CN112625949B - 一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用 - Google Patents

一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一株马赛类芽孢杆菌(Paenibacillus massiliensis)HMQAU19034，于2020年1月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.19419。本发明还公开了该菌株制备的微生物菌剂、制备方法及其在防治植物线虫病害中的应用。本发明的HMQAU19034菌株对根结线虫有很好的生防效果，既对二龄幼虫有较高的毒杀作用，又能诱导植物产生抗病性，特别是对黄瓜根结线虫病的防治效果明显；本发明所提供的HMQAU19034菌株防治效果稳定，对环境友好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。

Description

一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域，具体涉及一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用。
背景技术
根结线虫Meloidogyne spp.是蔬菜生产上最具危害性和广泛性的植物病原线虫，能够侵染114个科的3000多种植物，其中遭受根结线虫严重侵染的植物有茄科、葫芦科植物，同时根结线虫的侵染所造成的伤口，致使作物根部病害严重发生，每年造成巨大的经济损失。据不完全统计，线虫病害使我国各种作物年平均产量损失达10-15％，全球每年因线虫造成的损失达1000亿美元。
目前，防治线虫的主要方法仍是化学防治，目前灭线磷、溴甲烷、涕灭威等化学杀线虫剂在国内几乎都被禁用或限制使用，线虫对现有杀线剂的抗药性也不断较强，可选用的化学药剂种类更少了，因此筛选高效、微生物杀线剂成为趋势。植物内生菌资源丰富，对生态环境的安全性更高，可产生与植物相同或相似的药用活性物质，是筛选获得高效安全杀线虫菌株的天然宝库。
本发明人在近期的研究中首次发现马赛类芽孢杆菌(Paenibacillusmassiliensis)HMQAU19034菌株对根结线虫二龄幼虫有较强的致死活性，该细菌在黄瓜根结线虫病的防治中有着重要的应用价值，而该细菌的杀线虫活性及其在根结线虫病中的应用未见报道。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的不足，提供一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用。
本发明第一个目的在于提供一种从西洋参根内分离并筛选出来的生防细菌——(Paenibacillus massiliensis)，丰富了根结线虫生防菌的菌种资源，为研究开发生物杀线剂奠定基础。
本发明第二个目的在于提供一种利用上述菌株HMQAU19034生产的微生物菌剂。
本发明第三个目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。
本发明第四个目的在于提供上述微生物菌剂对根结线虫的生测方法。
本发明第五个目的在于提供上述菌株HMQAU19034防治根结线虫病的室内盆栽试验方法。
本发明第六个目的在于提供上述菌株HMQAU19034防治根结线虫病的分根试验方法。
本发明第七个目的在于提供上述菌株HMQAU19034在诱导植物对根结线虫产生抗性的应用。
本发明第八个目的在于提供上述菌株HMQAU19034的鉴定方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明筛选鉴定得到一株马赛类芽孢杆菌(Paenibacillus massiliensis)HMQAU19034，于2019年9月分离自山东省莱阳市万第镇小院村三年生西洋参根结内，并于2020年1月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.19419。
本发明所提供的一种由上述的马赛类芽孢杆菌(Paenibacillus massiliensis)HMQAU19034制备的微生物菌剂，所述微生物菌剂含有菌株HMQAU19034和/或菌株HMQAU19034的代谢产物。
优选的，本发明所提供的上述的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为菌株HMQAU19034的发酵液或者发酵滤液。
优选的，本发明所提供的上述的微生物菌剂，所述微生物菌剂为液体菌剂，且在该菌剂中活菌和/或活芽孢的数量≥1.7～2.0×109个/mL。
本发明所提供的微生物菌剂的制备方法，具体步骤包括：
(1)固体LB培养基制备；
(2)液体LB培养基制备；
(3)活化菌株：挑取一环菌株HMQAU19034菌落，接种在50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养24h，制成种子液；
(4)发酵液的制备：将种子液以1/50的接种量接种于50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养48h，制备菌株HMQAU19034发酵液；
(5)发酵滤液的制备：将制备好的发酵液于4℃，8000r/min离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，制备菌株HMQAU19034发酵滤液。
本发明所提供的固体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，15-20g琼脂粉，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
本发明所提供的液体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
基于同一个发明构思，本发明提供了一种微生物菌剂的应用，所述微生物菌剂用于植物线虫病害的防治。
基于同一个发明构思，本发明提供了一种植物线虫病害的防治方法，所述方法是利用上述的马赛类芽孢杆菌(Paenibacillus massiliensis)菌株HMQAU19034或者上述的微生物菌剂处理。
根据本发明提供HMQAU19034的发酵液和发酵滤液菌剂可作为单剂或组合制剂利用或施用，这样的制剂可包括农业上合适的助剂、溶剂、载体、表面活性剂或填充剂。
需要说明的是，本发明的菌剂可用于防治各种线虫病害。
本发明的菌剂可用于防治的线虫实例包括，但不限于根结线虫，这里所使用的线虫是指植物线虫，所述植物线虫意指对植物造成伤害的植物寄生线虫和生活在土壤中的线虫。植物寄生线虫包括，但不仅限于，体外寄生虫，例如剑线虫属、长针线虫属、毛刺线虫属；半寄生物例如穿刺线虫属；迁移性内寄生虫，例如短体属、穿孔线虫属和Scutellonernaspp.；固着性寄生虫，例如异皮线虫属、Globoderal spp.和根结线虫属；茎和叶内寄生虫，例如茎线虫属、滑刃线虫属和Hirshmaniella spp.。尤其是有害的根寄生性线虫，例如异皮线虫属或球异皮线虫属的孢囊线虫和根结线虫属的根结线虫。然而，这里描述的化合物的使用不局限于这些属或物种，且也以同样的方式扩展到其他线虫。
本发明中的菌剂可作用的植物并不是特别限制的：例如，谷物(例如水稻、大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉米、高粱等)、豆类(大豆、赤小豆、菜豆、蚕豆、豌豆、花生等)，果树或水果(苹果、柑橘、梨、葡萄、桃、杏、樱桃、核桃、扁桃、香蕉、草莓等)、蔬菜(甘蓝、番茄、菠菜、花椰菜、生菜、洋葱、葱、辣椒等)、块根作物(胡萝卜、马铃薯、甘薯、萝卜、莲藕等)、经济作物(棉、麻、油菜、甜菜、甘蔗、橄榄、橡胶、咖啡、烟草、茶叶等)、牧场用植物(果园草、高粱、三叶草、紫花苜蓿等)、草坪用草(高丽草、小糠草等)、调味作物(薰衣草、迷迭香、百里香、香菜、胡椒、姜等)和开花植物(菊花、玫瑰、兰花等)。
根据本发明的菌剂对植物和植物部位的处理使用常用的处理方法直接进行或作用于其周围、生长地进行，例如通过浸渍、喷涂、雾化、灌溉、挥发、撒粉、撒播、发泡、涂布、浇灌、滴水灌溉等，并且在繁殖材料的情况下，尤其是种子的情况下，还通过一层或多层涂覆等作为用于干燥种子的处理粉末、处理种子的溶液、用于浆液处理的水溶性粉末。也可通过超低容量的办法施用菌剂，或注射菌剂本身到土壤中。
本发明的有益效果是：
1.本发明的HMQAU19034菌株对根结线虫有很好的生防效果，既对二龄幼虫有较高的毒杀作用，又能诱导植物产生抗病性，特别是对黄瓜根结线虫病的防治效果明显。具体的，实施例的研究表明，菌株HMQAU19034发酵滤液对南方根结线虫的J2有较强的毒杀作用，24h致死率达94.21％；盆栽试验结果表明，菌株HMQAU19034发酵液对黄瓜根结线虫病相对防效达到66.7％；进一步的，菌株HMQAU19034的发酵液对南方根结线虫都有明显的防治效果，其根结级数明显降低，降低65.73％；而且，菌株HMQAU19034发酵液能够促进植物CAT酶、POD酶活的提高。
2.本发明所提供的HMQAU19034菌株防治效果稳定，对环境友好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。
附图说明
图1为菌株HMQAU19034革兰氏染色图；
图2为基于16S基因序列构建的细菌HMQAU19034和相关细菌的邻接法系统发育树，其中，分支处的数值为Bootstrap法重复1000次评估得到的各节点支持率；标尺0.01为进化距离；
图3为实施例4的操作示意图；
图4为菌株HMQAU19034发酵液处理组及对照组诱导黄瓜抗病性分根试验根结，其中A为浇灌菌株HMQAU19034发酵液处理组，B为浇灌等量清水对照组；图5为实施例5的操作示意图；
图6为实施例5中不同处理对根部CAT酶活的影响，其中，每列中字母不同者表示差异达显著水平(P<0.05)；
图7为实施例5中不同处理对根部POD酶活的影响，其中，每列中字母不同者表示差异达显著水平(P<0.05)；
图8为实施例5中不同处理对根部SOD酶活的影响，其中，每列中字母不同者表示差异达显著水平(P<0.05)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的内容，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。
本发明中，马赛类芽孢杆菌(Paenibacillus massiliensis)菌株HMQAU19034或被简称为HMQAU19034。
本发明所提供的微生物菌剂的制备方法，具体步骤包括：
(1)固体LB培养基制备；
(2)液体LB培养基制备；
(3)活化菌株：挑取一环菌株HMQAU19034菌落，接种在50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养24h，制成种子液；
(4)发酵液的制备：将种子液以1/50的接种量接种于50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养48h，制备菌株HMQAU19034发酵液；
(5)发酵滤液的制备：将制备好的发酵液于4℃，8000r/min离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，制备菌株HMQAU19034发酵滤液。
本发明所提供的固体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，15-20g琼脂粉，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
本发明所提供的液体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
实施例1拮抗菌株的分离筛选和鉴定
(1)分离筛选
2019年9月于山东省莱阳万弟镇小院村采集具有根结线虫根结的西洋参根部，将约1克重的带根结的西洋参根，表面消毒，之后用消毒的剪刀剪碎，加入灭菌水1mL，用灭菌后的研钵和研棒研磨，把研磨汁液采用稀释平板法分离细菌菌株，培养基为固体LB培养基，待长出菌落后，挑取细菌单菌落于LB固体平板划线纯化并保存。
(2)形态鉴定
将斜面上的菌株转接到固体LB培养基平板上，进行三区划线，在30℃培养箱中培养48h，待长成明显单菌落后观察菌落形态，并通过革兰氏染色简单观察菌体形态。
菌株HMQAU19034革兰氏染色如图1所示，革兰氏染色呈阳性。菌落边缘不规则，表面不光滑，不透明。
(2)生理生化鉴定
根据目标菌株的形态特征，选取常见的生理生化指标，参照东秀珠的生理生化鉴定方法(参考文献：东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京:科学出版社，2001)进行鉴定。鉴定结果如表1所示。初步鉴定菌株为马赛类芽孢杆菌(Paenibacillusmassiliensis)。
表1菌株生理生化鉴定
Figure BDA0002845864910000081
注：“+”表示反应为阳性或菌株可生长，“-”表示反应为阴性或者无变化，菌株不可生长。
(3)分子鉴定
使用细菌基因组DNA提取试剂盒(Bacterial DNA Kit)提取HMQAU19034基因组DNA，-20℃冰箱中保存备用。以提取的基因组DNA为模板，采用细菌16S rDNA的通用引物27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGTCAGAACGAACGCT-3'和1492R:5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC-3'进行PCR扩增。
扩增反应体系反应体系为25μL：10×PCR反应缓冲液2.5μL，dNTPs(10mmol/L)2μL，引物(10mmol/L)各1μL，Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.5μL，DNA模板1μL，ddH2O补足25μL。反应条件：94℃预变性5min；94变性℃30s，63℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸7min。
PCR结束后，取5μL PCR产物与1μL 6×Loading Buffer混匀后，以DNA marker2000为分子量标准，在1％的琼脂凝胶上120V电泳30min，于凝胶成像系统中检测扩增产物的长度及浓度。
利用试剂盒进行普通PCR产物纯化，纯化后用1％琼脂凝胶电泳检测回收纯化的PCR产物，显示单条带后即表示纯化成功。根据pMDTM18-T Vector使用手册，进行产物连接和转化，单菌落采用pMDTM18-T通用引物M13-47:5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3'和RV-M:5'-GAGCGGATAACAATTTCACACACAGG-3'进行PCR扩增检测。
扩增反应体系及反应条件同上述。
PCR结束后，取5μL PCR产物在1％的琼脂凝胶上120V电泳30min，于凝胶成像系统中检测扩增产物的长度。若目的片段的长度在1700bp左右，则对应菌落为阳性克隆子，将其菌液送至上海生工生物工程有限公司进行测序。
测序结果在NCBI数据库上进行BLAST比对，分析发现该菌株与马赛类芽孢杆菌(Paenbacillus massiliensis)(GenBank登录号为NR029098.1)的同源性达到99.06％。下载比对结果中的相关菌株的16S rDNA序列，并用MEGA5.05软件进行系统发育分析，建立系统发育树并进行聚类分析。系统发育分析结果表明，该菌株与3株马赛类芽孢杆菌菌株的序列位于系统发育树的同一分支。同源性比对数据和系统发育树位置进一步证明了菌株HMQAU19034为马赛类芽孢杆菌(Paenbacillus massiliensis)。
实施例2菌株HMQAU19034对南方根结线虫二龄幼虫的毒性
(1)南方根结线虫二龄幼虫的获得
取出含有大量根结线虫卵囊的黄瓜或空心菜的根系，用水轻轻冲洗，小心取下卵囊，置于0.5％次氯酸钠中消毒2min，再用无菌水冲洗3次，把卵囊放在内有少量无菌水的培养皿里，25℃恒温箱中培养，24h后收集一次新孵化的二龄幼虫备用，本发明中，二龄幼虫简称J2幼虫。
(2)菌株HMQAU19034发酵液和发酵滤液的工作液的制备
取菌株HMQAU19034发酵液，使用无菌水调整菌体浓度为1.0×107cfu·m L-1，即为发酵液的工作液；若继续将此工作液于4℃，8000r/min离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，即为发酵滤液的工作液。
(3)菌株HMQAU19034发酵滤液对南方根结线虫二龄幼虫的毒性
取1mL发酵滤液于24孔细胞培养板中，加入30条新孵化的J2幼虫，于25℃培养箱中，分别于6h，12h，24h观察记录J2死亡率。以无菌水为对照，每处理3次重复，计算出平均死亡率和校正死亡率。
校正死亡率＝((试验组死亡率-对照组死亡率)/对照组死亡率)×100％
试验结果表明，菌株HMQAU19034发酵滤液对南方根结线虫的J2有较强的毒杀作用，6h和12h的致死率分别为14.24％和66.07％，24h致死率达94.21％。
实施例3菌株HMQAU19034对黄瓜根结线虫的盆栽试验
黄瓜苗选用改良鲁黄瓜3号品种。以蛭石：营养土质量比1:1作为育苗基质，将种子播种于育苗盘。育苗盘置于28℃的培养箱。待种子出芽后，及时浇水。幼苗长到约有2-3片真叶后进行移栽。
将黄瓜移栽到10*10*18cm的花盆中，7d后浇菌株HMQAU19034发酵液，按1.0×107CFU/g soil，以浇等量的清水为对照组，5d后浇线虫悬浮液，每盆1500-2000个卵。30d后参考Bridge和Page的方法进行根结分级(参考文献：J.Bridge and S.L.J.Page(1980)Estimation of Root-knot Nematode Infestation Levels on Roots Using a RatingChart,Tropical Pest Management,26:3,296-298)，调查根结指数，计算病情指数及相对防效。
盆栽试验结果表明，对照CK的病情指数为50％，菌株HMQAU19034根结病情指数为17％，其相对防效达到66.7％。
实施例4发酵液诱导黄瓜抗病性分根试验
将长到3片真叶的黄瓜幼苗的根冲洗干净后，根大约均等分开，分别种植在分根花盆的两侧，置于光照培养室中，使黄瓜幼苗在分根花盆中扎根7d。然后在花盆A侧灌入100mL菌株HMQAU19034发酵液为试验处理组，以浇灌等量清水作为对照组，试验处理组和对照组的B侧都灌入等量的水。每个处理5个重复。发酵液处理5d后，在试验处理组和对照组分根花盆的B侧加入2000个卵。本试验的操作示意图如图3所示。根结线虫处理20d后，用缓慢的水流冲洗黄瓜的根部，调查根结级数，并计算病情指数和防治效果，参考Bridge和Page的方法进行根结分级。采用统计学软件IBM SPSS statistics 19.0对获得的数据进行统计学分析。
图4显示了菌株HMQAU19034发酵液处理组及对照组诱导黄瓜抗病性分根试验根结。由表2中可知，菌株HMQAU19034的发酵液对南方根结线虫都有明显的防治效果，其根结级数明显降低，降低65.73％。菌株HMQAU19034处理后的黄瓜防效显著，相对防效达到65.64％。
表2分根条件下菌株HMQAU19034发酵液对黄瓜根结线虫病的防效
Figure BDA0002845864910000121
实施例5菌株HMQAU19034诱导的植物酶活的变化
将黄瓜根分为两部分埋于分根花盆的两侧A和B，定植7d后进行下列处理：处理1：A，B两侧均为清水对照；处理2：A侧接细菌菌株HMQAU19034发酵液，B侧为清水对照；处理3：A侧接清水，B侧接种根结线虫二龄幼虫(J2)；处理4：A侧接菌株HMQAU19034发酵液，B侧接种J2。每个处理10棵苗，发酵液量为30mL/株。每个处理分别于处理后的3d、7d、12d，选取3株各个处理植株根部B侧，迅速用清水洗净后，称取1g分装，用液氮速冻，于-80℃冰箱保存用于提取植物酶活。本试验的操作示意图如图5所示。
用试剂盒提取的方法提取植物酶活，用紫外分光光度计分别测定过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)在470nm、560nm、240nm处的OD值，并计算酶活。采用IBM SPSS statistics 19.0对得到的数据统计学软件进行统计学分析。
如图6所示，接种菌株HMQAU19034发酵液的处理2和处理4，CAT酶活呈先升高后降低的趋势，接种7d时达到最大值。处理2与处理1相比，CAT酶活增加了54.17％，处理4与处理3相比，CAT酶活增加了25％。说明菌株HMQAU19034发酵液能够促进植物CAT酶活的提高，CAT酶在黄瓜产生抗性反应中发挥作用。
如图7所示，接种菌株HMQAU19034发酵液的处理2和处理4，POD酶呈先升高后降低的趋势，接种7d时达到最大值。处理2与处理1相比，POD酶活增加了154.27％，处理4与处理3相比，POD酶活增加了13.33％。说明菌株HMQAU19034发酵液能够促进植物POD酶活的提高，POD酶在黄瓜产生抗性反应中发挥作用。
如图8所示，接种菌株HMQAU19034发酵液的处理2和处理4，SOD酶活没有明显的变化。处理3酶活先升后降是由根结线虫侵染引起的SOD酶活变化。SOD酶活处理2比处理1低，处理4比处理3低。说明菌株HMQAU19034发酵液不能够促进植物SOD酶活的增加，SOD酶在黄瓜产生抗性反应中没有发挥作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 青岛农业大学
<120> 一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用
<141> 2020-12-17
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1516
<212> DNA
<213> 16S rDNA of Paenibacillus massiliensis
<400> 1
agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc 60
ggactgatga agaagcttgc ttcttctgag gttagcggcg gacgggtgag taacacgtag 120
gcaacctgcc ctttggactg ggataactac cggaaacggt agctaatacc agataattca 180
cttcttcgca tggagaagtg aggaaagacg gagcaatctg tcaccggagg atgggcctgc 240
ggcgcattag ctagttggag aggtaacggc tccccaaggc gacgatgcgt agccgacctg 300
agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag 360
tagggaatct tccgcaatgg gcgaaagcct gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg 420
ttttcggatc gtaaagctct gttgccaagg aagaacgtcc ttaagagcaa ctgcttaagg 480
agtgacggta cttgagaaga aagccccggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg 540
tagggggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagcg cgcgcaggcg gtcatttaag 600
tctggtgttt aagcccgggg ctcaaccccg gatcgcacgg gaaactggat gacttgagtg 660
cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca 720
ccagtggcga aggcgactct ctgggctgta actgacgctg aggcgcgaaa gcgtggggag 780
caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgagtgcta ggtgttaggg 840
gtttcgatac ccttggtgcc gaagttaaca cattaagcac tccgcctggg gagtacggtc 900
gcaagactga aactcaaagg aattgacggg gacccgcaca agcagtggag tatgtggttt 960
aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat ctgaatgacc ggatcagaga 1020
tggtcctttc cttcgggaca ttcaagacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg 1080
tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg accttagttg ccagcatttc 1140
ggatgggcac tctagggtga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa 1200
atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtactac aatggctggt acaacgggaa 1260
gcgaagccgc gaggtggagc caatcctaaa aagccagtct caattcggat tgcaggctgc 1320
aactcgcccg catgaagtcg gaattgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata 1380
cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtc acaccacgag agtttacaac acccgaagtc 1440
ggtggggtaa ccgcaaggag ccagccgccg aaggtggggt agatgattgg ggtgaagtcg 1500
taacaaggta accgta 1516

Claims (8)

1.一株马赛类芽孢杆菌（Paenibacillus massiliensis）菌株HMQAU19034，其特征在于，该菌株于2020年1月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号：CGMCC No.19419。
2.一种由权利要求1所述的马赛类芽孢杆菌（Paenibacillus massiliensis）菌株HMQAU19034制备的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂含有菌株HMQAU19034。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液体菌剂，且在该菌剂中活菌和/或活芽孢的数量为1.7×109～2.0×109个/mL。
4.根据权利要求2所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤包括：
（1）固体LB培养基制备；
（2）液体LB培养基制备；
（3）活化菌株：挑取一环菌株HMQAU19034菌落，接种在50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养24h，制成种子液；
（4）发酵液的制备：将种子液以1/50的接种量接种于50mL液体LB培养基中，200rpm、30℃恒温振荡培养48h，制备菌株HMQAU19034发酵液；
（5）发酵滤液的制备：将制备好的发酵液于4℃，8000r/min离心15min，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，制备菌株HMQAU19034发酵滤液。
5.根据权利要求4所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述固体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，15-20g琼脂粉，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
6.根据权利要求4所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述液体LB培养基由以下方法制备：取10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母浸出汁，去离子水溶解，pH6.8，用去离子水定容至1L，121℃湿热灭菌25min。
7.根据权利要求2所述的微生物菌剂的应用，其特征在于，所述微生物菌剂用于根结线虫病害的防治。
8.一种植物线虫病害的防治方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求1所述的马赛类芽孢杆菌（Paenibacillus massiliensis）菌株HMQAU19034或者权利要求2所述的微生物菌剂处理；所述植物线虫为根结线虫。
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