CN112640997A - 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于青贮饲料制备技术领域，涉及一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95‑4.45，且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，将所得培养液离心，收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料，即可提高青贮饲料有氧稳定性。本发明通过控制青贮饲料接种培养物的产酸量，乳酸、乙酸的含量及比例，使乳酸浓度/乙酸浓度比值在的比例在9.69‑13.25之间，进而在制备青贮饲料过程中可以有效抑制霉菌、酵母菌的生长，大幅度的提高青贮饲料的有氧稳定性，可将开窖后青贮饲料的储存时间延长至40d以上，而且可以提高青贮饲料感官评价评分，改善青贮饲料的品质。
Description
技术领域
本发明属于青贮饲料制备技术领域，涉及一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。
背景技术
青贮是通过利用青贮材料中乳酸菌厌氧发酵，使原料产生有机酸，降低pH值，抑制和杀死各种有害微生物的繁衍，从而达到保存饲料长时间使用的一种贮藏方式。青贮生物饲料是反刍动物重要的饲料来源，青贮饲料能有效保存青贮植物的营养成分，保证原料青绿时的鲜嫩汁液，质地柔软，适口性好，消化率高等优点，是反刍动物(如牛、羊等)的重要的饲料来源。青贮可发生在筒仓、青贮饲料堆、青贮饲料窖、青贮饲料捆、或适于所选植物材料青贮的任何其它方法中。
青贮是解决青饲料不易贮藏的一个有效而经济的方法。但是，自然状态下青贮比较困难，目前普遍采用添加菌剂青贮，通过在青饲料中加入植物乳杆菌、布氏乳杆菌、短乳杆菌、戊糖片球菌等菌株，加快青贮的发酵速度，进而提高青贮饲料的品质。CN106615609B“公开了所提供的布氏乳杆菌可以增加苜蓿及粳稻秸青贮发酵品质，降低蛋白质损失，增加青贮饲料有氧稳定性；专利所述的有氧稳定性时间为最长为422h，有氧稳定性时间较短，不利于对青贮饲料的储存。
CN 106103697 B公开了一种用于处理青贮饲料以增强有氧稳定性的方法，所述方法通过抑制选自酵母、霉菌和孢子形成细菌的微生物的生长提高青贮饲料的发酵和稳定性，并且允许较早的有氧暴露，该发明有氧稳定性时间为30d。该专利中使用的菌种为布氏乳杆菌或短乳杆菌，专利中没有提及菌株筛选评价方法，
CN 106028829 B提供了一种用于处理青贮饲料的方法，其包括将青贮饲料接种剂加入青贮饲料中，所述青贮饲料接种剂能有效防止或降低有氧酸败。该发明中提及的青贮饲料有氧稳定性时间73.05h，有氧稳定性较差，影响青贮饲料开窖后的品质。
上述各方法，虽然能够一定程度上的提高相应的有氧稳定性，但青贮饲料的有氧稳定性时间较短，影响青贮饲料开窖后饲料的品质，不利于青贮饲料的长期储存，进而需要提供一种延长有氧稳定性的方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为为：
一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法，将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45，且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，将所得培养液离心，收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料，即可提高青贮饲料有氧稳定性。
所述青贮饲料发酵剂接种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45，且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，丙酸浓度在小于等于0.92g/L，将所得培养液离心，收集沉淀将其按以1×105cfu/g～5×105cfu/g(青贮饲料)接种至青贮原料中，发酵成青贮饲即可提高青贮饲料有氧稳定性。
所述培养基为改良的MRS培养基。
所述改良的MRS培养基配方为：蛋白胨10.0-20g/L，牛肉膏10.0-16g/L，酵母粉5.0-8.8g/L，葡萄糖20.0-30g/L，乙酸钠2.8-8.6g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，MnSO4·4H2O 0.05g/L，吐温-801mL，pH 6.2～6.4。
所述青贮饲料发酵剂培养后，培养物的细胞数达到5×108cfu/mL-4×109cfu/mL，且发酵液的pH值达到3.95-4.45，乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，丙酸浓度在小于等于0.92g/L。
所述青贮饲料原料为全株玉米、不带穗玉米秸秆、苜蓿，也适用于其他可以青贮的其他秸秆类植物。
所述青贮饲料发酵剂为乳酸菌和/或青贮饲料培养物。
所述乳酸菌为布氏乳杆菌、短乳杆菌、棒状乳杆菌、希氏乳杆菌、乳脂明串球菌中的一种或几种。
本发明的优点与积极效果为：
本发明通过控制青贮饲料接种培养物的产酸量，乳酸、乙酸的含量及比例，使乳酸浓度/乙酸浓度比值在的比例在9.69-13.25之间，进而在制备青贮饲料过程中可以有效抑制霉菌、酵母菌的生长，大幅度的提高青贮饲料的有氧稳定性，可将开窖后青贮饲料的储存时间延长至40d以上，而且可以提高青贮饲料感官评价评分，改善青贮饲料的品质。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
下述青贮饲料有氧稳定性测定：青贮发酵结束后，每个处理组随机取3处保存完好的青贮饲料，混匀后取样，取混匀后的饲料800～1000g置于大的塑料封口袋中，直至塑料袋装满，用牙签扎数个小孔，再套上一个宽松不封口的塑料袋，防止交叉污染和减少水分损失，用50℃的普通温度计测定温度变化。样品都置于阴暗处，环境温度根据实际情况确定，温度变化每4h记录1次，当青贮物料的温度超过环境温度2℃时为止。试验中的温度计、牙签等用具使用前均须紫外灭菌。
pH值测定：青贮完成后，打开上述密封袋，分别将各组的青贮饲料混合均匀，准确称取20克青贮饲料，加入180ml蒸馏水，搅拌均匀，用组织捣碎机搅碎1min静置沉淀，然先后用四层纱布和定性滤纸过滤，滤出草渣得到浸出液，用pH计直接测定浸出液的pH值即青贮饲料的pH值。
高效液相测定有机酸含量的方法：设备型号Agilent 1260，色谱柱Agilent SB-C18；液相条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.08％的磷酸溶液，A:B＝5：95；检测波长200nm，流速0.7mL/min；上样量10μL。
实施例1
取市售青贮玉米秸秆20g，放置于的500mL的三角瓶中(瓶中含180mL无菌水)，密封，置于摇床上以150r/min摇动2h，吸取1mL上清液加入到9mL无菌水中，漩涡振荡，而后利用无菌水进行稀释，稀释成10-4、10-5、10-6、10-7等4个梯度，分别取4个梯度的菌液100μL涂布于改良的固体MRS平板培养基上，30℃厌氧培养48-72h，根据菌落颜色、大小、光泽、是否有透明圈等挑取单菌落，将挑取单菌落在MRS固体培养基上划线，30℃恒温厌氧培养24-60h，按上述方式重复划线分离培养3次，直至培养物形态单一，即获得纯的培养物。
将该纯培养物，转接至改良的MRS培养基中培养24h后测定发酵液中的pH为4.45，并利用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸，该培养物乳酸含量为6.89g/L，乙酸含量为0.52g/L，丙酸为0.36g/L，无丁酸产生，乳酸浓度/乙酸浓度比值为13.25。高效液相测定有机酸含量的方法：设备型号Agilent 1260，色谱柱Agilent SB-C18；液相条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.08％的磷酸溶液，A:B＝5：95；检测波长200nm，流速0.7mL/min；上样量10μL。
挑取该培养物使用改良的MRS液体培养基培养24h，菌落数可达到1.5×109cfu/mL(通过涂布平板菌落计数)，离心收集菌体，待用，用于制备玉米青贮试验。
制备青贮饲料：将该纯培养物接种至玉米秸秆中，具体为：全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长，并将上述离心后获得纯培养物按试验设计用量2×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中，用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上，并搅拌均匀；装于青贮袋中，抽真空后封口储存于室温环境中，环境温度为22℃-28℃之间，青贮时间45d，试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性，并进行感官评定。试验做3个平行。青贮完成后，青贮玉米秸秆为黄绿色，具有芳香酸味，外形湿润紧密，感官形象较佳；测定青贮玉米pH为3.89，有氧稳定性时间达到45d，大大延长了青贮饲料的储存周期。
实施例2
取市售青贮苜蓿20g，放置于的500mL的三角瓶中(瓶中含180mL无菌水)，密封，置于摇床上以150r/min摇动2h，吸取1mL上清液加入到9mL无菌水中，漩涡振荡，而后利用无菌水进行稀释，稀释成10-4、10-5、10-6、10-7等4个梯度，分别取4个梯度的菌液100μL涂布于改良的固体MRS平板培养基上，30℃厌氧培养48-72h，根据菌落颜色、大小、光泽、是否有透明圈等挑取单菌落，将挑取单菌落在MRS固体培养基上划线，30℃恒温厌氧培养24-60h，按上述方式重复划线分离培养3次，直至培养物形态单一，即获得纯的培养物。
将该纯培养物，转接至改良的MRS培养基中培养24h后测定发酵液中的pH为4.21，并利用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸，其中乳酸含量为19.16g/L，乙酸含量为1.98g/L，无丙酸、丁酸产生，乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69。高效液相测定有机酸含量的方法：设备型号Agilent 1260，色谱柱Agilent SB-C18；液相条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.08％的磷酸溶液，A:B＝5：95；检测波长200nm，流速0.7mL/min；上样量10μL。挑取该培养物使用改良的MRS液体培养基培养24h，培养温度为30℃，该菌株菌落数可达到2.5×109cfu/mL(通过涂布平板菌落计数)，离心收集菌体，待用，用于制备苜蓿青贮试验。
制备青贮饲料：以2年生、当年第2次刈割(8月份)的紫花苜蓿为青贮原料，刈割后，植株在阳光下萎蔫4h，切碎至1.0-1.5cm。将该纯培养物接种至苜蓿秸秆中，按试验设计用量5×105cfu/g苜蓿溶于500g去离子水中，用喷雾器均匀的喷洒在30kg切碎的苜蓿上，并搅拌均匀；装于青贮袋中，抽真空后封口储存于室温环境中，环境温度为22℃-28℃之间，青贮周期60d，试验后测定青贮苜蓿的pH值及有氧稳定性，并进行感官评定。试验做3个平行。青贮苜蓿，60d后测定pH为3.98，有氧稳定性时间达到42d，大大延长了青贮饲料的储存周期。
实施例3
将市售菌株棒状乳杆菌，在MRS培养基中培养20h后测定发酵液中的pH为3.95，发酵液中有机酸采用高效液相色谱法测定，其中乳酸含量为28.65g/L，乙酸含量为2.61g/L，丙酸为0.92g/L，无丁酸产生，乳酸浓度/乙酸浓度比值为10.98。此菌株使用MRS液体培养基培养20-24h，离心收集菌体，涂布平板菌落计数，该菌株菌落数可达到3.0×109cfu/mL。
青贮试验：全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长，并将离心后的棒状乳杆菌菌体按试验设计用量1×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中，用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上，并搅拌均匀；装于青贮袋中，抽真空后封口储存于室温环境中，环境温度为22℃-28℃之间，青贮周期45d，试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性，并进行感官评定。试验做3个平行。45d测定青贮玉米的pH值为3.93，青贮玉米外观为黄绿色，有芳香酸味，感官评定较佳；有氧稳定性时间为41.3d，延长了青贮饲料的保质期。
对比例
将市售菌株布氏乳杆菌(保藏号：CGMCC1.15607)采用MRS培养基，在厌氧条件下，培养24h后测定发酵液的pH为4.41，并用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸，乳酸浓度/乙酸浓度比值为13.26，其中乳酸含量为8.57g/L，乙酸含量为0.65g/L，丙酸为0.34g/L，无丁酸产生。该菌株使用改良的MRS液体培养基培养24h，涂布平板菌落计数，该菌株菌落数可达到1.3×109cfu/mL，离心收集菌体，用于制备玉米青贮试验。
制备青贮饲料：
全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长，并将上述离心后的菌体按试验设计用量2×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中，用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上，并搅拌均匀；装于青贮袋中，抽真空后封口储存于室温环境中，环境温度为22℃-28℃之间，青贮周期45d，试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性，并进行感官评定。试验做3个平行。45d后测定青贮秸秆的pH为3.83，有氧稳定性时间为15.5d；青贮秸秆颜色为黄褐色，有浓的酸味，秸秆外观湿润，感官评价较好。
Claims (8)
1.一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45，且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，将所得培养液离心，收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料，即可提高青贮饲料有氧稳定性。
2.按权利要求1所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述青贮饲料发酵剂接种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45，且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，丙酸浓度在小于等于0.92g/L，将所得培养液离心，收集沉淀将其按以1×105cfu/g～5×105cfu/g(青贮饲料)接种至青贮原料中，发酵成青贮饲即可提高青贮饲料有氧稳定性。
3.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述培养基为改良的MRS培养基。
4.按权利要求3所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于所述改良的MRS培养基配方为：蛋白胨10.0-20g/L，牛肉膏10.0-16g/L，酵母粉5.0-8.8g/L，葡萄糖20.0-30g/L，乙酸钠2.8-8.6g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，MnSO4·4H2O 0.05g/L，吐温-801mL，pH 6.2～6.4。
5.按权利要求2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述青贮饲料发酵剂培养后，培养物的细胞数达到5×108cfu/mL-4×109cfu/mL，且发酵液的pH值达到3.95-4.45，乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69～13.25，丙酸浓度在小于等于0.92g/L。
6.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述青贮饲料原料为全株玉米、不带穗玉米秸秆、苜蓿，也适用于其他可以青贮的其他秸秆类植物。
7.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述青贮饲料发酵剂为乳酸菌和/或青贮饲料培养物。
8.按权利要求7所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法，其特征在于：所述乳酸菌为布氏乳杆菌、短乳杆菌、棒状乳杆菌、希氏乳杆菌、乳脂明串球菌中的一种或几种。
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|---|---|---|---|---|
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| CN116790423A (zh) * | 2023-05-18 | 2023-09-22 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104365995A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-02-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种用于制备青贮饲料的微生物添加剂 |
| CN107828681A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-03-23 | 四川省草原科学研究院 | 高寒牧区裹包青贮用混合乳酸菌制剂 |
| CN108570421A (zh) * | 2017-03-09 | 2018-09-25 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株植物乳杆菌菌株及其青贮饲料发酵剂 |
| CN108935972A (zh) * | 2018-05-14 | 2018-12-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一种饲用大豆与甜高粱混贮的方法 |
| CN111534456A (zh) * | 2020-04-03 | 2020-08-14 | 中国科学院微生物研究所 | 一种复合乳酸菌剂及其在甘蔗尾叶青贮中的应用 |
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104365995A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-02-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种用于制备青贮饲料的微生物添加剂 |
| CN108570421A (zh) * | 2017-03-09 | 2018-09-25 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株植物乳杆菌菌株及其青贮饲料发酵剂 |
| CN107828681A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-03-23 | 四川省草原科学研究院 | 高寒牧区裹包青贮用混合乳酸菌制剂 |
| CN108935972A (zh) * | 2018-05-14 | 2018-12-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一种饲用大豆与甜高粱混贮的方法 |
| CN111534456A (zh) * | 2020-04-03 | 2020-08-14 | 中国科学院微生物研究所 | 一种复合乳酸菌剂及其在甘蔗尾叶青贮中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 黄峰等: "青贮微生物及其对青贮饲料有氧稳定性影响的研究进展", 《动物营养学报》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115669809A (zh) * | 2022-10-17 | 2023-02-03 | 湖南农业大学 | 一种玉米青贮添加剂 |
| CN116790423A (zh) * | 2023-05-18 | 2023-09-22 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
| CN116790423B (zh) * | 2023-05-18 | 2023-11-28 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
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