CN112655651A - 一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法，包括以下步骤1)挑选发育正常的3dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.2‑1％月硅酸钠溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；2)移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；3)将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；4)将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；5)利用Image‑ProPlus6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标；本发明的有益效果是具有操作简便、试剂便宜、成膜稳定的优点。

Description

一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法。
背景技术
血栓形成是临床常见的病理状态，全球每年有1500万人死于血栓栓塞性疾病，已经成为全球总死亡率的第一位，致死率也很高，吸烟、遗传、环境污染、糖尿病、严重创伤、恶性肿瘤、年龄等都是血栓的高危因素。
斑马鱼是属于辅鳍亚纲鲤科短担尼鱼属的一种硬骨鱼，原产于印度东部、巴基斯坦、缅甸以及孟加拉国的小溪、稻田及恒河中游地区，是一种常见的热带观赏鱼。20世纪70年代初，美国俄勒冈大学著名遗传学家George Streisinger开始研究其养殖方法、观察其胚胎发育过程。斑马鱼具有发育快速、性成熟期短、繁殖力强、体外受精、体外发育且受精卵透明，易于观察血管发生，是优良的模式动物。
发明内容
月桂酸钠常用于制造外周动脉的血栓栓塞模型，月桂酸钠可以损伤内皮细胞，致使血管的完整性受损，内皮下基质暴露，诱发凝血，导致血栓。
本发明的制备过程如下：
1.挑选发育正常的3dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.2-1％月硅酸钠溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2.移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3.将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4.将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5.利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/LMgSO4。
优选的，本发明动物模型的制备方法，包括以下步骤：
1.挑选发育正常的3dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.6％月硅酸钠溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2.移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3.将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4.将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5.利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/LMgSO4。
本发明的另一个目的在于提供斑马鱼血栓动物模型的使用方法，斑马鱼体积小、药物用量少、饲养成本低、胚胎体外发育且透明、可用于大规模溶栓药物筛选。
本发明的有益效果是：
获得了一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法，本方法具有操作简便、试剂便宜、成膜稳定的优点。
附图说明
图1：尾部血栓，A:对照组B:0.6％月桂酸溶液组
图2：尾部血栓面积与躯干面积比
图3：斑马鱼死亡率
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1：本发明动物模型的制备
实验材料：月桂酸钠、DMSO、邻联茴香胺购自SIGMA公司；醋酸钠、FeCl3、NaCl、KCl、MgSO4、H2O2、CaCl2购自国药集团化学试剂有限公司；6孔板购自泰州百科医疗器械有限公司。
实验仪器：XTL-7063SZ体式显微镜购自上海点应光学仪器有限公司；恒温培养箱LHP150L/250L购自常州冠军仪器制造有限公司。
斑马鱼饲养环境：实验用斑马鱼为AB系，参照Westefield的养殖方法，饲养于杭州怀特生物科技股份有限公司，水温28℃，电导率450-800μS/cm，pH值6.8-7.2，明/暗周期为14h/10h。
实验方法：挑选健康性成熟的AB系斑马鱼，按雌雄2:1的比例放入鱼缸中，次日清晨获得胚胎，挑选健康优质的胚胎，放入28℃培养箱，每日换水两次，在斑马鱼发育至3dpf时，空白对照组、模型对照组各挑选发育正常的斑马鱼30条，空白对照组为胚胎培养水，模型对照组加入用胚胎培养水配制的质量分数分别为0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％的月硅酸钠溶液继续培养48h，吸弃培养水，用移液枪吸取等体积邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；将斑马鱼置于新的6微孔板中加入等体积DMSO；取斑马鱼置载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；利用Image-Pro Plus6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标，结果见图1、图2，实验结束时各组胚胎死亡率见图3。
由图1、图2可以看出，月硅酸钠溶液能够使斑马鱼形成血栓，0.6％与0.8％和1％组(血栓染色面积/躯干面积)×100％相差不大，但斑马鱼致死率大幅升高，因此0.6％为最佳剂量。
实施例2本模型与苯肼诱导模型比较
实验材料：月桂酸钠、DMSO、邻联茴香胺购自SIGMA公司；醋酸钠、FeCl3、NaCl、KCl、MgSO4、H2O2、CaCl2购自国药集团化学试剂有限公司；6孔板购自泰州百科医疗器械有限公司。
实验仪器：XTL-7063SZ体式显微镜购自上海点应光学仪器有限公司；恒温培养箱LHP150L/250L购自常州冠军仪器制造有限公司。
斑马鱼饲养环境：实验用斑马鱼为AB系，参照Westefield的养殖方法，饲养于杭州怀特生物科技股份有限公司，水温28℃，电导率450-800μS/cm，pH值6.8-7.2，明/暗周期为14h/10h。
实验方法：挑选健康性成熟的AB系斑马鱼，按雌雄2:1的比例放入鱼缸中，次日清晨获得胚胎，挑选健康优质的胚胎，放入28℃培养箱，每日换水两次，在斑马鱼发育至3dpf时，空白对照组、月桂酸钠模型组、苯肼模型组各挑选发育正常的斑马鱼30条，空白对照组为胚胎培养水、月桂酸钠模型组质量分数为0.6％，苯肼模型组浓度为1.5μmol/L，继续培养48h，吸弃培养水，用移液枪吸取等体积邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标。
表1月桂酸钠组与苯肼组对比
Figure BDA0002896814180000041

Claims (2)

1.一种利用月桂酸钠诱导产生斑马鱼血栓模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)挑选发育正常的3dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.2-1％月硅酸钠溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2)移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3)将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4)将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5)利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/LMgSO4。
2.如权利要求1所述的斑马鱼血栓模型的使用方法，包括以下步骤：
1)挑选发育正常的3dpf斑马鱼30条左右，移入用胚胎培养水配制的0.6％月硅酸钠溶液，置于培养箱内培养48h后，吸弃培养水，用邻联茴香胺染色液于6微孔板中避光染色15min；
2)移除染色液，用DMSO快速清洗3遍；
3)将斑马鱼转入新的6微孔板中，加入等体积DMSO；
4)将斑马鱼置于载玻片上，于显微镜下对斑马鱼进行拍照并保存；
5)利用Image-Pro Plus 6计算斑马鱼躯干部及血栓染色面积，(血栓染色面积/躯干面积)×100％值作为血栓发生程度的指标；
其中，斑马鱼培养用水配方：5mmol/L NaCl，0.17mmol/L KCl，0.4mmol/L CaCl2，0.16mmol/L MgSO4；
其中，邻联茴香胺染色液配方：含0.6mg/mL邻联茴香胺，0.01mol/L醋酸钠，0.65％H2O2，0.16mmol/LMgSO4。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102907357A (zh) * 2012-09-27 2013-02-06 杭州环特生物科技有限公司 一种斑马鱼高脂血症模型的建立方法及其应用
US20130283403A1 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 National Cheng Kung University Zebrafish seizure model, method for establishing the same, and method for screening antiepileptic drug using the same
CN106667982A (zh) * 2017-02-24 2017-05-17 北京中医药大学 一种制备斑马鱼血栓模型的方法
CN110463654A (zh) * 2019-08-15 2019-11-19 贵州中医药大学 一种建立斑马鱼血管新生障碍模型的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130283403A1 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 National Cheng Kung University Zebrafish seizure model, method for establishing the same, and method for screening antiepileptic drug using the same
CN102907357A (zh) * 2012-09-27 2013-02-06 杭州环特生物科技有限公司 一种斑马鱼高脂血症模型的建立方法及其应用
CN106667982A (zh) * 2017-02-24 2017-05-17 北京中医药大学 一种制备斑马鱼血栓模型的方法
CN110463654A (zh) * 2019-08-15 2019-11-19 贵州中医药大学 一种建立斑马鱼血管新生障碍模型的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
丁赛丹 主编: "《实验动物模型制备手册》", 30 March 2019, 上海交通大学出版社 *

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