CN112646755A - 一株特基拉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株特基拉芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112646755A
CN112646755A CN202110087397.2A CN202110087397A CN112646755A CN 112646755 A CN112646755 A CN 112646755A CN 202110087397 A CN202110087397 A CN 202110087397A CN 112646755 A CN112646755 A CN 112646755A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus tequilensis
plant
strain
bacillus
tequilensis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110087397.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112646755B (zh
Inventor
王永红
他永全
闫志强
杨龙港
何军
祝传书
冯俊涛
马志卿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northwest A&F University
Original Assignee
Northwest A&F University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest A&F University filed Critical Northwest A&F University
Priority to CN202110087397.2A priority Critical patent/CN112646755B/zh
Publication of CN112646755A publication Critical patent/CN112646755A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112646755B publication Critical patent/CN112646755B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A01N43/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)及其应用，该菌株已于2020年12月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21317，保藏名称为特基拉芽孢杆菌Bacillus tequilensis M408F10‑3F8。将其应用于农业生物防治领域，可形成生物膜在植物根际稳定定殖，可对12种植物病原真菌和卵菌产生较强且广谱的抑制作用，可产生IAA来促进植物生长。该特基拉芽孢杆菌菌悬液和发酵液对黄瓜枯萎病盆栽防效分别达到50.00％和58.00％，与药剂对照多菌灵防效相当，且对黄瓜具有明显的促生作用，是一株性能优良的生防菌株，具有良好的开发应用前景。

Description

一株特基拉芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于农业生物防治技术领域，具体涉及一株特基拉芽孢杆菌(Bacillustequilensis)及其应用。
背景技术
植物病害对世界粮食生产及安全造成了严重的威胁。长期以来，化学农药和肥料的使用，使得环境污染、菌株抗药性以及土壤微生态失衡等问题日益加重。亟待挖掘可替代化学农药和肥料的微生物产品。尽管已有大量微生物产品的存在，但由于其在田间定殖力低、持效期短等现象，使得从根际、根内生等植物相关微生物群落中挖掘广谱、高效的微生物成为国内外学者的研究热点。
芽孢杆菌是一类产芽孢的革兰氏阳性细菌，大部分芽孢杆菌具有抗菌谱广、生长迅速、易分离培养、抗逆性强和生物安全性高等优点，从而作为益生菌在农业、食品、工业、医学、冶金、林业、环保以及军事等方面被广泛研究。2006年，Gatson等首次从墨西哥哈利斯科州的一个墓穴中分离到了特基拉芽孢杆菌B.tequilensis。Pradhan等研究发现，特基拉芽孢杆菌CH可通过产生脂肽及生物表面活性剂等物质破坏病原菌的生物膜，从而起到抑制作用。此外，也有学者报道该菌株具有促生作用。但目前关于特基拉芽孢杆菌的开发利用尚处于起步阶段。
发明内容
本发明的目的是提供一株特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)及其应用。本发明提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8，该菌株已于2020年12月07日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.21317。
一株特基拉芽孢杆菌，特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)的保藏编号为CGMCC No.21317。
本发明所述的特基拉芽孢杆菌用于制备植物抑菌剂的应用，或用于制备防治植物病原菌引起的植物病害药物的应用。
可选的，所述的植物病原菌选自油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum)病菌、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)病菌、小麦赤霉(Fusarium graminearum)病菌、苹果轮纹(Botryospuaeria berengeriana)病菌、烟草赤星(Alteraria alternata)病菌、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)病菌、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)病菌、黄瓜枯萎(Fusarium oxysporum.sp.cucumebrium Owen)病菌、草莓枯萎(Fusarium oxysporumf.sp.fragariae)病菌、番茄灰霉(Botrytis cinerea)病菌、苹果腐烂(Valsa mali Miyabeet Yamada)病菌和小麦全蚀(Gaeu-mannomyces graminsis(sacc.)Arx&Olivier Vartritici J.walker)病菌。
本发明所述的特基拉芽孢杆菌用于制备植物定殖剂、植物生防剂、生物有机肥或植物促生剂的应用。
一种制剂，所述的制剂为本发明所述的特基拉芽孢杆菌的菌悬液、发酵液、发酵产物或次生代谢产物。
本发明所述的制剂用于制备植物抑菌剂的应用，或用于制备防治植物病原菌引起的植物病害药物的应用。
可选的，所述的植物病原菌选自油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum)病菌、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)病菌、小麦赤霉(Fusarium graminearum)病菌、苹果轮纹(Botryospuaeria berengeriana)病菌、烟草赤星(Alteraria alternata)病菌、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)病菌、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)病菌、黄瓜枯萎(Fusarium oxysporum.sp.cucumebrium Owen)病菌、草莓枯萎(Fusarium oxysporumf.sp.fragariae)病菌、番茄灰霉(Botrytis cinerea)病菌、苹果腐烂(Valsa mali Miyabeet Yamada)病菌和小麦全蚀(Gaeu-mannomyces graminsis(sacc.)Arx&Olivier Vartritici J.walker)病菌。
一种IAA的制备方法，采用本发明所述的特基拉芽孢杆菌制备IAA。
一种生物膜的制备方法，采用本发明所述的特基拉芽孢杆菌制备生物膜。
本发明的特基拉芽孢杆菌应用于农业生物防治领域，可形成生物膜在植物根际稳定定殖，可对12种植物病原真菌和卵菌产生较强且广谱的抑制作用，可产生IAA来促进植物生长。该特基拉芽孢杆菌菌悬液和发酵液对黄瓜枯萎病盆栽防效分别达到50.00％和58.00％，与药剂对照多菌灵防效相当，且对黄瓜具有明显的促生作用，是一株性能优良的生防菌株，具有良好的开发应用前景。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是本发明实施例1提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8发育树；
图2是本发明实施例2提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8对12株病原真菌的抑菌活性；A,G表示水稻纹枯；B,H表示小麦赤霉；C,I表示油菜菌核；D,J表示苹果轮纹；E,K表示烟草赤星；F,L表示辣椒疫霉；M,S表示西瓜枯萎；N,T表示黄瓜枯萎；O,U表示草莓枯萎；P,V表示番茄灰霉；O,W表示苹果腐烂；R,X表示小麦全蚀；
图3是本发明实施例3提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8产IAA的标准曲线；
图4是本发明实施例3提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8生物膜的形成，A,B,C,D分别表示菌株M408F10-3F8在培养基LBG、LBM、LBGM和LB中的生物膜；
图5是本发明实施例5提供的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)M408F10-3F8对黄瓜枯萎病的盆栽防病促生作用。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径中得到。
本发明中提到的植物定殖剂、植物生防剂、生物有机肥、植物促生剂等均为农业中常用的肥料或营养液等常用剂型。特基拉芽孢杆菌菌株可形成生物膜在植物根际稳定定殖，可对12种植物病原真菌和卵菌产生较强且广谱的抑制作用，可产生IAA来促进植物生长。该特基拉芽孢杆菌菌悬液和发酵液对黄瓜枯萎病盆栽防效分别达到50.00％和58.00％，与药剂对照多菌灵防效相当，且对黄瓜具有明显的促生作用，是一株性能优良的生防菌株，具有良好的开发应用前景。
实施例1菌株M408F10-3F8分离纯化及分子生物学鉴定
称取10g小麦根际土壤加入200mL 0.01M无菌PBS缓冲液，在室温、180r/min条件下震荡30min得到根际土悬浮液，用无菌水梯度稀释为10-1、10-2和10-3，用涂布棒均匀涂布在M408培养基：酵母提取物1g、甘露醇10g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.2g、NaCl 0.1g、琼脂15g、蒸馏水1000mL、PH＝7.2-7.4；于30℃下恒温培养2d后挑取单菌落进行纯化培养。
DNA提取按照上海生工生物工程(上海)股份有限公司的柱式细菌DNA提取试剂盒的程序操作。选用选用细菌通用引物对：F27 5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGG-3'，P15415'-AAG GAG GTG GTG ATC CAG CCG CA-3'。反应条件为：94℃变性45s，50℃退火45s，72℃延伸75s，50μL反应体系30个循环。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测，经克隆测序得到序列结果。所得到的16S rDNA全序列与从Genbank等数据库中获得的16S rDNA序列进行比对，通过Mega 6.0软件包进行系统发育树的构建。
采用分子生物学方法对菌株M408F10-3F8进行鉴定。菌株M408F10-3F8的16S rDNA碱基序列测定结果如下所示，共测定菌株M408F10-3F8的16S rDNA有1447个碱基。
1 TCGTCACTTCGGCGGGGTGGCTCCTATAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACT
61 CTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGA
121 TCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTG
181 AGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATT
241 GTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTC
301 CTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATC
361 AAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACC
421 ATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGA
481 TGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTT
541 GTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAG
601 TGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATC
661 GTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTC
721 AGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGC
781 ATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCC
841 AATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAG
901 CCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGG
961 CACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGG
1021 TACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGC
1081 GTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAG
1141 TCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGT
1201 CGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTG
1261 GTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTAGC
1321 CCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCCG
1381 TCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGTAGAGTAGGTTATAGCGCTGAAGAACTAGATCCAA
1441 TGAAGTC
自菌株的基因组DNA中扩增获得片段大小为所得到的16S rDNA全序列与从Genbank等数据库中获得的16S rDNA序列进行比对后获取登录号为：M408F10-3F8(MW314756)。系统发育树的构建：选取10株模式菌株进行系统发育分析，构建的系统发育树见图1所示。
实施例2菌株M408F10-3F8抑菌作用测定
采用平板对峙法，对油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum)、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)、小麦赤霉(Fusarium graminearum)、苹果轮纹(Botryospuaeriaberengeriana)、烟草赤星(Alteraria alternata)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎(Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)、草莓枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.fragariae)、番茄灰霉(Botrytis cinerea)、苹果腐烂(Valsa mali Miyabe et Yamada)和小麦全蚀(Gaeu-mannomyces graminsis(sacc.)Arx&Olivier Var tritici J.walker)共12株植物病原真菌的抑制作用进行测定。首先，以培养皿中心为中心点，在培养皿底部十字交叉划线，距离中心点2.5cm处接种已经在LB培养基上活化的菌株；然后，用5mm打孔器将已活化的植物病原真菌打孔后接种于PDA培养基平板中央，对培养皿进行封口、于28℃条件下培养至病原菌对照长到培养皿三分之二的时候进行病原菌半径及所形成透明圈宽度的统计。
采用“平板对峙”法，以12种病原真菌为靶标，对菌株M408F10-3F8抑菌谱进行评价。结果表明，菌株M408F10-3F8对12种病原真菌具有广谱的抑制活性(图2)。其中，菌株M408F10-3F8对苹果腐烂病病原菌的抑制活性最高,抑制率为93.13％；对小麦全蚀对油菜菌核、苹果轮纹、烟草赤星和番茄灰霉病病原菌的抑制活性较为明显，抑制率分别为70.26％、63.24％、61.94％、66.54％和66.94％；对小麦赤霉、辣椒疫霉、西瓜枯萎和草莓枯萎病病原菌的抑制率介于50.00％-60.00％之间；对黄瓜枯萎的抑制活性较低，抑制率为47.81％，对水稻纹枯无显著的抑制活性(表1)。
表1菌株M408F10-3F8对12株病原真菌的抑制作用
Figure BDA0002911380860000051
Figure BDA0002911380860000061
实施例3菌株M408F10-3F8促生指标测定
首先将-80℃保存的菌株于LB培养基上进行划线，于28℃恒温箱中培养24h活化。然后将活化后的菌株接种一菌针于盛装有100mL LB液体培养基的250mL的锥形瓶中，同时在锥形瓶中添加1mL L-色氨酸，使其终浓度为100μg/mL，于28℃、180r/min条件下培养5d，每株菌进行2次生物学重复。取8mL菌株发酵液，于8000r/min、4℃条件下进行离心，吸取上清进行菌株IAA含量的定量测定。对于IAA含量的定量测定而言，吸取60mL上清于2mL离心管中，然后加入120mL Salkowski试剂于黑暗条件下进行显色，用紫外分光光度计测定530nm条件下各个处理的吸光度。同时，用梯度稀释的IAA溶液(50、10、5、2.5、1.25、0.625和0μg/mL)制作IAA含量与吸光度值的标准曲线，根据标准曲线对菌株产IAA能力进行评价。
采用点接种法，将活化后的菌株于无机磷培养基((NH4)2SO4 0.5g，NaCl 0.3g，KCl0.3g，MgSO4·7H2O 0.3g，Ca3(PO4)2 25g，FeSO4·7H2O 0.03g，MnSO4·H2O 0.03g，葡萄糖10g，PH 7.4-7.6)上，于28℃条件下恒温培养5d，根据菌株周围是否有透明圈产生及透明圈的大小来对菌株解无机磷能力进行评价。
采用点接种法，将活化后的菌株接种到以3mM ACC为唯一氮源的DF培养基(葡萄糖2.0g，葡萄糖酸2.0g，柠檬酸2.0g，微量元素溶液(CaCl2 200mg、FeSO4·7H2O 200mg、H3BO315mg、ZnSO4·7H2O 20mg、Na2MoO4 10mg、KI 10mg、NaBr 10mg、MnCl2 10mg、COCl2 5mg、CuCl25mg、AlCl3 2mg、NiSO4 2mg、去离子水1,000mL)10mL、去离子水990mL)上，以0.2％(w/v)(NH4)2SO4为唯一氮源的DF培养为阳性对照，以DF培养基为阴性对照。将接种后的平板于28℃条件下恒温培养5d，根据三种培养基上菌株的生长状况对菌株产ACC能力进行综合评价。
采用点接种法，将活化菌株接种于铬天青培养基(CAS)上，接种后的平板置于28℃条件下培养7d后，根据菌落周围黄色晕圈的出现与否以及大小来对菌株产铁载体的能力进行评价。
对分离得到的菌株M408F10-3F8产IAA能力、解磷能力、产ACC能力和产铁载体能力等促生指标的测定。通过构建IAA标准曲线(图3)，测定菌株M408F10-3F8在100μg/mL条件下可产生5.59μg/mL的IAA；但不具有解磷、解钾、固氮、产ACC和铁载体的能力(表2)。
表2菌株M408F10-3F8促生特性评价
Figure BDA0002911380860000071
实施例4菌株M408F10-3F8生物膜形成测定
挑取单菌落接种于盛装有100mL LB液体培养基的250mL锥形瓶中，于160rpm/min、30℃条件下过夜培养。在16孔板中分别加入200μL LB、LBG(含有1％甘油(v/v))、LBM(含有0.1mM MnSO4)和LBGM(含有1％甘油(v/v)和0.1mM MnSO4)培养基，取2μL过夜培养的菌液轻轻滴加于不同培养基的液面上，16孔板于30℃条件下静置培养3d，观察生物膜形成情况，并记录。
对菌株M408F10-3F8的生物膜测定结果表明：该菌株在LBGM培养基中可形成明显的生物膜，培养基LBG次之，LBG和LB培养基中无明显生物膜的形成(图4)。
实施例5菌株M408F10-3F8对黄瓜枯萎病的盆栽防效测定
首先将-80℃保存的菌株于LB固体培养基(胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、NaCl 10g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、PH＝7.2-7.4)上进行划线，于28℃恒温箱中培养24h活化。然后将活化后的菌株接种一菌针于盛装有100mL LB液体培养基(胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、NaCl10g、蒸馏水1000mL、PH＝7.2-7.4))的250mL的锥形瓶中。于160rpm/min、30℃条件下振荡培养48h，将发酵液在10000g条件下离心5min，上清液即为去菌体发酵液，菌体用等量无菌水重悬得到菌悬液。
将黄瓜种子播种在育苗盘中进行育苗，育苗一周后，移栽到苗盆中，每盆一株幼苗。移栽后，待黄瓜生长至2叶一心期，采用灌根法进行防效测定试验。试验处理包括：1)只接种25mL黄瓜枯萎和等量无菌水(FOC)；2)同时接种25mL黄瓜枯萎和等量的菌悬液(108CFU/mL)(F8-C-FOC)；3)同时接种25mL黄瓜枯萎和等量的无菌体发酵液(F8-F-FOC)；4)只接种菌悬液(108CFU/mL)(F8-C)；5)只接种无菌体发酵液(F8-F)；6)同时接种25mL黄瓜枯萎和等量的多菌灵药剂(500μg/mL)(Car.)和7)接种25mL无菌水(CK)。每个处理重复4次。接种一个月后进行病情指数、株高、鲜重的统计，并根据病情指数计算防效。
黄瓜枯萎病情指数：
0级：无病症；
1级：植株1/4以下的叶面表现出萎焉症状，茎基部无症状，植株正常生长；
2级：植株1/4-1/2叶面表现出萎焉症状，茎基部1/2以下出现褐变，植株矮化；
3级：植株1/2以上叶面表现出萎焉症状，茎基部1/2以上出现褐变，植株明显矮化；
4级：全株萎焉死亡。
Figure BDA0002911380860000081
表3菌株M408F10-3F8对黄瓜枯萎病的防病促生效果
Figure BDA0002911380860000082
菌株M408F10-3F8菌体和发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防效，防效分别为50.00％和58.00％，与药剂对照多菌灵的防效(50.00％)相当(表3，图5)。此外，与空白对照相比，菌株M408F10-3F8菌体和发酵液均对黄瓜植株具有显著的促生作用。其中，菌株M408F10-3F8发酵液处理下黄瓜植株叶绿素含量(31.46)显著高于空白对照叶绿素含量(26.60)，而M408F10-3F8菌体处理与对照无差异；菌株M408F10-3F8菌体和发酵液处理对黄瓜植株株高均显著高于空白对照株高(64.45cm)，分别为85.43cm和91.88cm；菌株M408F10-3F8菌体和发酵液处理对黄瓜植株鲜重均显著高于空白对照鲜重(17.62g)，分别为29.35g和31.22g；菌株M408F10-3F8菌体和发酵液处理对黄瓜植株干重均显著高于空白对照干重(2.12g)，分别为2.53cm和2.72cm(表3)。
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (9)

1.一株特基拉芽孢杆菌，其特征在于，特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)的保藏编号为CGMCC No.21317。
2.权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌用于制备植物抑菌剂的应用，或用于制备防治植物病原菌引起的植物病害药物的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的植物病原菌选自油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum)病菌、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)病菌、小麦赤霉(Fusarium graminearum)病菌、苹果轮纹(Botryospuaeria berengeriana)病菌、烟草赤星(Alteraria alternata)病菌、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)病菌、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)病菌、黄瓜枯萎(Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)病菌、草莓枯萎(Fusarium oxysporumf.sp.fragariae)病菌、番茄灰霉(Botrytis cinerea)病菌、苹果腐烂(Valsa mali Miyabeet Yamada)病菌和小麦全蚀(Gaeu-mannomyces graminsis(sacc.)Arx&Olivier Vartritici J.walker)病菌。
4.权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌用于制备植物定殖剂、植物生防剂、生物有机肥或植物促生剂的应用。
5.一种制剂，其特征在于，所述的制剂为权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌的菌悬液、发酵液、发酵产物或次生代谢产物。
6.权利要求5所述的制剂用于制备植物抑菌剂的应用，或用于制备防治植物病原菌引起的植物病害药物的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的植物病原菌选自油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum)病菌、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)病菌、小麦赤霉(Fusarium graminearum)病菌、苹果轮纹(Botryospuaeria berengeriana)病菌、烟草赤星(Alteraria alternata)病菌、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)病菌、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)病菌、黄瓜枯萎(Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)病菌、草莓枯萎(Fusarium oxysporumf.sp.fragariae)病菌、番茄灰霉(Botrytis cinerea)病菌、苹果腐烂(Valsa mali Miyabeet Yamada)病菌和小麦全蚀(Gaeu-mannomyces graminsis(sacc.)Arx&Olivier Vartritici J.walker)病菌。
8.一种IAA的制备方法，其特征在于，采用权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌制备IAA。
9.一种生物膜的制备方法，其特征在于，采用权利要求1所述的特基拉芽孢杆菌制备生物膜。
CN202110087397.2A 2021-01-22 2021-01-22 一株特基拉芽孢杆菌及其应用 Active CN112646755B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110087397.2A CN112646755B (zh) 2021-01-22 2021-01-22 一株特基拉芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110087397.2A CN112646755B (zh) 2021-01-22 2021-01-22 一株特基拉芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112646755A true CN112646755A (zh) 2021-04-13
CN112646755B CN112646755B (zh) 2022-06-28

Family

ID=75370641

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110087397.2A Active CN112646755B (zh) 2021-01-22 2021-01-22 一株特基拉芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112646755B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113151094A (zh) * 2021-04-27 2021-07-23 江苏师范大学 一种产挥发性抑菌气体的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN114990000A (zh) * 2022-03-29 2022-09-02 华中农业大学 一种降解dehp的复合微生物菌剂及其在制备有机肥中的应用
CN115873746A (zh) * 2022-08-08 2023-03-31 兰州交通大学 特基拉芽孢杆菌sy89在促进植物生长中的应用
CN115975878A (zh) * 2022-12-15 2023-04-18 鹤山市新的生物制品有限公司 一株特基拉芽孢杆菌菌株及其应用
CN117586925A (zh) * 2024-01-18 2024-02-23 哈尔滨长升吉时农业发展有限公司 特基拉芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101426895B1 (ko) * 2013-01-31 2014-08-05 수원대학교 산학협력단 사구식물 생장을 촉진시키는 바실러스테퀄엔시스 shrp8 미생물 및 이를 이용한 해안사구 토양 안정화방법
CN105695368A (zh) * 2016-04-11 2016-06-22 江苏省农业科学院 一株特基拉芽孢杆菌及其应用
US20160227789A1 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 University Of Florida Research Foundation, Inc. Bacteria and method for improving plant health and growth
CN109536425A (zh) * 2019-01-24 2019-03-29 河南科技大学 一种特基拉芽孢杆菌及其应用
CN109957522A (zh) * 2017-12-25 2019-07-02 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一株特基拉芽孢杆菌cas-mei-2-33及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101426895B1 (ko) * 2013-01-31 2014-08-05 수원대학교 산학협력단 사구식물 생장을 촉진시키는 바실러스테퀄엔시스 shrp8 미생물 및 이를 이용한 해안사구 토양 안정화방법
US20160227789A1 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 University Of Florida Research Foundation, Inc. Bacteria and method for improving plant health and growth
CN105695368A (zh) * 2016-04-11 2016-06-22 江苏省农业科学院 一株特基拉芽孢杆菌及其应用
CN109957522A (zh) * 2017-12-25 2019-07-02 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一株特基拉芽孢杆菌cas-mei-2-33及其应用
CN109536425A (zh) * 2019-01-24 2019-03-29 河南科技大学 一种特基拉芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI-FANG XU ET AL.: "Genomic and Functional Characterization of the Endophytic Bacillus subtilis 7PJ-16 Strain,a Potential Biocontrol Agent of Mulberry Fruit Sclerotiniose", 《MICROBIAL ECOLOGY》 *
周瑚等: "特基拉芽孢杆菌JN-369的分离鉴定及其抑菌物质分析", 《农药学学报》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113151094A (zh) * 2021-04-27 2021-07-23 江苏师范大学 一种产挥发性抑菌气体的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN113151094B (zh) * 2021-04-27 2022-05-13 江苏师范大学 一种产挥发性抑菌气体的特基拉芽孢杆菌及其应用
CN114990000A (zh) * 2022-03-29 2022-09-02 华中农业大学 一种降解dehp的复合微生物菌剂及其在制备有机肥中的应用
CN115873746A (zh) * 2022-08-08 2023-03-31 兰州交通大学 特基拉芽孢杆菌sy89在促进植物生长中的应用
CN115873746B (zh) * 2022-08-08 2023-09-05 兰州交通大学 特基拉芽孢杆菌sy89在促进植物生长中的应用
CN115975878A (zh) * 2022-12-15 2023-04-18 鹤山市新的生物制品有限公司 一株特基拉芽孢杆菌菌株及其应用
CN115975878B (zh) * 2022-12-15 2023-07-07 鹤山市新的生物制品有限公司 一株特基拉芽孢杆菌菌株及其应用
CN117586925A (zh) * 2024-01-18 2024-02-23 哈尔滨长升吉时农业发展有限公司 特基拉芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用
CN117586925B (zh) * 2024-01-18 2024-04-12 哈尔滨长升吉时农业发展有限公司 特基拉芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112646755B (zh) 2022-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112680382B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112646755B (zh) 一株特基拉芽孢杆菌及其应用
CN111088191B (zh) 一种芽孢杆菌和木霉菌联合培养方法及应用
Bashan Inoculants of plant growth-promoting bacteria for use in agriculture
CN102433282B (zh) 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN105886428A (zh) 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用
CN101525587B (zh) 一株链霉菌菌株及其应用
CN113717901B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用
CN104651260B (zh) 一种短短芽孢杆菌bbc-3及其应用与菌剂制备
CN102533593A (zh) 洋葱伯克霍尔德氏菌sd7及其培养方法和应用
CN112195130B (zh) 一种副地衣芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用
CN113969247A (zh) 一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用
Duan et al. Fermentation optimization and disease suppression ability of a Streptomyces ma. FS-4 from banana rhizosphere soil
Novinscak et al. Long term comparison of talc-and peat-based phytobeneficial Pseudomonas fluorescens and Pseudomonas synxantha bioformulations for promoting plant growth
CN108148765B (zh) 一株耐酸拟康宁木霉及其在抑制立枯丝核菌上的应用
CN113755408B (zh) 一种多功能枯草芽孢杆菌、复合菌剂及其应用
CN101518264A (zh) 一种防治植物土传真菌病害的微生物制剂及其应用
TWI740263B (zh) 貝萊斯芽孢桿菌khh13菌株及其增量培養方法與用途
CN107699526A (zh) 一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用
CN108998395B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN112680381B (zh) 一株多粘类芽孢杆菌及其应用
CN114946885A (zh) 一种抗玉竹叶斑病微生物农药
CN106566784A (zh) 防治猕猴桃溃疡病的菌株及其应用
CN107603904B (zh) 一种链霉菌及其应用
Walia et al. Techniques for improving microbial inoculants as a tool for sustainable development

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant