CN112645939A - 一种用阴离子树脂法纯化葛根素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种阴离子树脂法制备葛根素的方法，其具体步骤如下：在50℃的条件下，取粉碎葛根5kg，加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min；常规滤纸过滤1次，重复两到三次，合并滤液，减压浓缩至干得，用水溶解干燥物并定容至600mL，得葛根素提取液；用盐酸或氢氧化钠溶液调节葛根素提取液pH值至6.0，在40℃的条件下，与IRA‑900阴离子交换树脂混合吸附12h，三层纱布过滤1次得阴离子交换后树脂；将交换的IRA‑900阴离子交换树脂在30℃下，用70％甲醇，pH值为7下解吸7h后，收集葛根素解吸液，通过高效液相色谱检测其纯度。
Description
技术领域
本发明涉及了一种用阴离子树脂法制备葛根素的方法，属于天然产物加工技术领域。
背景技术
葛根为豆科植物野葛的干燥根，习称葛根，是卫生部批准的药食同源植物。葛根的分布极为广泛，中国大部地区有产，主要分布于辽宁、河北、河南、山东、安徽、江苏、浙江、福建、台湾、广东、广西、江西、湖南、湖北、重庆、四川、贵州、云南、山西、陕西、甘肃等地，主要生长于山坡草丛或较为阴湿的地方。
葛根含有丰富的异黄酮类、三萜类、芳香类等化合物，其中异黄酮类为主要有效成分。葛根具有解肌退热、生津止渴等功效，在临床上对心脑血管疾病、抗衰老、解酒护肝等具有特殊的疗效。
现代化学研究表明，葛根中存在的主要有效化学成分为黄酮类化合物葛根素、黄豆苷等成分，其中葛根素是本属的特有成分。葛根素是从豆科植物野葛根中提取的一种单一成份黄酮苷，具有活血化瘀、改善微循环、扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量等作用，其制剂葛根素注射剂临床用于治疗心脑血管疾病及视网膜血管病、眼底病及突发性耳聋等。
葛中的黄酮类化合物主要分布于根部，葛根中黄酮类物质的提取主要是根据相似相溶原理来完成的，黄酮类化合物的极性较大，一般需要极性较大的水、甲醇等溶液来完成提取。目前提取黄酮类化合物的方法众多，有酶解法、碱提酸沉法、加热回流法、亚临界水提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、超声辅助提取法等方法，每种方法都有各自的优缺点。中药粗提物中的成分十分复杂，含有许多杂质化合物，因此分离纯化黄酮类化合物是葛根研究的重要步骤。目前，黄酮类化合物分离纯化常用的方法有：结晶与重结晶法、大孔树脂吸附法、凝胶色谱法、离子交换树脂法、超滤法等方法。
大孔吸附树脂是20世纪60年代开始发展的一种有机高聚物吸附剂，多为苯乙烯型或丙酸酯型，根据极性大小，可以将树脂分为非极性、中极性、极性三种。利用大孔吸附树脂对待分离物质的吸附作用和筛选作用达到分离目的的，其吸附作用是由于范德华力或产生氢键的结果，则筛选作用是由树脂本身的多孔性结构决定的。
大孔吸附树脂的理化性质较稳定，在水、酸、碱及常用有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮等) 中均不被溶解，且具有选择性好、流体阻力小、吸附容量大、解吸容易、再生容易等优点。自发展以来，已被广泛应用于工业脱色、废水处理、药物分析、临床鉴定、药物分离提纯等领域。
发明内容
本方案以葛根为原料，使用大孔吸附树脂法纯化葛根素，分别进行了大孔吸附树脂的筛选、单因素对吸附量与解吸量的影响实验、正交实验、验证实验等步骤，为大孔吸附树脂纯化葛根素的研究进展提供分离纯化工艺及数据参考。
本发明提供一种阴离子树脂法制备葛根素的方法，其具体步骤如下：
(1)在50℃的条件下，取粉碎葛根5kg，加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min；
(2)常规滤纸过滤1次，滤渣再加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min，重复两到三次，合并滤液，减压浓缩至干得，用水溶解干燥物并定容至600mL，得葛根素提取液；
(3)用盐酸或氢氧化钠溶液调节葛根素提取液pH值至6.0，在40℃的条件下，与IRA-900 阴离子交换树脂混合吸附12h，三层纱布过滤1次得阴离子交换后树脂；
(4)将交换的IRA-900阴离子交换树脂在30℃下，用70％甲醇，pH值为7下解吸7h后，收集葛根素解吸液，通过高效液相色谱检测其纯度。
所述盐酸或氢氧化钠溶液优选为0.1mol/L盐酸或0.1mol/L氢氧化钠溶液。
所述减压浓缩优选为45-55℃。
技术效果
1、通过IRA-900阴离子交换树脂快速纯化葛根素，大大提高了其生产时间，也降低了其生产成本。
2、本发明方法简单、易于规模化生产。
附图说明
图1：树脂质量对葛根素吸附的效果；
图2：吸附时间对葛根素吸附效果的影响；
图3：吸附温度对葛根素吸附效果的影响；
图4：吸附液pH值对葛根素吸附效果的影响；
图5：解吸时间对葛根素解吸效果的影响；
图6：解吸液浓度对葛根素解吸效果的影响；
图7：解吸温度对葛根素解吸效果的影响；
图8：解吸液pH值对葛根素解吸效果的影响；
图9：供试样品中葛根素高效液相色谱图。
具体实施方式
下面用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。
实施例1
1、标准溶液的配制：准确称量10mg葛根素标准品，用70％甲醇溶解并定容至100mL。此时，葛根素标准使用液的浓度为100μL/mL。吸取相应体积的使用液，配制浓度梯度为5、 10、20、30、50μL/mL的标准溶液系列，放入高效液相色谱仪中进行检测，绘制标准曲线。
2、色谱参考条件：色谱柱：ODSC18，250mm*4.6mm*5μm；流动相：甲醇+36％乙酸+ 水＝25+3+72；流速：0.6mL/min；检测波长：247nm；进样体积：10μL；温度：35℃。
3、葛根素提取液的制备：在50℃的条件下，取粉碎葛根5kg，加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min，常规滤纸过滤1次，滤渣再加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min，重复两到三次，合并滤液，减压浓缩至干得，用水溶解干燥物并定容至600mL，得葛根素提取液。吸取0.5mL提取液至25mL容量瓶中，定容，上机检测葛根素的浓度，备用。
实施例2
1、树脂的预处理
新购买的树脂含有少量杂质，需要除去杂质才可以使用。先用蒸馏水洗涤树脂，直至洗涤液无浑浊现象，用2倍体积的无水乙醇浸泡24h，用无水乙醇洗涤树脂，直至洗涤液无白色浑浊。然后用蒸馏水清洗树脂，直至无醇味。再用体积分数为5％的盐酸溶液浸泡2h，蒸馏水洗至中性，然后用质量分数为5％的氢氧化钠溶液浸泡2h，蒸馏水洗至中性，备用。
2、树脂含水量的测定
用滤纸将完成预处理步骤的树脂表面的水分吸干，称取2.000g，放入80℃烘箱中干燥至恒重，称重，计算树脂的含水量。
树脂含水量＝(干燥前质量-干燥后质量)/干燥前质量*100％
3、阴离子树脂的静态吸附特性
称取2.000g处理好的树脂于洁净的锥形瓶中，准确加入40mL已测好浓度的葛根素提取液，于30℃水浴锅中，磁力搅拌24小时。待树脂饱和吸附后，吸取吸附后溶液，采用高效液相色谱仪检测浓度，计算静态吸附的吸附量和吸附率。
Q：吸附量，mg/g；E：吸附率；c0：提取液中葛根素的浓度，mg/mL；c1：吸附后葛根素溶液的浓度，mg/mL；V1：吸附液体积，mL；m：树脂的质量，g。
将上述饱和吸附的树脂转移至新的锥形瓶中，加入50mL70％甲醇，于30℃水浴锅中，保温24h，待解吸平衡后吸取解吸液，使用高效液相色谱仪检测解吸液中葛根素的浓度。计算静态吸附的解吸量和解吸率。
F：解吸率；D：解吸量，mg/g；V2：解吸液体积，mL；c2：解吸液中葛根素浓度，mg/mL。
4、阴离子交换树脂静态吸附葛根素实验
4.1静态吸附单因素实验
树脂质量对葛根素静态吸附率的影响：分别称取1、2、3、4、5、6g树脂于锥形瓶中，向每个瓶中加入葛根素提取液40mL，于30℃恒温水浴锅中保温24h，然后测其吸附量与吸附率。
吸附时间对葛根素静态吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入 40mL葛根素提取液，将锥形瓶放置在30℃恒温水浴锅中保温，每隔1h取一个样品，测其吸附量与吸附率。
吸附温度对葛根素静态吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入 40mL葛根素提取样液，将每个锥形瓶分别放置于25、30、35、40、45、50℃恒温水浴锅中保温24h，然后测其吸附量与吸附率。
4.2吸附液pH值对葛根素吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，将葛根素提取样液的pH值调节为4、5、6、7、8、9，分别加入锥形瓶中，将锥形瓶放置在30℃恒温水浴锅中保温24h，测其溶液的吸附量与吸附率。
4.3正交试验优化葛根素静态吸附的工艺：在正交试验结果的基础上，对影响葛根素静态吸附效果的因素进行L9(34))正交试验。以葛根素吸附率为考察指标，确定葛根素静态吸附的最佳条件。正交试验水平因素见表1.
表1葛根素静态吸附正交试验水平因素表
5、阴离子交换树脂解吸实验，按照吸附实验的最佳条件，进行葛根素静态吸附实验，制备吸附树脂，备用。
5.1单因素实验对树脂解吸的影响
(1)解吸时间对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入50mL 70％甲醇，于30℃恒温水浴锅中保温，每隔1h取一个锥形瓶(4-9h)，测解吸液中葛根素的浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。
(2)解吸液浓度对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，将甲醇稀释为 50％、60％、70％、80％、90％、100％，依次向各个锥形瓶中加入50mL，将锥形瓶置于30℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中葛根素的浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。
(3)解析温度对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入50mL 70％甲醇，将锥形瓶置于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中葛根素的浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。
(4)解吸液pH值对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，将70％甲醇调节pH为4、5、6、7、8、9，依次向各个锥形瓶中加入50mL解吸液，将锥形瓶置于30℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中葛根素的浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。
5.2正交试验优化阴离子交换树脂解吸葛根素的工艺：根据单因素实验的结果，对影响阴离子交换树脂解吸葛根素效果的因素进行L9(34))正交试验。以解吸率为指标，确定了阴离子交换树脂解吸葛根素的最佳工艺条件。正交试验水平因素见表2。
表2解吸葛根素正交试验水平因素表
6、结果与分析
6.1单因素实验对阴离子交换树脂吸附葛根素效果的影响
(1)树脂质量对葛根素静态吸附率的影响：称取1、2、3、4、5、6g树脂于锥形瓶中，分别向每个瓶中加入葛根素提取液40mL，于30℃恒温水浴锅中保温24h，然后测其吸附量与吸附率。由图1看出，树脂质量增加，吸附率增加。当树脂质量达到4g之后，吸附率开始趋于平稳，处于几乎不增加的状态，因此选择4g为实验树脂质量。
(2)吸附时间对葛根素静态吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入40mL葛根素提取液，将这6个锥形瓶放置在30℃恒温水浴锅中保温，每隔1h 取一个样品，测其溶液的吸附量与吸附率。结果见图2，随着时间的增加，吸附率逐渐增加，当时间为12h时，吸附率最大，但是时间继续延长，吸附率反而下降，可能是因为树脂上吸附的葛根素被重新解吸到溶液中，导致吸附率下降。因此，选取12h为实验时间。
(3)吸附温度对葛根素静态吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入40mL葛根素提取液，将每个锥形瓶分别放置于25、30、35、40、45、50℃恒温水浴锅中保温24h，然后测其吸附量与吸附率。结果见图3，随着温度的增加，树脂的吸附率缓慢增加，当温度达到40℃时，吸附率达到最佳，温度继续上升，吸附率开始急剧下降，可能是因为温度过高，阴离子交换树脂内部结构开始发生变化，导致吸附效果下降。
(4)吸附液pH值对葛根素吸附率的影响：称取6份2g树脂于锥形瓶中，将葛根素提取液的pH值调为4、5、6、7、8、9，加入锥形瓶中，将锥形瓶放置在30℃恒温水浴锅中保温24h，测其溶液的吸附量与吸附率。结果见图4，随着pH值的增加，树脂的吸附效果也在增强，当pH值为6时，效果最好，pH继续增加，吸附率开始下降。
6.2正交试验优化葛根素静态吸附工艺的研究：依据单因素实验的结果，对影响阴离子交换树脂吸附葛根素效果的因素进行L9(34))正交试验。以吸附率为指标，确定了阴离子交换树脂吸附葛根素的最佳工艺。实验结果见表3。
表3葛根素静态吸附正交试验结果
由极差R可以看出，A、B、C、D四个因素对阴离子交换树脂吸附葛根素效果的影响大小为：B>D>A>C，即吸附时间>pH值>树脂质量>吸附温度。阴离子交换树脂对葛根素吸附的最佳工艺为：B2D2A2C2。即：吸附时间为12h，pH值为6，树脂质量为4g，吸附温度为40℃。 6.3单因素实验对阴离子交换树脂解吸葛根素的效果
(1)解吸时间对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入50mL 70％甲醇，于30℃恒温水浴锅中保温，每隔1h取一个样品(4-9h)，测解吸液中的葛根素浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。结果见图5，树脂的解吸率随着时间的延长而增加，当解吸时间为7h时，解吸率最大，是因为解吸液中的葛根素达到饱和状态，时间继续延长，解析率不再增加，可能是因为解吸液中的葛根素重新被树脂吸附，所以呈现缓慢下降的趋势。
(2)解吸液浓度对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，将甲醇分别稀释为50％、60％、70％、80％、90％、100％，依次向各个锥形瓶中加入50mL解吸液，将锥形瓶置于30℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中的葛根素浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。结果见图6，随着解吸液浓度的增加，解吸率耶跟着增加，当浓度为70％时，解吸达到最大，随着浓度继续增大，解吸率反而开始下降。
(3)解吸温度对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，向每个锥形瓶中加入50mL 70％甲醇，分别将锥形瓶置于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中的葛根素浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。结果见图7，当温度上升时，树脂的解吸率随之增加，温度达到30℃时，解吸率达到最大，温度继续上升，解吸率开始下降。
(4)解吸液pH值对解吸效果的影响：称取6份2.0g吸附树脂于锥形瓶中，将70％甲醇的pH值调为4、5、6、7、8、9，依次向各个锥形瓶中加入50mL，将锥形瓶置于30℃恒温水浴锅中保温12h，测解吸液中的葛根素浓度，计算树脂的解吸量与解吸率。结果见图 8。树脂的解吸率随着pH值的增加而增加，当pH＝7时，解吸达到最大，pH继续增大，解吸率反而下降，可能是因为，随着pH增大，阴离子交换树脂开始进行再生，OH-开始取代树脂上吸附的葛根素阴离子，从而导致解吸率下降。
6.4正交试验优化阴离子交换树脂解吸葛根素工艺的研究：依据单因素实验的结果，对影响阴离子交换树脂解吸葛根素效果的因素进行L9(34))正交试验。以解吸率为指标，确定了阴离子交换树脂解吸葛根素的最佳工艺条件。正交试验结果见表4。
由极差R值可以看出，A、B、C、D四个因素对阴离子交换树脂解吸葛根素效果的影响大小为D>C>B>A，即解吸液pH值>解吸温度>解吸液浓度>解吸时间。阴离子交换树脂对葛根素解吸工艺的最佳工艺为D2C2B2A2，即：解吸液pH值为7，解吸温度为30℃，解吸液浓度为70％，解吸时间为7h。
以单因素实验为基础，考察了树脂质量、吸附时间、吸附温度及pH值四个因素对IRA-900 阴离子交换树脂吸附葛根素的效果，以正交试验优化了吸附工艺，结果显示，吸附时间为 12h，pH值为6，树脂质量为4g，吸附温度为40℃，此条件下，葛根素的吸附率为75.6182％。同时进行解吸实验，通过单因素实验考察解吸液浓度、解吸时间、解吸温度、解吸液pH值对解吸实验的影响，通过正交试验确定了解吸的最佳工艺，结果表明：解吸液pH值为7，解吸温度为30℃，解吸液浓度为70％，解吸时间为7h，此时，解吸率为80.5390％。通过高效液相色谱仪检测，纯度可达95.02％。
表4解吸葛根素正交试验结果
Claims (3)
1.一种阴离子树脂法制备葛根素的方法，其具体步骤如下：
(1)在50℃的条件下，取粉碎葛根5kg，加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min；
(2)常规滤纸过滤1次，滤渣再加入70％甲醇溶液2L，常温超声提取20min，重复两到三次，合并滤液，减压浓缩至干得，用水溶解干燥物并定容至600mL，得葛根素提取液；
(3)用盐酸或氢氧化钠溶液调节葛根素提取液pH值至6.0，在40℃的条件下，与IRA-900阴离子交换树脂混合吸附12h，三层纱布过滤1次得阴离子交换后树脂；
(4)将交换的IRA-900阴离子交换树脂在30℃下，用70％甲醇，pH值为7下解吸7h后，收集葛根素解吸液，通过高效液相色谱检测其纯度。
2.权利要求1方法，其中所述盐酸或氢氧化钠溶液优选为0.1mol/L盐酸或0.1mol/L氢氧化钠溶液。
3.权利要求1方法，其中所述减压浓缩优选为45-55℃。
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| WO2002085392A1 (fr) * | 2001-04-23 | 2002-10-31 | Weilin Wang | Procedes d'utilisation d'un extrait de puerariae radix, flavone de puerariae radix et preparation contenant une puerarine pour la prevention et le traitement de nouvelles indications |
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| CN1927876A (zh) * | 2005-09-07 | 2007-03-14 | 天津天士力现代中药资源有限公司 | 葛根素提取物的生产方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 占晨: "江西葛资源品质普查及葛根素的提取工艺", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》, no. 03, pages 057 - 66 * |
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