CN112574914A - 深海嗜盐单胞菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用 - Google Patents

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方家松
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曹军伟
程玉兰
杨金龙
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    • A01K61/50—Culture of aquatic animals of shellfish
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Abstract

本发明公开了深海嗜盐单胞菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用，属于海洋微生物技术领域。该深海嗜盐单胞菌命名为深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019803，该细菌的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示，来源于海拔‑7200米的南太平洋玛索海沟水域。本发明经分离、纯化和鉴定得到深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，同时验证该细菌形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。

Description

深海嗜盐单胞菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用
技术领域
本发明涉及海洋微生物技术领域，具体涉及深海嗜盐单胞菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
背景技术
厚壳贻贝(Mytilus coruscus)，属于软体动物门(Mollusca)，双壳纲(Bivalvia)，贻贝目(Mytilodia)，贻贝科(Mytilidae)，是我国重要的海产贝类养殖品种，分布于黄海、渤海和东海沿岸。厚壳贻贝有两种生活方式，包括浮游生活和附着生活，厚壳贻贝幼虫在浮游生活阶段的后期，眼点幼虫会附着变态变成稚贝，并最终成长为成贝。在稚贝生长为成贝的过程中，一旦环境发生变化，厚壳贻贝的稚贝能自行切断足丝并重新选择适宜的附着基进行再次附着。
厚壳贻贝作为一种营养价值高的海水贝类养殖品种，具有广阔的养殖前景和市场开发潜力，其苗种主要依靠天然苗种和半人工采苗获得。但是，随着渔业资源的过度开发，天然苗种已无法满足厚壳贻贝养殖产业的发展，解决种苗问题、探索利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着等生物工程技术显得尤为迫切。
发明内容
本发明的第一目的是，提供一株深海嗜盐单胞菌(Halomonassp.)。
本发明的第二目的是，提供上述深海嗜盐单胞菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
为实现上述第一目的，本发明采用的技术方案是：一株深海嗜盐单胞菌，命名为深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019803，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
根据本发明的一实施例，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示。
根据本发明的一实施例，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b来源于南太平洋玛索海沟水域(148°53.2473'E，53.9694'N)，海拔-7200米。
根据本发明的一实施例，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性。
为实现上述第二目的，本发明采用的技术方案是：上述深海嗜盐单胞菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
根据本发明的一实施例，所述厚壳贻贝为稚贝。
本发明采用上述技术方案，其有益效果如下：本发明首次获得一株深海嗜盐单胞菌，经分离、纯化和鉴定得到深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，同时验证该细菌形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。
附图说明
图1是不同初始细菌密度形成的生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的诱导活性。
具体实施方式
下面通过实施例和对比例进一步说明本发明，这些实施例只是用于说明本发明，本发明不限于以下实施例。凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
以下实施例中深海嗜盐单胞菌(Halomonassp.)，命名为深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019803，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示，利用ZoBell 2216E固体培养基分离、纯化得到纯种菌落，并通过16S rRNA基因测序与GENEBANK(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中核酸数据进行比对后上传至NCBI数据库，序列号为MF359292.1，具体如下：
gccgtggcggcagctacacatgcaagtcgagcggtaacagatccagcttgctggatgctgacgagcggcggacgggtgagtaatgcataggaatctgcccgatagtgggggataacctggggaaacccaggctaataccgcatacgtcctacgggagaaagggggctccggctcccgctatgggatgagcctatgtcggattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgacgatccgtagctggtctgagaggatgatcagccacatcgggactgagacacggcccgaactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggggaaaccctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggccctcgggttgtaaagcactttcagcgaggaagaacgcctagcggttaatacccgctaggaaagacatcactcgcagaagaagcaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgcgcgtaggtggcttgataagccggttgtgaaagccccgggctcaacctgggaacggcatccggaactgtcaagctagagtgcaggagaggaaggtagaattcccggtgtagcggtgaaatgcgtagagatcgggaggaataccagtggcgaaggcggccttctggactgacactgacactgaggtgcgaaagcgtgggtagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgtcgaccagccgttgggtgcctagcgcactttgtggcgaagttaacgcgataagtcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttaaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctactcttgacatcctgcgaatttggtagagataccttagtgccttcgggaacgcagagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttgggttaagtcccgtaacgagcgcaacccttgtccttatttgccagcgcgtaatggcgggaactctaaggagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatggcccttacgagtagggctacacacgtgctacaatggtcggtacaaagggttgccaactcgcgagagtgagccaatcccgaaaagccgatctcagtccggatcggagtctgcaactcgactccgtgaagtcggaatcgctagtaatcgtggatcagaatgccacggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtggactgcaccagaagtggttagcctaacgcaagagggcgatcaccacggttgttcccg。
一实施例中，深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b可以来源于南太平洋玛索海沟水域(148°53.2473'E，53.9694'N)，海拔-7200米。
以下通过具体实施例证明上述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，可用于诱导厚壳贻贝特别是稚贝附着方面。
实施例1
深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b对厚壳贻贝稚贝附着的诱导实验，具体步骤如下：将纯种的深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b菌株接到海水2216E液体培养基中扩大培养48h，离心得到细菌沉淀，用灭菌海水洗细菌并制成悬浮液，重复3次，得到的菌液定容为50mL，吖啶橙染色后，在1000倍镜头的荧光显微镜下随机选取10个点进行计数，测定其细菌密度后，将细菌原液加入盛有灭菌玻片的无菌玻璃培养皿中，最后加入灭菌海水定容至20mL，使得细菌初始密度分别为1.0×106cells/mL、1.0×107cells/mL、1.0×108cells/mL和5×108cells/mL，设置12个平行。在18℃以及避光条件下培养48h形成所需的生物被膜，将附有生物被膜的载玻片以及10只厚壳贻贝稚贝(壳长1.31±0.02mm，壳高0.89±0.02mm)加入含有灭菌过滤海水的培养皿中，在12h时记录稚贝的附着率，即载玻片上附着的稚贝个数占培养皿中稚贝总个数的百分比。
结果如图1所示，在初始细菌密度不同的条件下形成的生物被膜对稚贝的诱导活性有显著不同，初始密度为1×107cells/mL时形成的生物被膜对稚贝的附着诱导率为25.5％，初始密度为1.0×108cells/mL时形成的生物被膜对稚贝的附着诱导率为18.7％。证明深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性，为解决种苗和利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着提供新的技术途径。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Figure BDA0002836491740000051
Figure BDA0002836491740000061
序列表
<110> 上海海洋大学
<120> 深海嗜盐单胞菌及其在诱导厚壳贻贝附着中的应用
<141> 2020-11-23
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1436
<212> DNA
<213> 天然海水()
<400> 1
gccgtggcgg cagctacaca tgcaagtcga gcggtaacag atccagcttg ctggatgctg 60
acgagcggcg gacgggtgag taatgcatag gaatctgccc gatagtgggg gataacctgg 120
ggaaacccag gctaataccg catacgtcct acgggagaaa gggggctccg gctcccgcta 180
tgggatgagc ctatgtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat 240
ccgtagctgg tctgagagga tgatcagcca catcgggact gagacacggc ccgaactcct 300
acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggggaaa ccctgatcca gccatgccgc 360
gtgtgtgaag aaggccctcg ggttgtaaag cactttcagc gaggaagaac gcctagcggt 420
taatacccgc taggaaagac atcactcgca gaagaagcac cggctaactc cgtgccagca 480
gccgcggtaa tacggagggt gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agcgcgcgta 540
ggtggcttga taagccggtt gtgaaagccc cgggctcaac ctgggaacgg catccggaac 600
tgtcaagcta gagtgcagga gaggaaggta gaattcccgg tgtagcggtg aaatgcgtag 660
agatcgggag gaataccagt ggcgaaggcg gccttctgga ctgacactga cactgaggtg 720
cgaaagcgtg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgtc 780
gaccagccgt tgggtgccta gcgcactttg tggcgaagtt aacgcgataa gtcgaccgcc 840
tggggagtac ggccgcaagg ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt 900
ggagcatgtg gtttaattcg atgcaacgcg aagaacctta cctactcttg acatcctgcg 960
aatttggtag agatacctta gtgccttcgg gaacgcagag acaggtgctg catggctgtc 1020
gtcagctcgt gttgtgaaat gttgggttaa gtcccgtaac gagcgcaacc cttgtcctta 1080
tttgccagcg cgtaatggcg ggaactctaa ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg 1140
tggggacgac gtcaagtcat catggccctt acgagtaggg ctacacacgt gctacaatgg 1200
tcggtacaaa gggttgccaa ctcgcgagag tgagccaatc ccgaaaagcc gatctcagtc 1260
cggatcggag tctgcaactc gactccgtga agtcggaatc gctagtaatc gtggatcaga 1320
atgccacggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg 1380
actgcaccag aagtggttag cctaacgcaa gagggcgatc accacggttg ttcccg 1436

Claims (7)

1.一株深海嗜盐单胞菌，其特征在于，命名为深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019803，保藏日期为2019年10月11日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
2.根据权利要求1所述的深海嗜盐单胞菌，其特征在于，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b的16S rRNA基因如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1所述的深海嗜盐单胞菌，其特征在于，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b来源于南太平洋玛索海沟水域，海拔-7200米。
4.根据权利要求1所述的深海嗜盐单胞菌，其特征在于，所述深海嗜盐单胞菌Halomonassp.c7200b形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝附着活性。
5.根据权利要求4所述的深海嗜盐单胞菌，其特征在于，所述厚壳贻贝为稚贝。
6.权利要求1至5任一项所述深海嗜盐单胞菌在诱导厚壳贻贝附着中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述厚壳贻贝为稚贝。
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