CN112574912B - 一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用 - Google Patents
一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，深海中度嗜盐菌Martelella sp.NBT‑a的保藏号为CCTCC NO：M 2019808，且深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中应用；诱导的过程为：将深海中度嗜盐菌分离、纯化得到纯种中度嗜盐菌株；将纯种中度嗜盐菌株接种培养、洗涤得到悬浮菌液；并加入悬浮菌液和灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养；该株深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜能够诱导厚壳贻贝稚贝的附着，且不同细菌初始密度微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，及本发明对厚壳贻贝的人工养殖具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于海洋微生物技术领域，涉及一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，具体涉及一株深海中度嗜盐菌Martelella sp.NBT-a的分离、纯化、鉴定和保藏，以及其在不同初始细菌密度条件下形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响作用。
背景技术
厚壳贻贝(Mytilus coruscus)，隶属于软体动物门(Mollusca)，双壳纲(Bivalvia)，贻贝目(Mytilodia)，贻贝科(Mytilidae)，是我国重要的海产贝类养殖品种，分布于黄海、渤海和东海沿岸。在厚壳贻贝生活史中，受精卵发育到眼点幼虫后，经过附着变态成稚贝，并最终发育为成贝。在由稚贝向成贝生长发育的过程中，当环境发生变化时，厚壳贻贝稚贝能够自行切断足丝，开始爬行并重新选择适宜的附着基再次附着。稚贝的附着对于贻贝的水产养殖和海洋中贻贝种群的稳定十分重要。因此，探索细菌微生物被膜诱导厚壳贻贝附着具有经济价值和生态学意义。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明成功分离、纯化和鉴定一株深海中度嗜盐菌并发现其形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着具有诱导作用，故本发明的首要目的是提供一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
本发明的第二个目的是提供上述深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
为达到上述首要目的，本发明的解决方案是：
一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
一株深海中度嗜盐菌，其保藏号为CCTCC NO：M 2019808，该深海中度嗜盐菌为：Martelella sp.NBT-a。
该深海中度嗜盐菌的16S rRNA基因序列为：SEQ ID NO.1。
为达到上述第二个目的，本发明的解决方案是：
一株深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
优选地，诱导的过程为：将深海中度嗜盐菌分离、纯化得到纯种中度嗜盐菌株；将纯种中度嗜盐菌株接种培养、洗涤得到悬浮菌液；向培养皿中加入悬浮菌液和灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养。
优选地，悬浮菌液的初始密度为1.0×106-5×108cells/mL。
进一步优选地，悬浮菌液的初始密度选自1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108cells/mL和5×108cells/mL中的一种以上。
由于采用上述方案，本发明的有益效果是：
本发明的深海中度嗜盐菌微生物被膜在初始密度为1.0×108cells/mL时，形成的微生物被膜对稚贝附着的诱导率提高至35.56％，相比与无微生物被膜的对照组提高了23.34％，且本发明中不同细菌初始密度微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，故本发明的深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜能够诱导厚壳贻贝稚贝的附着以及对厚壳贻贝的人工养殖均具有重要的意义。
附图说明
图1为本发明的实施例中不同初始细菌密度悬浮菌液形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的诱导作用示意图(横坐标Bacterial density为细菌密度，纵坐标Settlement为附着率)。
具体实施方式
本发明提供了一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
本发明涉及的深海中度嗜盐菌Martelella sp.NBT-a来源于太平洋所罗门海新不列颠海沟(152°20.0262'E，5°44.4206'S)水下4000m处的海水。利用ZoBell 2216E固体培养基分离、纯化得到纯种菌落，并通过16S rRNA基因测序与GENEBANK(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中核酸数据进行比对后最终确定菌名为中度嗜盐菌，比对序列号为KY770204.1，其保藏信息为：该细菌的保藏单位为位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏日期为2019年10月11日，保藏号为CCTCC NO：M 2019808。
其中，该深海中度嗜盐菌的16S rRNA基因序列(SEQ ID NO.1)具体为：
以下结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例：
本实施例的深海中度嗜盐菌对厚壳贻贝稚贝附着的诱导实验：
主要步骤是将纯种菌株先在ZoBell 2216E固体培养基进行涂板和划线得到单菌落，然后转接到ZoBell 2216E液体培养基中扩大培养，离心洗涤并制成悬浮菌液。然后用吖啶橙染色并在荧光显微镜1000倍镜头下随机选取10个点进行计数，确定菌液总密度为2.1×109cells/mL。在灭菌培养皿中放入一个灭菌的载玻片，加入一定量的灭菌过滤海水和菌液使培养皿中液体总体积为20mL，初始细菌密度为1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108cells/mL和5×108cells/mL，在18℃、黑暗条件下培养48h形成微生物被膜。将附有微生物被膜的载玻片转移到新的含有灭菌过滤海水的培养皿中并在载玻片四周均匀放入10只厚壳贻贝稚贝(壳长1.22±0.05mm；壳高0.75±0.02mm)放入，在12h时记录稚贝的附着率，即载玻片上附着的稚贝个数占该培养皿中稚贝总个数的百分比。
研究发现该细菌形成的微生物被膜对厚壳贻贝稚贝的附着具有诱导活性，实验结果如图1所示，不同初始密度条件下形成的微生物被膜对稚贝的诱导活性也有所不同，在初始密度为1.0×106cells/mL时，形成的微生物被膜对稚贝附着的诱导率仅达18.89％，但在1.0×108cells/mL诱导率高达35.56％，相比与无微生物被膜的对照组提高了23.34％。由此可得，该株深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜能够诱导厚壳贻贝稚贝的附着，且不同细菌密度微生物被膜诱导活性有所不同，故本发明对于阐明厚壳贻贝稚贝附着和厚壳贻贝培育与养殖均具有重要的意义。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海海洋大学
<120> 一株深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用
<141> 2020-12-15
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1386
<212> DNA
<213> 深海中度嗜盐菌()
<400> 1
cggcagtggc gggagcttac catgcagtcg acgcaccttt taggtgagtg gcagacgggt 60
gagtaacgcg tgggaattta ccttttggta cggaatagct ccgggaaact ggaattaata 120
ccgtatgtgc ccttcggggg aaagatttat cgccaggaga tgagcccgcg tttgattagc 180
tagttggtgg ggtaatggcc taccaaggcg acgatcaata gctggtctga gaggatgatc 240
agccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt 300
ggacaatggg cgcaagcctg atccagccat gccgcgtgag tgatgaaggc cctagggttg 360
taaagctctt tcgccggtga agataatgac tgtagccggt aaagaagccc cggctaactt 420
cgtgccagca gccgcggtaa tacgaagggg gctagcgttg ttcggaatta ctgggcgtaa 480
agcgcacgta ggcggacatt taagtcaggg gtgaaatccc ggagctcaac tccggaactg 540
cctttgatac tgggtgtctt gagtatggaa gaggtaagtg gaattgcgag tgtagaggtg 600
aaattcgtag atattcgcag gaacaccagt ggcgaaggcg gcttactggt ccattactga 660
cgctgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt 720
aaacgatgat agctagccgt cggtgtgcat gcatatcggt ggcgcagtta acgcattaag 780
ctatccgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa aggaattgac gggggcccgc 840
acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcgc agaaccttac cagcccttga 900
catttggtgc tacctggaga gatccagggt tccttcggga cgccaggaca ggtgctgcat 960
ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctc 1020
gcccctagtt gccagcattt ggttgggcac tctaggggga ctgccggtga taagccgaga 1080
ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacgg gctgggctac acacgtgcta 1140
caatggtggt gacagtgggc agcgagcacg cgagtgtgag ctaatctcca aaagccatct 1200
cagttcggat tgcactctgc aactcgggtg catgaagttg gaatcgctag taatcgcgga 1260
tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg 1320
agttggttct acccgaaggc gctgcgctaa ccgcaagggg caggcgacca cgtagttacc 1380
ccgtcg 1386
Claims (6)
1.一株深海中度嗜盐菌（Martelella sp.）NBT-a，其保藏号为CCTCC NO：M 2019808。
2.一株如权利要求1所述的深海中度嗜盐菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
3.一株如权利要求1所述的深海中度嗜盐菌形成的微生物被膜在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述诱导的过程为：将深海中度嗜盐菌分离、纯化得到纯种中度嗜盐菌株；将所述纯种中度嗜盐菌株接种培养、洗涤得到悬浮菌液；向培养皿中加入所述悬浮菌液和灭菌海水培养，得到微生物被膜，将附有微生物被膜的载玻片和厚壳贻贝稚贝诱导培养。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述悬浮菌液的初始密度为1.0×106-5×108 cells/mL。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述悬浮菌液的初始密度选自1.0×106 cells/mL、1.0×107 cells/mL、1.0×108 cells/mL和5×108 cells/mL。
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Deep‑sea bacteria trigger settlement and metamorphosis of the mussel Mytilus coruscus larvae;Rui‑Heng Chang et al.;Sci Rep.;第11卷(第1期);第1-10页 * |
| 微生物膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响;杨金龙等;水产学报;第37卷(第6期);第904-909页 * |
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