNF。

研究结果表明，在所述药物组合物中，所述GDNF与免疫细胞因子白介素22的质量比为(0-0.6):1，优选为(0.001-0.55):1，更进一步优选为(0.063-0.27):1，可以达到较为显著的治疗效果，并将起效时间缩短到连续给药3天内，且副作用极小。

本发明中所述抗抑郁药物及药物组合物对于人类的药效剂量参考《药理实验方法学》(徐叔云教授主编，P1861表11-8)中“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值”，基于小鼠药效剂量进行估算。

所述“GDNF”从词义上讲主要是指胶质细胞来源的神经营养因子(缩写为GDNF)。本发明中所述“GDNF”实际是指胶质细胞来源的神经营养因子家族配体类药剂，其包括胶质细胞来源的神经营养因子(GDNF)、NRTN和ARTN。本发明中使用GDNF。

在本发明的一些实施例中，所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为0.0011-0.0013mg，更进一步优选为0.0011mg的免疫细胞因子白介素2。

在本发明的另一些实施例中，所述药物组合物的药效剂量为每日每千克体重0-0.0006mg的GDNF，优选为每日每千克体重0.0000033-0.0006mg的GDNF，进一步优选为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF。

在本发明的一些实施例中，所述药物组合物连续给药1周内，优选为3天内产生抗抑郁效果。

本领域技术人员应该了解的是，当所述药物组合物中所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，而GDNF含量为0时，所述药物组合物连续给药7天内产生抗抑郁效果；当所述药物组合物中所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，而GDNF含量不为0，尤其是，当所述药物组合物的药效剂量为每日每千克体重为0.0000033-0.0006mg的GDNF，优选为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF时，所述药物组合物连续给药3天内产生抗抑郁效果。

研究结果表明，本发明的药物组合物给药后持续有效时间≥1周(7天)，优选所述药物组合物给药后持续有效时间≥2周(14天)。

本发明第三方面提供了如本发明第二方面所述的药物组合物在用于制备抗抑郁药物中的应用。

根据本发明，所述抗抑郁药物的剂型包括口服制剂或注射制剂。

当采用口服制剂这种剂型时，可以选择使用片剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂。

在本发明的一些实施例中，所述口服制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.112-0.616mg，优选为0.252-0.616mg，进一步优选为0.308-0.364mg，更进一步优选为0.308mg；每一制剂单位中GDNF的含量为0-0.168mg，进一步优选为0.000924-0.168mg，更进一步优选为0.0230-0.168mg。

当采用注射剂这种剂型时，可以选择使用粉剂或注射液。

在本发明的一些实施例中，所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.028-0.154mg，优选为0.063-0.154mg，进一步优选为0.077-0.091mg，更进一步优选为0.077；所述注射制剂的每一制剂单位中GDNF的含量为0-0.042mg，优选为0.000231-0.042mg，进一步优选为0.00574-0.042mg。

本发明中，所述抗抑郁药物的药效剂量为：

(1)每日每千克体重0.0004-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，优选为每日每千克体重0.0009-0.0022mg的免疫细胞因子白介素22，进一步优选为每日每千克体重0.0011-0.0013mg，更进一步优选为每日每千克体重0.0011mg的免疫细胞因子白介素22；

(2)每日每千克体重0-0.0006mg的GDNF，优选为每日每千克体重0.0000033-0.0006mg的GDNF，进一步优选为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF。

基于上述口服制剂中的免疫细胞因子白介素22和GDNF的含量，容易理解，上述抗抑郁药物按70kg体重计，为每日1次，每次一制剂单位(例如，1片)。例如，所述抗抑郁药物的口服制剂用药可以采用，每次0.308-0.364mg免疫细胞因子白介素22和0.0230-0.168mgGDNF，每日1次。

基于上述注射剂中的免疫细胞因子白介素22和GDNF的含量，容易理解，上述抗抑郁药物按70kg体重计，为每日1次，每次一制剂单位(例如，1瓶)，1-2mL注入。例如，抗抑郁药物的静脉注射制剂用药可以采用，每次0.077-0.091mg免疫细胞因子白介素22和0.00574-0.042mg GDNF，每日1次。

在本发明的一些进一步的实施例中，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

本发明中对于药学上可接受的辅助成分没有特别的限制，可以采用本领域常规药学上可接受的辅助成分。

例如，对于片剂而言，所述药学上可接受的辅助成分包括填充剂(稀释剂、吸收剂)、湿润剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂和其他表面活性剂。

所述填充剂包括淀粉、糖粉、糊精、乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、无机盐类和甘露醇中的一种或几种。

所述湿润剂和黏合剂包括水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素，以及其他黏合剂(明胶溶液、蔗糖溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液)中的一种或几种。

所述崩解剂包括干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯比咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠中的一种或几种。

所述润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、氢化植物油、微粉硅胶和聚乙二醇类与月挂醇硫酸镁中的一种或几种。

所述其他表面活性剂包括用于提高溶出度的十二烷基硫酸钠等等。

再例如，对于注射剂而言，药学上可接受的辅助成分主要包括溶媒成分，其包括蒸馏水和/或生理盐水。

本领域技术人员应该理解的是对于粉剂型注射剂，使用时将本发明的抗抑郁药物组合物粉剂溶解或分散于蒸馏水和/或生理盐水制成注射液。

容易理解，注射液型注射剂是由本发明的抗抑郁药物组合物分散于注射用水和/或生理盐水制成。

Ⅲ.实施例

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可自常规生化试剂商店购置获得。

以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，所有结果以平均值±标准误(Mean±S.E.M)表示。数据分析采用双因素方差分析(Two-Way ANOVA)；所有的post hoc分析均采用Turkey检验完成。以p<0.05作为差异显著性标准。

在实验过程中，小鼠接受的所有实验操作均符合实验动物伦理学要求，遵守国家和北京大学动物部使用和保护委员会颁布的条例，并获得北京大学医学部动物使用和保护委员会伦理的批准。

雄性C57BL/6J小鼠：北京斯贝福生物技术有限公司。小鼠抑郁模型采用慢性社会挫败模型(CSD)。

实施例1：IL-22在抗抑郁中的作用

实验动物：雄性C57BL/6J小鼠(体重20-25g)。

1、小鼠适应性饲养1周后按照如下方式分为4个实验组进行饲养：

实验组1(对照+溶媒组)：对照组两两互为邻居鼠，用隔板隔开，不做其他处理，只每天更换不同的邻居鼠，此过程持续10天，第10天时将小鼠分开单笼饲养，同时腹腔注射溶媒(PBS)，注射剂量为100μL/25g，共8只小鼠；

实验组2(对照+IL-22 0.25μg/100μL/25g)：操作同上，第10天时将小鼠分开单笼饲养，同时腹腔注射IL-22，注射剂量为0.25μg/100μL/25g，共8只小鼠；

实验组3(CSD+溶媒组)：连续进行10天应激，第10天时将小鼠分开单笼饲养，同时腹腔注射溶媒(PBS)，注射剂量为100μL/25g，共12只小鼠；

实验组4(CSD+IL-22)：连续进行10天应激，第10天时将小鼠分开单笼饲养，同时腹腔注射IL-22，注射剂量为0.25μg/100μL/25g，共12只小鼠；

慢性社会挫败(CSD)模型具体方案安排如下

(一)造模

1、筛选CD-1攻击小鼠。将攻击鼠单独放入一个笼中适应一晚，使其有地盘意识，等到第二天放入一移居鼠，观察CD-1小鼠是否在3min内攻击移居鼠，此测试持续三天，三天均攻击则入选。

2、社会挫败模型实验：一共40只小鼠，24只为应激鼠，16只为对照鼠。将筛选好的CD-1攻击鼠放入应激笼单笼饲养，适应一晚，第二天正式实验，将应激鼠分别放入其笼中，使应激鼠被CD-1攻击鼠连续攻击5-10分钟，之后用带孔隔板将两鼠迅速分开，使两鼠有24小时的感官接触；对照组两两互为邻居鼠，也用隔板隔开，不做其他处理。添水添食，排除其他因素对实验鼠的干扰。此过程持续10天，10天中应激鼠每天更换不同的CD-1小鼠应激，对照鼠每天更换不同的邻居小鼠，以免适应。

(二)药物干预

1、将小鼠分为四组：对照组+PBS(8只)，对照组+IL-22(8只)，应激组+PBS(12只)，应激组+IL-22(12只)，IL-22的剂量按照0.25μg/100μL/25g腹腔注射，PBS按照100μL/25g腹腔注射，连续注射6天，每天下午5-6点注射。

2、糖水偏爱测试，测试方法如下：

(1)糖水适应阶段(适应阶段时间为48小时)：单笼饲养小鼠，笼中放置一瓶纯水和一瓶1％蔗糖水(1g蔗糖/100mL纯水)，第24小时时，交换纯水和糖水的位置。

(2)糖水偏爱测试阶段：完成最后一次注射后1小时将小鼠禁食禁水24小时，然后在笼中放置外观一样的一瓶纯水和一瓶1％蔗糖水(1g蔗糖/100mL纯水)，使小鼠自由饮水12小时(在第6小时交换纯水和糖水的位置)，测试前后称重两个水瓶，计算12小时内小鼠1％糖水和纯水的摄入量和糖水偏爱值。糖水偏爱值＝糖水摄入量/(糖水摄入量+纯水摄入量)×100％。

结果如图1所示。图1中，CON+PBS为实验组1小鼠的糖水偏爱测试结果，CON+IL-22为实验组2小鼠的糖水偏爱测试结果，CSD+PBS为实验组3小鼠的糖水偏爱测试结果，CSD+IL-22为实验组4小鼠的糖水偏爱测试结果。双因素方差分析表明，实验组3小鼠的糖水偏爱值较实验组1小鼠的糖水偏爱值显著降低(F 1,22＝9.814，p＝0.005)，显示出抑郁样行为。在给予IL-22或溶媒后，实验组4比实验组3显著提高了糖水偏爱值，(F1,22＝8.067，p<0.05)差异有统计学意义，表现出IL-22抗抑郁症状的作用。

3、完成糖水测试后，对小鼠进行强迫游泳测试，强迫游泳测试在直径10cm，高25cm的有机玻璃缸中进行，水深15cm，水温25±2℃。小鼠游泳时，保证其不能靠四肢或尾巴支撑桶底，并保持鼻尖露出水面呼吸。进行6min的强迫游泳测试，记录后4min内小鼠的漂浮不动时间，作为绝望行为的指标。

结果如图2所示。图2中，CON+PBS为实验组1小鼠的强迫游泳测试结果，CON+IL-22为实验组2小鼠的测试结果，CSD+PBS为实验组3小鼠的测试结果，CSD+IL-22为实验组4小鼠的测试结果。双因素方差分析表明，实验组3小鼠的不动时间较实验组1小鼠的不动时间显著延长，差异有统计学意义(F1,26＝38.961，p<0.05)，显示出在社会挫败模型中小鼠明显的抑郁样行为；实验组4与实验组3小鼠的不动时间相比有显著降低，差异有统计学意义(F1,26＝7.270，p＝0.012；)，显示IL-22可以逆转CSD诱发的抑郁样行为。

4、之后进行了小鼠社会交往测试用以评价社会挫败模型小鼠的社会交往能力。实验所用矿场为定制的不透明塑料箱，其规格为42cm×42cm×42cm。旷场分为两个区，一是围绕金属笼周边14×24cm的接触区，另一个是与接触区相对应的两个9cm×9cm的角落区。测试分为两个阶段，第一阶段为无攻击鼠阶段，此时接触区中放一个空金属笼子，将C57BL/6J小鼠头朝角落区方向放于旷场最中间，然后录像记录5min的活动情况；第二阶段为有攻击鼠阶段，此时在接触区中换一个同样的新金属笼子，并在金属笼内放一只陌生的CD1攻击鼠，然后将C57BL/6J小鼠头朝角落区方向放于旷场最中间，然后录像记录5min的活动情况。实验结束后用视频系统分析300s小鼠在旷场各个区的活动时间，以计算小鼠的社会交往率。

SIR(Social interaction rate，社会交往率)的值是指有攻击鼠存在时C57BL/6J小鼠在接触区持续时间/无攻击鼠存在时C57BL/6J小鼠在接触区持续时间；SIR≥1，表明C57BL/6J小鼠是抵抗鼠，对此应激不敏感；SIR<1，表明C57BL/6J小鼠是易感鼠，即为造模成功鼠。实验中要保持绝对安静，且每阶段放C57BL/6J小鼠进旷场前都要将粪便处理干净，喷洒75％酒精去除异味，以免对测试造成干扰。

结果如图3所示。图3中，CON+PBS为实验组1小鼠的社会交互实验测试结果，CON+IL-22为实验组2社会交互实验测试结果，CSD+PBS为实验组3社会交互实验测试结果，CSD+IL-22为实验组4社会交互实验测试结果。实验结果表明，经过双因素方差分析发现，慢性社交挫败有主效应(F1,38＝14.94，p<0.0001)，药物(IL-22)干预也具有主效应(F1,38＝4.43，p<0.05)，且社交挫败应激和药物干预之间没有交互作用(F1,38＝0.82，p>0.05)。说明社交挫败应激导致了小鼠明显的社交行为下降，IL-22可以逆转社会挫败应激导致的小鼠社交行为下降。

5、最后又进行了小鼠悬尾实验：C57BL/6J小鼠从动物房移入实验环境适应1h。由于是黑色小鼠所以选择白色背景，将小鼠尾部1/3处用医用胶带固定，悬挂于支架上，头部距地面15cm，用录像6min，统计后4min不动时间，实验结束后，将动物放回笼内，去除尾部胶带。

结果如图4所示。CON+PBS为实验组1小鼠的悬尾实验结果，CON+IL-22为实验组2小鼠悬尾实验结果，CSD+PBS为实验组3小鼠悬尾实验结果，CSD+IL-22为实验组4小鼠悬尾实验测试结果。经过双因素方差分析实验结果发现，实验组3比实验组1显著增加了小鼠的悬尾不动时间(F1,27＝5.384，p＝0.028)，此差异具有统计学意义，说明了社会挫败模型诱发了小鼠的抑郁样行为。而实验组4相比于实验组3，小鼠的悬尾不动时间明显降低(F1,27＝8.967，p＝0.006)，此差异具有统计学意义，说明了IL-22可以逆转小鼠的抑郁样行为，表现出了IL-22对小鼠抑郁样行为的改善。

以上结果表明，给小鼠腹腔注射IL-22可以逆转社会挫败模型中小鼠的糖水偏爱值降低、强迫游泳实验中的不动时间升高、悬尾实验中的不动时间升高、以及社会交互率的降低，这都说明了IL-22具有抗抑郁样作用，可能成为临床上治疗抑郁症的抗抑郁药物的潜力。

通过对IL-22和GDNF联合用药的试验研究，结果表明，将GDNF作为其他活性成分与IL-22复合所构成的药物组合物用于治疗抑郁症，可以降低IL-22用量，且所述药物组合物连续给药3天内即可产生抗抑郁效果，明显缩短了起效时间；同时，所述药物组合物给药后持续有效时间可达14天以上，明显提高疗效的持续时间，而且副作用也进一步减小了。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明做出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims (11)

1.一种免疫细胞因子白介素-22在用于制备抗抑郁药物中的应用；所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0011-0.0013mg的免疫细胞因子白介素22；所述抗抑郁药物的剂型为注射制剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述注射制剂为粉剂或注射液；所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量0.077-0.091mg。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物连续给药1周内产生抗抑郁效果；和/或，所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥1周。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物给药后持续有效时间≥2周。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

7.一种抗抑郁药物组合物在用于制备抗抑郁药物中的应用；

所述抗抑郁药物的药效剂量为每日每千克体重0.0011-0.0013mg的免疫细胞因子白介素22；所述药物组合物的药效剂量为每日每千克体重0.000082-0.0006mg的GDNF；所述抗抑郁药物的剂型为注射制剂；

所述抗抑郁药物组合物包括作为活性成分的免疫细胞因子白介素22；所述药物组合物中还含有其他活性成分，所述其他活性成分为胶质细胞来源的神经营养因子(GDNF)；在所述药物组合物中，所述GDNF与免疫细胞因子白介素22的质量比为(0.063-0.27):1。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物组合物连续给药3天内产生抗抑郁效果；和/或，所述药物组合物给药后持续有效时间≥2周。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述注射制剂为粉剂或注射液；所述注射制剂的每一制剂单位中免疫细胞因子白介素22的含量为0.077-0.091mg；所述注射制剂的每一制剂单位中GDNF的含量为0.00574-0.042mg。

10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅助成分。

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